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HAT-B is a yeast histone acetyltransferase composed of Hat1, Hat2 and Hif1 proteins. We demonstrate that a hat2 mutant or a hat1hat2 double mutant, but not a hat1 mutant, have an extended life-span. Transcriptome analysis shows that the single hat mutants are not very different from wild type. However, the comparison of the hat1 and hat2 transcriptomes shows that they are different. The hat1hat2 double mutant shows a transcriptional phenotype similar to that of the hat1 mutant but strongly enhanced. These results indicate that Hat2p could have additional functions in the cell to those of Hat1p.

En la cromatina de los organismos eucariotas el DNA se organiza alrededor de octámeros de histonas, dando lugar a la estructura nucleosomal. Las histonas sufren una serie de modificaciones postraduccionales entre las que se encuentra la acetilación de residuos de lisina, situados en los extremos N-terminales de estas proteínas. Esta modificación reversible, catalizada in vivo por las histona desacetilasas (HD) y las histona acetiltransferasas (HAT), ha sido implicada durante muchos años en la regulación de diversos procesos celulares de gran importancia. Recientemente, el papel de la acetilación de histonas en la regulación de la transcripción ha cobrado gran importancia con el descubrimiento de que proteínas con actividad HAT y HD son reguladores transcripcionales. En la levadura Saccharomyces cerevisiae se han identificado los genes que codifican para cuatro proteínas con actividad HAT, GCN5, HAT1, ESA1 y TAF130. Mediante métodos bioquímicos se había detectado previamente la existencia de al menos cuatro actividades histona acetiltransferasa diferentes, HAT A1, HAT A2, HAT A3 y HAT B. El análisis bioquímico de cepas de levadura mutantes en estos genes, y en otros genes que codifican proteínas relacionadas funcionalmente con estas HATs clonadas, realizado en este trabajo, ha permitido caracterizar estos enzimas previamente descritos en cuanto a su composición en proteínas, su localización subcelular y su especificidad de sustrato. Además el estudio bioquímico de cepas de levadura mutantes ha llevado a la identificación de una nueva actividad histona acetiltransferasa no descrita hasta el momento, el enzima denominado HAT A4., In eukaryotes DNA is packaged with histones into chromatin. One of the most important posttranslational modifications of the N-terminal tails of histones is the reversible acetylation of lysine residues. Acetylation has been correlated with the regulation of many important cellular processes such us chromatin assembly, DNA replication and gene transcription. Histone acetylation is maintained in vivo by two different enzymatic activities, namely histone acetyltransferases (HAT) and histone deacetylases (HD). The relationship between chromatin acetylation and gene transcription has become very clear since several proteins known to be transcriptional regulators have been reported to posses HAT or HD activity.In the yeast Saccharomyces cerevisiae four proteins with HAT activity have been reported, the products of the genes HAT1, GCN5, ESA1 and TAF130.By biochemical methods it had been previously reported the presence in yeast of at least four HAT activities, HAT A1, HAT A2, HAT A3 and HAT B. In this work, the biochemical analyses of the HAT activity present in yeast strains bearing mutations on HAT genes, or genes coding for proteins related to HATs, have allowed the characterization of these enzymatic activities previously described in terms of protein composition, subcellular location and substrate specificity. The biochemical study of yeast mutants has also lead to the identification of a new yeast HAT activity, HAT A4 enzyme.

La vid (Vitis vinifera L.) es una de las especies vegetales más susceptibles de padecer infecciones virales. En Europa y España, solo cinco especies virales (GFLV, ArMV, GLRaV-1, GLRaV-3 y GFkV), de las treinta y una patógenas de la vid, se encuentran bajo restricción legislativa. Algunos de estos son virus emergentes no contemplados en la legislación, siendo GPGV, GAMaV, GRLDaV, GVE, GVF, GVT, GRBV y GVCV las principales especies de virus emergentes que pueden constituir una amenaza para los cultivos españoles. Por tanto, el objetivo general de la presente tesis es conocer la situación de las principales virosis emergentes de vid en España y desarrollar herramientas de diagnóstico que puedan implementar programas de prevención temprana, selección sanitaria, certificación y erradicación. Los resultados de la búsqueda de virosis emergentes, realizada en diferentes años, denominaciones de origen y variedades de vid, muestran que: (1) virus como GLRaV-1, GLRaV-2, GLRaV-3, GFkV, GFLV y GRSPaV siguen teniendo una presencia destacada en los viñedos españoles; (2) se han detectado, con prevalencias bajas, y solo en las denominaciones de origen (D.O.) Utiel-Requena y Manchuela, los virus emergentes GPGV y GAMaV, habiendo sido este último detectado por primera vez en España en este estudio; (3) no ha sido detectada la presencia de los virus GVT, GVE, GVF, GRBV, GVCV y GRLDaV. La caracterización genética de los virus emergentes detectados en España ha demostrado que: (1) algunos aislados españoles de GPGV presentan un nuevo polimorfismo, no descrito hasta ahora, que afecta a la proteína de movimiento (MP); (2) existe una alta diversidad genética en los aislados españoles, lo cual sugiere la introducción por múltiples vías de este virus en las D.O. Utiel-Requena y Manchuela; y (3) la caracterización genética de los asilados GAMaV españoles evidencia que estos difieren del resto de los aislados virales descritos en otras 12 Resumen Resumen partes del mundo, sugiriendo por tanto que la introducción de este virus en España no es reciente. Adicionalmente, se han desarrollado tres nuevos métodos de detección, uno basado en PCR convencional para la detección de GAMaV y dos basados en PCR en tiempo real para la detección y cuantificación absoluta de GRLDaV y GPGV, los cuales han sido aplicados con éxito para el diagnóstico de los tres virus tanto en plantas de vid como en sus posibles vectores de transmisión. Estos nuevos métodos de detección constituyen herramientas útiles para abordar futuros estudios epidemiológicos y prevenir la dispersión de estos patógenos en España y en otros territorios del mundo. Y, por último, se ha identificado por primera el genoma completo del micovirus penicillimonavirus gammaplasmopara, asociado a una nueva sintomatología de vid de etiología desconocida. Los estudios de caracterización molecular y aislamiento de partículas virales de esta especie viral sugieren que podría tratarse del primer virus bipartito de la familia Mymonaviridae.

Este trabajo estudió la acetilación postraduccional de una estructura dinámica implicada en un gran número de procesos celulares, la cromatina. Para ello se realizaron experimentos utilizando el organismo eucariota Sacharomyces cerevisiae (la levadura de la cerveza). En una primera parte se llevó a cabo el análisis bioquímico de complejos histona acetiltransferasa (HAT) en S. cerevisiae, detectándose una nueva actividad HAT con especificidad sobre la histona H3, y a partir de este descubrimiento, se analizaron las actividades HAT A4-I y HAT A4-II. La segunda parte del trabajo consistió en la localización genómica de diversas HATs, y de marcas epigenéticas mediante ChIP-chip (combinación de inmunoprecipitación de cromatina y chips de DNA). Para ello se diseñó un nuevo método localización genómica (utilizando macrochips de ORFs de levadura y marcaje radiactivo) con el que se estudió la asociación de una serie de HATs a cromatina y el patrón de acetilación de la lisina 14 de la histona H3. Finalmente, se realizó un estudio de los efectos sobre la longevidad y sobre el perfil transcriptómico de la deleción de los genes HAT1 y HAT2, codificantes de proteínas pertenecientes al complejo HAT B de S. cerevisiae., This work studied posttranslational acetylation of chromatin, a dynamic structure involved in a great number of cellular processes. Experiments using eukariotic organism Sacharomyces cerevisiae (baker's yeast) were done with this aim.The first part consists in a thorough biochemical analysis of histone acetyltranferase (HAT) complexes in S. cerevisiae. This analysis dectected a new HAT activity with specificity towards H3 histone, so the activities we called HAT A4-I and HAT A4-II were analysed. The second part covers the genomic location of several HATs and epigenetic marks through ChIP-chip (a combination of chromatin immunoprecipitation and DNA chips). We designed a new genomic location method (involving ORF macroarrays and radiactive labelling) in order to study association of HATs to chromatin and the acetylation pattern of lysine 14 of histone H3.Finally we have performed several experiments to assess the effects on longevity and transcriptome caused by the deletion of two genes coding for proteins that belong to HAT B complex in S. cerevisiae.