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In Gram-positive bacteria with a low GC-content, e. g. Bacillus subtilis, carbon catabolite regulation (CCR) is mainly mediated by the carbon catabolite control protein A (CcpA). CcpA is a global transcriptional regulator that represses or activates hundreds of genes involved in carbon and nitrogen metabolism. In response to the availability of preferred carbon sources like glucose the phosphoproteins, HPrSer46P and CrhP, and the low-molecular weight effectors fructose-1,6-bisphosphate (FBP) and glucose-6-phosphate (Glc-6-P) stimulate CcpA function. The phosphoprotein-CcpA interaction triggers structural changes and converts CcpA into its DNA binding structure which allows binding of catabolite responsive elements (cre). Distinct point mutations in CcpA abolish regulation of some but not all target genes suggesting additional interactions of CcpA. Therefore, in vivo crosslinking and mass spectrometry were applied to identify CcpA complexes which are active in both repression and activation. This experiment was accomplished with multiple copies of a promoter region of a gene which is activated by CcpA to compensate for the large excess of promoters which are repressed by CcpA. For this purpose a B. subtilis strain with multiple copies of the ackA promoter was subjected to in vivo crosslinking and proteins interacting with CcpA were analyzed by mass spectrometry. Among these with CcpA interacting proteins identified by mass spectrometry HPr, all RNA polymerase subunits as well as the global regulator CodY were observed. In bacterial two-hybrid assays combining each RNA polymerase subunit with CcpA only a binding between CcpA and the α subunit (RpoA) was detected. In vivo crosslinking combined with immunoblot analyses revealed CcpA-RpoA complexes in cultures with or without glucose whereas CcpA-HPr and CcpA-CodY complexes occurred only or predominantly in cultures with glucose. Surface plasmon resonance (SPR) analyses confirmed binding of CcpA to the N- (αNTD) and C-terminal domains (αCTD) of RpoA as well as to CodY. Furthermore, binary interactions of CodY with the αNTD and the αCTD were detected by SPR. The KD values of complexes of CcpA or CodY with the αNTD or the αCTD are between 5 and 8 µM. CcpA and CodY form a loose complex with a KD of 60 µM. These data were combined to propose a model for a transcription initiation complex at the ackA promoter. In Gram-positiven Bakterien mit niedrigem GC-Gehalt, wie Bacillus subtilis, wird Kohlenstoff-Katabolitenregulation überwiegend vom Katabolit Kontroll Protein A (CcpA), einem globalen Transkriptionsregulator, vermittelt. CcpA reprimiert oder aktiviert die Expression von hunderten von Genen, die hauptsächlich im Kohlenstoff- und Stickstoffmetabolismus involviert sind. Die Phosphoproteine HPrSer46P und CrhP sowie die niedermolekularen Effektoren Fruktose-1,6-bisphosphat (FBP) und Glukose-6-Phosphat (Glc-6-P) stimulieren die DNA-Bindefähigkeit von CcpA in Gegenwart einer bevorzugten Kohlenstoffquelle, wie beispielsweise Glukose. Die Bindung dieser Phosphoproteine an CcpA führt zu Strukturänderungen und ermöglicht die Bindung des CcpA-Phosphoprotein-Komplexes an die sogenannten catabolite responsive elements (cre). In vorangegangenen Arbeiten lieferten CcpA Mutationsanalysen Hinweise für differenzielle Aktivitäten einiger CcpA-Punktmutanten, da die Regulation von einigen aber nicht von allen Genen aufgehoben wird und daher auf eine Beteiligung zusätzlicher Interaktionen von CcpA schließen lassen. Zur Identifizierung solcher bislang unbekannter CcpA-Komplexe, die sowohl bei der Repression als auch bei der Aktivierung von CcpA regulierten Genen beteiligt sind, wurde deshalb ein in vivo crosslinking durchgeführt. Um das Verhältnis von CcpA reprimierten zu aktivierten Genen anzugleichen, wurde die Anzahl einer Sequenz, die ackA Promotorregion, als repräsentatives durch CcpA aktiviertes Gen, erhöht. Durch massenspektrometrische Analysen konnte HPr als CcpA Interaktionspartner bestätigt werden. Unter den bisher unbekannten möglichen CcpA Interaktionspartnern befanden sich alle Untereinheiten der RNA Polymerase sowie der globale Regulator CodY. In detaillierten Untersuchungen mittels bakteriellem Two-Hybrid-System wurde nur eine direkte Interaktion zwischen CcpA und der α Untereinheit der RNA Polymerase (RpoA) detektiert. Die Bindung zwischen CcpA und RpoA konnte ebenfalls mittels in vivo crosslinking Experimenten und Immunoblotanalysen nachgewiesen werden. CcpA-RpoA Komplexe waren unabhängig vom Vorhandensein von Glukose im Kultivierungsmedium detektierbar. Im Gegensatz dazu war die Interaktion zwischen CcpA und CodY hauptsächlich bei Zugabe von Glukose nachweisbar und Komplexe zwischen CcpA und HPr konnten ausschließlich durch Zugabe von Glukose zum Medium detektiert werden. In qualitativen und quantitativen Oberflächenplasmonenresonanzanalysen wurde die Bindung von CcpA sowohl an die N , als auch an die C-terminale Domäne von RpoA (αNTD bzw. αCTD) bestätigt. Interaktionen jeder einzelnen RpoA Domäne (αCTD und αNTD) mit CodY konnten ebenfalls nachgewiesen werden. Die ermittelten KD Werte dieser Bindungen liegen zwischen 5 und 8 µM, die Interaktion zwischen CcpA und CodY wiederum ist mit einem KD Wert von ca. 60 µM vergleichsweise schwach. Anhand der in dieser Arbeit ermittelten Ergebnisse wurde ein Model für einen Transkriptionsinitiationskomplex am ackA-Promotor postuliert.