Search

Additional file 1: Supplementary Figure S1. Renin activity in urine by moderate loss of kidney function, hypertension (HTN) and albumin/creatinine (ACR: urine albumin to creatinine ratio). Data are expressed as mean ± Standard error of the mean (SEM). *P = 0.001 different from control group, † P

Fundação de Amparo e Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento (CNPq) Associação de Fundo e Incentivo à Pesquisa (AFIP) Baixos níveis de oxigênio nos tecidos (hipóxia) ocorrem em uma série de condições fisiopatológicas como no crescimento de tumores, doenças cardíacas e na apneia obstrutiva do sono. Durante a hipóxia é estimulado o crescimento de vasos sanguíneos (angiogênese) que leva ao aumento no aporte de O2 tecidual. O fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) e o sistema calicreína-cininas são essenciais para esse processo. Assim como em humanos, na hipóxia intermitente, modelo experimental da apneia obstrutiva do sono, foram descritos aumento da pressão arterial, diminuição do débito cardíaco, hipertrofia no ventrículo esquerdo e hipertensão pulmonar. No entanto, as evidências de angiogênese cardíaca nesse modelo não estão ainda claramente estabelecidas. A fim de investigar a angiogênese in vivo no ventrículo esquerdo, camundongos machos da linhagem C57Bl6/J e nocautes para o receptor de bradicinina B2 foram submetidos à hipóxia intermitente por 1, 2, 3, 4, ou 5 semanas, com posterior avaliação histológica de vascularização após implante de um plug de Matrigel. Também foram avaliadas as expressões gênica e proteica do fator de crescimento vascular endotelial e componentes do sistema calicreínas-cininas. Encontramos diminuição na angiogênese cardíaca in vivo em 2, 3 e 4 semanas de hipóxia intermitente. Coerente com esse dado, embora haja aumento da expressão do fator induzido por hipóxia na primeira semana, VEGF apenas aumentou após a terceira semana (isoforma 165) e a quarta semana (isoforma 121) e seu receptor VEGF-R2 na quinta semana de hipóxia intermitente. Nenhuma dessas alterações foi observada nos animais nocautes do receptor B2. Nos animais selvagens, o receptor B2 teve a expressão aumentada a partir da primeira semana de hipóxia intermitente, mantendo-se até a quinta semana. Inesperadamente a expressão gênica do receptor B1 nos animais selvagens diminuiu na primeira semana, enquanto não houve alteração na expressão proteica. A expressão das proteínas intracelulares (Akt e Src) não houve alteração no ventrículo esquerdo dos animais selvagens ou nocautes. Esses resultados sugerem que na hipóxia intermitente, ao contrário do observado em outros modelos de hipóxia, a clássica interação do VEGF com os componentes do sistema calicreínas-cininas não é suficiente para estimular a formação de novos vasos. Adicionalmente, o receptor B2 parece ser essencial para que as modificações observadas ocorram no modelo. Nossos resultados indicam um mecanismo para as consequências cardíacas da apneia obstrutiva do sono. Low levels of oxygen in the tissues (hypoxia) occur in a number of pathophysiologic conditions such as the growth of tumors, heart disease and obstructive sleep apnea. During hypoxia, blood vessel growth (angiogenesis) is stimulated, leading to increased tissue O2 uptake. The vascular endothelial growth factor (VEGF) and the kallikrein-kinin system are essential for this process. As in humans, in intermittent hypoxia, an experimental model of obstructive sleep apnea, increased blood pressure, decreased cardiac output, left ventricular hypertrophy and pulmonary hypertension were described. However, the evidence of cardiac angiogenesis in this model are not clearly established. In order to investigate in vivo angiogenesis, left ventricular male mice C57BI6/J and knockouts for the bradykinin B2 receptor were subjected to intermittent hypoxia during 1, 2, 3, 4 or 5 months with subsequent histological evaluation of vascularization after the implantation of a Matrigel plug. The gene and protein expressions of vascular endothelial growth factor and components of the kallikrein-kinin system were also evaluated. A decrease in cardiac angiogenesis in vivo after 2, 3 and 4 weeks of intermittent hypoxia was found. Consistent with this data, although there is an increase in the expression of hypoxia induced factor since the first week, VEGF only increased after the third week (isoform 165) and the fourth week (isoform 121) and its VEGF-R2 receptor in the fifth week of intermittent hypoxia. None of these changes was observed in its B2 receptor knockout animals. In wild type animals, the B2 receptor had an increased expression since the first week of intermittent hypoxia that remained until the fifth week. Unexpectedly the gene expression of B1 receptor in wild type was decreased in the first week, while there was no change in protein expression. The expression of intracellular proteins (Akt and c-Src) had no change in left ventricular wild animals or knockouts. These results suggest that the intermittent hypoxia, unlike that seen in other models of hypoxia, the classic interaction of VEGF with the components of the kallikreinkinin system is not enough to stimulate the formation of new vessels. Additionally, the B2 receptor appears to be essential for the observed changes to occur in the model. Our results suggest a mechanism for the cardiac effects of obstructive sleep apnea. FAPESP: 2012/02123-0 Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016)

Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Os neuropeptídeos desempenham um papel fundamental no controle do ciclo vigília-sono e as suas ações podem ser reguladas pela atividade das enzimas proteolíticas. Enzimas proteolíticas são essenciais para metabolização de neuropeptídeos, seja pela liberação a partir de precursores protéicos inativos ou ativos, ou pela inativação de neuropeptídeos ativos. Utilizando substratos com supressão interna de fluorescência, Western blot, inibidores específicos e PCR em tempo real, avaliamos as alterações na expressão e atividade da enzima conversora de angiotensina-I (ECA - EC 3.4.15.1) e thimet oligopeptidase (EP24.15 - EC 3.4.24.15) no sistema nervoso central de ratos em modelos de privação de sono paradoxal. Ratos machos foram distribuídos em cinco grupos: controle, privação de sono paradoxal por 96h (PSP96) e recuperação do sono (rebote após privação 24, 48 e 96 horas após PSP96). Encontrou-se variações nas atividades, na expressão e nos níveis de RNAm da ECA e EP24.15 em extratos do hipotálamo, hipocampo, tronco encefálico, córtex e estriado. Mudanças significativas nos parâmetros avaliados (atividade, níveis de RNAm e expressão protéica) foram observadas nos grupos PSP96 e nos rebotes. As alterações de atividade da ECA e EP24.15 podem implicar em mudanças no metabolismo das angiotensinas, bradicinina, peptídeos opióides (dinorfinas e encefalinas), substância P e GnRH e relacionar-se a algumas das mudanças fisiológicas (estresse, memória e cognição, nocicepção e alterações endócrinas) observadas durante e após a privação do sono. Neuropeptides have a fundamental role on sleep-wake cycle control and their actions are regulated by proteolytic processing. Proteolytic enzymes are essential for the metabolism of neuropeptides, either by release from active or inactive precursor protein, or the inactivation of active neuropeptides. Using fluorescence resonance energy transfer substrates, Western blot, specific inhibitors and real time PCR, we have demonstrated changes in the expression and activity of angiotensin I-converting enzyme (ACE - EC 3.4.15.1) and thimet oligopeptidase (EP24.15 – EC 3.4.24.15) in the central nervous system of rats submitted to paradoxical sleep deprivation. Male rats were distributed in 5 groups: control, paradoxical sleep deprivation during 96h (PSD96), and sleep recovery (recovery after sleep deprivation 24, 48 and 96h after PSD96). Alterations in the activities, expression and mRNA levels of ACE and EP24.15 were found in extracts of the hypothalamus, hippocampus, brainstem, cortex and striatum. Significant changes in these parameters (activity, mRNA levels, protein expression) were observed in groups PSD96 and recovery. Modifications on ACE and EP24.15 activities can result in alterations in the metabolism of angiotensins, bradykinin, opioid peptides (dynorphins and enkephalins), substance P and GnRH and be related to some of the physiological changes (stress, memory and cognition, nociception and endocrine changes) observed during and after sleep deprivation. TEDE BV UNIFESP: Teses e dissertações