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Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis. RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

The objective of this study was to evaluate the adherence to and invasion of HeLa cells by Campylobacter spp. strains (total n=63) isolated from chickens (n=4), dogs (n=4), non-human primates (n=16), pigs (n=9), calf feces (n=18), and bovine genital tracts (n=12). Thirty-two strains adhered to and 13 invaded HeLa cells. Invasive strains included 1 of 4 dog isolates, 4 of 16 non-human primate isolates (2 C. jejuni and 2 C. coli), 1 of 9 C. coli strains isolated from pigs, and 7 of 18 C. fetus subsp. fetus isolated from calf feces. Only 25% of chicken and dog isolates and 23% of pig isolates were able to adhere to HeLa cells, a property of 65% of strains obtained from calf feces and 83% of bovine genital tract-isolated strains. The adherent phenotype was observed in 5 of 19, 6 of 15, and 21 of 29 strains of C. jejuni, C. coli, and C. fetus subsp. fetus, respectively, whereas 3 of 19, 3 of 15, and 7 of 29 strains were additionally able to invade HeLa cells, respectively. C. jejuni, C. coli, and C. fetus subsp. fetus strains isolated from animal feces are able to adhere and invade HeLa cells, whereas C. fetus subsp. fetus strains isolated from the bovine genital tract were not invasive in HeLa cells. The present study showed that C. jejuni isolated from primates and dogs, C. coli isolated from non-human primates and pigs, and C. fetus subsp. fetus isolated from calf feces have the ability to adhere to and to invade HeLa cells. Moreover, the lack of invasive ability by C. fetus subsp. fetus strains isolated from the bovine genital tract could be important in the pathogenesis of the genital tract diseases caused by this bacterium. RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar a adesão e invasão de células HeLa por amotras de Campylobacter spp. (total n=63) isoladas de frangos (n=4), cães (n=4), primatas não-humanos (n=16), porcos (n=9), fezes de bezerros (n=18), e trato genital de bovinos (n=12). Trinta e duas amostras foram capazes de aderir e 13 invadiram células HeLa. As amostras invasivas incluíram 1 de 4 isolados de cão, 4 de 16 isolados de primatas não-humano (2 C. jejuni e 2 C. coli), 1 de 9 C. coli isoladas de porcos e 7 de 18 C. fetus subsp. fetus isoladas de fezes de bezerros. Apenas 25% dos isolados de frango e de cão e 23% dos isolados de suínos foram capazes de aderir a células HeLa, propriedade exibida por 65% das cepas obtidas a partir de fezes de bezerros e por 83% das amostras isoladas de trato genital bovino. O fenótipo aderente foi observado em 5 de 19, 6 de 15 e 21 de 29 amostras de C. jejuni, C. coli e C. fetus subsp. fetus, respectivamente, enquanto que 3 de 19, 3 de 15 e 7 de 29 amostras foram adicionalmente capazes de invadir as células HeLa, respectivamente. Amostras de C. jejuni, C. coli e C. fetus subsp. fetus isoladas de fezes de animais foram capazes de aderir e invadir as células HeLa, enquanto amostras de C. fetus subsp. fetus isoladas a partir de amostras de trato genital bovino não foram invasivas, em células HeLa. O presente estudo mostrou que amostras de C. jejuni isoladas de primatas não-humanos e cães, C. coli isoladas de primatas não-humanos e porcos, e C. fetus subsp. fetus isolados a partir de fezes de bezerros foram capazes de aderir e invadir células HeLa. Além disso, a falta de capacidade invasiva de amostras de C. fetus subsp. fetus isoladas de trato genital bovino pode ser importante na patogênese das doenças das vias genitais causadas por esta bactéria.

The aim of this study was to evaluate the viability of Campylobacter spp. in frozen and chilled broiler carcasses using real-time PCR with propidium monoazide (PMA) pretreatment. Sixty broiler carcasses were collected: 30 frozen and 30 chilled. Each carcass was submitted to 2 real-time PCR protocols to detect and quantify Campylobacter spp.: one using pretreatment with PMA, which blocks the amplification of DNA from dead bacteria, and the other without PMA. The results showed that PMA-pretreated carcasses, either frozen or chilled, had a lower positivity rate compared to untreated samples (P

The aims of the present study were to determine (i) the profiles of phylogroup and (ii) the antimicrobial susceptibility of pathogenic Escherichia coli strains isolated from calves, and of Salmonella spp. strains isolated from calves and pigs in Minas Gerais State, Brazil. Sixty-one pathogenic E. coli strains and Salmonella spp. (n = 24) strains isolated from fecal samples of calves and Salmonella spp. (n = 39) strains previously isolated from fecal samples of growing/finishing pigs were tested. The minimum inhibitory concentration (MIC) using the agar dilution method was determined for nalidixic acid, amikacin, amoxicillin, ampicillin, cefoxitin, norfloxacin, gentamicin, tetracycline, and trimethoprim-sulfamethoxazole. All E. coli isolates were susceptible to amikacin. Tetracycline was the antimicrobial that presented the higher frequency of resistance among E. coli strains, followed by ampicillin, trimethoprim-sulfamethoxazole, amoxicillin, nalidixic acid, norfloxacin, gentamicin, and cefoxitin. E. coli (n = 61) strains isolated from calves belonged to different phylogroup namely, phylogroup A (n = 26), phylogroup B1 (n = 31), phylogroup E (n = 3), and phylogroup F (n = 1). Phylogroups B2, C, and D were not identified among the E. coli in the present study. All Salmonella spp. (n = 24) strains isolated from fecal samples of calves were susceptible to amikacin, amoxicillin, ampicillin, norfloxacin, gentamicin, tetracycline, and trimethoprim-sulfamethoxazole. Resistance to nalidixic acid and cefoxitin was detected in 16.66 and 8.33 % of the Salmonella spp. strains, respectively. Among the Salmonella spp. (n = 39) strains isolated from fecal samples of pigs, the higher frequency of resistance was observed to tetracycline, followed by amoxicillin, gentamicin, ampicillin, trimethoprim-sulfamethoxazole, nalidixic acid, cefoxitin, and norfloxacin. All strains were susceptible to amikacin. Forty-eight (78.68 %) of the E. coli strains were classified as multidrug-resistant, whereas among Salmonella spp. strains, the percentage of multidrug resistance was 57.14 %, being all multidrug-resistant strains isolated from pigs (92.30 %). The results from the present study indicate a high frequency of antimicrobial resistance among pathogenic E. coli strains isolated from calves and Salmonella spp. strains isolated from pigs and a high rate of susceptibility to most antimicrobials tested among Salmonella spp. strains isolated from calves. Our study highlights the presence of multidrug-resistant strains of E. coli and Salmonella spp. isolated from food-producing animals in Minas Gerais, Brazil. Electronic supplementary material The online version of this article (doi:10.1007/s11250-016-1152-0) contains supplementary material, which is available to authorized users.

Universidade Federal de Minas Gerais, Escola de Veterinária, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Laboratório de Bacteriologia AplicadaSusceptibility pattern of 45 Campylobacter spp.isolates – 16 C. jejuni, eight C. coli, and 21 C. fetus isolated from different animal species in Brazil – to twelve antimicrobial agents was determined. All Campylobacter spp. isolates were susceptible to gentamicin, sulfadiazine, and sulfamethoxazole. C. jejuni and C. coli were also sensitive to chloramphenicol, whereas all C. fetus strains were susceptible to kanamycin. Cefoperazone showed the highest percentage of resistance among C. jejuni (68.75%), followed by nalidixic acid (31.25%), ampicillin (37.50%), tetracycline (37.50%), erythromycin (12.50%), and kanamycin (6.25%). Likewise, cefoperazone exhibited the highest percentage of resistance among C. coli (75.00%), followed by nalidixic acid (50.00%), tetracycline (50.00%), erythromycin (37.50%), ampicillin (12.50%), and kanamycin (12.50%). Among C. fetus strains, nalidixic acid showed the highest resistance rate (85.71%), followed by cefoperazone (71.43%), tetracycline (42.86%), ampicillin (19.05%), chloramphenicol (9.52%), and erythromycin (4.76%). Therefore, it was found that the majority of Campylobacter spp. isolated from animals was sensitive to gentamycin, chloramphenicol, kanamacyn, and sulfonamides; however, a high proportion of the strains showed reduced susceptibility to nalidixic acid, ampicillin, cefoperazone, and tetracycline. Moreover, C. coli and C. fetus isolates showed a high percentage of multidrug resistant strains. padrão de sensibilidade de 45 amostras de Campylobacter spp, incluindo 16 amostras de C. jejuni, 8 de C. coli e 21 C. fetus, isoladas de diferentes espécies de animais do Brasil, foi determinado para doze antimicrobianos. Todas as amostras de Campylobacter spp foram sensíveis à gentamicina, sulfadiazina e sulfametoxazol. C. jejuni e C. coli foram também sensíveis ao cloranfenicol, enquanto todas as amostras de C. fetus foram sensíveis à canamicina. Cefoperazona mostrou o maior percentual de resistência entre C. jejuni (68,75%), seguido pelo ácido nalidíxico (31,25%), ampicilina (37,50%), tetraciclina (37,50%), eritromicina (12,50%) e canamicina (6,25%). Similarmente, cefoperazona também exibiu o maior percentual de resistência entre as amostras de C. coli (75,00%), seguido pelo ácido nalidíxico (50,00%), tetraciclina (50,00%), eritromicina (37,50%), ampicilina (12,50%) e canamicina (12,50%). Entre os isolados de C. fetus, ácido nalidíxico apresentou maior taxa de resistência (85,71%), seguido de cefoperazona (71,43%), tetraciclina (42,86%), ampicilina (19,05%), cloranfenicol (9,52%) e eritromicina (4,76%). Assim, os nossos resultados mostraram que a maioria das amostras de Campylobacter spp isolados de animais foram sensíveis à gentamicina, cloranfenicol, canamicina e sulfonamidas. No entanto, uma proporção elevada das amostras apresentou susceptibilidade reduzida ao ácido nalidíxico, ampicilina, cefoperazona e tetraciclina. Além disso, C. coli e C. fetus mostraram uma alta porcentagem de amostras resistentes a múltiplas drogas.

Este trabalho de pesquisa incidiu sobre a temática da Pobreza e Desigualdade na era da Globalização. Ao longo da história o conceito de pobreza tem-se alterado, tornando-se hoje mais do que a simples falta de necessidades básicas, mas também a ausência de necessidades não-materiais para viver uma vida digna. Os efeitos do fenómeno da globalização na pobreza e na desigualdade são complexos e difusos, com resultados desiguais de região para região, e por este motivo, existem diferentes perspetivas ideológicas em torno do seu debate. Nas recentes décadas têm havido um esforço por parte da comunidade internacional em combater e reduzir o fenómeno da pobreza em todo mundo. Os Objetivos de Desenvolvimento do Milénio e os Objetivos de Desenvolvimento Sustentável constituem marcos importantes na história da luta contra a pobreza no séc. XXI. Embora com resultados positivos e muitos objetivos alcançados, ainda existem várias metas por alcançar até ao ano de 2030. Também a nível Europeu se tem feito um esforço para combater a pobreza e a desigualdade. Organizações como a EAPN têm tido um papel importante para a consciencialização e combate à pobreza e exclusão social, quer a nível europeu quer a nível nacional This research work focused on the theme of Poverty and Inequality in the era of Globalization. Throughout history the concept of poverty has changed, becoming today more than the simple lack of basic needs, but also the absence of non-material needs to live a dignified life. The effects of globalization on poverty and inequality are complex and diffuse, with uneven results from region to region, and as a result, it has produced different ideological perspectives around its debate. In recent decades there has been an effort by the international community to tackle and reduce the phenomenon of poverty worldwide. The Millennium Development Goals and Sustainable Development Goals are important marks in the history of fight against poverty in the 21st century. Although with positive results and many achieved goals, there are still several goals to achieve by the year 2030. Also at the European level efforts have been made to fight poverty and inequality. Organizations such as EAPN have played an important role in raising awareness and fight against poverty and social exclusion, not only at European level but also at national level.

Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the selection of clones producing antibodies. Clones were obtained by limiting dilution and screened for the production of specific antibodies to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing monoclonal antibodies (MAbs) anti-C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific monoclonal antibodies (MAbs): two were specific for C. fetus subsp. venerealis and two were specific for C. fetus subsp. fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lysed C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the BovigamTM kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer's specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar's test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method. O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.

This study aimed to determine the susceptibility profile of Brazilian Brucella abortus isolates from cattle to eight antimicrobial agents that are recommended for the treatment of human brucellosis and to correlate the susceptibility patterns with origin, biotype and MLVA16-genotype of the strains. Screening of 147 B. abortus strains showed 100% sensitivity to doxycycline and ofloxacin, one (0.68%) strain resistant to ciprofloxacin, two strains (1.36%) resistant to streptomycin, two strains (1.36%) resistant to trimethoprim-sulfamethoxazole and five strains (3.40%) resistant to gentamicin. For rifampicin, three strains (2.04%) were resistant and 54 strains (36.73%) showed reduced sensitivity. Two strains were considered multidrug resistant. In conclusion, the majority of B. abortus strains isolated from cattle in Brazil were sensitive to the antimicrobials commonly used for the treatment of human brucellosis; however, a considerable proportion of strains showed reduced susceptibility to rifampicin and two strains were considered multidrug resistant. Moreover, there was no correlation among the drug susceptibility pattern, origin, biotype and MLVA16-genotypes of these strains.

Foram identificadas diferenças no perfil protéico das amostras de Sponselee, Norma e Hardjoprajitno, com bandas protéicas entre 175, 47 kDA e 12,10 kDa. A amostra Sponselee foi a que apresentou maior número de bandas (12), seguida da Norma que apresentou 11 bandas e de Hardjoprajitno que apresentou 9 bandas. Todas as bandas observadas na amostra Sponselee possuíam correspondentes nas outras duas amostras. A amostra Norma não apresentou uma banda em torno de 35,77 kDa e a Hardjoprajitno não apresentou bandas em torno de 89,59 kDa, 35,77 kDa e 12,10 kDa. O reconhecimento dessas proteínas por soros hiperimunes contra cada uma das amostras também mostrou diferenças, sendo que o maior número de proteínas reconhecido em todas as amostras por todos os soros se encontrou entre 35,83 kDa e 29,19 kDa. Os soros contra bovino na amostra Norma só reconheceu proteínas de baixa massa molecular nas amostras Norma (6,80 kDa) e Hardjoprajitno (6,80 kDa e 5,30 kDa). Soro bovino contra a amostra Hardjoprajitno reconheceu uma proteína de 44,33 kDa todas às amostras e proteínas de 4,22 kDa nas amostras Sponselee e Norma e de 10,49 kDa e 6,16 kDa na Hardjoprajitno. As diferentes proteínas identificadas poderiam se constituir em alvos específicos para o desenvolvimento de testes diagnósticos e vacinas contra leptospirose bovina. Differences in the protein profile of Leptospira sp. strains Sponselee, Norma and Hardjoprajitno were observed, with bands ranging from 175.47 kDa to 12.10 kDa. Strain Sponselee presented a 12-band profile, while strain Norma showed 11 and strain Hardjoprajitno showed 9 bands in the profile. All bands observed in Sponselee strain profile could match bands in the other two strains. Strain Norma lacks a band at 35.77 kDa and strain Hardjoprajitno lacks the bands at 89.59 kDa, 35.77 kDa and 12.10 kDa. The recognition profile from hyperimmune sera was also different for the studied serovar Hadjo strains. The majority of recognized proteins was in the range of 35.83 kDa to 29.19 kDa. Cattle sera against strain Norma only recognized low molecular mass proteins in strains Norma (6.80 kDa) and Hardjoprajitno (6.80 kDa and 5.30 kDa). Bovine sera against strain Hardjoprajitno recognized a 44.33 kDa protein in all studied strains and proteins of 4.22 kDa in strains Sponselee and Norma and of 10.49 kDa and 6.16 kDa in strain Hadjoprajitno. The different identified proteins could become specific targets to the development of diagnostic tests and vaccines against bovine leptospirosis.

A presente atualização trata de duas das mais importantes doenças sexualmente transmitidas de bovinos, a campilobacteriose genital bovina e a tricomonose genital bovina. São abordados aspectos relacionados à epidemiologia destas doenças, principalmente em relação a sua distribuição no Brasil. Também são revisados aspectos importantes de diagnóstico, incluindo as técnicas e interpretação dos resultados, além de medidas de controle para ambas as doenças. The present update deals with two of the most important sexually transmitted diseases of cattle: bovine genital campylobacteriosis and bovine genital trichomonosis. Epidemiological aspects, mainly their distribution in Brazil, alongside with their diagnosis in cattle are presented and commented. The main points in their diagnoses, including the description of the techniques and the interpretation of the results are also reviewed. Finally the control and prevention of both diseases are discussed.

O presente trabalho aborda duas das mais importantes doenças sexualmente transmitidas de bovinos, a campilobacteriose genital bovina e a tricomonose genital bovina causadas pelo Campylobacter fetus subsp. venerealis e pelo Tritrichomonas foetus, respectivamente. O primeiro capítulo contém uma revisão de literatura sobre as duas enfermidades na qual são abordados aspectos relacionados à epidemiologia, diagnóstico, medidas de controle, distribuição, fatores de risco e imunidade. Estudos in vitro sobre a interação entre C. fetussubsp. venerealis e T. foetus com células epiteliais são apresentados no segundo e terceiro capítulos, respectivamente,. A cinética de transcrição de CXCL8 pelos microrganismos foram avaliadas usando as linhagens epiteliais HeLa, MDBK, HEK293, HEK293-TLR2, HEK293-TLR4/MD-2 por qRT-PCR após realização de cinética de infecção com os iniciadores específicos para CXCL8, TLR2, TLR4, MD-2. Neste estudo, a amostra de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354T, previamente ativada por três passagens em novilhas virgens, foicapaz de induzir a transcrição de CXCL8 via TLR2 após 6h em células epiteliais indicando a participação desta quimiocina na resposta imune inicial contra o microrganismo. A amostra de T. foetus isolada de trato genital de fêmea bovina foi capaz de induzir a expressão de CXCL8via TLR4/MD-2 após 18h de infecção. Em ambas as enfermidades a resposta humoral está bem definida, entretanto, é necessário a compressão da resposta imune inata á essas infecções, o que poderá propiciar um avanço no conhecimento da imunidade de mucosas notrato genital e contribuir para o maior conhecimento das patogenias. The present study is about two of the most important sexually transmitted diseases in cattle, bovine genital campylobacteriosis and bovine genital trichomoniasis caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis and by Tritrichomonas foetus respectively. In the first chapter, there is a literature review of the two diseases, focusing on aspects related to epidemiology, diagnosis, control measures, distribution, risk factors and immunity. In the second and third chapters, we studied the interaction of C. fetus subsp. venerealis and T. foetus with epithelial cells in vitro respectively. The kinetics of CXCL8 transcription in microorganisms were evaluated by RT-PCR using epithelial cells: HeLa, MDBK, HEK293, HEK293-TLR2, HEK293-TLR4/MD-2, after infection kinetics, with the use of specific primers for CXCL8, TLR2, TLR4, MD-2. In this study, the C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354T strain, previously activated by three passages in virgin heifers, was able to induce the expression of CXCL8 via TLR2 in epithelial cells after 6 h indicating the involvement of this chemokine in the initial immune response against theorganism. T. foetus isolated from bovine female genital tract was able to induce the transcription of CXCL8 via TLR4/MD-2 18 h after infection. In both diseases the humoral response is well defined, however, is needed to compress the innate immune response, which will provide abetter understanding of the mucosal immunity in the genital tract, contributing to a greater knowledge of the pathogenesis.

Para a produção de anticorpos monoclonais contra Campylobacter fetus subsp. venerealis foram utilizadas as linhagens de células de mieloma Sp2/0-Ag14 e células de baço de camundongos BALB/c imunizados com sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A detecção dos anticorpos monoclonais foi realizada por ELISA indireto utilizando antígeno sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. A clonagem foi realizada por diluição limitante e os clones foram caracterizados por ELISA indireto utilizando um painel de bactérias sonicada escolhidas em função da prevalência e habitats: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352 e Arcobacter skirrowii LMG 6621; e no "western blotting" utilizando antígenos sonicados de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 e C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. Foram obtidos 15 clones produtores de anticorpos anti C. fetus subsp. venerealis das classes IgM (1) e IgG (14). Quatro clones dentre os 15 clones obtidos foram produtores de anticorpos monoclonais espécie-específicos: dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp venerealis NCTC 10354 e dois clones reagiram com maior especificidade contra C. fetus subsp fetus ADRI 1812. Nenhum dos clones reagiu contra C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, comprovando a especificidade dos anticorpos monoclonais testados. Todos os clones reconheceram uma proteína de massa molecular de aproximadamente 148 kDa no sonicado de C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354. Myeloma cells Sp2/0-Ag14 and spleen cells from BALB/c mouse immunized with sonicated Campylobacter fetus subsp. venerealis NCTC 10354 were fused with polyethylene glycol (PEG) for the production of monoclonal antibodies (MAb's). Clones were obtained by limiting dilution and screened for specific MAb's to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 by indirect ELISA and western blot against a panel of bacteria: C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354, C. fetus subsp fetus ADRI 1812, C. sputorum biovar sputorum LMG 6647, C. lari NCTC 11352, and Arcobacter skirrowii LMG 6621 for the ELISA and C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 and C. sputorum biovar sputorum LMG 6647 for the western blotting. Fifteen clones producing MAb's anti C. fetus subsp. venerealis of the IgM (1) and IgG (14) classes were further screened for species-specificity. Four clones of the 15 obtained were producers of species-specific MAb's, 2 were specific for C. fetus subsp venerealis and 2 specific for C. fetus subsp fetus. None of the clones were reactive against C. sputorum biovar sputorum LMG 6647. All clones recognized a protein with molecular mass of approximately 148 kDa from lised C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354.

Background Brucellosis caused by Brucella abortus is one of the most important zoonoses in the world. Multiple-locus variable-number tandem repeat analysis (MLVA16) has been shown be a useful tool to epidemiological traceback studies in B. abortus infection. Thus, the present study aimed (i) to evaluate the genetic diversity of B. abortus isolates from a brucellosis outbreak, and (ii) to investigate the in vivo stability of the MLVA16 markers. Results Three-hundred and seventy-five clinical samples, including 275 vaginal swabs and 100 milk samples, were cultured from a brucellosis outbreak in a cattle herd, which adopted RB51 vaccination and test-and-slaughter policies. Thirty-seven B. abortus isolates were obtained, eight from milk and twenty-nine from post-partum/abortion vaginal swabs, which were submitted to biotyping and genotyping by MLVA16. Twelve B. abortus isolates obtained from vaginal swabs were identified as RB51. Twenty four isolates, seven obtained from milk samples and seventeen from vaginal swabs, were identified as B. abortus biovar 3, while one isolate from vaginal swabs was identified as B. abortus biovar 1. Three distinct genotypes were observed during the brucellosis outbreak: RB observed in all isolates identified as RB51; W observed in all B. abortus biovar 3 isolates; and Z observed in the single B. abortus biovar 1 isolate. Epidemiological and molecular data show that the B. abortus biovar 1 genotype Z strain is not related to the B. abortus biovar 3 genotype W isolates, and represents a new introduction B. abortus during the outbreak. Conclusions The results of the present study on typing of multiple clinical B. abortus isolates from the same outbreak over a sixteen month period indicate the in vivo stability of MLVA16 markers, a low genetic diversity among B. abortus isolates and the usefulness of MLVA16 for epidemiological studies of bovine brucellosis.

A contaminação de carcaças de frangos de corte por micro-organismos do gênero Campylobacter é frequente. No entanto, sua detecção é dificultada devido a sua característica fastidiosa. Metodologias como a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em Tempo Real foram desenvolvidas para verificar a presença do micro-organismo. Porém, também é necessário determinar sua viabilidade visto que apenas bactérias vivas são capazes de causar infecções alimentares no homem. O propídio monoazida (PMA) é um intercalante de DNA capaz de penetrar apenas em células não viáveis, impedindo que seu DNA seja amplificado pela técnica da PCR em tempo real. Com o objetivo de detectar e quantificar Campylobacter spp. viável em carcaças de frango de corte congeladas e resfriadas, foram analisadas 60 amostras de carcaças de frangos (30 resfriadas e 30 congeladas) pela metodologia da PCR em tempo real com e sem o tratamento pelo PMA. Foi observado que quando as amostras foram tratadas com PMA, tanto as carcaças congeladas quanto as resfriadas, tiveram menor taxa de positividade em relação às amostras não tratadas com este intercalante de DNA (p

Mastite, geralmente definida como a inflamação da glândula mamária, é a enfermidade de maior custo para a pecuária leiteira mundial. O maior obstáculo para reduzir da incidência da mastite, e consequentemente as implicações na produção e qualidade do leite, é a implementação de medidas efetivas no controle da mastite nas fazendas leiteiras, que depende principalmente da melhor compreensão da complexa interação patógeno-hospedeiro. A interação patógeno hospedeiro é uma importante e ampla área de pesquisa básica e clínica. Desta forma, o presente trabalho buscou elucidar alguns aspectos da interação patógeno-hospedeiro: 1) revisão sobre a importância dos receptores do tipo Toll na mastite bovina, especialmente considerando os patógenos: Escherichia coli e Staphylococcus aureus; 2) avaliação do diagnóstico da infecção intramamária pelo exame microbiológico do leite de amostras individuais por quarto, em duplicata por quarto e compostas e sua relação com a contagem de células somáticas; 3) avaliação por citometria de fluxo da interdependência dos quartos mamários pela função neutrofílica e perfil linfocítico; 4) estudo da função neutrofílica e perfil linfocítico em quartos mamários infectados por Streptococcus dysgalactiae; 5) determinação a capacidade de aderência e internalização em células epiteliais mamárias por S. aureus, S. fleurettii, e duas cepas de S. chromogenes; e 6) efeito da vacinação sobre a dinâmica da infecção intramamária por S. aureus e estafilococos coagulase-negativo. Mastitis, generally defined as the inflammation of the mammary gland, is the most costly of the infectious, endemic diseases to affect dairy cows and other dairy species. The greatest obstacle to reduce mastitis is the implementation of effective mastitis control measures in dairy farmers, which mainly depends on a better understanding of the complex interaction between an infecting pathogen and the host immune system. Host-pathogen interaction is a broad, important area of research encompassing both basic and clinical sciences. Thus, here it was addressed some aspects of the host-pathogen interactions, as follows: 1) Review of the role of pattern-recognition receptors in the innate immunity of bovine mastitis with focuses on the major mastitis pathogens: Escherichia coli and Staphylococcus aureus; 2) Determine a set of rules for classifying the infection status of an udder at quarter (single and duplicate milk samples) and cow (composite milk sample) levels and compare with distincts somatic cell count (SCC) thresholds (at quarter and cow levels); 3) Evaluation of the interdependence of the quarters by evaluating milk neutrophil function and milk lymphocyte profiles in uninfected quarters from infected and uninfected udders by flow cytometry analysis; 4) Function of milk neutrophils and the milk lymphocyte profile in Streptococcus dysgalactiae-infected mammary glands; 5) Capacity of S. aureus, S. fleurettii, and two dissimilar strains of S. chromogenes species to adhere and internalize into bovine mammary epithelial cells; 6) Efficacy of a commercial vaccine under field condition in two dairy herds with high bulk milk somatic cell count (SCC) and a high prevalence of IMIs by S. aureus.

Campylobacter fetus é um patógeno que coloniza o trato genital e placenta bovina, no entanto, os mecanismos envolvidos no tropismo tecidual deste microrganismo são desconhecidos. Vários mecanismos são importantes para a afinidade tecidual de Campylobacter spp., incluindo a quimiotaxia. Neste estudo foi avaliada a atividade quimiotática de ácidos orgânicos, aminoácidos, carboidratos e íon inorgânico, componentes do muco uterino, nas concentrações entre 0.005M a 1M e hormônios produzidos pela placenta bovina nas concentrações entre 0.005 ng/mL a 500 ng/mL para duas amostras de C. fetus subsp. venerealis e quatro amostras de C. fetus subsp. fetus. Meso-eritritol, 17-estradiol e lactogênio placentário bovino não apresentaram atividade quimiotática, nas concentrações testadas, para as amostras avaliadas, enquanto deoxicolato de sódio foi quimiorepelente. L-fucose, sulfato de ferro ferroso, fumarato de sódio, piruvato de sódio, succinato de sódio, L-aspartato, L-glutamato e L-serina foram quimioatraentes para as amostras avaliadas de C. fetus subsp. venerealis e C. fetus subsp. fetus. Progesterona foi quimioatraente, em concentrações acima de 50 ng/mL, para duas amostras de C. fetus subsp. fetus. Assim, este estudo demonstrou que substâncias químicas presentes no útero e placenta bovina atraem C. fetus subsp. venerealis e C. fetus subsp. fetus e que duas amostras de C. fetus subsp. fetus foram atraídas por altas concentrações de progesterona. Campylobacter fetus is a pathogen that colonizes the bovine genital tract and placenta, however, the mechanisms responsible for the tissue tropism of this microorganism are unknown. Several mechanisms are important for tissue affinity of Campylobacter spp., including chemotaxis. In this study, the chemotactic activity of organic acids, amino acids, carbohydrates and inorganic ion, common uterine mucous components, in concentrations from 0.005M to 1M, and hormones produced by the bovine placenta, in concentrations of 0.005 ng/mL to 500 ng/mL, was evaluated for two strains of C. fetus subsp. venerealis and four strains of C. fetus subsp. fetus. Meso-erythritol, 17-estradiol and bovine placental lactogen presented no chemotactic activity in the concentrations tested, while sodium deoxycholate was chemorepellent for all strains tested. L-fucose, iron ferrous sulfate, sodium fumarate, sodium pyruvate, sodium succinate, L-aspartate, L-glutamate and L-serine were chemoattractants for the evaluated C. fetus subsp. venerealis and C. fetus subsp. fetus strains. Progesterone was chemoattractant, in concentrations above 50 ng/mL, for two strains of C. fetus subsp. fetus. Thus, this study showed that chemical substances present in the bovine uterus and placenta attract C. fetus subsp. venerealis and C. fetus subsp. fetus and that two strains of C. fetus subsp. fetus were attracted by high concentrations of progesterone.

FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Campilobacteriose Genital Bovina é uma doença venérea que causa problemas reprodutivos em rebanhos, com grande importância em países onde há largo emprego da monta natural. Phage Display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Com o objetivo de selecionar peptídeos miméticos à bactéria Campylobacter fetus subsp. venerealis e fragmentos de anticorpos recombinantes (scFv) foram empregadas biblioteca comercial de peptídeos conformacionais de sete aminoácidos e biblioteca de scFv construída contra células tumorais. Foram selecionados cinco peptídeos considerados miméticos a C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 – P3, com os quais foram produzidos soros hiperimune em camundongo e realizados imunoensaios com antígenos bacterianos e amostras de muco cérvico-vaginal de novilhas. Oito clones que expressam moléculas de scFv reativos contra C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 – P3 foram selecionados e triados por meio de ELISA Indireto com outras bactérias. Dentre os peptídeos miméticos, dois foram considerados promissores (ALASLPL e LSYLFPP) devido à reação do soro hiperimune contra a bactéria e dos peptídeos sintéticos com muco cérvico-vaginal. Os clones de scFv apresentaram reações cruzadas entre bactérias do gênero Campylobacter e dois (3H6 e 4G7) apresentaram baixa reatividade contra Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Bovine genital Campylobacteriosis is a venereal disease that causes reproductive problems in herds, with great importance in countries where there is widespread use of natural service. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that displays peptides fused to the viral capsid proteins in selections against biological target. The aim of the present study was to select mimetic peptides to Campylobacter fetus subsp. venerealis and recombinant monoclonal antibody fragments (scFv). Library of conformational seven aminoacids peptides and scFv library constructed from tumor cells were uses. Five peptides was considered mimetics to C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 - P3, and hyperimmune sera were produced in mice and performed immunoassays with bacterial antigens and samples of cervical-vaginal mucus of heifers. Eight clones expressing scFv antibodies reactive against C. fetus subsp. venerealis NCTC 10354 - P3 were selected and screened by ELISA. Among the mimetic peptides, two were considered promising (ALASLPL and LSYLFPP) due to the reaction of hyperimmune serum against bacteria and synthetic peptides with cervical-vaginal mucus. ScFv antibodies showed cross-reactivity between bacteria of the genus Campylobacter and two clones (3H6 and 4G7) showed low reactivity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus.

A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma doença venérea de grande importância para a pecuária mundial. Apesar de relevante, poucas são as informações a respeito de sua patogenia e resposta imunológica, o que poderia ser suprimido através de um modelo de infecção experimental em um animal de laboratório. O objetivo deste estudo foi infectar camundongos BALB/c com Campylobacter fetus subsp. venerealis por via intravaginal e estabelecer um modelo de infecção experimental em que possa ser estudado este microrganismo. Camundongos BALB/c fêmeas foram inoculados, via intravaginal, com C. fetus subsp. venerealis, e a infecção foi avaliada por 7 dias. Durante este período, foram realizados lavados vaginais, os quais foram submetidos às técnicas de isolamento, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e Imunofluorescência direta (IFD) para a identificação da bactéria. Durante todos os dias, após a eutanásia, o trato genital foi retirado e submetido às técnicas de Imunoistoquímica (IHQ), Hematoxilina e Eosina (HE), IFD da impressão do tecido vaginal em lâmina e PCR do tecido. Foi observado que camundongos BALB/c são infectados por C. fetus subsp. venerealis, por via intravaginal, em qualquer estágio do ciclo estral sem a necessidade de imunossupressão ou modificação do ciclo, permanecendo na vagina destes animais por até 7 dias após a inoculação experimental, o que permite concluir que o camundongo BALB/c pode ser estabelecido como modelo de infecção experimental para estudos sobre o C. fetus subsp. venerealis. The bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal disease of great importance to the world's livestock. Despite its relevance, there is little information about its pathogenesis and animal immune response, which could be demonstrated by a model of experimental infection in a laboratory animal. The objective of this study was to infect BALB/c mice with Campylobacter fetus subsp. venerealis, intravaginally, and establish an animal model in which this microorganism can be studied. BALB/c mice were inoculated intravaginally with C. fetus subsp. venerealis and infection was assessed by 7 days. During this period, they were collected vaginal washes for carrying out culture and Direct Immunofluorescence (DIF) techniques to identify the bacteria. Every day, after euthanasia, the genital tracts were removed and subjected to Immunohistochemistry (IHC), Hematoxylin and Eosin (HE) and DIF of the vaginal tissue imprint in slide. It was observed that BALB/c mice are infected by C. fetus subsp. venerealis, intravaginally, at any stage of estrous cycle without the need of immunosuppression or estrous cycle modification, remaining in the vagina of these animals for up to 7 days after experimental inoculation, which allows conclude that the BALB/c mouse can be established as experimental infection model for studies about C. fetus subsp. venerealis