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O Aspidosperma subincanum Mart. é uma planta medicinal conhecida popularmente por ser utilizada no tratamento de hipercolesterolemia, diabetes e doenças digestivas. O tônico amargo de sua casca é conhecido pela população indígena por estimular as funções circulatórias. Embora, um estudo prévio tenha demonstrado que o extrato etanólico de Aspidosperma subincanum (EEAS) induz hipotensão associada à bradicardia e vasodilatação, nenhum estudo científico avaliou os efeitos diuréticos dessa planta medicinal brasileira. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade diurética do EEAS e possíveis mecanismos de ação, utilizando ratos Wistar. EEAS, 60, 120 e 300 mg/Kg, ou furosemida (20 mg/Kg) foram administrados, via oral, e os ratos foram colocados individualmente em gaiolas semi-metabólicas durante 24 h para a coleta de urina, nos períodos de 1, 2, 4, 6, 8, 12 e 24 h após os tratamentos. Para avaliar o envolvimento da via dos prostanoides no possível efeito diurético do EEAS, os animais receberam piroxicam (5 mg/Kg, i.p.), um inibidor não seletivo das cicloxigenases, previamente ao tratamento com EEAS 120 mg/Kg. Os grupos controle receberam apenas salina (NaCl, 0,9%), ou salina e piroxicam. O volume urinário, o consumo de água, a excreção de eletrólitos e o pH foram medidos. A administração oral de EEAS 60 e 120 mg/Kg aumentou significativamente a excreção urinária e de eletrólitos Na+ e K+ durante o período de estudo, sendo que houve aumento do volume urinário a partir da primeira hora após os tratamentos, e aumento da excreção de eletrólitos a partir de 2 h após os tratamentos. EEAS 60 e 120 mg/Kg causaram aumento relativo na diurese cumulativa de 24 h em aproximadamente 77% e 142,95%, respectivamente, comparado com grupo controle. EEAS 300 mg/Kg causou aumento da excreção urinária a partir de 8 h após tratamento. De 4 h até o final do experimento, o grupo tratado com EEAS 120 mg/kg proporcionou maior excreção de Na+ do que o grupo tratado com furosemida, enquanto o grupo tratado com EEAS 60 mg/Kg proporcionou excreção similar ao grupo furosemida, sendo que neste grupo ocorreu maior excreção de K+ na urina quando comparado com os outros grupos. A excreção urinária do EEAS foi reduzida por piroxicam nos períodos de 2 h, 4 h e 8 h após os tratamentos na proporção de 54.2%, 50.3% e 38.9%, respectivamente. O piroxicam também inibiu a excreção de Na+ entre 4 e 8 h após os tratamentos, na proporção de 38.4 e 39.0%, respectivamente. Ainda inibiu excreção de K+ na ordem de 28.2% em 4 h e 47.1% em 8 h. Os resultados mostram que o EEAS apresenta compostos ativos responsáveis pela atividade diurética em ratos, e o mecanismo de ação parece envolver a via dos prostanoides. Aspidosperma subincanum Mart. is a medicinal herb used for the treatment of hypercholesterolemia, diabetes and digestive illnesses. The bitter tonic of its bark is known by the indigenous population to stimulate circulatory functions. Although a previous study showed that EEAS induces hypotension associated with bradycardia and vasodilation, no scientific data have been described to evaluate the diuretic effects of this Brazilian medicine plant. The aim of the present study was to evaluate the diuretic activity of an ethanol extract of Aspidosperma subincanum (EEAS), and possible mechanisms of action, using Wistar rats. EEAS, 60, 120 and 300 mg/Kg, or furosemide (20 mg/Kg) were orally administered and the rats were kept individually in metabolic cages for 24h for urine collection 1, 2, 4, 6, 8, 12 and 24h after treatments. To evaluate the involvement of prostanoids in the diuretic action of EEAS, the animals received piroxicam (5 mg/Kg, i.p.), a nonselective inhibitor of cyclooxygenase, before treatment with EEAS 120 mg/Kg. The control groups received only saline (NaCl, 0,9%), or saline and piroxicam. The urinary volume, the water consumption, electrolyte excretion and pH were measured. The oral administration of EEAS 60 and 120mg/Kg increased significantly the urine and electrolyte excretion of Na+ and K+ continuously throughout the study period, wherein increased the urinary output from the first hour after treatment, and increased the electrolytes from the second hour onwards after treatment. EEAS 60 and 120 mg/Kg caused a relative increase in cumulative diuresis around of 77% and 142,95%, respectively, compared with the control group. EEAS 300 mg/Kg increased the urinary excretion from 8 h after treatment. From 4 h until the end of the experiment, the group treated with EEAS 120 mg/kg provided a major excretion of Na+ than the furosemide group, while the group treated with EEAS 60 mg/Kg provided a similar excretion of Na+ when compared to the group that received furosemide. The furosemide group showed significantly higher amounts of K+ in the urine when compared with the others group. The urinary excretion of EEAS was reduced by piroxicam 2 h, 4 h and 8 h after treatments by around 54.2%, 50.3% and 38.9%, respectively. Piroxicam reduced Na+ excretion between 4 and 8 h after treatments by 38.4 and 39.0%, respectively. And still inhibited the K+ excretion by around 28.2% at 4 h and 47.1% at 8 h. The results suggest that EEAS could present compound(s) responsible for diuretic activities, and the mechanism could involve prostanoids system.