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In der vorliegenden Dissertation wurde die Expression der Krüppel-like Faktoren (KLF) während der Differenzierung mononukleärer Zellen untersucht. Durch RT-PCR wurden Expressionsprofile der KLF 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13 in Monozyten (MO), Makrophagen (MAK), unstimulierten Dendritischen Zellen (DC) und stimulierten DC angefertigt. Eine deutliche Regulation während der Differenzierung konnte dabei für KLF2, KLF4, KLF5, KLF6, KLF7, KLF8, KLF11 und KLF12 gezeigt werden. KLF6, KLF8 und KLF12 wurden zusätzlich proteinchemisch mittels Gelelektrophorese und Westernblot nachgewiesen. Übereinstimmend mit den Ergebnissen der RT-PCR konnte folgendes gezeigt werden: 1. Der Zellzyklussupressor KLF6 wird in MO deutlich stärker exprimiert als in MAK. 2. KLF8 weist ein besonderes Expressionsmuster auf mit geringer Expression in MO und deutlich stärker in MAK und DC. Alle anderen untersuchten KLF haben eine deutlich höhere Expression in MO als in den ausdifferenzierten MAK und DC. 3. Die deutlichste Regulation während der Differenzierung mononukleärer Zellen weist KLF12 auf. KLF12 wird in MAK nicht exprimiert, in MO hingegen stark, daneben weisen jedoch auch lymphozytäre Zellen eine deutliche KLF12 Expression auf. Zum näheren Verständnis der transkriptionellen Regulation wurde anschließend der Einfluss der KLF6 und KLF8 auf die Expression von MADDAM untersucht. Die stärkste Regulation in den Transfektionsversuchen war für KLF 8 durch Verwendung des 150 bp langen proximalen Promotors zu erreichen. Bei KLF6 hingegen konnte mit einem 450 bp Fragment eine weitere Aktivitätssteigerung im Vergleich zum kürzeren 150 bp Fragment beobachtet werden. Es wurde bereits in anderen Arbeiten gezeigt, dass die typischen GC-Boxen, die als Hauptbindungsstelle der KLF gelten, alle innerhalb des 150 bp Promotors liegen. Für den Genrepressor KLF8 scheinen diese Bindungsstellen entscheidend zu sein. Für KLF6 müssen hingegen weitere Bindungsstellen, außerhalb der klassischen proximalen Promotorregion, vorhanden sein. Darüber hinaus konnte gezeigt werden, dass die Expression von MADDAM in mononukleären Zellen der Expression von KLF6 tendenziell sehr ähnlich ist. Außerdem wurde bewiesen, dass KLF6 den MADDAM Promotor aktivieren kann. Der Transkriptionsfaktor KLF6 könnte deshalb eine wichtige Bedeutung für die Hochregulation von MADDAM haben. Zusammengefasst zeigte die vorliegende Arbeit, dass eine deutliche Regulation der KLF Transkriptionsfaktoren während der Differenzierung mononukleärer Zellen stattfindet. Den Stellenwert, den die veränderte Expression der KLF-Transkriptionsfaktoren dabei für die Differenzierung mononukleärer Zellen einnimmt, werden weitere Untersuchungen klären müssen., The topic of this dissertation was the influence of KLF transcription factors in monocyte differentiation. Via RT-PCR was shown that KLF2, KLF4, KLF5, KLF6, KLF7, KLF8, KLF11 and KLF12 are particularly regulated during monocyte differentiation. Furthermore the expression of KLF6, KLF8 and KLF12 in monocytes compared to macrophages and dendritic cells was verified using Western blot technology. In addition in transfection trials could be shown that KLF 6 can especially activate the 450bp MADDAM promotor whereas KLF8 represses the 150bp promotor. Therefore KLF6 activation of MADDAM also needs cofactors, because the typical GC-boxes binding KLF-factors are all within the 150bp promotor.

Die atheroprotektive Wirkung von Östrogen ist gut belegt. Zur Wirkung von Östrogen auf vorbestehende atherosklerotische Läsionen liegen aber nur wenige Daten vor. Ziel der vorliegenden Untersuchung war es, im Kaninchenmodell die Auswirkungen einer Cholesterin-Vorfütterung auf den atheroprotektiven Effekt von Östrogen zu prüfen. Insgesamt wurden 32 weibliche NZW-Kaninchen verwendet. Bei 24 Kaninchen folgte auf eine Ovarektomie die Aufteilung in 3 Gruppen zu je 8 Tieren. Folgende Versuche wurden durchgeführt: 84 Tage Cholesterinfütterung (Gruppe I), 168 Tage Cholesterinfütterung (Gruppe II), 168 Tage Cholesterinfütterung, davon die letzten 84 Tage Gabe von Östrogen (1 mg/kg KG/Woche i.m.). Eine weitere 8-köpfige Gruppe erhielt eine Normaldiät über 84 Tage. Nach Gefäßentnahme wurde die Plaquegröße morphometrisch ermittelt. Das Endothel wurde immunhistologisch durch Nachweis des "von Willebrand Faktors" (vWF) dargestellt und quantitativ erfasst. Die morphometrische Bestimmung der Intimafläche ergab, dass in der mit Östrogen behandelten Gruppe III die atherosklerotischen Plaques im Bereich der A. carotis, Aorta thoracalis und abdominalis deutlich kleiner waren als in der korrespondierenden Gruppe ohne Östrogengabe (Gruppe II). Im Aortenbogen konnte die Gabe von Östrogen das Plaquewachstum in der zweiten Versuchshälfte in Gruppe III jedoch nicht mehr günstig beeinflussen. Korrespondierend zu den morphometrischen Befunden zeigte sich im Aortenbogen nach 84-tägiger Cholesterinfütterung (Gruppe I) eine signifikant reduzierte Expression des vWF’s im Vergleich zur Kontrollgruppe (Gruppe IV). In den übrigen Gefäßabschnitten konnte kein Unterschied in der vWF-Expression nachgewiesen werden. Eine vorbestehende schwerwiegende Schädigung des Endothels scheint also mit einem Verlust der atheroprotektiven Wirkung von Östrogen einherzugehen. Diese Befunde weisen auf die wichtige Rolle eines intakten Endothelverbands bei der Vermittlung der atheroprotektiven Östrogenwirkung hin.

ObjectivesWe sought to assess the accuracy of an integrated cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for the diagnosis of relevant coronary artery or bypass graft stenosis in patients with suspected coronary artery disease (CAD) or with previously performed percutaneous coronary intervention (PCI) or coronary bypass graft surgery (CABG).BackgroundCMR is suitable for diagnosing inducible myocardial ischemia in patients with suspected CAD and has been proven to be a helpful diagnostic tool for decision of further treatment. However, little is known about its diagnostic accuracy in patients with known CAD who previously were treated by PCI or CABG.MethodsA total of 477 patients with suspected CAD, 236 with previous PCI, and 110 after CABG referred for coronary X-ray angiography (CXA) underwent an integrated CMR examination before CXA. Myocardial ischemia was assessed using first-pass perfusion after vasodilator stress with adenosine (140 μg/kg/min for 3 min) using gadolinium-based contrast agents (0.1 mmol/kg). Late gadolinium enhancement (LGE) was assessed 10 min after a second contrast bolus.ResultsCXA demonstrated a relevant coronary vessel stenosis (≥70% luminal reduction) in 313 (38%) patients using quantitative coronary analysis. The combination of CMR perfusion and LGE assessment for detecting a relevant coronary stenosis in patients with suspected CAD yielded sensitivity and specificity of 0.94 and 0.87, in PCI patients 0.91 and 0.90, and in CABG patients 0.79 and 0.77, respectively.ConclusionsA combined CMR protocol for the assessment of myocardial perfusion and LGE is feasible for the detection of relevant coronary vessel stenosis even in patients who previously were treated by PCI or CAG in a routine clinical setting. However, diagnostic accuracy is reduced in patients with CABG. This could be due to different flow and perfusion kinetic. Further studies are needed to optimize the clinical protocols especially in post-surgical patients.