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Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 22 de mayo de 2009

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología, Este trabajo ha sido financiado por los siguientes proyectos de investigación: FIS PI11/2680 del Fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III (Ministerio de Economía y Competitividad) y FPS PI/0512/2011 de la Fundación Progreso y Salud (Junta de Andalucía).

La uretra puede presentar alteraciones desde el momento del nacimiento (patologías congénitas), o adquiridas a lo largo de la vida. En todos los casos, estas patologías pueden requerir cirugía reconstructiva. Tradicionalmente, la reparación de tejidos lesionados se ha realizado utilizando tejidos tomados del propio paciente (autoinjerto o autotrasplante de mucosa oral o de otros tejidos) (Osman et al., 2015) o de otro individuo (aloinjerto o trasplante heterólogo). Actualmente, para la corrección de la mayor parte de las patologías uretrales, se recurre a colgajos autólogos de tejidos adyacentes o a injertos libres, principalmente de mucosa oral o vesical (Osman et al., 2015; Gallegos y Santucci, 2016). Sin embargo, la obtención de colgajos locales no siempre es factible, y la extracción de mucosa oral o vesical no está exenta de complicaciones y efectos secundarios tanto en la zona donante como en la zona receptora. Por otro lado, la utilización de tejidos heterólogos ha arrojado resultados bastante pobres en la sustitución de uretra, siendo muy frecuente la aparición de rechazos inmunológicos del tejido trasplantado. La elaboración de un sustituto uretral mediante ingeniería tisular, supondría un avance en el tratamiento de la patología uretral, evitando o reduciendo las complicaciones derivadas de las técnicas actualmente disponibles (Versteegden et al., 2017). Para ello, se han descrito numerosas técnicas, entre las que destacan la elaboración de constructos (Versteegden et al., 2017-2) y las técnicas de descelularización y recelularización (Simões et al., 2017). De hecho, la descelularización de tejidos constituye un método eficaz en la generación de biomateriales en ingeniería tisular de distintos órganos humanos (Crapo et al., 2011; Keane et al., 2015). Asimismo, es necesario desarrollar nuevos métodos que permitan preservar adecuadamente los tejidos descelularizados para su transporte al quirófano e, idealmente, para uso diferido (Rodríguez et al., 2013). En la presente Tesis Doctoral se han obtenido biomateriales tubularizados mediante técnicas de descelularización, los cuales han sido sometidos a diversos protocolos de criopreservación y liofilización para uso diferido, evaluándose la efectividad de cada protocolo., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en Medicina Clínica y Salud Pública

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología., Tesis Univ. Granada. Departamento de Cirugía y sus Especialidades . Leída el 2 de diciembre de 2005

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 27 de octubre de 2008

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 11 de diciembre de 2008

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 19 de abril de 2010

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 22 de diciembre de 2006

La ingenieria tisular es una rama pionera de la investigación, la cual en las últimas décadas ha desarrollado grandes avances en los manejos y tratamientos de patologías. Dichos manejos convencionales son insuficientes e incluso en algunos casos nocivos para el mismo paciente. Una de las ramas que se ha visto beneficiada con estos grandes avances ha sido la urología. Dentro del campo de la ingeniería tisular, los manejos y la creación de tejidos artificiales con células madre abren actualmente una gran puerta de posibilidades para el manejo de patologías urológicas. En este contexto las células madre de la gelatina de Wharton presentan un enorme potencial para el desarrollo de nuevos manejos y tratamientos en el campo de la urología. En la presente Tesis Doctoral se explicarán las características del sistema urinario tanto anatómicas, embriológicas como histológicas. Así mismo, se explicarán las diversas patologías urológicas y sus actuales manejos, así como los efectos adversos y las limitaciones que dichos manejos presentan. Finalmente en este trabajo se expondrán los avances de la ingeniería tisular en el campo urológico, y el potencial actual de las células madre de la gelatina de Wharton., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en: Biomedicina, Proyectos de Investigación FIS PI14/0955 y FIS PI15/2048 del fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III (Ministerio Español de Economía y Competitividad).

El cartílago es un tipo de tejido conectivo especializado, que se caracteriza por estar constituido por condrocitos y una matriz extracelular (MEC) altamente especializada, cuya composición rica en fibras colágenas, fibras elásticas, glicosaminoglicanos, proteoglicanos y glicoproteínas, le confieren sus propiedades biomecánicas y su elevada hidratación. Histológicamente, existen tres tipos de cartílago en la especie humana, los cuales se diferencian por la composición de la MEC. Estas variedades son, el cartílago hialino, localizado en las articulaciones sinoviales, en el cartílago de crecimiento de los huesos largos, y en la porción conductora de la vía aérea. El cartílago elástico, que constituye el esqueleto de algunas vísceras, el cual es especialmente importante en el pabellón auricular y conducto auditivo externo y el cartílago fibroso que se localiza en los discos intervertebrales, sínfisis púbica y en la articulación temporomandibular En el área maxilofacial, tema de especial interés en esta Tesis Doctoral, se localizan los tres tipos de tejido cartilaginoso, el cartílago hialino en el septum nasal, el cartílago elástico en el conducto auditivo externo y pabellón auricular y el fibrocartílago en el disco de la articulación temporomandibular. El tejido cartilaginoso en sus distintas variedades, se ve afectado por múltiples patologías neoplásicas, congénitas, osteodegenerativas, autoinmunes, traumatismos y diversos síndromes. En el caso del cartílago elástico, tipo de cartílago estudiado en la presente Tesis Doctoral, la patología más frecuente que lo afecta es la microtia, una patología congénita que afecta al pabellón auricular. Actualmente, aunque existen diversas alternativas terapéuticas para el tratamiento de este tipo de lesiones del pabellón auricular, los resultados no son del todo satisfactorios ni duraderos en el tiempo, requiriendo múltiples intervenciones quirúrgicas con su amplia gama de complicaciones, por lo cual, la generación de un sustituto adecuado de cartílago elástico para uso clínico, continua siendo un desafío. En la presente Tesis Doctoral se estudió la generación mediante técnicas de Ingeniería Tisular, de un modelo de cartílago elástico artificial humano utilizando condrocitos humanos derivados de cartílago elástico (CHDCE), encapsulados en un biomaterial, un hidrogel compuesto de fibrina-agarosa nanoestructurado., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en Biomedicina, Esta Tesis Doctoral ha sido realizada en los laboratorios del Grupo de Ingeniería Tisular del Departamento de Histología de la Universidad de Granada y financiada por el proyecto de investigación PI-0653-2013 de la Consejería de Salud de la Junta de Andalucía, por el proyecto de investigación GREIB PP2012-P109 (Proyectos de investigación precompetitivos del plan propio) de la Universidad de Granada y del Vicerrectorado de Política e Investigación.

En primer lugar, se hace un breve repaso de la embriología del ojo humano, para continuar con un recuerdo anatómico macro y microscópico de la superficie ocular. Seguidamente, se explica de forma abreviada en qué consiste el glaucoma y sus principales formas de tratamiento médico entre las que se encuentran los colirios de análogos de prostaglandinas. Se hablará también de farmacología ocular, haciendo hincapié en los conservantes más importantes, especialmente el cloruro de benzalconio, que se encuentra presente en varias de las presentaciones comerciales estudiadas en este trabajo. Asimismo, se explicarán diversos métodos para estudiar la viabilidad celular, algunos de los cuales se han utilizado en esta obra., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en: Biomedicina, Proyectos de Investigación “Elaboración de un modelo biomimético de córnea artificial humana nanoestructurada a partir de células madre corneales y mesenquimales (PI 11/1582)” y “Generación de córneas artificiales con epitelio y endotelio transdiferenciados y biomateriales nanoestructurados de curvatura controlada (PI 14/0955)” del fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III.

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología, Esta Tesis Doctoral ha sido realizada en los laboratorios del Grupo de Ingeniería Tisular del Departamento de Histología de la Universidad de Granada y financiada por los Proyecto de Investigación “GENERACIÓN DE SUSTITUTOS DE MUCOSA PALATINA Y HUESO NANOESTRUCTURADOS MEDIANTE INGENIERÍA TISULAR PARA SU APLICACIÓN EN EL TRATAMIENTO DE FISURADOS PALATINOS (PI 10/02213)” y “GENERACIÓN DE UN CONSTRUCTO COMPLETO DE PALADAR DURO HUMANO PARA SU UTILIZACIÓN CLÍNICA (PI 14/02110)” del fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III.

El objetivo general de esta Tesis Doctoral es identificar los patrones histológicos e histoquímicos de la matriz extracelular de mucosa oral ortotípica y heterotípica generada por Ingeniería Tisular., Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología, Esta Tesis Doctoral ha sido realizada en los laboratorios del Grupo de Ingeniería Tisular del Departamento de Histología de la Universidad de Granada y financiada por el Proyecto de Investigación titulado “Generación de Mucosa oral artificial humana a partir de células madre de la gelatina de Wharton” – PI FIS11/2668 del Plan Nacional de Investigación Científica, Desarrollo e Innovación Tecnológica (I+D+i), Fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competitividad. Cofinanciado con fondos FEDER, Unión Europea.

La elaboración de tejidos artificiales, cada vez más biomiméticos y biocompatibles con los tejidos corporales, constituye el objetivo básico de la ingeniería tisular. En tal sentido, los procesos de biofabricación y de funcionalización de los biomateriales que forman parte de los tejidos artificiales constituyen un objeto preferente de investigación en este campo, al considerarse dichos biomateriales componentes activos y determinantes en las distintas propiedades que van a desempeñar los nuevos tejidos. La reciente generación de un hidrogel de fibrina-agarosa con gran aplicación a la ingeniería tisular ha estimulado la investigación de procesos de mejora de sus propiedades para su aplicación a distintas situaciones terapéuticas. En la presente Tesis Doctoral, con el objeto de generar nuevos modelos tisulares mas biomiméticos, se desarrollan dos modelos tisulares constituidos por hidrogeles de fibrina-agarosa (HFA) y de fibrina-agarosa nanoestructurada (NHFA) a los que se someten a la acción de glutaraldehido y genipín, agentes químicos con efectos de entrecruzamiento. Aunque los efectos de la nanoestructuración han sido estudiados es la primera vez que se investigan los efectos de los agentes químicos sobre los hidrogeles de fibrina-agarosa y de fibrina-agarosa nanoestructurada. Tras la generación de los hidrogeles de fibrina-agarosa a partir de plasma humano, ácido tranexámico, agarosa tipo VII y cloruro cálcico como elementos básicos, tanto los no nanoestructurados como los nanoestructurados por comprensión plástica se someten a la acción de los agentes químicos glutaraldehido y genipín a concentraciones de 0,25 y 0,5% y se realizan estudios estructurales sobre los patrones fibrilares y de porosidad, reológicos sobre los modulos de rigidez (G), elástico (G´) y viscoso (G”) y de biocompatibilidad mediante ensayos biofuncionales, bioquímicos e histológicos. Los resultados ponen de relieve que la combinación de una concentración variable de glutaraldehido o genipín y/o de nanoestructuración permite 1) controlar la porosidad en los modelos tisulares de fibrina-agarosa, 2) que el módulo de rigidez (G) mejora significativamente tras la utilización de las distintas concentraciones de glutaraldehido y genipín, con independencia de que el biomaterial este o no nanoestructurado, 3) que el modulo elástico ( G´) alcanza en todos los casos valores hasta cuatro veces superiores a los del módulo viscoso ( G´´) con independencia de la utilización de glutaraldehido o genipín, lo que indica que los nuevos modelos tisulares generados poseen propiedades marcadamente elásticas y 4) que existen diferencias significativas en relación con la viabilidad a favor del genipín. La concentración más citotóxica es glutaraldehido al 0,5% con importante mortalidad celular y la más viable la de genipín al 0,25% escasa disminución celular. La generación de diferentes modelos de tejidos artificiales de fibrina-agarosa elaborados mediante la aplicación combinada de dos procesos de biofabricación por entrecruzamiento -agentes químicos y nanoestructuración-, permite el diseño de modelos versátiles de tejidos artificiales con patrones estructurales biomiméticos de diferente porosidad, con patrones biomecánicos de diferente rigidez, elasticidad y viscosidad y con patrones de biocompatibilidad y viabilidad diferentes que pueden ser utilizados en los protocolos de ingeniería tisular de acuerdo con los tejidos nativos que hayan de ser sustituidos en los nuevos protocolos terapéuticos que actualmente promueve la medicina regenerativa., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en: Biomedicina, Esta Tesis Doctoral se ha realizado en el marco del Plan Propio de investigación de la Universidad de Granada (programa 6B) de contratos predoctorales con la Fundación San Francisco Javier y Santa Cándida (Ref. 4028/15). La tesis ha sido financiada asimismo parcialmente por el Grupo de Investigación de Ingeniería Tisular CTS-115 y por los proyectos FIS PI14/955, PI14/2110, PI14/1343 y PI15/2048 del Plan Nacional de Investigación Científica, Desarrollo e Innovación Tecnológica (I + D + I), Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía e Innovación (cofinanciados por fondos FEDER, UE) y SAS PI-0653-2013 de la Fundación Progreso y Salud, Consejería de Salud, Junta de Andalucía, España.

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología

La articulación temporomandibular es una de las articulaciones más importante del organismo, ya que está involucrada en funciones tan importantes como el habla, la deglución y la masticación. La patología más importante que afecta a esta articulación es el Síndrome de Disfunción Articular, debido a la gran incidencia que presenta en la población y a la repercusión negativa que produce en la calidad de vida de los pacientes que la padecen. La etiopatogenia se basa en un aumento de presión intraarticular que produce una degeneración discal progresiva y, consecuentemente, una destrucción articular. A pesar de la diversidad de tratamiento que existen para esta enfermedad, ninguno de ellos presenta resultados favorables a largo plazo, por lo que se pierde la funcionalidad de la articulación. Debillo a ello, la Ingeniería Tisular sería una alternativa terapéutica de suma importancia, ya que daría la posibilidad de crear un sustituto viable de disco articular. Para el desarrollo de cualquier protocolo de Ingeniería Tisular es necesario seleccionar las poblaciones celulares más viables. Así, el objetivo de esta tesis doctoral ha sido evaluar la viabilidad de los condrocitos de la articulación temporomandibular para su uso en Ingeniería Tisular Maxilofacial. Para ello se tomaron biopsias de disco articular humano. De estas se asilaron los condrocitos y se cultivaron hasta obtener 9 pases celulares. En todos los pases celulares se analizó la viabilidad celular mediante disitintas técnicas de determinación de la viabilidad. Se usaron: técnicas mixtas metabólicas (Live/Dead), técnicas de exclusión del colorante vital azul tripán, técnicas microanalíticas, técnicas de expresión génica y determinación del índice de Viabilidad Media., Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología., Esta tesis doctoral ha sido realizada en los laboratorios del Grupo de Ingeniería Tisular del Departamento de Histología de la Universidad de Granada y financiada por el Proyecto de Investigación FIS PI11/02668 financiado por el Fondo de Investigación Sanitaria del Instituto de Salud Carlos III.

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 13 de mayo de 2011

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 2 de mayo de 2008

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 24 de marzo de 2010

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 22 de diciembre de 2006

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 2 de mayo de 2008

Reducción alta, de alta frecuencia y no-aceleración con el de campos magnéticos., Univ. de Granada, Departamento de Histología. Leída en 1990

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 19 de julio de 2007

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 23 de octubre de 2009

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 30 de mayo de 2011

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 9 de mayo de 2011

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 24 de marzo de 2010

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída el 15 de septiembre de 2009

Tesis Univ. Granada. Departamento de Histología. Leída 23 de septiembre de 2005