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Submitted by Vitor Brassolatti Machado (vitorbrassolattimachado@gmail.com) on 2020-07-18T03:36:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Vitor FINAL.pdf: 14356665 bytes, checksum: 2419403b4e30bfd1e168182320c13983 (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2020-07-20T19:54:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 machado_vb_me_sjrp_par.pdf: 5883864 bytes, checksum: cd5b6126e0a07dba390fa242ae669822 (MD5) Made available in DSpace on 2020-07-20T19:54:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 machado_vb_me_sjrp_par.pdf: 5883864 bytes, checksum: cd5b6126e0a07dba390fa242ae669822 (MD5) Previous issue date: 2020-06-25 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Fundação de Apoio à Pesquisa e Extensão de São José do Rio Preto (FAPERP) O vírus sincicial respiratório humano (HRSV) é o principal agente causador de doenças crônicas do trato respiratório inferior em crianças e idosos por todo o mundo. A proteína M2-1 do HRSV atua como um fator de antiterminação transcricional, possibilitando a transcrição de todos os genes. Essa proteína é dividida em quatro domínios: um domínio de dedo de zinco; o domínio de oligomerização; o domínio globular que interage com o RNA viral; e um domínio C terminal não estruturado. Em 2016, um estudo publicado por Bailly e colaboradores mostrou que alguns alcaloides esteroidais possuíam atividade antiviral significativa contra o HRSV e que o principal alvo do composto era o domínio globular da proteína M2-1 (dgM2-1). O presente estudo teve como objetivo responder às seguintes perguntas: i) quais são os parâmetros termodinâmicos e as interações não covalentes envolvidas na formação e estabilização do complexo dgM2-1 / RNA ?; ii) ciclopamina e solasodina realmente interagem no domínio globular? Quais regiões destas moléculas estão envolvidas na interação com a proteína? Para alcançar os resultados, mensuramos a supressão de fluorescência do dgM2-1 pelo RNA em diferentes condições de temperatura, força iônica e pH. A constante de dissociação determinada para o complexo é da ordem de 10-9 M e a estequiometria de ligação é de 2 proteínas para 1 molécula de RNA. O efeito da temperatura revelou uma variação negativa na entalpia de ligação, enquanto o aumento no pH ou na concentração salina confirmou que a orientação da interação possui uma componente eletrostática. Os resultados também indicam que a interação é espontânea, com ligações de hidrogênio e forças de van der Waals desempenhando um papel fundamental na estabilização do complexo. Com relação aos alcaloides esteroidais, descobriu-se que ambos interagem no sítio de ligação ao AMP e o complexo formado foi visualizado por meio de docking molecular, o qual demonstrou que a interação ocorre na região de interface interdomínio dgM2-1/dedo de zinco e depende de ligações de hidrogênio e contatos hidrofóbicos para ocorrer. Esses achados necessitam de maiores investigações e são importantes para a compreensão do mecanismo de interação entre a proteína M2-1 do HRSV com o RNA e com candidatos promissores para o desenvolvimento de antivirais. Human respiratory syncytial virus (HRSV) is the major causative agent of chronic lower respiratory tract diseases in children and elderly worldwide. The M2-1 protein from HRSV acts as a transcription antitermination factor, enabling the transcription of all genes. This protein is divided into four domains: a zinc finger domain; the oligomerization domain; the core domain that interacts with the viral RNA; and unstructured C-terminal domain. In 2016, a study published by Bailly and colleagues showed that steroidal alkaloids had significant antiviral activity against HRSV and that the main target of the compound was the M2-1 protein core domain (cdM2-1). Then, the present study aimed to answer two questions: i) what are the thermodynamic parameters and the non-covalent interactions involved in the formation and stabilization of the cdM2-1/RNA complex? ii) do solasodine and cyclopamine really interact in the core domain? Which regions of these molecules are involved in the interaction with the protein? To achieve the results, we measured the fluorescence quenching of cdM2-1 by RNA under different conditions of temperature, ionic strength and pH. The determined dissociation constant for the complex was on the range of hundreds nanomolar and the binding stoichiometry is of two proteins per RNA molecule. The effect of temperature revealed a negative binding enthalpy change, whereas the increase either in pH or in saline concentration confirmed that electrostatic forces drive the interaction. The results also indicate that it is spontaneous, with hydrogen bonds and van der Waals forces playing a key role on the stabilization of the complex. Regarding to the steroidal alkaloids, it was found that both interact at the AMP binding site and the complex formed was visualized by molecular docking, which demonstrated that the interaction occurs at the cdM2-1 / zinc finger interdomain interface region and it depends on hydrogen bonds and hydrophobic contacts to occur. These findings require further investigation and are important for understanding the mechanism of interaction between HRSV M2-1 protein with RNA and with promising candidates for the development of antivirals. CAPES: 001 FAPESP: 2018/08900-4 FAPERP: 091/2019

This work employed pregnant rats treated with Solanum lycocarpum unripe fruits (10% in diet) from gestation day (GD) 06 to post-natal day (PND) 07, for the evaluation of the sperm number, daily sperm production and epididymal sperm transit time of the male offspring at PND 60 and PND 90. No differences were observed in the daily sperm production (DSP) and sperm number in the testis of the exposed males at PND 60 and PND 90. Also, no alterations were observed in sperm transit time in the caput epididymis of the exposed males at PND 60 and PND 90. However, a reduced sperm transit time was observed in the corpus/cauda epididymis of the experimental males at PND 90. The last data may explain the reduced sperm number observed in the corpus/cauda epididymis of the experimental male rats at PND 90. These data show that the male rats exposed to S. lycocarpum fruits during gestation did not present alterations in testis sperm production and number, however the sperm transit time through epididymis was impaired, resulting in a decreased number of spermatozoa in epididymis cauda. We conclude that S. lycocarpum may cause imbalance on hypothalamus-pituitary gland axis Ratas prenhes foram tratadas do dia 06 da gestação (GD 06) ao dia 07 pós-natal (PND 07) com frutos verdes secos e moídos da Solanum lycocarpum (10% na ração). Após nascimento das ninhadas, foi avaliado na prole masculina adulta aos 60 e 90 dias de vida, o número de espermátides e a produção espermática diária nos testículos e o tempo de trânsito espermático no epidídimo. A exposição não foi capaz de promover alterações na produção espermática diária (DSP) e no número de espermátides produzidas pelo testículo dos ratos expostos aos frutos verdes da S. lycocarpum durante a gestação e início da lactação. Não foram observadas alterações no tempo de trânsito espermático na cabeça do epidídimo, porém, foi constatado menor número de espermatozóides no corpo/cauda do epidídimo nos machos experimentais com 90 dias de vida, provavelmente resultante do menor tempo de trânsito espermático observado no corpo/cauda do epidídimo aos PND 90. Estes dados sugerem que a exposição de ratos aos frutos verdes da S. lycocarpum durante a gestação e início da lactação, não foi suficiente para promover alterações na produção mas sim no trânsito espermático, indicando possível alteração no eixo hormônio liberador das gonadotrofinas hipotálamo-hipófise-gônada

Made available in DSpace on 2016-04-26T13:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005 - Grazielle Lopes.pdf: 873139 bytes, checksum: a0c7ad5e4e1b396668d3653025f1e5bb (MD5) Previous issue date: 2005-05-25 CAPES - Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior The biological activity of crude extracts and glycoalkaloidal fractions of six Solanum species, S. crinitum, S. seafothianum, S. variable, S. capsicoide, S. americanum and S. lincocarpum, was related in this work against Artemia salina microcrustace and Biomphalaria glabrata snail. The S. crinitum glycoalkaloidal fraction was HPLC-MS monitored and three different glycoalkaloids were verified. The S. crinitum collected plants, from Jo?o Pessoa (PB) and Serop?dica (RJ), were compared and a similar chemical profile was observed. The steroidal alkaloid solasodine was isolated from S. crinitum and utilized on oxidation and sterification reactions. In the last reactions the microwave irradiation was also utilized in the presence of several catalysts. The NMR 1H, 13C and IR spectroscopic techniques and the GC-MS were used to characterize the products. The crude extracts and fractions of Solanum species were assayed against Artemia salina and the result had showed a significant toxicity. The S. seaforthianum and S. crinitum glycoalkaloidal fractions were the most actives. All crude extracts of Solanum species and four glycoalkaloidal fractions haven t presented significant activity against Biomphalaria glabrata snails. However, the S. seafothianum and the S. crinitum fractions showed effective moluscicidal activities and these results have led us a good correlation ship with Artemia salina assays. Este trabalho relata o estudo da atividade biol?gica dos extratos brutos e das fra??es glicoalcaloidais de seis esp?cies do g?nero Solanum, S. crinitum, S. seforthianum, S.capsicoides, S. variable, S. americanum, S. lycocarpum frente ao microcrust?ceo Artemia salina e ao caramujo Biomphalaria glabrata. A fra??o glicoalcaloidal de Solanum crinitum, foi monitorada por CLAE-EM sendo verificada a presen?a de tr?s diferentes glicoalcaloides, bem como foi realizada a compara??o qu?mica das fra??es de plantas coletadas em Jo?o Pessoa-PB e Serop?dica-RJ observando-se o mesmo perfil. Desta esp?cie, isolou-se o alcal?ide esteroidal solasodina, com o qual foram realizadas rea??es de oxida??o e esterifica??o, sendo que na segunda utilizou-se a metodologia cl?ssica e tamb?m irradia??o em forno de microondas, na presen?a de diferentes catalisadores. As t?cnicas espectrosc?picas de IV, RMN de 1H e 13C e tamb?m CG-EM, foram utilizadas para identificar e caracterizar os produtos obtidos nas rea??es. Os ensaios frente a Artemia salina mostraram que, tanto os extratos brutos como as fra??es glicoalcaloiais apresentaram toxidez significativa, sendo as fra??es de S. seaforthianum e de S. crinitum, as mais t?xicas. Diante do ensaio moluscicida, todos os extratos brutos e algumas das fra??es glicoalcaloidais n?o apresentaram atividade significativa. Por?m, as fra??es de S. seaforthianum e S. crinitum, mostraram bastante ativas, podendo este efeito ser correlacionado aos resultados do ensaio de toxidez geral.

Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-27T11:24:33Z No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-05-27T14:30:36Z : No. of bitstreams: 1 2-s2.0-78149421316.pdf: 495092 bytes, checksum: c3c3d3d955add1064d4bbff292604e95 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-27T11:24:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-01 This work employed pregnant rats treated with Solanum lycocarpum unripe fruits (10% in diet) from gestation day (GD) 06 to post-natal day (PND) 07, for the evaluation of the sperm number, daily sperm production and epididymal sperm transit time of the male offspring at PND 60 and PND 90. No differences were observed in the daily sperm production (DSP) and sperm number in the testis of the exposed males at PND 60 and PND 90. Also, no alterations were observed in sperm transit time in the caput epididymis of the exposed males at PND 60 and PND 90. However, a reduced sperm transit time was observed in the corpus/cauda epididymis of the experimental males at PND 90. The last data may explain the reduced sperm number observed in the corpus/cauda epididymis of the experimental male rats at PND 90. These data show that the male rats exposed to S. lycocarpum fruits during gestation did not present alterations in testis sperm production and number, however the sperm transit time through epididymis was impaired, resulting in a decreased number of spermatozoa in epididymis cauda. We conclude that S. lycocarpum may cause imbalance on hypothalamus-pituitary gland axis. Departamento de Análises Clínicas e Toxicológicas Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN Departamento de Morfologia do Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP Patologia Experimental e Comparada Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade de São Paulo, São Paulo-SP Departamento de Patologia Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade de São Paulo, São Paulo-SP Departamento de Morfologia do Instituto de Biociências Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP