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O objetivo desse estudo foi determinar a ocorrência e os fatores associados à soropositividade para Leptospira spp. em ovinos do estado de Sergipe, Brasil, a partir de 1.200 amostras coletadas de sessenta propriedades das suas três mesorregiões entre os anos de 2011 e 2012. Foi observada, pela reação de soroaglutinação microscópica, 37,7% (452/1.200; IC: 0.357-0.396) de ovinos soropositivos com 93,3% (56) de propriedades com pelo menos um animal positivo. Os sorogrupos reagentes predominantes foram: Sejroe (32,1%), Icterohaemorrhagiae (23,5%) e Grippotyphosa (22,4%), com presença também de reações para Australis (7,1%), Pomona (3,8%), Autumnalis (3,5%), Panama (3,3%), Ballum (1,8%), Andamana (1,3%), Hebdomadis (0,9%) e Seranga (0,4%). As titulações variaram de 100 a 3.200, sendo que 77,2% delas ? 400. Os fatores associados à presença de ovinos soropositivos a Leptospira spp. foram: criações de subsistência (p=0,000, OR=3,08, IC95%=1,99-4,78) e com finalidade de produção de matrizes e reprodutores (p=0,000, OR=2,19, IC95%=1,46-3,28). As infecções por Leptospira spp. estão ostensivamente presentes nos rebanhos ovinos do estado de Sergipe, sendo necessária a adoção de práticas de manejo adequadas, direcionadas ao controle de roedores e criação consorciada com bovinos que podem levar a contaminação dos alimentos e pastagens.

Leptospirosis is considered a neglected disease with an estimated more than one million cases every year. Since rodents are at the same time the main reservoir and generally asymptomatic to Leptospira infection, understanding why some animal species are resistant and others are susceptible to this infection would shed some light in how to control this important zoonosis. The innate immune response against Leptospira is mainly dependent on phagocytosis and activation of the Complement System. In this context, cytokines may drive the early control of infection and the adaptive response. Since the Complement System is important to eliminate leptospires in vivo, we investigated if Complement C5 in A/J mice would modulate the cytokine production during infection by Leptospira interrogans serovar Kennewicki type Pomona Fromm (LPF). Thus, our aim was to investigate the systemic levels of pro- and anti-inflammatory cytokines during Leptospira infection in the blood, liver, lung, and kidney on the third and sixth days of infection in A/J C5+/+ and A/J C5-/- mice. Blood levels of TNF-α, IL-6, IFN-γ, and MCP-1 reached a peak on the third day. Although both mouse strains developed splenomegaly, similar histopathological alterations in the liver and the lung, levels of pro- and anti-inflammatory cytokines were different. A/J C5+/+ mice had higher levels of liver IL-10, IL-1β, IL-12p40, and IL-12p70 and kidney IL-1β, IL-12p40, and IL-12p70 on the sixth day of infection when compared to A/J C5-/- mice. Our results showed that in A/J genetic background, the Complement component C5 modulates a cytokine profile in the liver and kidney of infected mice, which may play a role in the control of disease progression.

The aims of the study were to determine the seroprevalence of leishmaniasis and Chagas disease, and to determine the risk factors associated with seropositivity in dogs in the tourist city of Ibiúna, São Paulo, Brazil. A total of 570 blood samples of dogs were collected from four regions in the 48 districts of the municipality, from September 2007 to March 2008, and submitted for serological examination. Laboratory diagnosis of leishmaniasis and Chagas disease was performed using indirect enzyme-linked immunosorbent assay and indirect immunofluorescence, respectively. Of the 570 animals examined, 13 (2.3%; 95% confidence interval [CI] = 1.2%-3.8%) were seropositive for leishmaniasis, and 35 (6.1%; 95% CI = 4.3%-8.3%) were seropositive for Chagas disease. A risk factor associated with seropositivity for Chagas disease in dogs was residence in a region with a predominance of small farms generally used for subsistence planting and leisure and surrounded by forest areas (odds ratio = 4.20). By contrast, there were no risk factors identified for leishmaniasis, leading us to conclude that leishmaniasis and Chagas disease are present in dogs in the tourist city of Ibiúna, São Paulo; however, additional studies are needed in order to fully define the risk factors associated with disease in this municipality.

The aim of this study was to study the seroepidemiological profile of brucellosis and leptospirosis in horses traction Island Maiandeua, state of Pará. In two distinct periods, blood samples were collected from 52 animals of both sexes and different ages (2 to 17 years), totaling 104 samples. For the research of antibodies anti-Brucella abortus were used in rapid agglutination test in plate. In the first harvest, none animal was positive, however in the second harvest there were three animals reactive serum. The research of antibodies anti-Leptospira spp. was performed with the use of the microscopic agglutination test (MAT), the first harvest was 23.07% reacting animals and 15.38% at the second harvest, for one or more Leptospira spp. with titers ranging from 100 to 200. The predominant serotype at first and second harvest was the Autumnalis 40% and 37.5% respectively. According to age, it was observed in group 1 (2 to 7 years) 27.78% and 13.89% respectively in the two samples and the second group (> 7 years) was found 12.50% and 18 75% of reactive serum. The results observed in this study demonstrated that the island of Maiandeua, state of Pará, there is the presence of Leptospira spp, with the most frequent serovar autumnalis and possible exposure of animals to brucella smooth, suggesting low risk of infection in the population of horses examined.

ABSTRACT. Rizzo H., Gregory L., Beraldi F., Castro V., Morais Z.M. & Vasconcellos S.A. [Leptospirosis and reproductive performance of sheep bred in São Paulo State, Brazil.] Soropositividade para leptospirose e desempenho reprodutivo de ovinos de criatórios localizados no estado de São Paulo, Brasil. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 36(3):244-250, 2014. Departamento de Clínica Médica, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitá- ria, São Paulo SP 05508-270, Brasil. Email: hubervet@gmail.com The association between leptospirosis serum reactivity and reproductive failure was investigated on 294 sheep from 28 farms on the State of São Paulo, Brazil. The samples were screened using microscopic serum agglutination with 24 serovars, the cut-off point was the dilution of 1:100. Biological samples from 16 abortion products, one uterus, six placentas, five samples of uterine discharge, five swabs with vaginal discharge, 17 semen samples, and three samples of preputial secretion, were submitted to bacterial cultivation and isolation on Fletcher media. Organs pools of seven aborted fetuses were screened trough PCR technique in order to find Leptospira sp. DNA. Leptospirosis serum reactive sheep with reproductive disturbances history proportion was 22.8% (67/294). 87 positive serum agglutination reactions (title > 100) were found with 15 different serovars. The most predominant were: Autumnalis (n=33), Icterohaemorrhagiae (n=11) e Hardjo (Hardjoprajitno) (n= nine) with titles ranging from 100 to 800. Positive animals association with endometritis was high OR=7.62 (p=0.021 and CI=1.36 – 42.72), abortion had low association OR-0.54 (p=0.046 and CI= 0.30 – 0.99). There was neither positive PCR test nor isolation. It was not possible to find the association between reproductive disturbances and leptospirosis serum reactivity on the sheep flocks studied on the State of São Paulo.

A survey of Leptospira spp. in wild mammals from the southern Pantanal of Mato Grosso do Sul was performed by microscopic agglutination test (MAT) and polymerase chain reaction (PCR). The serovars most frequently found were Hardjobovis (28%), Icterohemorhagiae (12%), M110/2006 strain (isolated from Cerdocyon thous, 16%), Canicola (L014 isolated from Bos Taurus, 4%), Whitcombi (4%), Pomona (20%), Autumnalis (12%) and Copenhageni (M9/99 isolated from Rattus norvegicus, 4%). From the 79 samples tested by PCR, 21 (26.58%) were positive, resulting in the amplification fragment of approximately 331pb. Two amplified fragments from C. thous were cloned, sequenced and identified as L. interrogans by phylogenetic analysis.

O gambá (Didelphis spp.) é um marsupial onívoro nativo das Américas que apresenta comportamento sinantrópico em áreas urbanas. Apesar da sua proximidade com animais domésticos e o homem, o conhecimento da sua participação na epidemiologia de alguns agentes zoonóticos é fundamental. Este estudo objetivou determinar a presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. em amostras de sangue colhidas de gambás de 18 municípios do estado de São Paulo, Brasil, entre 2003 e 2008. Foram obtidas amostras sanguíneas de 343 gambás: Didelphis aurita (n = 256) e Didelphis albiventris (n = 87). As amostras foram testadas para detecção de anticorpos contra T. gondii, utilizando o teste de aglutinação modificado (TAM-Toxo; ponto de corte ≥ 25); Neospora spp., utilizando a reação de imunofluorescência indireta (RIFI; ponto de corte ≥ 25); e Leptospira spp., utilizando a soroaglutinação microscópica (SAM-Lepto; ponto de corte ≥ 100). As frequências de anticorpos contra T. gondii, Neospora spp. e Leptospira spp. foram 22,7%, 1,5% e 3,5%, respectivamente. Os sorogrupos-sorovares de Leptospira spp. que apresentaram soropositividade foram: Autumnalis-Butembo; Mini-Mini; Ballum-Castellonis; Icterohaemorrhagiae-Icterohaemorrhagiae; Icterohaemorrhagiae-Copenhageni e Grippotyphosa-Grippotyphosa ou Bananal. Esse estudo demonstrou que esses agentes estão circulando em populações de gambás no estado de São Paulo. Desta forma, investigações que visam determinar o papel dos marsupiais na epidemiologia de cada doença devem ser conduzidas, especialmente visando o entendimento do comportamento desses animais como hospedeiros dessas zoonoses.

RESUMO: O objetivo do trabalho foi determinar a prevalência de leptospirose e brucelose por Brucella canis e determinar os fatores de risco associados com a positividade em cães da Estância Turística de Ibiúna, estado de São Paulo, Brasil. Foram examinados 570 animais distribuídos em 4 regiões nos 48 bairros do município, no período de setembro de 2007 a março de 2008. O diagnóstico sorológico da leptospirose foi efetuado com o teste de soroaglutinação microscópica (SAM), e para o diagnóstico de brucelose foi realizado hemocultivo. Dos 570 animais examinados, 187 (32,8%; IC95% 28,9 - 36,8) foram soropositivos para leptospirose, com predomínio de reações para os sorovares Pyrogenes, Autumnalis e Canicola, e 6 (1,05%; IC95% 0,4 - 2,2) foram positivos para brucelose. A variável atividade sexual (OR = 1,73) foi identificada como fator de risco associado à positividade para leptospirose, e o manejo do tipo solto foi considerado fator de risco tanto para leptospirose (OR = 1,96) quanto para brucelose (OR = 10,85). Conclui-se que a leptospirose e a brucelose estão presentes em cães da Estância Turística de Ibiúna, São Paulo, e que a atividade sexual e o acesso irrestrito à rua são condições associadas com a prevalência das infecções.

This work reports a survey of Leptospira spp in pampas deer (Ozotoceros bezoarticus) in the Pantanal wetlands of the state of Mato Grosso do Sul, Brazil by serology and polymerase chain reaction (PCR). Seventy pampas deer were captured in the dry season and surveyed using PCR, microscopic agglutination test (MAT) (n = 51) and by both techniques (n = 47). PCR detected infections in two pampas deer and MAT detected infections in three. Through sequencing and phylogenetic analyses, the PCR-amplified fragment detected in deer was identified as Leptospira interrogans. Serovars Pomona and Butembo were detected using MAT and the highest titre was 200 for serovar Pomona. Epidemiological aspects of the findings are discussed.

Procurando atender ao objetivo de manter a regularidade da periodicidade do Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science (BJVRAS), estamos lançando o segundo fascículo de 2015. Neste número, houve o predomínio de artigos da área de Reprodução Animal, que conta com uma revisão sobre a eficiência placentária na espécie equina, dois trabalhos analisando aspectos do sêmen: perfil oxidativo de sêmen bovino criopreservado em diferentes estações do ano e criopreservação do sêmen de quatis; além de uma investigação sobre a influência da temperatura de transporte de ovários na viabilidade de oócitos caninos coletados em diferentes estágios do ciclo estral. Na área de Cirurgia Veterinária, é investigada a contração de feridas. Na área de Clínica Veterinária, foi analisado o eletrocardiograma de cães tratados com solução oftálmica de maleato de timolol 0,5%. Na área de Medicina Veterinária Preventiva, é apresentado um trabalho que investigou a ocorrência de toxoplasmose e neosporose em cães da cidade de Natal, Rio Grande do Norte. A área de Patologia Veterinária conta com um trabalho efetuado em modelo experimental que investiga a carcinogênese química em camundongos BALB-C. Finalmente, na área de Nutrição e Produção Animal é apresentada uma investigação da reatividade de equinos à presença de estímulos sonoros. Desejamos uma boa leitura a todos. Prof. Dr. Silvio Arruda Vasconcellos Editor-Chefe Profª Drª Solange Maria Gennari Editor Científico

Foram estabelecidos critérios de interpretação do teste de tuberculinização aplicado ao diagnóstico da tuberculose em grupos de caprinos experimentalmente sensibilizados. Dos 30 animais utilizados, dez foram sensibilizados com Mycobacterium avium - amostra D4 (grupo A) e dez com Mycobacterium bovis - amostra AN5 (grupo B). Dez caprinos não foram sensibilizados e constituíram o grupo controle (grupo C). No teste cervical simples, realizado com tuberculina bovina (M. bovis) e lido às 72 horas pós-tuberculinização (p.t.), as reações positivas foram aquelas em que houve aumento da espessura da dobra de pele igual ou superior a 3,9mm; reações inconclusivas, quando situadas entre 1,8 e 3,8mm, e negativas quando iguais ou menores que 1,7mm. A análise dos resultados do teste cervical comparativo, realizado com o M. avium e M. bovis e lido às 72 horas p.t., indicou reação positiva quando o aumento da espessura da dobra da pele induzida pela tuberculina bovina superou a reação à aviária em pelo menos 2,5mm; reação inconclusiva quando a diferença entre a reação à tuberculina bovina e à tuberculina aviária ficou situada entre 1,9 e 2,4mm; e negativa quando a reação bovina ultrapassou a aviária em até 1,8mm. Às 96 horas após a injeção da tuberculina, foi efetuada a avaliação histológica do local das reações tuberculínicas colhendo-se amostras de pele de cinco caprinos dos grupos A e B e de quatro animais do grupo controle; os resultados confirmaram a presença, nos grupos sensibilizados, de infiltrado inflamatório, constituído, preferencialmente, por células mononucleares.

Foram avaliados 304 cães de ambiente rural e urbano do município de Monte Negro, Rondônia, através do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), Soroaglutinação Lenta em Tubos (SAL) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) para a pesquisa de anticorpos anti-Brucella abortus e da Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e Imunodifusão em gel de ágar com soro tratado com 2-Mercaptoetanol (IDGA-ME) para Brucella canis. Foram consideradas positivas as amostras reagentes nas provas confirmatórias do 2-ME e IDGA-ME. Verificaram-se 56 (18,4%) animais reagentes ao AAT e 12 (4,0%) reagentes a SAL. Apenas um cão (0,3%) foi considerado positivo, confirmado pela prova do 2-ME. Foram observadas 11 (3,6%) reações á IDGA, porém não houve confirmação na prova do IDGA-ME. Ressalta-se a baixa ocorrência de cães positivos ao 2-ME e a ausência de animais reagentes á IDGA-ME.

Em estudo retrospectivo abrangendo os anos de 1984 a 1997, foram realizados 15.558 exames sorológicos para leptospirose (SAM, com coleção de 24 sorovares), que incluíram: 284 ovinos, 879 bubalinos, 983 cães, 1.941 caprinos, 2.903 eqüinos e 8.568 suínos, distribuídos percentualmente por estado da seguinte forma: ovinos - SP (100%); bubalinos - SP (100%); cães - SP (80,7%), RS (0,10%), SC (0,10%) e PI (19,0%); caprinos - SP (33,1%), PB (63,7%) e CE (3,2%); eqüinos - SP (79,3%), RS (9,98%), SC (0,62%), PR (2,5%), RJ (0,17%), MG (1,96%), MT (3,99%), PB (1,3%) e PI (0,03%); suínos - SP (61,91%), RS (0,3%), SC (5,95%), PR (3,67%), RJ (0,88%), MG (24,38%), GO (1,12%), SE (0,2%), PE (0,90%), CE (0,34%) e MA (0,1%). A distribuição temporal dos animais examinados incluiu: para a espécie ovina - 54,5% referentes aos anos 1996 e 97, 33,3% referentes a 89 e 90 e 12,2% aos outros anos; espécie bubalina - 21,7% no intervalo de 1984 a 95 e 78,83% entre 96 e 97; espécie canina - 16,91% entre 1984 e 92 e 83,09% entre 1993 e 97; caprinos - 6,97% entre 1984 e 91 e 93,09% entre 1992 e 97, sendo que 49% das amostras foram referentes ao ano de 1992; eqüinos - 18,1% no intervalo de 84 a 90 e 81,9% de1991 a 97; suínos - 61,16% referentes aos anos 90, 91, 95 e 96. As médias de animais reatores e variantes mais freqüentes por espécie foram: ovinos - 0,70% de soropositividade e reações mais freqüentes para a variante icterohaemorrhagiae; bubalinos - 43,7% de positivos e variantes hardjo seguida de pomona; cães - soropositividade de 17,7% e reações para as variantes copenhageni e icterohaemorrhagiae no estado de SP e pyrogenes no PI; caprinos - 4,17% de positividade e variantes icterohaemorrhagiae e grippotyphosa no CE, icterohaemorrhagiae na PB e pyrogenes em SP; eqüinos - 29% de soros positivos e variantes icterohaemorrhagiae no PR, SC, SP, RJ e MG, grippotyphosa no MT, pyrogenes na PB e patoc no RS; suínos - soropositividade de 24,46% e grippotyphosa seguida de icterohaemorrhagiae em MG, pomona no RS, pomona e icterohaemorrhagiae em PE e RJ, autumnalis no CE e icterohaemorrhagiae em GO, PR, SC e SP.

Realizou-se o estudo da soroprevalência da leptospirose em bovinos e humanos especificamente em propriedades familiares na região de fronteira agrícola da rodovia Transamazônica, na Amazônia Oriental. A prevalência da leptospirose bovina foi 97% [90,9 - 99,5%] de propriedades com pelo menos um animal positivo na soroaglutinação microscópica para o diagnóstico da leptospirose. Em 61,2% dos rebanhos o sorotipo hardjo foi apontado como o mais provável, em 9% deles o sorotipo bratislava e em 4,5% o shermani. A prevalência sorológica da leptospirose humana foi 32,8% [23,4 - 43,5%] de núcleos familiares com pelo menos um indivíduo positivo na soroaglutinação microscópica para o diagnóstico da leptospirose. Em 9% dos núcleos familiares o sorotipo bratislava foi apontado como o mais provável, em 6% deles o sorotipo hardjo e em 4,5% o grippotyphosa. Foi discutido o impacto desses achados sobre a produção animal e saúde pública na região e feitas sugestões para minorar o problema.

Foi efetuada a comparação em hamsters da proteção conferida e dos níveis de anticorpos induzidos por duas bacterinas comerciais antileptospirose. Os ensaios empregados foram o teste oficial de potência com desafio (TP), o ensaio proposto, teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) e a soroaglutinação microscópica (SAM). O protocolo de imunização foi representado por duas aplicações individuais de 0,25 mL das bacterinas, puras ou de suas diluições geométricas de razão dois variando de 200 a 51.200 para a bacterina A e de 200 a 3.200 para a bacterina B, por via subcutânea com o intervalo de 15 dias. Decorridos 15 dias da segunda aplicação de vacina, um grupo de animais foi desafiado com 0,2 mL de cultivos de leptospiras, por indivíduo, respectivamente dos sorovares Canicola (bacterinas A e B) ou Kennewicki (bacterina A). Os números de doses infectantes empregados nos desafios foram de 100 e 631 respectivamente, para os sorovares Canicola e Kennewicki. Decorridos 21 dias do desafio, os grupos de animais utilizados nos testes de ICLIV e SAM foram sangrados e os seus soros foram reunidos em pools (n = 5). No TP, adotando-se os critérios internacionais, as bacterinas foram aprovadas. A comparação do desempenho das bacterinas para os sorovares adotados, segundo sua concentração, por meio das proporções de animais sobreviventes ao TP e a média dos títulos de anticorpos identificados no teste de ICLIV, indicou que um título igual ou superior a 0,77 log corresponde ao nível de aprovação da bacterina no TP.

Foi realizado um levantamento da infecção por Leptospira spp. em mamíferos silvestres do Pantanal sul-mato-grossense com o emprego da reação de soroaglutinação microscópica (SAM) e da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os sorovares de maior frequência nos animais investigados foram Hardjobovis (28%), Icterohemorhagiae (12%), M-110/2006 (isolado de Cerdocyon thous; 16%), Canicola (L014 isolada de Bos taurus, 4%), Whitcombi (4%), Pomona (20%), Autumnalis (12%) e Copenhageni (M9/99 isolada de Rattus norvegicus, 4%). Das 79 amostras examinadas pela PCR, 21 (26,58%) foram positivas, com a amplificação de um fragmento de aproximadamente 331pb. Dois fragmentos amplificados obtidos de amostras de C. thous foram clonados, sequenciados e identificados como L. interrogans por análise filogenética. PALAVRAS-CHAVE: leptospirose; mamíferos silvestres; Pantanal; PCR; sorologia,

Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic bacteria from the genus Leptospira. The disease represents a serious public health problem in underdeveloped tropical countries. Leptospires infect hosts through small abrasions in the skin or mucous membranes and they rapidly disseminate to target organs. The capacity of some pathogenic leptospiral strains to acquire the negative complement regulators Factor H (FH) and C4b Binding Protein (C4BP) correlates with their ability to survive in human serum. In this study we assessed the functional consequences of the AMD-associated polymorphism FH His402 or FH Tyr402 on FH-Leptospira interactions. In binding assays using sub-saturating amounts of FH, the FH Tyr402 variant interacted with all the strains tested more strongly than the FH His402 variant. At higher concentrations, differences tended to disappear. We then compared cofactor activities displayed by FH His402 and FH Tyr402 bound to the surface of L. interrogans. Both variants exhibit similar activity as cofactors for Factor I-mediated cleavage of C3b, thus indicating that they do not differ in their capacity to regulate the complement cascade.

Leptospira interrogans is the etiological agent of leptospirosis, a zoonotic disease of human and veterinary concern. The identification of novel proteins that mediate host-pathogen interactions is important for understanding the bacterial pathogenesis as well as to identify protective antigens that would help fight the disease. We describe in this work the cloning, expression, purification and characterization of three predicted leptospiral membrane proteins, LIC10258, LIC12880 (Lp30) and LIC12238. We have employed Escherichia coli BL21 (SI) strain as a host expression system. Recently, we have identified LIC12238 as a plasminogen (PLG)-binding receptor. We show now that Lp30 and rLIC10258 are also PLG-receptors of Leptospira, both exhibiting dose-dependent and saturating binding (K(D), 68.8±25.2 nM and 167.39±60.1 nM, for rLIC10258 and rLIC12880, respectively). In addition, LIC10258, which is a novel OmpA-like protein, binds laminin and plasma fibronectin ECM molecules and hence, it was named Lsa66 (Leptospiral surface adhesin of 66 kDa). Binding of Lsa66 to ECM components was determined to be specific, dose-dependent and saturable, with a K(D) of 55.4±15.9 nM to laminin and of 290.8±11.8 nM to plasma fibronectin. Binding of the recombinant proteins to PLG or ECM components was assessed by using antibodies against each of the recombinant proteins obtained in mice and confirmed by monoclonal anti-polyhistidine antibodies. Lsa66 caused partial inhibition on leptospiral adherence to immobilized ECM and PLG. Moreover, this adhesin and rLIC12238 are recognized by antibodies in serum samples of confirmed leptospirosis cases. Thus, Lsa66 is a novel OmpA-like protein with dual activity that may promote the attachment of Leptospira to host tissues and may contribute to the leptospiral invasion. To our knowledge, this is the first leptospiral protein with ECM and PLG binding properties reported to date.

Foram examinados 176 eqüídeos (15 muares e 161 eqüinos) do município de Monte Negro, Rondônia, Amazônia Ocidental Brasileira, frente a agentes virais e bacterianos. A amostra correspondeu ao total de eqüídeos no município, considerando um nível de confiança de 99%, prevalência esperada de 50% e erro padrão de 10%. As infecções virais foram investigadas pelas provas de Imunodifusão em gel de Agar (Anemia Infecciosa Eqüina - AIE), Inibição da hemaglutinação (Influenza eqüina tipos 1 e 2 IE-1 e 2) e Soroneutralização em cultura celular (Arterite Viral Eqüina - AVE, Herpesvírus Eqüino tipo 1 HVE1, Estomatite Vesicular - EV e Encefalomielite Eqüina do Leste - EEE, do Oeste - WEE e Venezuela - VEE). Para o diagnóstico da leptospirose, foi utilizada a prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM); para o diagnóstico da brucelose, o teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) foi utilizado como teste de triagem e as provas de Soroaglutinação Lenta em Tubos (SLT) e 2-mercaptoetanol como testes diagnósticos. Foram constatados 9,6% dos eqüídeos reativos para AIE, 22,7% para HVE1, 19,9% para IE-1, 42,0% para IE-2, 21,0% para EEE, 11,3% para VEE, 3,4% para Brucella spp. e 91,4% para Leptospira spp. Os sorovares de leptospira mais freqüentes foram Bratislava (10,5%), Icterohaemorrhagiae (8,7%) e Autumnalis (8,7%) nos eqüinos e Patoc (26,6%) nos muares. Não foram encontrados animais com anticorpos contra AVE, EV e WEE.

A Leptospirose é uma doença bacteriana de caráter zoonótico que afeta os animais domésticos, silvestres e o homem. Levantamentos sorológicos têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies sinantrópicas e silvestres na epidemiologia da doença. Com o objetivo de conhecer melhor a epidemiologia da Leptospirose dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo, foi realizado um estudo sorológico nos animais silvestres mantidos em cativeiro, no período de 1996 a 1999. Foram colhidas amostras de sangue de 302 animais atendidos na rotina da Divisão de Veterinária, das quais 59 apresentaram resultado positivo (19.5%) para a prova de Soroaglutinação Microscópica. Os sorovares mais prováveis para o conjunto total de resultados foram : copenhageni (15/59=25.4%), pomona (13/59=22%) e castellonis (10/59=16.9%). Entre os animais silvestres examinados os sorovares mais prováveis foram : Família Callithrichidae : castellonis (3/3=100%), Família cebidae : copenhageni : (13/21=65%), grippotyphosa (2/21=9.5%) e castellonis (1/21=44.7%). Família felidae : pomona (12/17=70.5%), icterohaemorrhagiae (2/17=11.7%) e grippotyphosa (1/17=5.8%), Família canidae : castellonis (2/4=50%), cynopteri (1/4=25%) e mini (1/4=25%), Família cervidae : mini (1/1=100%), Família bovidae : copenhageni (2/3=66.6%), pomona (1/3=33.3%), Família dasyproctidae : castellonis (2/3=66.6%), Família macropodidae: sentot (1/1=100%), família giraffidae : castellonis (1/1=100%). Animais de vida livre como ratos (Rattus norvegicus) e gambás (Didelphis marsupialis) também foram submetidos a prova de soroaglutinação necroscópica e cultura bacteriológica. Foram encontrados testes positivos para o sorovar icterohaemorrhagiae em 42,8% dos ratos e 40% dos gambás estudados. As freqüências de positivos quando analisadas do ponto de vista da localização espacial dos recintos destes animais, permitiram a verificação da existência de áreas críticas para exposição à leptospira dentro da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. As freqüências de positivos para as várias áreas examinadas foram : Setor extra (36/113=31.8%), Alameda dos felinos (10/20=50%), Ilhas+Alameda, Lago+Alameda Girafa (3/14=21.4%), Alameda Urso+Alameda Zebra (3/21=14.2%), Gaiolão II (1/21=14.2%), Planície Africana (2/15=13.3%) e Alameda Bisão (1/2=50%). As razões desta constatação foram discutidas e medidas de profilaxia e controle para a Leptospirose no ambiente da Fundação Parque Zoológico de São Paulo foram sugeridas. Também foi discutida a importância do monitoramento sorológico em ambientes de zoológico para ações de vigilância.

Considerando a importância do sêmen na transmissão da leptospira bovina, foi realizado o presente estudo que teve como objetivo aplicar a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para a detecção de leptospiras em sêmen bovino experimentalmente contaminado. A reação de PCR foi capaz de amplificar um fragmento de DNA específico de 330 pares de bases a partir de cultivos puros de 26 sorovares de Leptospira spp. A contaminação experimental de sêmen com Leptospira interrogans serovar hardjo revelou que a técnica de PCR conseguiu detectar 10 bactérias/ml, concentração sensivelmente mais baixa que as 1.000 bactérias/ml detectadas através do cultivo microbiológico. Os resultados observados revelam o grande potencial da reação de PCR para a detecção de Leptospira spp. em sêmen bovino, notadamente em centrais de inseminação artificial.

A evolução da doença causada pela inoculação intraperitoneal de Mycobacterium bovis (cepa AN5) foi avaliada em hamsters (Mesocrícetus auratus) tratados de segundas a sextas-feiras, com doses subcutâneas de 30 mg/kg de Triclorfon, por um período de 8 semanas consecutivas. Os critérios adotados para essa avaliação foram o tempo de sobrevivência após a inoculação e a quantificação do agente no baço, fígado, rim e pulmão colhidos aos 1, 15, 29 e 45 dias após a inoculação. Nessas oportunidades também foram realizados exames histopatológicos. Os animais do grupo tratado com Triclorfon e do grupo controle desenvolveram tuberculose progressiva. Os resultados da quantificação do agente nos órgãos examinados, e do tempo de sobrevivência após a inoculação, não mostraram qualquer influência da administração do Triclorfon.

Trinta e cinco amostras do vírus da raiva, isoladas de material cerebral de animais domésticos procedentes de áreas endêmicas da doença no Brasil, foram estudadas objetivando determinar seu perfil biológico e sua identidade imunológica com a amostra clássica desse vírus. Os resultados ofereceram valores, induzidos pela inoculação intracerebral em camundongos, indistintos dos padrões existentes para a amostra clássica, com os seguintes resultados: período de incubação médio de 10,2 dias com extremos, nos valores individuais, mínimo de 4 dias e máximo de 23 dias; período clínico médio da doença de 3,3 dias com extremos, nos valores individuais, mínimo de 1 dia e máximo de 5 dias; patogenicidade global de 96,5% (adoecendo 332 dos 344 camundongos inoculados em todos os grupos) com extremos mínimo de 66,7% e máximo de 100%, e manifestações características da raiva. Todas as amostras estudadas reagiram especificamente à prova de imunofluorescência direta aplicada à raiva e apresentaram identidade imunológica com a estirpe clássica do vírus rábico, Sorotipo 1, revelada pela prova de soroneutralização em camundongos.

Descreve-se a tuberculose desencadeada pela inoculação intraperitoneal de 1.0 mg de Mycobacterium bovis (cepa AN 5) em hamsters através de exames bacteriológicos e histopatológicos, realizados 1, 15, 29 e 45 dias após a infecção. A bactéria se multiplicou no baço, rins, fígado e pulmões dos animais infectados, induzindo a formação de lesões granulomatosas. Um dia após a infecção o baço albergou um maior número de bactérias e 45 dias após a infecção houve diferença nas concentrações bacterianas apenas entre baço e rim, com um maior número de bactérias para o baço. Foram observadas duas fases de bacteremia e a micobactéria foi cultivada a partir do líquido peritoneal em todas as etapas do experimento. Os animais perderam peso em decorrência da doença e morreram em média 50.6 dias após a infecção.

O estudo comparativo de antígenos preparados com 13 estirpes de Leptospira biflexa (abaeté, andamana, huenos aires, bovedo, garcia, jequitáia, nazaré, ondina, patoc, pirajá, rufino, são paulo e tororó) na prova de aglutinação microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose, em soros de ovinos e caprinos triados com uma coleção de 18 sorotipos de Leptospira interrogans, demonstrou que as estirpes jequitáia e huenos aires apresentaram o melhor comportamento com níveis de sensibilidade, especificidade e concordância relativas superiores a 60%. Para os soros de ovinos não houve diferença entre os antígenos jequitáia e buenos aires (0,70

Na clínica dermatológica veterinária por vezes atendem-se carnívoros domésticos com lesões ulceradas de evolução prolongada e, geralmente, rebeldes à terapia usual, que podem ser originárias de infecções por micobactérias do gênero Mycobacterium. Pela escassez de descrições na bibliografia brasileira, pelo inusitado das lesões e pela resposta à terapia preconizada, descrevem-se dois casos de micobacteriose em caninos atendidos na FMVZ/USP. As cadelas (Pastor Alemão, Doberman), adultas, apresentavam lesões ulceradas graves, nas faces posteriores dos pavilhões auriculares, de aspecto granulomatoso, exsudativas, recobertas por crostas hemorrágicas. Inexistiam linfoadenomegalia satélite e tampouco sintomas nos demais sistemas orgânicos. Complementaram-se os exames físico, hematológico e radiológico por curetagem das lesões e biópsias de pele que foram então submetidas a exames histopatológico, bacteriológico (direto: técnicas de Holst-Mitchinson e Radhakrishna, Ziehl-Neelsen); cultivo (meios de Lowenstein-Jensen e de Stonebrink & Leslie), em diferentes temperaturas; teste de tuberculina (PPD mamífero e aviário). Demonstrou-se, na bacterioscopia e na histopatologia, a presença de bacilos ácido-álcool resistentes que não cresceram nos meios de cultivo convencionais, mesmo quando submetidos a várias temperaturas distintas, bem como quadro tecidual piogranulomatoso típico. Após a interposição da terapêutica tópica (solução de Burrow, sal sódico de rifamicina) e parenteral (rifampicina) obteve-se flagrante melhora com remissão do quadro lesional. Discutem-se a etiopatogenia do quadro e as condutas diagnóstica e terapêutica.

Foi investigada a maior diluição do hipoclorito de sódio comercial com 2,5% de cloro ativo (água de lavadeira) capaz de inativar o Mycobacterium fortuitum em presença de níveis variáveis de fezes de bovino como fonte de matéria orgânica. Os ensaios foram conduzidos de modo que o desinfetante atuasse durante 60 minutos à temperatura de 4 a 8°C. A neutralização da ação do desinfetante foi obtida com a solução de tiossulfato de sódio a 0,5% e tween-80 a 0,05% (v/v). Os microrganismos sobreviventes foram recuperados em meio de Lowenstein-Jensen. A quantificação das unidades formadoras de colônias (U.F.C.) foi analisada pelo Teste “U" de Mann-Whitney. Os resultados obtidos demonstraram que a presença de fezes bovinas prejudicou a atividade micobactericida do desinfetante ensaiado. Foi possível constatar-se que as diluições de trabalho capazes de determinar a redução de 70% do número de U.F.C. foram de 1:64 e 1: 16, respectivamente, em ausência e presença de matéria orgânica. Em diluições de trabalho superiores ao valor de 1:64 a atividade micobactericida do hipoclorito de sódio foi muito irregular.

De 90 hamsters primíparas com 80 a 120 gramas de peso vivo, 75 foram inoculadas com a dose individual de 0,5 ml de estirpe virulenta do sorotipo pomona (30 a 40 leptospiras ativas por campo microscópico, no aumento de 200 vezes) e as 15 remanescentes constituíram o grupo testemunho não infectado. Todos os animais tratados com leptospiras apresentaram os sinais da infecção (prostração, taquipnéia, eriçamento do pelame, icterícia e hemorragias nasal, bucal e perineal) e foram sacrificados por ocasião da fase agônica da doença, situada entre o quarto e o sétimo dia da inoculação. Nesta oportunidade, os ovários foram colhidos em condições assépticas e submetidos à técnica de visualização de leptospiras (exame direto em microscopia de campo escuro, coloração argêntica de Levaditi e reação de imunofluorescência direta), cultivo em meio de Fletcher e exame histopatológico (coloração de hematoxilina e eosina). A ocorrência de uma possível contaminação estabelecida durante a retirada dos ovários foi investigada através da lavagem em solução salina tamponada estéril. As leptospiras foram demonstradas em todos os ovários do grupo de animais experimentalmente inoculados (lavados e não lavados), através da coloração de Levaditi, reação imunofluorescência direta e também no cultivo em meio de Fletcher. O exame direto em microscopia de campo escuro mostrou ser uma técnica muito pouco sensível. O exame das preparações submetidas à coloração argêntica possibilitou a visualização de leptospiras em diferentes estruturas dos ovários, incluindo: o interstício, a zona pelúcida e o interior dos óvulos. Os exames histopatológicos permitiram observar as alterações morfológicas típicas de um processo inflamatório agudo em 57% dos ovários examinados.

Foi investigada a influência do BCG sobre o grau de resistência apresentado pelo hamster à infecção experimental por leptospiras. Foram utilizados 48 animais (machos com peso entre 60 a 80 gramas) dos quais 23 tratados com o BCG (duas aplicações de 0,5 ml, via intraperitonial com intervalo de sete dias) e 25 tratados com placebo (meio de Souton) nas mesmas condições referidas. No terceiro dia após a segunda dose do imunomodulador ou placebo, os animais foram experimentalmente infectados, via intraperitonial, com um inóculo de 0,5 ml de uma cultura de L. interrogans sorotipo pomona. Os animais ficaram em observação durante 21 dias e os que apresentaram sinais da doença foram sacrificados em fase agônica. A esse tempo foi realizada a colheita de materiais destinados a confirmar o estabelecimento da infecção experimental, através de métodos diretos (visualização em campo escuro e/ou cultura em meio de Retcher) e indiretos (reação de soroaglutinação microscópica). As proporções de animais mortos por leptospirose dentre os infectados foram de 0/23 (0,00%) e de 20/25 (80,00%), respectivamente, para o grupo tratado com o BCG e o grupo placebo.

Em cinco criações de suínos localizadas nos municípios de Bragança Paulista e Guarulhos, no Estado de São Paulo, Brasil, foram colhidas amostras de fezes de 85 leitões, com um a 30 dias de idade, apresentando quadro clínico de diarréia. A pesquisa de enterotoxina termoestável (STa) foi efetivada através do teste em camundongos recém-nascidos enquanto a demonstração da STb foi realizada em alça ligada de intestino de suíno. O sorogrupo 0149 foi constatado em 19 (22,35%) isolamentos dos quais 16 (18,82%) produziram enterotoxina STa e três (3,53%) produziram enterotoxinas STa e STb. O sorogrupo 0139 foi observado em oito (9,41%) estirpes produtoras da enterotoxina STa. Os sorogrupos 010, 0119, 0148 e 0158 somente foram produtores de enterotoxina STa; entretanto, o sorogrupo 020 apresentou ainda um (1,17%) isolamento com enterotoxina STb e dois (2,35%) produzindo simultaneamente STa e STb. Foram observadas duas (2,35%) estirpes produtoras de enterotoxina STa nos sorogrupos 035 e 0157.

Tendo em vista que a maioria dos desinfetantes químicos tem a sua atuação antimicrobiana prejudicada pela presença de matéria orgânica, o objetivo do presente trabalho foi o de investigar, comparativamente, a influência da presença de fezes ou de soro de bovinos sobre a atividade micobactericida de desinfetantes químicos de uso pecuário. Foram ensaiados cinco desinfetantes: A - hipoclorito de sódio; B - combinação de fenóis e cresóis; C - combinação de aldeídos e amorno quaternário; D - iodóforo; E - composto fenólico. A suspensão microbiana foi representada por uma cultura de Mycobactenum fortuitum na concentração de 0,0005% (peso úmido). 0 período de atuação dos desinfetantes foi de 60 minutos, à temperatura de 4 a 8 °C. A interrupção da ação dos desinfetantes foi estabelecida pelo emprego de inativantes. A recuperação dos microrganismos remanescentes foi obtida por cultivo em meio de Lowenstein-Jensen, com quantificação do número de unidades formadoras de colônias (U.F.C.). Os produtos "A", “B" e "C" revelaram possuir atividade micobactericida em presença de matéria orgânica, com percentuais de redução do número de U.F.C. em relação aos controles, superiores a 55,0%. O produto "D" apresentou variabilidade de comportamento frente ao sistema de ensaio adotado. 0 produto "E" mostrou-se destituído de poder micobactericida. A despeito de apresentar percentuais de redução de U.F.C. em relação aos controles, superiores a 90%, o produto "A" teve a sua atividade micobactericida inibida pela matéria orgânica (Teste U de Mann-Whitney: nível de significância de 0,05). 0 produto "B" foi inibido apenas quando a matéria orgânica foi representada por soro bovino. 0 produto "C" não apresentou redução de seu poder micobactericida quando em presença de soro ou fezes.

O fenômeno do consumo de antígeno, devido apresentação de anticorpos neutralizantes específicos para a raiva, em bovinos previamente vacinados e a sua possível interferência na resposta imunológica humoral, decorrente de revacinação, foi investigado em cinco bovinos mestiços azebuados, criados em condições de campo. A revacinação foi realizada 180 dias após a primeira aplicação, utilizando uma vacina comercial inativada, preparada em células BHK-21. As amostras de soros foram obtidas em intervalos sequenciais de 0 (zero), 24 , 72 horas, sete e 14 dias, em cada vacinação e foram submetidas à prova de neutralização em camundongos para a pesquisa de anticorpos. O título médio de anticorpos neutralizantes, encontrado para o momento imediatamente antes da primeira vacinação foi < 1:5, 24 e 72 horas após a vacinação foi < 1:6, 25; no sétimo dia pós-vacinação o valor médio foi de 1:144 ± 51; aos 14 dias pós-vacinação, 1:3.460 ± 1.329. Todos os animais apresentaram títulos detectáveis no 180ª dia pós-vacinação, com um valor médio de 1:58 ± 14; no entanto, 24 horas após a dose revacinante, foi detectado um valor médio de 1:129 ± 80, ascendendo para 1:277 ± 161 no 3 S dia pós-vacinação, e níveis crescentes no 7 ! e no 14! pós-vacinação, com valores, respectivamente, superiores a 1:6.400 e1:25.600, indicando o estabelecimento de uma resposta anamnéstica plena. Não foi observado o efeito do consumo do antígeno e a consequente diminuição nos títulos de anticorpos, imediatamente após a revacinação.

RESUMO: Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.