Search

We investigated the infection of Bovine Leukemia Virus (BLV) related to other pathogens [Neospora caninum, Bovine Herpesvirus-1 (BoHV-1), Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV), and pathogenic bacteria] in 80 bovine aborted fetuses. The materials comprised whole fetuses, fetal organs, and placenta. The BLV was diagnosed by nested-PCR (env gp51 BLV gene), the identification of viral genotypes by sequencing, and the phylogenetic analysis by neighborjoining and maximum composite likelihood methods. The other pathogens and diagnoses were, respectively: Neospora caninum (nested-PCR), BoHV-1 (nested-PCR), BVDV (PCR), Brucella spp. (isolation and identification), Leptospira spp. (PCR), aerobic bacteria [Enterobacteriaceae, Gram positive cocci, Trueperella (Arcanobacterium) pyogenes] and micro-aerophilic (Campylobacter spp., Histophilus somni, and Listeria monocytogenes) by isolation and identification. BLV fetal antibodies were identified by ELISA kit. Thirteen (16.25%) fetuses were positive by BLV nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed BLV genotypes 1, 5, and 6, which are frequently found in cattle in Brazil, Argentina, and Uruguay. No fetuses were positive for BLV antibodies by ELISA. A single case of coinfection with BLV was found for each of the pathogens Trueperella (Arcanobacterium) pyogenes, Klebsiella spp., and Streptococcus spp. were isolated as a pure or representing the preponderance of bacteria in a pooled culture. In the 67 BLV-negative fetuses, pathogens identified were single cases of Trueperella (Arcanobacterium) pyogenes, Staphylococcus aureus, and Brucella abortus; 2 of Escherichia coli; 3 of bovine viral diarrhea virus; and 4 of Neospora caninum. No pathogens were found in 55 fetuses. The low number of BLV positive samples infected or no by other pathogens didn´t allow performing statistical analysis for understanding if there were significative differences among not infected and infected BLV fetuses. Because BLV is an immunosuppressive agent and predisposes the cow to other pathogens, its connection with Leukemia or abortions need additional studies with bigger sampling, for elucidating pathogenesis in the pregnant cow and in the fetus. The rates of BLV transplacental transmission show the necessity of prophylactic measures in Brazilian cattle herds, in order to avoid infection in utero.

Campylobacteriosis is a worldwide distributed zoonosis. One of the main virulence factors related to Campylobacter spp. in animals and humans is the cytolethal distending toxin (CDT), encoded by three adjacent genes (cdtA, cdtB, cdtC). The occurrence of Campylobacter spp. in samples of vegetables has not been reported in Brazil yet, and has seldom been described in the international literature. The detection of CDT in these strains has not been reported, either. The objectives of the present study were to determine the occurrence of Campylobacter spp. strains carrying virulence factors in samples of poultry and vegetables (lettuce and spinach) from different points of sale, thus verifying if vegetables are as an important vehicle for potentially virulent Campylobacter spp. strains as poultry. Twenty four strains were identified as Campylobacter jejuni by phenotypic and genotypic methods: 22 from broiler carcasses and two from lettuce samples. Three strains were identified as Campylobacter coli: two from broiler carcasses and one from lettuce. The presence of the cdt genes were detected in 20/24 (83.3%) C. jejuni strains, and 3/3 (100%) C. coli strains. The isolation of Campylobacter spp. strains with the cdt gene cluster in lettuce samples points to a new possible source of contamination, which could have an impact in the vegetable production chain and risk to public health. Results show that potentially virulent C. jejuni and C. coli strains remain viable in samples of broiler carcasses and vegetables at the points of sale.

A Chlamydophila abortusi, anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci sovovar 1, é uma bactéria Gram negativa, intracelular obrigatória. Esse micro-organismo é frequentemente encontrado em distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos, sendo o aborto epizoótico dos bovinos e o aborto enzoótico dos ovinos e caprinos as manifestações mais importantes. Considerando-se o pouco material literário a respeito da clamidofilose no Brasil, a pesquisa teve como objetivo determinar a presença de anticorpos fixadores de complemento anti-Chlamydophila abortusi, correlacionando os resultados obtidos com achados no exame clínico e histórico dos animais, além de alterações nos índices zootécnicos, em especial na esfera reprodutiva, tais como alto índice de repetição de cio, número elevado de abortamentos, elevado número de natimortos, entre outros. Foram testadas para prova de fixação do complemento 220 amostras de soro de ovinos, de 26 propriedades, distribuídas em 19 municípios, com relato de manifestação reprodutiva, obtendo-se 19,55% (43/220) de testes positivos para Chlamydophila abortusi, com ocorrência de foco constatada de 61,53%. No geral, a titulação de anticorpos encontrada foi baixa, com título não superior a 64. A frequência de manifestação reprodutiva mais observada foi o aborto, representando 65,12% (28/43) do número total de animais soropositivos, seguido de repetição de cio juntamente com nascimento de cordeiro fraco, com frequência de 6,98% (3/43) e, por fim, morte neonatal com 4,65% (2/43), sendo que não houve associação significativa entre animais que foram positivos ao teste e a esses fatores. The Chlamydophila abortusi was previously known as Chlamydia psittaci sorovar 1, it is a Gram negative and obligate intracellular bacteria. This microorganism is frequently related with reproductive manifestation in ovines, goats and bovines. The major manifestation are Enzootic abortion in bovines and enzootic abortion in small ruminants. There are few literary material about clamidofilosis in Brazil, so the present research had the objective to determine the presence of complement fixing antibodies anti-Chlamydophila abortusi, correlating the results with the clinical examination and historical of the animals, besides variation in the zootecnic index, especially in the reproductive characters like high index of cio repetition, high abortion number, high neonatal mortality number etc. It was tested for the complement fixation test 220 serum ovine samples, from 26 properties, distributed in 19 cities, with historical of reproductive manifestation. It was found 19.55% (43/220) of positive tests to Chlamydophila abortusi, obtaining 61.53% of focus occurrence. In the study low antibodies titers were found, not superior of 64. Abortion was the major reproductive manifestation observed, expressing 65.12% (28/43) of the total number animals serum positive, followed by estrus repetition and weak lamb born, with a frequency of 6.98% (3/43) and, lastly, neonatal mortality death with 4.65% (2/43). No significant association was observed between serum positivity and these factors.

Foram analisadas 80 amostras de sobrecoxas de frangos de corte resfriados provenientes de feiras livres e hipermercados do município de São Paulo, SP. Treze estirpes de Campylobacter spp. foram isoladas em 10 (12,5%) sobrecoxas, sendo cinco amostras originárias de feiras livres e cinco de hipermercados. Onze estirpes foram identificadas como Campylobacter jejuni e duas como Campylobacter coli. As 11 estirpes foram confirmadas como C. jejuni pela PCR do gene da hipuricase (hip), e destas, quatro (36,4%) apresentaram os três genes (cdtA, cdtB e cdtC) codificantes da toxina citoletal distensiva pela multiplex-PCR, sendo três estirpes provenientes de hipermercados e uma de feira livre. Observou-se a presença de estirpes virulentas de C. jejuni, portadoras do complexo de genes cdt, nas amostras de frango resfriado, não só na linha de abate, mas até o ponto final da cadeia de distribuição, nos dois principais centros de venda a varejo.

RESUMO Leptospiras excretadas pela urina podem sobreviver por longos períodos em águas de superfície e solos, na dependência do pH e teor de umidade e de matéria orgânica. Investigou-se a influência do meio ambiente na transmissão da leptospirose em dois rebanhos exclusivos de ovinos (A e C) e dois de ovinos consorciados com bovinos (F e H) da região de Sorocaba, SP, no período de dezembro de 2007 a setembro de 2008. Foram examinadas amostras de soro pela reação de soroaglutinação microscópica; de urina, água e solo pelo cultivo para leptospiras e urina de ovinos pela PCR. Condições edafoclimáticas, pH das águas de superfície e solo, granulometria e permeabilidade do solo foram analisadas. Todos os rebanhos apresentaram pelo menos um animal sororeagente para Leptospira spp. Apenas a PCR de um pool de urina de ovinos (H) foi positiva. Leptospira spp. foi isolada do lago de F. O pH das águas de superfície variou entre 6,0-7,0; e nos solos entre 4,5 e 6,8. Os índices de matéria orgânica em A, C e H variaram de 24 a 35 g/dm3, e 63 g/dm3 em F. A composição do solo de A e F mostrou-se franco-argiloarenosa, C argilosa e H franco-siltosa; como texturas mistas são capazes de manter a umidade, principalmente devido a argila. Diante da presença de animais sororeatores e portanto da circulação de Leptospira spp. nos rebanhos, conclui-se que o ciclo de transmissão é dependente da interação sinérgica e antagônica de muitas variáveis; onde o pastejo num habitat com alto teor de umidade parece ser limitante.

RESUMO Objetivou-se com este estudo realizar o primeiro inquérito soro-epidemiológico para o vírus da maedi-visna e Chlamydophila spp. em 12 rebanhos de ovinos do Município de Uberlândia, MG. Foram utilizadas 334 amostras de soro sanguíneo de ovinos e aplicou-se um inquérito epidemiológico a cada propriedade. Os testes realizados para a pesquisa de anticorpos contra o vírus da maedi-visna e Chlamydophila spp. foram imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e reação de fixação do complemento (RFC), respectivamente. Não foram detectados ovinos reagentes para maedi-visna. Verificou-se uma prevalência de 3,3% para Chlamydophila spp., com títulos variando de 32 a 64. Não houve diferença estatística significativa (p > 0,05) para os fatores de risco analisados. Ressalta-se a importância dos sistemas de vigilância epidemiológica para atuar no controle dessas infecções, evitando a introdução do vírus da maedi-visna e uma maior propagação da Chlamydophila spp. neste município.

The goal of this study was to perform a seroepidemiological investigation and to identify risk factors associated with infection of Chlamydophila abortus of sheep herds in the Brazilian state of Alagoas. The study was conducted with samples of 274 ewes with ages equal to or higher than 24 months in 25 herds and in 23 towns located in three regions of the state (Sertão, Agreste and Eastern Alagoas). Anti-C. abortus antibodies were detected using the microcomplement fixation test. The risk factors, were determined based on questionnaires consisting of objective questions, about the farmer and general characteristics of the herd like size, sanitary situation and reproductive management. Among 274 sera samples analyzed for C. abortus, 59 (21.5%) were positive with titers >32, 187 (68.3%) negative and 28 (10.2%) suspect with titers >16. In the 23 towns studied, 20 had positive animals. Among herds 21 (77.7%) of had positive animals. The only variable which appeared to be significant in the multivariate analysis was the region, and Sertão was the most significant (p

A total of 192 samples of illegal cheese from different regions of the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil, were analyzed for the isolation and detection of Brucella spp. DNA by means of microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR), respectively. Samples that yielded positive results were submitted to the analysis of the occurrence of Brucella abortus (biovars 1, 2 e 4), as well as to the differentiation of DNA in B19 vaccinal strain or Brucella abortus field strain using PCR. Although the microorganism was not isolated from any sample, PCR detected 37 positive samples (19.27%) using genus-specific primers. From these, all (100%) were Brucella abortus. Differentiation of the strain showed that 30/37 samples (81.08%) were vaccinal strain B19 and seven (18.92%) were Brucella abortus field strains. Results showed that diagnostic sensitivity of PCR was greater than that of microbiological culture. The standardization of the reaction for the differentiation of vaccinal and field strains enabled the analysis of all samples positive for Brucella abortus. It is, therefore, a reliable method, also applicable to natural infections caused by the microrganism.

The objective of the present trial was to characterize genetically strains of Campylobacter jejuni subsp. jejuni isolated from humans and several animal sources (bovines, swine, dogs, primates, wild boars and poultry). A total of 828 different animal samples (feces, carcass, aborted fetus and hysterectomized uterus) were analysed by means of routine bacteriological methods, and 36 C. jejuni strains were isolated. Thirty strains of human fecal origin were obtained in clinical analysis laboratories in the city of São Paulo. The 66 C. jejuni strains isolated were submitted to genetic characterization. Primers based on fla A gene were used in a polymerase chain reaction (PCR) and amplified a fragment of the 702 bp. PCR products were evaluated by means of sequencing and genealogic analysis. Genetic variability analysis of 66 strains showed 44 different subtypes of C. jejuni. One subtype was identical to a C. jejuni strain of human origin with the sequence in the GenBank (GENBANK accession number AF050186). Subtyping analysis of C. jejuni strains based on sequencing of the fla A gene variable region and analysis of sequence alignment by the Maximum Parsimony method showed to be highly discriminatory, providing the best conditions to differentiate strains involved in outbreaks from those sporadically isolated. This is the first study of molecular subtyping analysis of human and animal C. jejuni strains using sequencing technique and genealogic analysis in the state of São Paulo, Brazil.O objetivo do presente trabalho foi caracterizar geneticamente estirpes de Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de humanos e de diferentes origens animais (bovinas, suínas, cães, primatas, javalis, suínos e aves de corte). Um total de 828 amostras (fezes, carcaças, fetos abortados e útero histerectomizado) foram analisadas por métodos de rotina bacteriológica e 36 estirpes de C. jejuni foram isoladas. Trinta estirpes de origem fecal humana foram obtidas de laboratórios de análises clínicas da cidade de São Paulo. As 66 estirpes de C. jejuni isoladas foram submetidas à caracterização genética. Oligonucleotídeos baseados no gene fla A foram usados na reação de polimerase em cadeia (PCR) e amplificou um fragmento de 702 pb. Os produtos obtidos pela PCR foram avaliados pelas técnicas de seq��enciamento e análise genealógica. Análise da variabilidade genética das 66 estirpes revelou 44 diferentes subtipos de C. jejuni. Um subtipo de origem humana apresentou seqüência idêntica à de C. jejuni depositada no GenBank (GENBANK acesso número AF050186). A subtipagem das estirpes de C. jejuni baseadas no seqüenciamento da região variável do gene fla A e na análise do alinhamento das seqüências pelo método da Máxima Parcimônia, mostraram-se altamente discriminatórios fornecendo melhores condições para a correta diferenciação entre estirpes originárias de surto e as isoladas esporadicamente. Este foi o primeiro estudo de subtipagem molecular de estirpes de C. jejuni de origem humana e animal utilizando a técnica do seqüenciamento com análise genealógica realizado no Estado de São Paulo, Brasil.

Leptospirosis is a widely distributed zoonosis that affects domestic and wild animals, and that has the man as the end point of its epidemiological chain. Leptospirosis diagnosis in primates is more difficult than in other animal species, as clinical signs and lesions are less evident and antibody response is detected only for short periods. The aim of this article was to describe the detection of Leptospira spp using polymerase chain reaction (PCR), in clinical samples from one captive black-capped Capuchin monkey (Cebus apella), which presented characteristics compatible with leptospirosis (jaundice and haemorrhagic kdney) in the macroscopic post-mortem examination. A friable kidney fragment and urine sample were cultured and submitted to experimental inoculation in guinea pigs and PCR using genus specific primer pair targeting the 16S rRNA region from Leptospira interrogans serovar canicola. Isolation of the agent was negative both in culture and experimental inoculation. The PCR amplification of the clinical samples showed a 330 pb amplified fragment that corresponds to the Leptospira genus. Based on these results PCR was considered an important tool for leptospira detection in nonhumam primates, more sensitive and specific than other techniques, especially considering that the viability of the pathogen was not possible. These advantages enable the detection of the leptospiras in urine and kidney, even when autolysed, frozen or badly conserved, which prevented the isolation and experimental inoculation from positive results.A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição geográfica que acomete os animais domésticos e silvestres, tendo o homem como ponto final da cadeia epidemiológica. O diagnóstico da leptospirose em primatas é dificultado em relação a outras espécies animais, porque os sinais clínicos e lesões são menos evidentes e a resposta de anticorpos é detectada apenas em curtos períodos. O presente trabalho tem por objetivo descrever a detecção de Leptospira spp empregando-se a Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras clínicas provenientes de um macaco prego (Cebus apella) criado em cativeiro, que apresentou ao exame macroscópico realizado durante a necrópsia, características sugestivas de leptospirose (icterícia e rins hemorrágicos). Amostras de urina e fragmento de rim friável foram submetidas às técnicas cultivo e inoculação experimental em cobaias e PCR empregando-se primers gênero específicos da seqüência do gene 16S rRNA de Leptospira interrogans sorovar canicola. Na PCR as amostras clínicas revelaram um fragmento amplificado de 330 pb correspondente ao gênero Leptospira. O isolamento do agente foi negativo nas demais técnicas empregadas. Pelos resultados obtidos, verifica-se que a técnica de PCR representou uma importante ferramenta de detecção de leptospiras em primatas não-humanos, principalmente considerando-se que não foi necessária a viabilidade do patógeno, permitindo a detecção do agente em amostras autolisadas, congeladas ou amostras mal conservadas, que prejudicaram o isolamento e a inoculação experimental.

Caseous lymphadenitis (CLA) is a contagious disease caused by Corynebacterium pseudotuberculosis. It occurs worldwide and is responsible for economic losses in sheep raising. The aim of this study was to standardize an indirect ELISA to detect antibodies anti-C. pseudotuberculosis in sheep. Serum samples from animals previously tested serially using microbiological culture and PCR from the puncture of lymph nodes and lungs, made up an initial panel with the aim of standardizing the test. When it was applied to field samples, the ELISA reaction showed sensitivity of 100% and specificity of 100% based on microbiological culture and PCR results. Although microbiological culture is the gold standard in C. pseudotuberculosis diagnosis, the ELISA standardized in this study seems to be advantageous because it is faster to process the samples, and may be used as a screening test, or even for animals trade, once the disease is often unapparent, making clinical and microbiological diagnosis difficult to be performed.

O objetivo do presente trabalho foi determinar as prevalências de propriedades positivas e animais soropositivos para Chlamydophila abortus em ovinos deslanados da região semiárida do Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram colhidas amostras de sangue de 476 ovinos procedentes de 72 propriedades em 14 municípios na mesorregião do Sertão, Estado da Paraíba. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Chlamydophila abortus foi utilizada a reação de fixação de complemento (RFC). Uma propriedade foi considerada positiva quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. Das 72 propriedades usadas 38 (52,8%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo, e dos 476 animais 94 (19,7%) foram soropositivos. Participação em exposições (odds ratio =4,31; IC 95% =1,80-10,35; p=0,011) foi identificada como fator de risco. Sugere-se que a infecção por Chlamydophila abortus encontra-se disseminada em ovinos da região, e baseando-se na análise de fatores de risco, recomenda-se o controle sanitário nas exposições de animais. The aim of this investigation was to determine the flock-level and animal-level prevalences of Chlamydophila abortus in sheep from the semiarid region of Northeastern Brazil, as well as to identify risk factors. Blood samples were collected from 476 sheep of 72 flocks in 14 counties in the Sertão mesoregion, state of Paraíba. For the serological diagnosis of Chlamydophila abortus infection the complement fixation test (FC) was carried out. A flock was positive when presented at least one seropositive animal. From the 72 flocks, 38 (52.8%) presented at least one seropositive sheep, and 94 (19.7%) of the 476 animals were seropositive. Participation in animal expositions (odds ratio= 4.31; 95% CI= 1.80-10.35; p=0.011) was identified as risk factor. It is suggested that C. abortus infection is spread in sheep of the region, and based on the risk factor analysis sanitary control in animal expositions is recommended.

O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de animais soropositivos ao vírus da Maedi-Visna (MVV) em ovinos e ao vírus da CAE (CAEV) em caprinos criados no estado de São Paulo. Na pesquisa dos anticorpos séricos anti- MVV e anti-CAEV foi utilizada a técnica de imunodifusão em gel de ágar (IDGA). Dentre os ovinos estudados, 0,3% (4/1235) eram sororreagentes ao MVV e 15,1% caprinos (30/199) ao CAEV. Foi realizada a análise de fatores de risco associados à condição de propriedade positiva para CAEV e Maedi-Visna. Foram selecionadas variáveis para as duas enfermidades, no entanto, quando essas variáveis foram usadas na regressão logística múltipla, não foram identificados fatores de risco para as infecções. A infecção pelo CAEV no estado de São Paulo tem uma ampla disseminação e com uma alta prevalência enquanto que o MVV apresenta baixa prevalência. Ressalta-se a importância de medidas de prevenção e controle para diminuir a ocorrência da CAE e evitar a disseminação da Maedi-Visna.

Isolaram-se estirpes de Campylobacter spp. em amostras de carcaças (n=65), fezes (n=65) e linfonodos mesentéricos (n=65) de suínos abatidos em frigoríficos do estado de São Paulo e detectaram, pela técnica da Multiplex-PCR, a presença do complexo de genes cdt, responsáveis pela expressão do fator de virulência da toxina CDT. Do total de 195 amostras de origem suína, Campylobacter spp. foi isolado de 31 (15,9%), sendo 29 (93,6%) de amostras de suabe retal, 1/65 (3,2%) de suabe de carcaça e um (3,2%) de linfonodo. Vinte e oito estirpes de C. coli foram positivas para a detecção dos genes cdt, e três estirpes de C. jejuni foram negativas para a detecção desses genes. Foi detectada, pela primeira vez no estado de São Paulo, a presença dos genes cdt em 100% das estirpes de Campylobacter coli provenientes de suínos abatidos em frigoríficos. The purposes of this study were to isolate and identify Campylobacter spp. strains from the carcasses (n=65), feces (n=65) and mesenteric lymph nodes (n=65) of swine slaughtered in abattoirs in the State of Sao Paulo and to detect the presence of the cdt gene complex - responsible for the expression of the virulence factor cytolethal distensive toxin - in these Campylobacter spp. strains through Multiplex-PCR. From 195 samples analyzed, Campylobacter spp. was isolated in 31 (15.9%): 29 (93,6%) samples of rectal swab, 1 (3.2%) carcass swab and 1 (3.2%) lymph node sample. The 28 strains of isolated C. coli were positive for CDT toxin genes and the three strains of isolated C. jejuni were negative for these genes. It was also the first time that the cdt gene cluster was detected in strains isolated from swine in the state of São Paulo. These findings indicate swine as a potential spreading source of virulent strains of Campylobacter coli, either for slaughterhouse staff or consumers of carcasses and sub products.

This paper aimed to determine the excretion period of B19 vaccine strain during a complete reproductive cycle (from estrus synchronization, artificial insemination, pregnancy and until 30 days after parturition) of dairy cows from 3 to 9 years old that were previously vaccinated from 3 to 8 months. Three groups were monitored with monthly milk and urine collection during 12 months: G1 with seven cows from 3 to 4 years old; G2 with three cows from 5 to 6 years old; and G3 with four cows from 7 to 9 years old. Urine and milk samples were submitted to bacteriological culture and urine and PCR reactions for detection of Brucella spp. and PCR-multiplex for B19 strain identification. Ring test (RT) was also performed in the milk samples, and serum samples were tested by buffered acidified plate antigen test (BAPA). All animals were serologically negative at BAPA and Brucella spp. was not isolated from both urine and milk samples. RT revealed 13/210 (6.2%) positive milk samples. PCR reactions detected DNA of Brucella spp. in 86/420 (20.5%) samples. In urine it was found a significantly higher frequency (35.2%; 74/210) than in milk (5.7%; 12/210), more frequently from the estrus to 150 days of pregnancy and after parturition (6.7%; 10/150), and from 150 days of pregnancy to parturition (3.4%; 2/60), and they were all identified as B19 strain. In three groups, intermittent excretion of B19 strain was detected mainly in urine samples, which confirmed its multiplication and persistence in cows for until 9 years.

Objetivou-se com este estudo calcular a prevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção por Chlamydophila abortus em suínos criados em granjas tecnificadas no Estado de Alagoas, Brasil. Para compor a amostra do estudo foram utilizados 342 suínos, sendo 312 matrizes e 30 varrões oriundos de sete granjas de ciclo completo e distribuídas em cinco municípios do Estado de Alagoas. O diagnóstico sorológico da infecção por C. abortus foi realizado através da microtécnica de Fixação do Complemento (RFC). A análise dos fatores de risco foi realizada por meio da aplicação de questionários investigativos, constituídos por perguntas objetivas referentes ao criador, às características gerais da propriedade, ao manejo produtivo, reprodutivo e sanitário. Observou-se prevalência de 10,5% (36/342) de suínos soropositivos para a infecção por C. abortus, com 85,8% das granjas analisadas com animais positivos. As variáveis que demonstraram associação significativa foram: utilização de bebedouros comuns para jovens e adultos (p=0,024; OR=10,83; IC=1,36-86,03) e método de cobertura de monta natural associada à inseminação artificial (p=0,05; OR=7,62; IC=1,00-58,31). Relata-se a primeira ocorrência de anticorpos anti-C. abortus em suínos no Brasil. Fatores como a introdução de reprodutores nos plantéis e a forma de fornecimento de água foram evidenciados como facilitadores da infecção das matrizes neste estudo. Dessa forma, medidas de controle da infecção devem ser enfocadas nesse aspecto para evitar a disseminação do agente nas granjas suinícolas e em outros plantéis da região. The objective of this study was to determine the prevalence and identify risk factors associated with Chlamydophila abortus infection in commercial swine farms on the state of Alagoas, Brazil. To compose the study sample 342 pigs were used, with 312 sows and 30 boars from seven swine farms and distributed in five districts of the Alagoas. The serological diagnosis of infection by C. abortus was performed by fixation of complement microtechnique (RFC). The analysis of risk factors were performed by the application of research questionnaires, consisting of objective questions relating to the designer, the general characteristics of the property, the production, reproductive and health management. I was observed a prevalence of 10.5% (36/342) of pigs seropositive for infection by C. abortus with 85.8% of farms with positive animals analyzed. The variables that showed significant association were use of common drinker for young and adults pigs (p=0.024, OR=10.83, CI=1.36-86.03) and associated the natural mount with artificial insemination (p=0.05, OR=7.62, CI=1.00-58.31). This work reports the first occurrence of anti-C. abortus in pigs in Brazil. Factors as the introduction of boars in herds and the form of water supply were seen as facilitators of infection on sows in this study. Thus measures of infection control should be focused on this aspect to prevent the spread of the agent in pig farms and other herds in the region.

The genomic DNA of thirty strains of Aujeszky's disease virus (ADV) isolated in the South and Southeast regions of Brazil from 1982 to 1996 were characterized by restriction endonuclease analysis with BamHI. Twenty seven strains were isolated from pigs, 1 from cattle, 1 from cat and 1 from dog. Using a systematization previously described, the 30 ADV strains could be classified as genomic types I (n = 2) and II (n = 28). Genomic type III was not observed. In this first study of genomic type characterization of brazilian ADV strains, we could demonstrate the occurence in Brazil of the genomic types I and II, with a large predominance of genomic type II.O DNA genômico de 30 amostras do vírus da doença de Aujeszky (VDA), isoladas nas regiões Sul e Sudeste do Brasil no período de 1982 a 1996, foram caracterizadas por análise do perfil de restrição utilizando a enzima BamHI. Vinte e sete amostras foram isoladas de suínos, uma de bovino, uma de felino e uma de canino. Através de uma sistemática previamente descrita, as 30 amostras de VDA foram classificadas como pertencentes ao tipo genômico I (n = 2) e tipo genômico II (n = 28). O tipo genômico III não foi observado. Neste primeiro estudo de caracterização genômica de isolados de VDA do Brasil, foi possível demonstrar a ocorrência dos tipos genômicos I e II, com marcante predomínio do tipo II.

The objectives of the present study were the subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains obtained from humans and different animal species using PCR-RFLP, and the detection, by means of the same technique, of strains related to serotype PEN O19:LIO 7, the main C. jejuni serotype linked to Guillain-Barré Syndrome (GBS). Seventy C. jejuni strains isolated from human feces (n=33), primates (n=15), dogs (n=5), swine (n=2), bovines (n=1), abortion material from goats (n=2) and poultry carcasses (n=12), all collected in the state of São Paulo, were subtyped by means of PCR-RFLP of fla A gene, using restriction endonucleases Hae III, Afa I and Mbo I. Seven subtypes were observed when using the enzyme Hae III; eight when using Mbo I; and seven when using Afa I. The combination of the three endonucleases led to 16 fla-RFLP subtypes, from which ten subtypes shared strains of human and animal origin. From these, seven subtypes were observed in human and broiler strains. In eight subtypes, the other animal species shared patterns with human strains. It was inferred that, besides broilers, swine, goats, dogs and primates may be sources of infection for human in São Paulo. PCR-RFLP is a highly discriminatory technique that may be applied to molecular epidemiology studies of samples from different origins. Besides, the study also enabled the detection of two human strains and two primate strains related to serotype PEN O19: LIO 7.

The prevalence and risk factors for anti-Toxoplasma gondii antibodies were investigated in goats of the Serido Oriental microregion, Rio Grande do Norte state, Northeast region of Brazil. Three hundred and sixty-six blood samples from goats collected by jugular venopuncture were used. For the serologic diagnosis of Toxoplasma gondii infection, the indirect fluorescent-antibody test (IFAT) with cut-off value 1:64 was carried out. The prevalence of anti-T. gondii antibodies was 30.6% [95% CI=25.9-35.6%] with titers ranging from 1:64 to 1:16,384. The multivariate logistic regression analysis showed that the risk factors associated to anti-T. gondii antibodies were presence of cats in the herd, extensive/semi-intensive management systems and lack of mineral supplementation.

The objective of the present trial was to characterize genetically strains of Campylobacter jejuni subsp. jejuni isolated from humans and several animal sources (bovines, swine, dogs, primates, wild boars and poultry). A total of 828 different animal samples (feces, carcass, aborted fetus and hysterectomized uterus) were analysed by means of routine bacteriological methods, and 36 C. jejuni strains were isolated. Thirty strains of human fecal origin were obtained in clinical analysis laboratories in the city of São Paulo. The 66 C. jejuni strains isolated were submitted to genetic characterization. Primers based on fla A gene were used in a polymerase chain reaction (PCR) and amplified a fragment of the 702 bp. PCR products were evaluated by means of sequencing and genealogic analysis. Genetic variability analysis of 66 strains showed 44 different subtypes of C. jejuni. One subtype was identical to a C. jejuni strain of human origin with the sequence in the GenBank (GENBANK accession number AF050186). Subtyping analysis of C. jejuni strains based on sequencing of the fla A gene variable region and analysis of sequence alignment by the Maximum Parsimony method showed to be highly discriminatory, providing the best conditions to differentiate strains involved in outbreaks from those sporadically isolated. This is the first study of molecular subtyping analysis of human and animal C. jejuni strains using sequencing technique and genealogic analysis in the state of São Paulo, Brazil. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar geneticamente estirpes de Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de humanos e de diferentes origens animais (bovinas, suínas, cães, primatas, javalis, suínos e aves de corte). Um total de 828 amostras (fezes, carcaças, fetos abortados e útero histerectomizado) foram analisadas por métodos de rotina bacteriológica e 36 estirpes de C. jejuni foram isoladas. Trinta estirpes de origem fecal humana foram obtidas de laboratórios de análises clínicas da cidade de São Paulo. As 66 estirpes de C. jejuni isoladas foram submetidas à caracterização genética. Oligonucleotídeos baseados no gene fla A foram usados na reação de polimerase em cadeia (PCR) e amplificou um fragmento de 702 pb. Os produtos obtidos pela PCR foram avaliados pelas técnicas de seqüenciamento e análise genealógica. Análise da variabilidade genética das 66 estirpes revelou 44 diferentes subtipos de C. jejuni. Um subtipo de origem humana apresentou seqüência idêntica à de C. jejuni depositada no GenBank (GENBANK acesso número AF050186). A subtipagem das estirpes de C. jejuni baseadas no seqüenciamento da região variável do gene fla A e na análise do alinhamento das seqüências pelo método da Máxima Parcimônia, mostraram-se altamente discriminatórios fornecendo melhores condições para a correta diferenciação entre estirpes originárias de surto e as isoladas esporadicamente. Este foi o primeiro estudo de subtipagem molecular de estirpes de C. jejuni de origem humana e animal utilizando a técnica do seqüenciamento com análise genealógica realizado no Estado de São Paulo, Brasil.

Leptospirosis is a widely distributed zoonosis that affects domestic and wild animals, and that has the man as the end point of its epidemiological chain. Leptospirosis diagnosis in primates is more difficult than in other animal species, as clinical signs and lesions are less evident and antibody response is detected only for short periods. The aim of this article was to describe the detection of Leptospira spp using polymerase chain reaction (PCR), in clinical samples from one captive black-capped Capuchin monkey (Cebus apella), which presented characteristics compatible with leptospirosis (jaundice and haemorrhagic kdney) in the macroscopic post-mortem examination. A friable kidney fragment and urine sample were cultured and submitted to experimental inoculation in guinea pigs and PCR using genus specific primer pair targeting the 16S rRNA region from Leptospira interrogans serovar canicola. Isolation of the agent was negative both in culture and experimental inoculation. The PCR amplification of the clinical samples showed a 330 pb amplified fragment that corresponds to the Leptospira genus. Based on these results PCR was considered an important tool for leptospira detection in nonhumam primates, more sensitive and specific than other techniques, especially considering that the viability of the pathogen was not possible. These advantages enable the detection of the leptospiras in urine and kidney, even when autolysed, frozen or badly conserved, which prevented the isolation and experimental inoculation from positive results. A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição geográfica que acomete os animais domésticos e silvestres, tendo o homem como ponto final da cadeia epidemiológica. O diagnóstico da leptospirose em primatas é dificultado em relação a outras espécies animais, porque os sinais clínicos e lesões são menos evidentes e a resposta de anticorpos é detectada apenas em curtos períodos. O presente trabalho tem por objetivo descrever a detecção de Leptospira spp empregando-se a Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras clínicas provenientes de um macaco prego (Cebus apella) criado em cativeiro, que apresentou ao exame macroscópico realizado durante a necrópsia, características sugestivas de leptospirose (icterícia e rins hemorrágicos). Amostras de urina e fragmento de rim friável foram submetidas às técnicas cultivo e inoculação experimental em cobaias e PCR empregando-se primers gênero específicos da seqüência do gene 16S rRNA de Leptospira interrogans sorovar canicola. Na PCR as amostras clínicas revelaram um fragmento amplificado de 330 pb correspondente ao gênero Leptospira. O isolamento do agente foi negativo nas demais técnicas empregadas. Pelos resultados obtidos, verifica-se que a técnica de PCR representou uma importante ferramenta de detecção de leptospiras em primatas não-humanos, principalmente considerando-se que não foi necessária a viabilidade do patógeno, permitindo a detecção do agente em amostras autolisadas, congeladas ou amostras mal conservadas, que prejudicaram o isolamento e a inoculação experimental.

The genomic DNA of thirty strains of Aujeszky's disease virus (ADV) isolated in the South and Southeast regions of Brazil from 1982 to 1996 were characterized by restriction endonuclease analysis with BamHI. Twenty seven strains were isolated from pigs, 1 from cattle, 1 from cat and 1 from dog. Using a systematization previously described, the 30 ADV strains could be classified as genomic types I (n = 2) and II (n = 28). Genomic type III was not observed. In this first study of genomic type characterization of brazilian ADV strains, we could demonstrate the occurence in Brazil of the genomic types I and II, with a large predominance of genomic type II. O DNA genômico de 30 amostras do vírus da doença de Aujeszky (VDA), isoladas nas regiões Sul e Sudeste do Brasil no período de 1982 a 1996, foram caracterizadas por análise do perfil de restrição utilizando a enzima BamHI. Vinte e sete amostras foram isoladas de suínos, uma de bovino, uma de felino e uma de canino. Através de uma sistemática previamente descrita, as 30 amostras de VDA foram classificadas como pertencentes ao tipo genômico I (n = 2) e tipo genômico II (n = 28). O tipo genômico III não foi observado. Neste primeiro estudo de caracterização genômica de isolados de VDA do Brasil, foi possível demonstrar a ocorrência dos tipos genômicos I e II, com marcante predomínio do tipo II.

The five selections carried out in the mouse for high or low antibody responsiveness to various multideterminant immunogens were successful. In all cases the large interline difference was shown to result from the additive effects of several independently segregating loci (polygenic regulation). However, important peculiarities were demonstrated in these original selections concerning either the cellular mechanisms operating or the effect of the selected genes on antibody responses to antigens unrelated with those used for the selection (multi-specific effect). In an attempt to improve and generalize the effect of selection, the 5 high and the 5 low lines were inter-crossed to obtain populations with a balanced proportion of the 5 genomes. These two populations were then submitted to selective breedings in which the phenotypic character was the weighted responses to pluri-antigen immunization. The data obtained in 16 consecutive generations of two selective breedings (general-primary, GP and general-secondary, GS, responses) carried out from these populations are reported. The genetic parameters of the response to GP and GS selections are compared with those obtained in the original selections. The final result of both GP and GS selections demonstrate a marked improvement of the high and low antibody production traits, both quantitatively (interline divergence) and qualitatively (multi-specific effect). The success of GP and GS selections agrees with the concept that distinct groups of genes are preferentially affected by selection according to the nature of the selection antigen and the immunization procedure.

Among the differences observed between the various high (H) and low (L) antibody responder lines of mice resulting from distinct bidirectional selective breedings, one of the most puzzling is the variation in the “multispecific effect,” i. e., in the modification of antibody responses to antigens unrelated to those used during the selection. The best examples are the H and L lines of selection IV, selected on the basis of responses to somatic antigen of Salmonella which do not differ in their antibody responses to sheep erythrocytes (SE). However, a wide range of variability is observed in the responses of (HIV x LIV)F2 hybrids to this antigen, and it was therefore hypothesized that distinct groups of genes might regulate antibody responses to SE and the somatic antigen. Indeed, a new selection (IV-A) for anti-SE responsiveness started from these (HIV x LIV)F2 successfully produced a high and a low anti-SE responder line. The results of selection IV-A and the variance analysis of (HIV-A × LIV-A)F2 hybrids are reported. They are roughly similar to those in selection I, also carried out for anti-SE responsiveness. In vivo attempts to identify the major regulatory mechanism which contributes to the interline difference indicate that the efficiency of macrophage accessory function has been modified in selection IV-A, as was observed in selection I, whereas this function did not differ in Hev and Lev lines. Probably in relation to the involvement of macrophage function there is a notable increase of the multispecific effect in selection IV-A when compared with selection IV. The results of selection IV-A demonstrate that responsiveness to heterologous erythrocytes and to somatic antigen of Salmonella are under separate polygenic control operating through distinct regulatory mechanisms. The choice of the selection antigen and immunization procedure is of major importance for defining the gene interaction operating in each selective breeding experiment and the extent of its multispecific effect.

Summary The high (H) and low (L) antibody responder lines of mice produced by selective breeding are characterized by different modifications in immunocompetent cell potentialities, according to the immunization procedure used for the selection process. In selections I and II, the difference in antibody responsiveness between H and L lines was clearly shown to depend mainly on macrophage function: the more rapid catabolism of antigens in L mice was the main cause of the low antibody production. In contrast, up to now, no difference has been observed between H and L mice of selections III and IV in terms of the macrophage accessory role. The administration of silica particles has a well known impairment effect on macrophage activity. Therefore, the effect of silica injection on the kinetics of antibody responses to selection antigens was compared in H and L mice of the four selections. Silica was given either intravenously or locally in one hind footpad 6 or 24 h before immunization by the same route. Silica treatment consistently improved antibody responsiveness in the L mice of selections I and II, but had no effect in the L mice of selections III and IV. The antibody responses of the H lines of the four selections were not substantially modified by silica injections. Therefore, the silica treatment reduced the interline difference in antibody responses in selections I and II only, by interfering with the expression of the genetic modification of macrophage activity. However, a similar effect was not obtained with other substances known to affect macrophages, including dextran sulphate or carrageenan. The results reported here are in agreement with the above-mentioned statement that the genetic modification of macrophage function plays a major role in the interline difference in selections I and II and is not involved in selections III and IV.

Um inquérito soroepidemiológico foi conduzido para a pesquisa de anticorpos anti-Chlamydophila abortus, anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Brucella abortus em caprinos leiteiros do semiárido da Paraíba. A amostragem foi delineada para a determinação da prevalência de propriedades positivas (focos) e de animais soropositivos. Foi realizada uma seleção aleatória de propriedades (unidades primárias) e, dentro dessas, foi escolhido, de forma aleatória, um número pré-estabelecido de fêmeas caprinas (unidades secundárias). Ao todo foi colhido sangue de 974 fêmeas caprinas provenientes de 110 propriedades. Na ocasião da colheita, foi aplicado um questionário epidemiológico por propriedade e as coordenadas geográficas foram obtidas com um aparelho de GPS. Para o diagnóstico sorológico das infecções por C. abortus e B. abortus, foram utilizados os testes de Fixação de Complemento e do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), respectivamente. Para o diagnóstico das infecções por T. gondii e N. caninum foram utilizadas reações de imunofluorescência indireta (RIFI). Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. As análises realizadas foram: determinação das prevalências de focos e de animais soropositivos e identificação de fatores de risco. As prevalências de focos de C. abortus, T. gondii, N. caninum e B. abortus foram de 50,0% [40,3% - 59,7%], 70,0% [60,5% - 78,4%], 16,4% [10,0% - 24,6%] e 0,0% [0,0% - 3,3%], respectivamente. As prevalências de animais soropositivos para C. abortus, T. gondii, N. caninum e B. abortus foram de 11,9% [8,3% - 16,8%], 18,1% [14,3% - 22,6%], 1,9% [1,0% - 3,4%] e 0,0% [0,0% - 3,8%], respectivamente. Os fatores de risco para a infecção por C. abortus foram: compartilhar reprodutores e/ou sêmen (odds ratio = 2,35) e histórico de abortamentos (odds ratio = 3,06). Presença de plantas tóxicas na propriedade (odds ratio = 5,11) e a caprinocultura não ser a principal atividade (odds ratio = 3,34) foram apontadas como fatores de risco para a ocorrência de focos de infecção por T. gondii. Para a infecção por N. caninum, os fatores de risco associados à ocorrência de focos foram: alugar pastos (odds ratio = 10,34), não usar seringas descartáveis (odds ratio = 3,78) e possuir 25 ou mais caprinos (odds ratio = 6,51). Sugere-se que esforços sejam concentrados na condução de medidas de prevenção e controle das infecções por C. abortus, T. gondii e N. caninum em caprinos leiteiros do semiárido da Paraíba, especialmente aquelas relacionadas à correção de fatores de risco, visando a redução da prevalência e da disseminação desses agentes nesses animais e a possível exposição de seres humanos. A seroepidemiological study for anti-Chlamydophila abortus, anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum and anti-Brucella abortus antibody research was carried out in dairy goats from the semiarid of Paraíba state. Sampling was delineated for the determination of positive flocks (foci) and seropositive animals prevalences. A random selection of flocks (primary units) was performed and a pre-established number of female goats (secundary units) were sampled in each of these flocks. A total of 975 serum samples from 110 flocks were collected. On the occasion of the blood collection, an epidemiological questionnaire was applied in each flock and the geographical coordinates were obtained with a GPS. For the serological diagnosis of C. abortus and B. abortus infections complement fixation test and Rose Bengal test (RBT) were used, respectively. Indirect fluorescent antibody tests (IFAT) were carried out for detecting anti-T. gondii and anti-N. caninum antibodies. A flock was considered focus when presented at least one seropositive animal. The following analyses were performed: determination of foci and seropositive animals prevalences and identification of risk factors. Foci prevalences of C. abortus, T. gondii, N. caninum and B. abortus were 50.0% [40.3% - 59.7%], 70.0% [60.5% - 78.4%], 16.4% [10.0% - 24.6%] and 0.0% [0.0% - 3.3%], respectively. Seropositive animals prevalences to C. abortus, T. gondii, N. caninum and B. abortus were 11.9% [8.3% - 16.8%], 18.1% [14.3% - 22.6%], 1.9% [1.0% - 3.4%] and 0.0% [0.0% - 3.8%], respectively. Risk factors associated with C. abortus infection were: lend buck and/or semen (odds ratio = 2.35) and history of abortions (odds ratio = 3.06). Presence of toxic plants in the property (odds ratio = 5.11) and goat production do not be the main activity in the property (odds ratio = 3.34) were identified as risk factors for the occurrence of foci of T. gondii infection. For the N. caninum infection risk factors associated with occurrence of foci were: share pasture (odds ratio = 10.34), do not use disposable syringes (odds ratio = 3.78) and flock size 25 goats (odds ratio = 6.51). It was suggested that efforts be concentrated on the application of control and prevention measures for C. abortus, T. gondii and N. caninum infections in dairy goats from the semiarid of the Paraíba state, especially those related to the correction of risk factors, aiming to reduce the prevalence and spread of these agents and possible exposure of humans.

Em decorrência da importância da leptospirose nas criações zootécnicas pelos prejuízos econômicos, principalmente pelas infecções crônicas, forma mais importante na propagação e permanência da bactéria no ambiente, este trabalho pretendeu estudar o curso da leptospirose e a formação do portador pela infecção experimental de hamsters com Leptospira interrogans sorvar Canicola, estirpe LO4, autóctone, pelas vias conjuntiva-nasal (CN) e cérvico-vaginal (CV) comparadas a via controle, intraperitonial (IP) com duas concentrações de inóculo (20-30 e 100-200 leptospiras/campo microscópico) e ainda estabelecer a eficácia conferida por cinco vacinas experimentais formuladas com dois tipos de adjuvantes (saponina e hidróxido de alumínio), pelo desafio de hamster. No preparo das vacinas foi considerada a virulência da estirpe LO4 submetida a duas e cinco passagens in vitro, que foi comparada com duas vacinas controle produzidas com a estirpe de referência, Hond Utrecht IV, com indeterminado número de passagens in vitro. Foram também avaliadas a indução de anticorpos aglutinantes e neutralizantes e as lesões histopatológicas por HE e Warthin-Starry. A detecção das leptospiras nos órgãos de hamsters mortos pela leptospirose ou eutanasiados foi realizada pela visualização direta, cultivo e PCR, considerando qualquer um dos resultados positivo. A visualização direta foi o melhor método de detecção na suspensão de órgãos. A via CN mostrou-se tão letal quanto IP na maior concentração de inóculo (p

A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosas, de ocorrência mundial, que acomete caprinos e ovinos, caracterizada pela formação de abscessos em gânglios linfáticos superficiais, e alguns casos órgãos e linfonodos internos. É uma enfermidade causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis, responsável por grandes perdas econômicas na caprinocultura e ovinocultura. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um teste sorológico sensível e específico para detectar anticorpos anti-C. pseudotuberculosis em ovinos. Os animais foram classificados em dois grupos, com sintomatologia aparente para linfadenite caseosa (n=103) colhidos a campo, onde foram coletados amostras de soro e punção de linfonodos aumentados; e animais sem sintomatologia aparente (n=50) dos quais as amostras de soro e fragmentos de pulmão e linfonodo mediastínico foram colhidos em frigorífico. Em ambas as amostras a confirmação da presença e ausência da doença foi realizada através das provas de cultivo microbiológico e PCR, considerados nesse estudo como padrão para classificação dos animais. O resultado do cultivo microbiológico dos animais com sintomatologia aparente foi 53,5% (55/103) identificadas como C. pseudotuberculosis através de provas bioquímicas, e com a utilização da PCR, 46,5% (48/103) das amostras foram positivas para C. pseudotuberculosis. Com relação aos animais sem sintomatologia aparente, todas as amostras foram negativas no cultivo microbiológico e PCR (0/50). Na padronização do ELISA indireto foram utilizados 42 soros positivos e 43 soros negativos confirmados no cultivo microbiológico e PCR para linfadenite caseosa. A média de absorbância foi 1,88 com desvio padrão de 0,43, para as amostras positivas e, para as amostras negativas a média de 0,71 e desvio padrão 0,18. Dessa forma foram consideradas positivas, as amostras que apresentaram na reação de ELISA valor da DO> 1,1 e negativas de 1.1 and negative

A técnica de PCR, utilizando-se \"primers\" desenhados a partir do gene que codifica uma proteína imunogênica de 31 KDa de Brucella abortus, foi empregada na detecção de Brucella spp. em 300 amostras de produtos lácteos clandestinos apreendidas em municípios dos Estados de São Paulo (SP) e de Minas Gerais (MG). Foram analisadas 49 amostras de queijo minas frescal e 18 de queijo meia-cura provenientes de MG, e 92 amostras de queijo minas frescal, 33 amostras de queijo meia-cura e 108 amostras de leite cru provenientes de SP. O isolamento bacteriano foi tomado como referência, porém não se isolou Brucella spp. de nenhuma das amostras cujos cultivos mostraram-se contaminados com outros gêneros bacterianos. Pela PCR foi observado que 37 amostras de queijo foram positivas: 29/141 (20,56 %) das amostras de queijo minas frescal e 8/51 (15,68%) das amostras de queijo meia-cura. Todas as amostras positivas na PCR para Brucella spp. foram confirmadas como sendo da espécie Brucella abortus pela técnica de PCR utilizando-se \"primers\" espécie-específicos. Foi instituída a reação de hemi-nested PCR para a diferenciação da cepa em B19 ou campo tomando-se como base a deleção genética de 702 pb existente na cepa vacinal B19. A padronização da técnica permitiu que todas as cepas de Brucella spp. fossem diferenciadas, revelando que 30 (81,08%) amostras eram B19 e 7 (18,92%) eram cepas de Brucella abortus de campo. A concordância estimada entre as técnicas de PCR e do cultivo microbiológico através do indicador Kappa foi considerada baixa (K = 0) devido ao não isolamento do microrganismo. A PCR assay using primers designed based on the gene that encodes a 31 KDa immunogenic protein from Brucella abortus was used in the detection of Brucella spp. in 300 samples of illegal dairy products obtained in cities of the states of São Paulo (SP) and Minas Gerais (MG), Brazil. A total of 49 samples of minas frescal cheese and 18 samples of meia-cura cheese from MG were analyzed, besides 92 samples of minas frescal cheese, 33 samples of meia-cura cheese and 108 samples of raw milk from SP. Although bacterial isolation was used as reference, Brucella spp. was not isolated from any samples in which culture was contaminated by other genera of bacteria. PCR showed that 37 samples were positive for Brucella spp.: 29/141 (20,56 %) of the minas frescal cheese samples and 8/51 (15,68%) of the meia-cura cheese samples. All positive samples for Brucella spp. were confirmed as Brucella abortus by PCR using species-specific primers. Hemi-nested PCR was used for the differentiation between B19 and field strains, based on the genetic deletion of 702 pb in the vaccinal strain. Standardization of the technique enabled the differentiation of all Brucella spp. strains, showing that 30 of them (81,08%) were B19 and 7 (18,92%) of them were Brucella abortus field strains. Estimated agreement between PCR and microbiological culture as determined by Kappa indicator was considered to be poor (K = 0) due to the absence of isolation of the microorganism.

Rotavírus têm sido identificados mundialmente como o mais importante agente etiológico de diarréias agudas não-bacterianas em animais jovens de várias espécies, incluindo a humana. Foi desenvolvido e avaliado um método de ELISA tipo “duplo-sanduíche" para a detecção de rotavírus a partir de material fecal. Para tanto, a amostra NCDV de rotavírus do grupo A foi propagada em cultivo celular com células MA-104. O vírus foi concentrado por ultracentrifugação e inoculado em coelhos e carneiros. Em seguida, as frações IgG, oriundas de amostras de soro dos animais, foram purificadas por cromatografia de troca iônica e absorvidas com soro total de ambas espécies animais, utilizando-se polímero de glutaraldeído, de modo a eliminar reações inespecíficas. A presença do rotavírus foi detectada pela IgG de carneiros e revelada pela IgG de coelho, usando como conjugado IgG de cabra anti-IgG de coelho conjugada à peroxidase. Os valores de diluição dos componentes do ELISA e o valor do ponto-de-corte foram definidos usando-se 26 amostras fecais (13 positivas e 13 negativas) de leitões, tendo como prova padrão a eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Aplicado a um painel constituído de 86 amostras fecais diarréicas de leitões, os resultados do ELISA foram: 100% de sensibilidade; 98,79% de especificidade, com uma concordância de 98,83%. A variância entre 86 repetições da mesma amostra foram 0,001 (para a amostra positiva) e 0,0002 (para a amostra negativa). Estes resultados demonstram que este ELISA é um teste sensível e específico para o diagnóstico de rotavírus a partir de material fecal. Rotaviruses have been identified worldwide as a major etiologic agent of acute nonbacterial diarrhea in the young of many species, including humans. In this investigation was developed and evaluated a “double-sandwich" antibody ELISA method for detection of rotavirus from stool specimens. For that, the NCDV strain of rotavirus group A was serially cultivated in MA-104 cell culture. The virus was concentrated by ultra-centrifugation and inoculated in rabbits and sheeps. After that, the IgG of serum samples of the animals was purified by ion-exchange chromatography and absorbed with whole serum of both animal species using a glutaraldehyde polymer, in order to eliminate inespecific reactions. The presence of rotavirus was detected by the sheep’s IgG and revelated by the rabbit’s IgG, using a anti-rabbit IgG peroxidase conjugate developed in goat. The values of diluition of the components of the ELISA and the cut-off value were defined using 26 fecal samples (13 positive and 13 negative) of piglets. Following this procedure, the test was employed in a panel of 86 fecal samples from piglets with diarrhea, using as standard the polyacrilamide gel electrophoresis (PAGE) test. The results of the ELISA were: 100% of sensivity; 98.79% of specificity, with an agreement of 98.83%. The variance between 86 repetitions of the same sample were 0.001 (for one positive sample) and 0.0002 (for one negative sample). These results showed that this ELISA is an sensitive and specific screening test for rotavirus diagnosis from fecal material.