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[ESP] A la hora de realizar cultivos in vitro vegetales, hay que tener en cuenta diversos factores que pueden afectar a su crecimiento, como pueden ser: medio de cultivo, temperatura, luz, etc. Estos factores afectarán de forma diferente a cada tipo de cultivo, especialmente a diferentes especies vegetales. En este ensayo, se ha caracterizado cómo afectan la luz, el tamaño del inóculo y la disgregación del inóculo al crecimiento de cultivos en matraces de Nicotiana benthamiana. El factor que más influye en el crecimiento de este tipo de cultivo es el tamaño del inóculo: se requiere un mínimo porcentaje de inóculo para que el crecimiento del cultivo sea significante. [ENG] In vegetal in vitro cultures, there are several factors to be considered that can affect growth, such as: culture medium, temperature, light, etc. These factors affect differently each type of culture, specially to different species. In this assay, we have studied how the light, the size of the inoculum and the inoculum disaggregation affect the growth of flasks cultures of Nicotiana benthamiana. The most influent factor is the inoculum size: it is necessary to have a minimum inoculum to achieve a significant growth.

[SPA] A pesar de las ventajas que presentan los cultivos de células vegetales para expresión y producción de proteínas y otros metabolitos de interés en biorreactores frente a los cultivos microbianos, tienen algunas limitaciones. Dos de las más importantes son el alto porcentaje de inóculo que se necesita para que los cultivos sean viables y el estrés por cizalla que sufren por la agitación mecánica. El estrés por dilución, o bajo porcentaje de inóculo, y el estrés por cizalla dan lugar al proceso de muerte celular programada (MCP). En estudios previos se ha visto que un medio de cultivo condicionado puede proteger a las células de la MCP. En este trabajo se ha estudiado este efecto frente al estrés por cizalla y por dilución que sufren los cultivos celulares vegetales a escala de matraz, para poder aplicarlo a cultivos en biorreactores. [ENG] Although there are advantages about using plant cell cultures as expression system to produce proteins and metabolites of interest in bioreactors comparing to microbial cultures, they also have some limitations. Two of the most important ones are the high inoculum percentage is needed to have viable cultures and the shear stress they suffer from mechanic agitation. Both stresses lead to programming cell death (PCD). In previous studies, it has been demonstrated that a cell-conditioned growth medium has a protective effect against PCD. In this work, we have studied this effect against both stresses in flasks cultures, to apply it in the future to bioreactor cultures.

El cultivo in vitro es una técnica muy empleada en investigación vegetal, siendo uno de los pilares de la biotecnología vegetal. Las especies Nicotiana tabacum y Nicotiana benthamiana son utilizadas como sistemas modelo en la investigación vegetal. En este trabajo, se va a establecer un cultivo in vitro de estas dos especies vegetales, bajo las mismas condiciones de cultivo, con el fin de observar si las diferencias que existen entre ellas, morfológicas y fenotípicas, se traducen en diferencias en el crecimiento bajo condiciones de cultivo in vitro. Más concretamente, se busca determinar si estas condiciones afectan a la velocidad de crecimiento y la cantidad de biomasa producida. Dentro del tiempo de este trabajo, se podría concluir que no hay diferencias significativas en cuanto a estos parámetros de crecimiento, aunque serían necesarios más ensayos para corroborar estos datos preliminares. Con los cultivos obtenidos se pretende, en próximas investigaciones, realizar los ensayos en biorreactores, y analizar de nuevo si ahí el crecimiento es semejante o difiere entre las especies.