1. Stabil och antibiotikafri läkemedelsproduktion i rekombinant Escherichia coli
- Author
-
Benevides, Kristina, Broström, Oscar, Elison Kalman, Grim, Swenson, Hugo, Vlassov, Andrei, and Ågren, Josefin
- Subjects
hsdS ,autoinduktion ,expressionssystem ,sekundärstruktur ,auto ,peptidläkemedel ,terminator ,batch ,fed-batch ,tal ,pseudogen ,optimering ,läkemedel ,rrnB ,fermentation ,stam ,lac-operon ,repressor ,number ,5'-UTR ,T2 ,kromosom ,T1 ,pH ,promotor ,T7 ,T7-system ,OriC ,affibodymolekyl ,inducering ,BL21(DE3) ,kromosomal ,kopietal ,kopie ,escherichia coli ,ompA ,kontinuerlig ,gen ,antibiotikafri ,mRNA ,Pharmaceutical Biotechnology ,lac-operator ,stabil ,system ,rekombinant ,acetat ,modell ,utbytemodell ,matlab ,termineringssekvens ,proteinexpression ,plasmid ,expression ,induktion ,copy-number ,affibodymolekyler ,T7-promotor ,caiB ,BL21 ,antibiotika ,B-stam ,E. coli ,peptid ,kromosombaserad ,yjiV ,operon ,Läkemedelsbioteknik ,Affibody ,bioreaktor ,origin of replication ,affibody-molekyler ,fermentor ,kopietalmodell ,acetatbildning ,acetatreduktion ,peptider ,operator ,yjjM ,affibody-molekyl ,fed ,3'-UTR ,copynumber ,plasmidfri ,pseudo ,acetatproduktion ,copy ,acetatreducering - Abstract
Den här rapporten presenterar ett antibiotikafritt, stabilt och kromosombaserat expressionssystem för läkemedelsproduktion i Escherichia coli på beställning av företaget Affibody AB. E. coli-stammen BL21(DE3) valdes som värdorganism för expressionssystemet. Systemet består av en genkassett som innehåller en T7-promotor, en 5′-UTR från genen ompA och en terminatorsekvens från RNA-operonet rrnB. Fyra kopior av genkassetten ska integreras i pseudogenerna caiB, yjjM, hsdS och yjiV. En datormodell som modellerar det egentliga kopietalet i cellerna har skapats i mjukvaran MATLAB, vilket visar att det uppskattas vara maximalt 32 kopior av genkassetten per cell på grund av replikation av kromosomen. Ett högt pH i fermentorn; att använda fed-batch och blandade kolhydratkällor; och att använda stammen BL21(DE3) minskar acetatproduktionen i cellen. En lägre acetatproduktion kan leda till en högre produkthalt. En proteinutbytesmodell för mjukvaran MATLAB har konstruerats för att uppskatta koncentrationen av Affibody®-molekylen i en E. coli cell.
- Published
- 2017