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Los ureidos, alantoína y ácido alantóico, constituyen la principal forma de transporte del nitrógeno orgánico a larga distancia en varias especies tropicales de Leguminosas nodulantes. En otras especies vegetales se han determinado variaciones en el contenido de ureidos en respuesta a diferentes condiciones de estrés, pero poco se conoce sobre los mecanismos moleculares subyacentes. En este trabajo se observó que el estrés salino promueve la acumulación de alantoína en Arabidopsis principalmente por la represión transcripcional de AtALN (Arabidopsis thaliana Allantoinase). La importancia de este fenómeno durante la respuesta al estrés fue determinada a partir del análisis comparativo de plantas con distintas capacidades para acumular alantoína. Las líneas mutantes en AtALN (aln-1 y aln-2) acumularon mayores niveles de alantoína y presentaron una mejor tolerancia al estrés salino que las plantas de tipo silvestre (WT, wild-type). Por otro lado, se desarrollaron líneas transgénicas pRD29A:ALN/aln-2 que degradaron alantoína en respuesta al estrés. El fenotipo sensible de estas plantas indica que la acumulación de alantoína por represión transcripcional de AtALN es crítica durante el estrés salino. También se observó una fuerte relación entre la acumulación de alantoína en la planta y la tolerancia al estrés oxidativo inducido por metilviológeno. Por lo tanto, la alantoína acumulada podría señalizar la respuesta antioxidante y así tener un rol protector en los eventos oxidativos que ocurren durante distintos estreses fisiológicos en Arabidopsis.Complementariamente se estudió la implicancia de AtUPS5 (Arabidopsis thaliana Ureide Permease 5) en el transporte de alantoína en Arabidopsis. El fenotipo sensible y la acumulación de alantoína en las raíces de líneas mutantes en AtUPS5 (ups5-1 y ups5-2) durante el estrés salino sugieren que el transporte de alantoína mediado por AtUPS5 es un evento necesario durante la tolerancia al estrés en Arabidopsis. Para conocer el destino subcelular de las variantes de splicing AtUPS5L (Large) y AtUPS5s (short), se generaron plantas transgénicas que expresan proteínas fluorescentes fusionadas a sus dominios citosólicos centrales. Se comprobó la funcionalidad de estas construcciones en Arabidopsis mediante experimentos nutricionales y de estrés salino. Ambas variantes se localizaron en el retículo endoplásmico, pero la variante AtUPS5L también se localizó en la red del trans-Golgi/endosoma temprano (TGN/EE). El destino subcelular de las variantes de AtUPS5 sugiere que podrían tener distintos roles en la distribución de alantoína entre compartimentos subcelulares en las células vegetales.También se observó que los ureidos se acumularonn en plantas que crecieron en condiciones de baja relación C/N dadas por oscuridad total o exceso de nitrógeno inorgánico en el medio. Sin embargo, cantidades elevadas de NH4+ indujeron particularmente la acumulación de alantoína en Arabidopsis. Esto fue revertido por el agregado de sacarosa en el medio de cultivo. El fenotipo sensible de las líneas ups5-1 y aln-2 al exceso de NH4+ sugiere que el transporte de alantoína mediado por AtUPS5 y la expresión de AtALN son procesos necesarios para abastecer a la planta con el nitrógeno acumulado en la alantoína en estas condiciones. The ureides,allantoin and allantoate, serve as major organic compoundsforlong-distance nitrogen transportin various species oftropical legumes. In other plant species, variations in ureides concentrations have been observed under different stress conditions, but the underlying molecular mechanisms remained poorly understood. In this work, we observed that salt stress triggers allantoin accumulation in Arabidopsis mainly by AtALN(Arabidopsis thaliana Allantoinase) down regulation. The relevance of this process during stress response was established by the comparative analysis of plants with different capacities of allantoin accumulation. AtALNmutant lines (aln-1 and aln-2) accumulated higher allantoin levels and presented a better tolerance to salt stress than WT (wild-type) plants. On the other hand, we developed pRD29A:ALN/aln-2 transgenic lines that consumed allantoin in response to stress. The sensitive phenotype of this plants indicated that allantoin accumulation by AtALN down regulation is critical for salt stress tolerance. We observed also a strong relationship between allantoin accumulation and tolerance to metilviologen induced oxidative stress. Therefore, the accumulated allantoin could signal antioxidant response and/or have a protective role in the oxidative events during physiological stresses in Arabidopsis.In addition,a potencial role of allantoin transport mediated by AtUPS5 (Arabidopsis thaliana Ureide Permease 5was considered. The sensitive phenotype and allantoin accumulation in the roots of AtUPS5 mutant lines(ups5-1y ups5-2)during salt stress suggest that allantoin transport mediated by AtUPS5 is an important event for salt stress alleviation in Arabidopsis.To study the subcellular fateof splicing variants AtUPS5L (Large) and AtUPS5s (short), transgenic plants that expresed fluorescent proteins fused to their central loops were generated. The capacity of these fusion proteins to correctly complement the function of native ones was proved by nutritional and salt stress experiments. Both variants were localized in the endoplasmic reticulum, but the AtUPS5L variant was also localized in the trans-Golgi network/early endosome (TGN/EE). The subcellular fate of AtUPS5 splicing variants suggest that they could have different roles in allantoin distribution between subcelular compartments in the plant cells. It was also observed that ureides accumulated in plants that grow under low C/N ratio conditions given by total darkness or high inorganic nitrogen in the culture media. However, high NH4+concentrations induced particularly allantoin accumulation in Arabidopsis plants. This was reverted by adding sucrose in the culture media. The sensitive phenotype to high NH4+of up5-1 and aln-2 lines suggest that allantoin transport by AtUPS5 and AtALNexpression are neccesary processes to metabolizethe nitrogen accumulated in form of allantoin under these conditions. Fil: Lescano López, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales. Instituto Multidisciplinario de Biología Vegetal; Argentina

Acute renal failure (AFR) is one of the most complicated and critical events during the septic event, manifesting by production of reactive oxygen species (ROS), glomerular and tubular disorders, which contributes to worsening the prognosis and decreases in survival. [6]-gingerol and [10]-gingerol phenolic compounds are bioactive substances from ginger (Zingiber officinale Rosc.). Such compounds own protective potential effect on renoprotection due to their antioxidant and anti-inflammatory properties. This study investigated the modulatory effects of the [6]- and [10]-gingerol compounds on the renal damage triggered by cecal ligation and puncture (CLP)-induced ARF. Male Wistar rats (180-210 g) were divided into 6 groups (protocol. 45/14). The control groups (Sham) were induced to false surgery and subsequently treated with 2% Tween-80, [6]- or [10]-gingerol (25 mg/kg); AFR groups were induced by CLP process and subsequently trated with 2% tween-80, [6]- or [10]-gingerol (25 mg/kg, i.p.). The treatments were performed 2 hours before and 12 and 24 hours after induction. The biochemical parameters indicative of renal and tubular function, oxidative profile, antioxidant activity and gene expression of pro-inflammatory mediators by RT-qPCR we evaluated. In addition, the metabolomic profile by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) assays and histological analysis were also performed. The polymicrobial infection altered considerably parameters related to renal function, decreasing CLCR (0.4±0.1 mL/min), FU (0.008±0.001mL/min) with reduction of the GSH content (13.55±1.3 μg/mg/prot.). Indeed, had an increased of the BUN (62.1±2.1mg/dL), PU:CUR (46.6±7.4 mg/dL), the LDH activity (383.7±80.2 U/L), the FENa (1.5±0.3%), renal MDA (1.725µg/mg prot.) and nitrite (61.5±9.5 nM/g prot.). On the other hand, TNF-α levels, and IL-1β were increased (1.4±0.1 and 5.5±0.8 relative expression, respectively), triggering kidney failure and decreasing the survival of animals. The treatment with both compounds [6]-gingerol and [10]-gingerol (25mg/kg) exerted protection on renal injury. Improved the CLCR (1.2±0.2 mL/min and 1.0±0.07 mL/min, [6]- and [10]-gingerol, respectively) and FU (0.01±0,001mL/min, 0.010±0.001mL/min, [6]- and [10]-gingerol, respectively) with increased GSH activity (26.22±2.0 µg/mg prot. and 24.06±3.5 µg/mg prot., [6]- and [10]-gingerol, respectively). In addition, the BUN (46.83±2.7mg/dL, [6]-gingerol), PU:CUR (22.95±7.18mg/dL and 21.58±4.29 mg/dL [6]- and [10]-gingerol, respectively), the LDH activity (212.7±30.85 mg/dL and 236.3±43.8mg/dL, [6]- and [10]-gingerol, respectively), FENa (0.6±0.1% 0.58±0.09% e [6]- and [10]-gingerol, respectively), renal MDA (0.7462±0.16 mg de prot., [6]-gingerol) and nitrite (36.6±4.1 nM/g prot. and 38.98±7.9 nM/g prot. [6]- and [10]-gingerol, respectively) were all decreased. Besides the inhibition of TNF-α transcription (0.865 e 1.030, [6]- and [10]-gingerol, respectively) and IL-1β (3.330 e 1.790, [6]- and [10]-gingerol, respectively), providing protection on kidney function and increased survival of CLP animals. In addition, the specific injury to kidney cells was confirmed by the expressive values of Kidney Injury Molecule-1 (KIM-1) in septic animals, which were blocked by compounds [6]- and [10]-gingerol. Improvement in renal morphology was correlated with increased survival of CLP animals after [6]- and [10]-gingerol treatment. The principal component analysis (PCA) reported phenotypic changed in the metabolic profile by metabolite discrimination among the sham, CLP and CLP groups treated with [6]- or [10]-gingerol. The 1H NMR approach indicated increased in creatine, allantoin, dimethylglycine (DMG) and taurine in the CLP group (P

Microbial protein synthesis is essential to meet protein requirements in ruminants. The aim of this investigation was to evaluate the effect of incorporating extruded corn (Zea mays L.) into the ration of young steers fed with grass silage on microbial protein synthesis (MPS). Twenty young steers in metabolic cages were used for supplying food. The treatments consisted of combinations of extruded corn (EC) and ground corn (GC) EC-10 (10% EC-30% GC); EC-25 (25% EC-15% GC) and EC-40 (40% EC-0% GC). These foods constituted 40% of the ration (DM-based) and the remaining 60% was grass silage. The MPS was calculated through the excretion of purine derivatives (PD) in the urine, using total collection of urine. The inclusion of a higher percentage of extruded corn (EC-40) increased the PD excretion (51.85 mmol d-1, P < 0.05). The values of PD excretion ranged between 663 and 1078 μmol BW-075 d-1. The microbial protein absorption and flow of duodenal N also increased with a higher portion of extruded corn (EC-40, P < 0.05). The differences between treatments can be explained by the effect of corn extruding. This allows more energy available for ruminal bacteria and improved synchrony between energy and protein.La síntesis de proteína microbiana es fundamental para satisfacer los requerimientos proteicos en rumiantes. El objetivo de esta investigation fue evaluar el efecto de incluir maíz (Zea mays L.) extruido en la ración de novillos alimentados con ensilaje de pradera, sobre la sintesis de proteina microbiana (MPS). Se emplearon 20 novillos jóvenes ubicados en jaulas metabólicas para suministro de los alimentos. Los tratamientos consistieron en combinaciones de maiz extruido (EC) y maiz molido (GC) EC-10 (10% EC-30% GC); EC-25 (25% EC-15% GC) y EC-40 (40% EC-0% GC). Estos alimentos constituyeron el 40% de la ración (base MS) y el restante 60% fue ensilaje de pradera. Se estimó la MPS a través de la excreción de derivados de purinas (PD) en la orina, empleando colección total de orina. La inclusión de un mayor porcentaje de EC (EC-40) incrementó la excreción de PD (51.85 mmol d-1, P < 0,05). Los valores de excreción de PD fluctuaron entre 663 y 1078 μmol BW-075 d-1. La absorción de proteína microbiana y el flujo de N duodenal también se incrementaron por una mayor inclusión de EC (EC-40, P < 0,05). Las diferencias entre los tratamientos pueden ser explicadas por el efecto de la extrusión del maiz. Ello permite una mayor disponibilidad de energia para las bacterias ruminales y una mejor sincronia entre energia y proteina.

Memora nodosa (Silva Manso) Miers (Bignoniaceae) é uma planta do Cerrado popularmente conhecida como caroba. Na medicina tradicional folhas e raízes da espécie são utilizadas pela propriedade cicatrizante de úlceras externas e as raízes para dores abdominais. Do extrato etanólico das raízes da M. nodosa (EERMN) foi extraído um derivado purínico, a alantoína, encontrada em produtos destinados ao uso tópico devido à sua propriedade cicatrizante. Além disto, dados da literatura demonstraram propriedades anti-inflamatória e antinociceptiva com o EERMN e com a alantoína. Desta maneira, avaliou-se o efeito promovido pelo EERMN e da alantoína sobre a mucosa gástrica de camundongos procurando evidenciar se, além da ação anti-inflamatória, haveria algum efeito lesivo sobre a mucosa gástrica. A partir dos resultados iniciais observados buscou-se avaliar o efeito antiulcerogênico do extrato etanólico e da alantoína buscando identificar os mecanismos de ação envolvidos nesta atividade. Foram utilizados camundongos albinos Swiss, pesando entre 30-35 g, mantidos em condições controladas de temperatura (23  1C) e luminosidade (ciclo claro-escuro de 12 horas). A atividade gastroprotetora foi avaliada em diferentes modelos experimentais de úlceras gástricas induzidas por restrição alimentar, indometacina, estresse, etanol, etanol acidificado e ácido acético. Após sete dias de restrição alimentar os animais tratados com EERMN (300 mg/kg v.o.) apresentaram redução no índice de lesão de 15.01  2.92 para 5.20  1.44. No modelo de lesão gástrica aguda induzida por indometacina, diferentes doses do EERMN (100, 300 e 1000 mg/kg v.o.) apresentaram redução no índice de lesão de 12.70  1.70 (controle) para 7.20  0.35; 6.37  0.41 e 5.71  0.47, respectivamente. Quando as lesões gástricas foram induzidas pelo estresse dos animais, o EERMN (300 mg/kg v.o.) promoveu a redução no índice de lesão de 9.10  1.05 para 5.20  0.24. Quando as úlceras gástricas foram induzidas por etanol a 75%, o EERMN foi capaz de reduzir a área ulcerada em 69%. Os parâmetros de secreção ácida gástrica (volume, acidez livre e total) não foram alterados pelo tratamento com o extrato. Entretanto, o tratamento com o EERMN foi capaz de evitar a depleção da barreira de muco gástrico em relação ao grupo controle lesado, embora não tenha sido capaz de alterar os níveis de glutationa. No modelo de indução por etanol acidificado, o tratamento com alantoína nas doses de 30, 60 e 120 mg/kg reduziu a área ulcerada de 67,08  3,07% para 51,53  4,67; 42,32  4,93 e 43,18  4,90%, respectivamente. Quando as lesões foram induzidas por etanol, alantoína (60 mg/kg v.o.) apresentou uma redução de 80% da área ulcerada. Nos modelos de lesões agudas induzidas por estresse e indometacina, esta mesma dose de alantoína foi capaz de reduzir o índice de lesão de 11,90  0,93 para 6,62  0,49 e de 15,35  0,81 para 7,09  0,96, respectivamente. Foi também demonstrado efeito antiulcerogênico visto pela redução da área de lesão de 74,41  4,57 para 24,10  0,89 mm2 no modelo de indução por ácido acético após sete dias de tratamento com alantoína em doses diárias de 60 mg/kg (v.o.). Na quantificação do muco gástrico, semelhantemente ao EERMN, a alantoína foi capaz de prevenir a depleção do muco fixado (34,77  4,14) em relação ao grupo controle lesado (19,75  2,53). Além disso, alantoína foi capaz de restaurar a atividade da enzima catalase de 403,7  15,13 (controle lesado) para 499,9  16,38 nmoles/mg de proteína após modelo de indução por etanol. Deste modo, o conjunto de resultados demonstra que a atividade gastroprotetora para o EERMN e alantoína pode envolver diferentes mecanismos. Memora nodosa (Silva Manso) Miers (Bignoniaceae) is a Cerrado plant popularly known as caroba. In traditional medicine leaves and roots are used by the wound healing properties and the roots for abdominal pain. From ethanolic root extract of Memora nodosa (EERMN) was extracted a purinic derivative, allantoin, that is founded in products for topical use by the wound healing properties. Previous works revealed anti-inflammatory and antinociceptive properties with EERMN and allantoin. In this context, we seek evidence of whether, in addition to antiinflammatory action, there would be some gastric damaging effect. However, after the initial results obtained, this work sought to evaluate the antiulcerogenic effect of the extract and the allantoin and elicit the mechanisms involved in this activity. Albino Swiss mice, weighing 30-35g, maintained on standard conditions of temperature (23  1C) and illumination (12-h light/12-h dark cycle) were used. The gastroprotective activity was designed in different experimental gastric ulcers models induced by food restriction, indomethacin, stress, ethanol, ethanol acidity and acetic acid. Seven days after food restriction the animals treated with EERMN (300 mg/kg p.o.) showed reduction in the index of lesion from 15.01  2.92 to 5.20  1.44. In indomethacin induced gastric lesion, different EERMN doses (100, 300 and 1000 mg/kg p.o.) reduced the index of lesion from 12.70  1.70 (control) to 7.20  0.35; 6.37  0.41 and 5.71  0.47 respectively. Seven days after food restriction the animals treated with EERMN (300 mg/kg p. o.) showed reduction in the lesion index from 15.01  2.92 to 5.20  1.44. When the gastric ulcers were induced by ethanol 75%, the EERMN reduced the ulcerated area in 69%. The gastric acid secretion parameters (volume, pH and total acidity) did not alter by the treatment with the plant extract. However, the treatment with EERMN was capable to avoid the gastric mucus barrier depletion when compared to control lesion group, although it was not able to alter the glutathione levels. In the ethanol acidity model, the treatment with allantoin in doses of 30, 60 and 120 mg/kg reduced ulcerated area from 67.08  3.07% to 51.53  4.67; 42.32  4.93 and 43.18  4.90% respectively. When the lesions were induced by ethanol, allantoin (60 mg/kg p.o.) reduced ulcerated area in 80%. In models of acute lesions induced by stress and indomethacin, this same allantoin dose reduced the index of lesion from 11.90  0.93 to 6.62  0.49 and from 15.35  0.81 to 7.09  0.96 respectively. In the chronic model, allantoin demonstrated an antiulcerogenic effect by the reduction of lesion area from 74.41  4.57 to 24.10  0.89 mm2 in the acetic acid model. In the quantification of gastric mucus, similarly to EERMN, allantoin was able to prevent the mucus depletion (34.77  4.14) when compared with control lesion group (19.75  2.53). Moreover, allantoin was able to restore the activity of catalase enzyme from 403.7  15.1 (control lesion group) to 499.9  16.38 nmol/mg protein after gastric lesion induced by ethanol. These results demonstrate antiulcerogenic activity for EERMN and allantoin throughout different mechanisms. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Streptomyces species are native inhabitants of soil, a natural environment where nutrients can be scarce and competition fierce. They have evolved ways to metabolize unusual nutrients, such as purines and its derivatives, which are highly abundant in soil. Catabolism of these uncommon carbon and nitrogen sources needs to be tightly regulated in response to nutrient availability and environmental stimulus. Recently, the allantoin degradation pathway was characterized in Streptomyces coelicolor. However, there are questions that remained unanswered, particularly regarding pathway regulation. Here, using a combination of proteomics and genetic approaches, we identified the negative regulator of the allantoin pathway, AllR. In vitro studies confirmed that AllR binds to the promoter regions of allantoin catabolic genes and determined the AllR DNA binding motif. In addition, effector studies showed that allantoic acid, and glyoxylate, to a lesser extent, inhibit the binding of AllR to the DNA. Inactivation of AllR repressor leads to the constitutive expression of the AllR regulated genes and intriguingly impairs actinorhodin and undecylprodigiosin production. Genetics and proteomics analysis revealed that among all genes from the allantoin pathway that are upregulated in the allR mutant, the hyi gene encoding a hydroxypyruvate isomerase (Hyi) is responsible of the impairment of antibiotic production. Fil: Navone, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina Fil: Macagno, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina Fil: Licona Cassani, Cuauhtémoc. The University Of Queensland; Australia. Laboratorio Nacional de Genómica para la Biodiversidad; México Fil: Marcellin, Esteban. The University Of Queensland; Australia Fil: Nielsen, Lars K.. The University Of Queensland; Australia Fil: Gramajo, Hugo Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina Fil: Rodriguez, Eduardo Jose. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina

Las purinas y derivados como la alantoína son componentes abundantes del suelo, constituyendo una fuente de carbono y nitrógeno muy importante del hábitat natural de Streptomyces. En este trabajo de tesis se caracterizó la vía metabólica de degradación de alantoína como así también la regulación de la misma en S. coelicolor, mediante técnicas proteómicas, metabolómicas, bioquímicas, de biología molecular y de ingeniería genética. A partir de experimentos de proteómica se identificaron la mayor parte de las proteínas involucradas en la degradación de alantoína en esta bacteria. Posteriormente, se caracterizaron cuatro enzimas de esta vía, alantoinasa y alantoicasa, las cuales son esenciales para el crecimiento de la bacteria en medio con alantoína, e hidroxipiruvato isomerasa y tartronato semialdehído reductasa mediante técnicas bioquímicas y de ingeniería genética. Por otra parte, se identificó el regulador transcripcional negativo AllR del metabolismo de la alantoína en S. coelicolor. Ensayos in vitro permitieron identificar los sitios de unión de este regulador a tres promotores de la vía. Estos sitios se encuentran altamente conservados en otras especies de Streptomyces lo que denota una preservación en la regulación de esta ruta metabólica en este importante género bacteriano. Estos estudios permitieron proponer un modelo de regulación mediado por alantoato. A su vez, este trabajo permitió realizar una conexión importante entre el metabolismo primario de alantoína y el metabolismo secundario de producción de antibióticos en S. coelicolor. Por un lado, se evidenció que la degradación de alantoína provoca una marcada disminución de la producción de antibióticos. Mediante técnicas de metabolómica y análisis de compuestos nitrogenados en los cultivos se pudo determinar que el producto final de esta vía es amonio. El aislamiento de una mutante en el complejo ureasa, que no genera acumulación de amonio extracelular pero es capaz de producir niveles normales de antibióticos en medio con alantoína, permitió conectar el exceso de amonio con la inhibición de la producción de antibióticos durante el metabolismo de alantoína. Por otro lado, se estableció que el normal funcionamiento del regulador AllR es necesario para la producción de antibióticos en S. coelicolor, ya que la inactivación del gen allR afecta notablemente la síntesis de los mismos. La inactivación de genes que aumentan su expresión en ausencia del regulador AllR permitió identificar al gen hyi, que codifica para la enzima hidroxipiruvato isomerasa, como responsable de este efecto. La mutante AllR-Hyi- revierte la producción de metabolitos secundarios a los niveles de la cepa parental. Para agregar a esto, una mutación en el gen hyi en la cepa parental provoca un aumento de la síntesis de antibióticos y abre una puerta para estudios futuros como estrategia para aumentar la producción de compuestos bioactivos en esta especie bacteriana. Este trabajo expresa la importancia del estudio de las vías metabólicas primarias, no solo para aumentar el conocimiento general de este importante género bacteriano sino también debido a la interacción de estas vías con el metabolismo secundario y la posibilidad de una futura manipulación para beneficio del ser humano. Fil: Navone, Laura. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; Argentina

Memora nodosa (Silva Manso) Miers é uma espécie da flora do Cerrado cujas folhas e caules são utilizados popularmente no tratamento de feridas e úlceras externas, enquanto as raízes são empregadas para dores abdominais e no tratamento da sarna. O objetivo desse trabalho foi avaliar a toxicidade aguda dos extratos etanólicos das folhas e raízes nas doses de 2000 e 5000 mg kg-1 em ratos e camundongos e a atividade cicatrizante das soluções aquosas contendo 2% desses extratos em feridas cutâneas em ratos. A contração das bordas das feridas foi avaliada por análises histológicas e morfométricas após 4, 7 e 14 dias de tratamento e por reação imunohistoquímica após 7 dias de tratamento. Os extratos etanólicos das folhas e raízes não apresentaram toxicidade na dose de 2000 mg kg-1 para ratos e camundongos e na dose de 5000 mg kg-1 para ratos. Nos camundongos, a dose de 5000 mg kg-1 dos extratos das folhas e raízes provocou alterações histológicas no fígado. Não foram observadas diferenças significativas na contração das feridas entre os grupos tratados com os extratos das folhas e das raízes e o controle após 4 e 7 dias de tratamento. Após 14 dias de tratamento, 50% dos animais tratados com o extrato das raízes apresentaram reepitelização total das feridas e reconstrução parcial dos anexos. A alantoína, isolada do extrato etanólico da raiz, pode ser considerada como um dos metabólitos secundários responsáveis pela aceleração da reepitelização. Memora nodosa (Silva Manso) Miers is a Brazilian Cerrado species whose leaves and stems are commonly used to treat external wounds and ulcers and the roots are used for abdominal pain and to treat scabies. The purpose of this study was to evaluate the acute toxicity of ethanol extracts from the leaves and roots of M. nodosa at 2000 and 5000 mg kg-1 doses in rats and mice and to evaluate the healing activity of aqueous solutions containing 2% of these extracts on skin wounds in rats. The contraction of the wounds was evaluated by histological and morphometric analysis after 4, 7 and 14 days of treatment and by immunohistochemistry analysis after 7 days of treatment. The ethanol extracts of leaves and roots presented no toxicity at a 2000 mg kg-1 dose for rats and mice, and at a 5000 mg kg-1 dose for rats. Histological changes in the liver of mice were verified with a 5000 mg kg-1 dose of the leaf and root extracts. Macroscopic and histological differences were not observed in the contraction of wounds between the groups treated with leaf and root extracts and the control group after 4 and 7 days of treatment. After 14 days of treatment, 50% of the animals treated with the root extract presented total re-epithelialization of wounds and partial reconstruction of the annexes. Allantoin, isolated from the root ethanol extract, can be considered one of the secondary metabolites responsible for accelerating re-epithelialization.

PURPOSE: To evaluate and characterize the wound healing process profile induced by allantoin incorporated in soft lotion oil/water emulsion using the planimetric and histological methods. METHODS: Female Wistar rats (n=60) were randomly assigned to 3 experimental groups: (C) control group-without treatment; (E) group treated with soft lotion O/W emulsion excipients; (EA) group treated with soft lotion O/W emulsion containing allantoin 5%. The emulsions either containing or not allantoin were topically administered for 14 days and the wound area was evaluated by planimetry and by qualitative and quantitative histological analysis of open wound model. RESULTS: The data which were obtained and analyzed innovate by demonstrating, qualitatively and quantitatively, by histological analysis, the profile of healing process induced by allantoin. The results suggest that the wound healing mechanism induced by allantoin occurs via the regulation of inflammatory response and stimulus to fibroblastic proliferation and extracellular matrix synthesis. CONCLUSION: This work show, for the first time, the histological wound healing profile induced by allantoin in rats and demonstrated that it is able to ameliorate and fasten the reestablishment of the normal skin. OBJETIVO: Avaliar e caracterizar o perfil cicatricial induzido pela alantoína incorporada em uma emulsão óleo/água, sob os aspectos planimétrico e histológico. MÉTODOS: Ratos Wistar fêmeas (n=60) foram agrupados aleatoriamente em três grupos experimentais grupo controle - sem tratamento (C); grupo tratado com emulsão pura (E); grupo tratado com emulsão contendo 5% de alantoína (EA). As emulsões contendo ou não alantoína foram administradas topicamente durante 14 dias e a área da ferida foi avaliada por planimetria e por análise histológica qualitativa e quantitativa em modelo de ferida aberta. RESULTADOS: Na análise planimétrica não foi observado diferenças significativas entre os grupos experimentais. Os resultados da análise histológica sugerem que o mecanismo de cicatrização induzido pela alantoína ocorre via controle da resposta inflamatória e estímulos à proliferação fibroblástica e síntese de matrix extracelular de maneira mais intensa e rapidamente em relação aos grupos controles. CONCLUSÃO: Este trabalho mostra pela primeira vez o perfil histológico de cicatrização induzido pela alantoína em ratos, demonstrando ser capaz de melhorar e acelerar o processo de reconstituição da pele.

Doze vacas da raça Holandesa foram distribuídas em três quadrados latinos 4 × 4 com o objetivo de avaliar o pH, o N-amoniacal, a produção de proteína microbiana, o número de protozoários no rúmen, a concentração de N-ureia no plasma e no leite e balanço de nitrogênio. Os tratamentos consistiram de silagem de milho ou cana-de-açúcar contendo 0, 7 ou 14% de caroço de algodão. Não houve diferença no pH quando fornecida cana-de-açúcar, apesar da diminuição dos valores após o início da alimentação. Os valores de N-amoniacal mantiveram-se acima de 15 mg/dL, após 6 horas de alimentação, apenas quando fornecida silagem de milho e cana-de-açúcar com 7% de caroço de algodão. O maior consumo de MS e nutrientes obtido com a silagem de milho implicou em menor eficiência de uso do nitrogênio e maiores excreções de N-ureia na urina em relação às demais dietas (150,6 vs 96,0 mg/kg PV). O fornecimento de cana-de-açúcar com 7% de caroço de algodão promoveu maiores quantidades de purinas totais (PT), purinas absorvidas (PA), nitrogênio microbiano (207, 6 vs 185,2 g/dia) e melhor balanço de compostos nitrogenados (31,5 vs 15,5) em relação às demais dietas com cana-de-açúcar. O menor consumo de MS e extrato etéreo quando fornecida cana-de-açúcar sem caroço de algodão resultou em maior número de protozoários (129,4 vs 34,0 × 10³/mL), maior excreção urinária de nitrogênio e menor síntese de proteína microbiana em relação às demais dietas, o que indica falta de sincronização na degradação da energia e proteína na relação volumoso:concentrado proposta neste experimento. Twelve cows were allotted to three 4 × 4 Latin Squares to evaluate pH, ammonium nitrogen, microbial protein production, number of protozoa in the rumen, plasma and milk urea concentration and balance of nitrogen compounds. Treatments consisted of maize silage or sugarcane with whole cottonseed, at 0, 7 or 14%. There were no differences on pH between sugarcane treatments, despite the reduction of values after the beginning of feeding. Ammonium nitrogen values were kept above 15 mg/dL after 6 hours of the beginning of feeding by maize silage and sugarcane with 7% whole cottonseed treatment. The higher DM and nutrients intake by maize silage treatment implied in less efficient use of nitrogen with higher urine N-urea excretion compared to other treatments (150.6 vs 96.0 mg/kg BW). Sugarcane with 7% whole cottonseed treatment obtained greater amounts of total purines (PT), absorbed purines (PA), microbial nitrogen (207,6 vs 185,2 g/d) and better balance of nitrogen compounds (31,5 vs 15,5) in relation to other sugarcane treatments. The lower DM and EE intake when supplied sugarcane without whole cottonseed resulted on high protozoa counts (129.4 vs 34.0 × 10³/mL), higher urine nitrogen excretion and lower microbial protein synthesis compared to other treatments, which indicates lack of energy and protein degradation synchronism, on forage:concentrate ratio proposed by this experiment.

O experimento foi conduzido com os objetivos de estimar a produção e a eficiência de síntese de proteína microbiana utilizando-se a excreção total de derivados de purinas (DP) e avaliar as concentrações de uréia na urina, de uréia e N-uréia no plasma e no leite de vacas holandesas em lactação alimentadas com dietas formuladas com diferentes níveis (0; 12,0; 25,0; 38,0 e 51,0%) de palma forrageira (Opuntia ficus indica Mill) em substituição total ao milho (Zea mays L.) e parcial ao feno de capim-tifton (Cynodon spp). Foram utilizadas cinco vacas holandesas distribuídas em um quadrado latino 5 x 5. Cada período experimental teve duração de 17 dias, dez para adaptação dos animais à dieta e sete para coleta de dados. O volume urinário foi estimado em amostras spot de urina obtidas 4 horas após a alimentação. O volume urinário (27,62 L), a excreção urinária de ácido úrico (35,78 mmol/dia), alantoína na urina (288,42 mmol/dia), alantoína no leite (18,11 mmol/dia) e alantoína total (306,54 mmol/dia), a excreção de derivados de purina total (342,33 mmol/dia) e de purinas absorvidas (350,03 mmol/dia), a síntese de proteína microbiana (1.376,07g/dia) e a eficiência da síntese de proteína microbiana (115,38 g/kgNDTconsumido) não foram afetados pela substituição do milho e do feno de tifton por palma na dieta. A excreção de uréia na urina (mg/kg PV) e as concentrações de uréia e N-uréia no plasma (mg/dL) decresceram de forma linear, enquanto a excreção e as concentrações de uréia e N-uréia no leite e de glicose plasmática não foram influenciadas pelos níveis de palma na dieta. O milho pode ser substituído integralmente e o feno, parcialmente, por palma forrageira em dietas para vacas holandesas em lactação, pois a substituição não afetou a produção de proteína microbiana ou as perdas do nitrogênio dietético pela excreção de uréia. The objective of this trial was to evaluate the effect of replacing Tifton hay and corn with forage cactus (Opuntia ficus indica Mill ) on microbial protein synthesis and efficiency and N metabolism in lactating Holstein cows. Diets contained (% of DM): 0, 12.0, 25.0, 38.0, or 51.0%) of forage cactus. Five Holstein cows were randomly assigned to treatments in a 5 x 5 Latin square design. Each experimental period lasted 17 days with 10 days for diet adaptation and seven days for data and sample collection. Urinary volume was estimated based on creatinine excretion in spot urine samples obtained four hours after feeding. Urinary volume (27.62 L), urinary excretion of uric acid (35.78 mmol/day) and allantoin (288.42 mmol/day), allantoin in milk (18.11 mmol/day), total allantoin (306.54 mmol/day), total excretion of purine derivatives (342.33 mmol/day), absorbed purines (350.03 mmol/day), microbial protein synthesis (1376.07g/day) and efficiency (115.38 g/kgNDT) were not affected by increasing the levels of forage cactus in the diet. The urinary excretion of urea (mg/kg BW) and the concentrations of urea and urea-N in plasma (mg/dL) decreased linearly while the concentrations of urea and urea-N in milk were not affected when the levels of forage cactus were increased in the diet. Corn can be completely replaced with forage cactus because microbial protein synthesis was not changed and urinary excretion of urea decreased linearly. However, Tifton hay was necessary in the diet to maintain microbial production.

Con la finalidad de estimar el flujo de proteína microbial hacia el duodeno (PMFD) en vacas lactantes a partir de la excreción urinaria de alantoína y establecer su relación con algunos parámetros del comportamiento productivo, se utilizaron ocho vacas (4 Holstein y 4 BON x Holstein) en diferente estado de lactancia (55 a 361 días en lactancia) que permanecieron bajo estabulación durante nueve días consumiendo pasto kikuyo (Pennisetum clandestinum), concentrado comercial y sal mineralizada. Durante los tres últimos días se registró la producción de leche (PL) y se tomaron muestras para analizar la concentración de proteína cruda (PCL) y nitrógeno ureico (NUL). En muestras del pasto y del concentrado se determinó la materia seca (MS), la proteína cruda (PC), las cenizas (Cen), el extracto etéreo (EE), la fibra en detergente neutro (FDN), el nitrógeno insoluble en detergente neutro (PCIDN) y los carbohidratos no estructurales (CNE) y se estimó la concentración de nutrientes digestibles totales (NDT). Se determinó el consumo de materia seca (CMS) (11.63 ± 1.8 kg/vaca/d), el nitrógeno ingerido total (NIT) (249.9 ± 57.7 gr/vaca/d), la proteína degradable en rumen (PDR) del pasto y del concentrado mediante la técnica in situ, y la relación CNE: PDR (1.1 ± 0.15 gr: gr). Los dos últimos días se recolectó la orina excretada por cada vaca (OR) donde se determinó la concentración de nitrógeno (NO) (23.08 ± 5.64 kg/vaca/d) y de alantoina (16.9 ± 15.1 g/d) a partir de la cual se estimó la PMFD (482.9 ± 509.7 g/vaca/d). Asimismo, con base en los NDT consumidos se estimó la PMFD (PMFDNRC) (769.80 ± 161.20 g/cow/d). Se establecieron relaciones mediante ecuaciones de regresión lineal entre el NO y la OR (p 0.7). Los datos sugieren que la excreción de alantoína en orina se puede usar para estimar la PMFD. With the purpose to estimate the microbial protein flow to the duodenum (MPFD) in lactating cows from the urinary excretion of allatoin and establish its relationship with some productive parameters, were used eight cows (4 Holstein and 4 BON x Holstein) in different lactation stage (55 to 361 days in lactation) they were kept under confinement conditions for 9 days eating kikuyu grass (Pennisetum clandestinum), commercial mixed food and mineralized salt. During the 3 last days was registered the milk production (MPD) and were collected samples to analyze the crude protein (CPM) and urea nitrogen (MUN) concentration. In samples of the grass and of the commercial mixed food were analyzed the dry matter (DM), crude protein (CP), ash, ether extract (EE), neutral detergent fiber (NDF), insoluble nitrogen in detergent fiber (INDF) and were estimated the non structural carbohydrates (NSC) and the total digestible nutrients (TDN). The dry matter intake (DMI) (11.63 ± 1.8 kg/cow/d) and total nitrogen intake (TNI) (249.9 ± 57.7 gr/cow/d) were determined. Besides, the rumen degradable protein (RDP), both, the grass and the commercial mixed food using the in situ technique, and the NSC: RDP relationship (1.1 ± 0.15 gr: gr) were determined. Urine excretion (UE) of each cow was collected during the last 2 days in which the nitrogen (UN) (23.08 ± 5.64 kg/cow/d) and allantoin concentration (16.9 ± 15.1 g/d) were determined and the MPFD (482.9 ± 509.7 g/cow/d) was estimate from this last. The other hand, using the TDN intake was estimate the MPFD (PMFDNRC) (769.80 ± 161.20 g/cow/d). Linear regression equations between UN and UE (p 0.7). The results suggested that the urine allantoin excretion can used to estimate the MPFD.

Com o objetivo de avaliar os efeitos dos níveis de uréia ou casca de algodão sobre a produção de proteína microbiana, estimada por meio dos derivados de purinas na urina, a concentração de uréia plasmática (NUP) e as excreções de uréia em novilhos, foram realizados dois experimentos. No primeiro, 24 novilhos mestiços castrados, com peso vivo médio inicial de 300 kg, foram alocados em delineamento inteiramente casualizado, nos quatro tratamentos: 0; 0,65; 1,30 e 1,95% de uréia na base da MS total, em substituição à proteína do farelo de soja. No segundo, 16 novilhos mestiços, com peso vivo médio inicial de 230 kg, foram distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, nos quatro tratamentos: 0, 10, 20 e 30% de casca de algodão na base da MS total, em substituição à silagem de capim-elefante. As amostras de urina foram obtidas por meio da coleta de urina spot, na qual foram determinados os derivados de purinas (alantoína e ácido úrico). No soro sanguíneo e na urina, foram analisadas as concentrações de uréia e creatinina. Não houve efeito dos níveis de uréia, tampouco dos de casca de algodão, sobre os derivados de purinas e sobre a eficiência de síntese microbiana. A concentração de NUP e a excreção de uréia não foram influenciadas pelos níveis de uréia das rações. A concentração de NUP decresceu linearmente com a inclusão da casca de algodão na dieta. Tanto a uréia quanto a casca de algodão podem ser utilizadas, até os níveis de 1,95% e 30%, respectivamente, na MS total da dieta de novilhos de origem leiteira, sem afetar a eficiência de síntese microbiana. Two trials were conducted to study the effects of different levels of urea or cottonseed hulls on yield of microbial protein, estimated by the urinary excretion of purine derivatives, concentration of plasma urea, and excretion of urea in steers. In the first trial, 24 crossbred castrated steers averaging 300 kg of initial live weight (LW) were uniformly assigned to four treatments in a complete randomized design as follows: 0, 0.65, 1.30, or 1.95% of urea (% of dry matter) that replaced soybean meal in the diet. In the second study, 16 crossbred steers averaging 230 kg of initial LW were uniformly assigned to four treatments in a complete randomized design as follows: 0, 10, 20, or 30% of cottonseed hulls (% of dry matter) that replaced elephant grass silage in the diet. Spot urine samples were obtained and the concentration of purine derivatives (allantoin plus uric acid) determined. Concentrations of creatinine and urea were analyzed in both blood plasma and urine. No significant differences in the urinary concentration of purine derivatives and in the estimation of microbial protein yield were observed by feeding different levels of urea or cottonseed hulls to steers. Similarly, no significant differences in the concentration of plasma urea and in the urinary excretion of urea were found by increasing the proportions of urea in the diet. However, concentration of plasma urea decreased linearly by replacing elephantgrass silage with cottonseed hulls in the second trial. It can be concluded that urea as well as cottonseed hulls can be included up to 1.95 and 30% of the diet dry matter, respectively, with no significant change in the efficiency of microbial protein synthesis.

Doze vacas Holandesas foram distribuídas em três quadrados latinos 4 x 4, balanceados de acordo com o período de lactação, com o objetivo de estimar a produção de proteína microbiana, utilizando-se a excreção total de derivados de purinas (DP) a partir de coletas spot de urina, as concentrações de nitrogênio (N)-uréia no plasma, no leite e na urina, o pH e a concentração de amônia ruminal. As quatro rações experimentais foram formuladas para conter na base da matéria seca 70% de silagem de milho e 30% de concentrado. Foram utilizados níveis crescentes de farelo de trigo no concentrado (0, 33, 67 e 100%) em substituição ao fubá de milho. As concentrações de uréia (38,8 mg/dL) e N-uréia (18,1 mg/dL) no leite não foram afetados pelos níveis de farelo de trigo, assim como as concentrações plasmáticas de uréia (51,1 mg/dL) e N-uréia (23,8 mg/dL). As excreções urinárias de uréia, N-uréia, alantoína, DP, purinas absorvidas, N-microbiano e concentração de alantoína no leite não foram alteradas. Entretanto, a excreção de ácido úrico apresentou comportamento quadrático, com valor máximo de 40,03 mmol/dia no nível de 36% de farelo de trigo. O pH e a concentração de amônia ruminal antes e após a alimentação também não foram afetados pelos níveis de farelo de trigo. O fubá de milho pode ser substituído integralmente pelo farelo de trigo no concentrado de vacas leiteiras, com produção de leite média de 20 kg/dia, alimentadas com dietas à base de silagem de milho, sem que ocorra alteração na produção de proteína microbiana e no pH e concentração de amônia ruminal. Twelve Holstein cows were allotted to four 4 x 4 Latin square balanced in accordance with the lactation period, with the objective of evaluating the protein production, using the total purine derivatives (PD) excretion, obtained from spot urine collection, the plasma and milk urea and nitrogen(N)-urea, pH and ruminal ammonia concentration. The four experimental diets were formulated to contain 70% of corn silage and 30% of concentrate. Increasing levels of wheat middlings in the concentrate (0, 33, 67 and 100%) in substitution to the corn meal. The milk urea (38.8 mg/dL) and N-urea (18.1 mg/dL) concentrations were not influenced by wheat middlings levels, such as plasma urea (51.1 mg/dL) e N-urea (23.8 mg/dL) concentration. The urinary urea, N-urea, allantoin, PD, absorbed purine, N-microbial urinary excretion and milk allantoin concentration were not altered. However, uric acid excretion presented a quadratic response, with maximum value of 40.03 mmol/day in the wheat middlings level of 36%. The pH and ruminal ammonia concentration before and after feeding were also not influenced by wheat middlings levels. The corn meal can be substituted integrally by the wheat middlings in the concentrate of dairy cows, with 20 kg/day average milk production, fed corn silage based diets, with no alteration on microbial protein production and ruminal pH and ammonia concentration.

Doze vacas da raça Holandesa, puras e mestiças, foram distribuídas em três quadrados latinos 4 x 4, com o objetivo de avaliar o balanço de nitrogênio (N), a produção de proteína microbiana, a concentração de uréia no plasma e no leite e diferentes tempos de coleta de urina. As dietas foram constituídas à base de silagem de milho (SM) (AG 1051) com relação volumoso:concentrado (V:C) de 60:40, com base na matéria seca (MS), ou à base de cana-de-açúcar (CA) (RB 855536) com relação V:C de 60:40, com 0,35 ou 1% de uréia+sulfato de amônio (SA) ou V:C de 50:50 com 1% de uréia+SA. O balanço de N, para a dieta à base de SM, foi maior, 88 g N/dia, do que para as dietas com CA com 40% de concentrado, 67 ou 69 g N/dia. Entre as dietas contendo CA, não houve diferença no balanço de N. A excreção média diária total de derivados de purinas (DP), as purinas absorvidas (PA) e a estimativa de N microbiano, 221 g/dia, foram maiores para dieta à base de SM, quando comparada com as dietas à base de CA com 40% de concentrado, 180 ou 178 g N microbiano/dia. Entretanto, quando comparada à dieta contendo CA com 50% de concentrado, não houve diferença para as variáveis balanço de N, DP, PA e N microbiano. Não houve diferença na excreção média diária total de DP, PA e produção de N microbiano, entre as dietas contendo CA. Em relação aos tempos de coleta de urina de 24 ou 8 horas, ou seja, coleta total ou parcial, não houve diferença nas excreções médias diárias de creatinina (24 x 22 mg/kg de PV), uréia, alantoína (245 x 228 mmol/dia) e ácido úrico. A dieta contendo CA, corrigida com 1% de uréia+SA, com 50% de concentrado proporcionou produção de proteína microbiana semelhante à dieta à base de SM com relação V:C de 60:40, com base na MS. O N-uréia plasmático parece ser melhor indicador do metabolismo protéico em vacas leiteiras do que o N-uréia no leite. Twelve purebred and crossbred Holstein cows were allotted to three 4 x 4 Latin Squares to evaluate the nitrogen (N) balance, microbial protein production, plasma and milk urea concentration and different urine collections times. The experimental diets were based on corn silage (CS) (AG 1051) with forage:concentrate ratio (F:C) of 60:40, in dry matter (DM) basis, or in sugar cane basis (SC) (RB 855536) with F:C of 60:40 with .35 or 1% of urea+ammonium sulfate (AS) mixture or FC of 50:50 with 1% of urea+AS. Nitrogen balance (N) was higher for CS based diet, 88 g N/day, in relation to SC based diets with 40% concentrate, 67 or 69 g N/day. Among the SC diet based, difference on N balance was observed. Average total daily excretion of purine derivatives (DP), absorbed purine (AP) and estimated microbial N, 221 g/day, were higher for CS based diet, when compared to SC based diets with 40% concentrate, 180 ou 178 g microbial N/day. However, when compared to SC based diet with 50% concentrate, there was no difference for N balance, PD, AP and microbial N variables. There was no difference in the average total daily excretion of PD, AP and microbial N production among the diets containing SC. There was no difference on the daily mean urine excretion of creatinine (24 x 22 mg/ of kgLW), urea, allantoin (245 x 228 mmol/day) and uric acid relative to the urine collection of 24 or 8 hours, or else, total or partial urine collection. SC based diet, corrected for 1% of urea+AS, with 50% concentrate provided microbial protein production similar to that of CS based diet with F:C ratio of 60:40, in DM basis. N-urea plasma seems to be better indicator of the protein metabolism in dairy cows than N-urea in milk.

Doze vacas da raça Holandesa, puras e mestiças, foram distribuídas em três quadrados latinos 4 x 4, com o objetivo de avaliar o balanço de nitrogênio (N), a produção de proteína microbiana, a concentração de uréia no plasma e no leite e diferentes tempos de coleta de urina. As dietas foram constituídas à base de silagem de milho (SM) (AG 1051) com relação volumoso:concentrado (V:C) de 60:40, com base na matéria seca (MS), ou à base de cana-de-açúcar (CA) (RB 855536) com relação V:C de 60:40, com 0,35 ou 1% de uréia+sulfato de amônio (SA) ou V:C de 50:50 com 1% de uréia+SA. O balanço de N, para a dieta à base de SM, foi maior, 88 g N/dia, do que para as dietas com CA com 40% de concentrado, 67 ou 69 g N/dia. Entre as dietas contendo CA, não houve diferença no balanço de N. A excreção média diária total de derivados de purinas (DP), as purinas absorvidas (PA) e a estimativa de N microbiano, 221 g/dia, foram maiores para dieta à base de SM, quando comparada com as dietas à base de CA com 40% de concentrado, 180 ou 178 g N microbiano/dia. Entretanto, quando comparada à dieta contendo CA com 50% de concentrado, não houve diferença para as variáveis balanço de N, DP, PA e N microbiano. Não houve diferença na excreção média diária total de DP, PA e produção de N microbiano, entre as dietas contendo CA. Em relação aos tempos de coleta de urina de 24 ou 8 horas, ou seja, coleta total ou parcial, não houve diferença nas excreções médias diárias de creatinina (24 x 22 mg/kg de PV), uréia, alantoína (245 x 228 mmol/dia) e ácido úrico. A dieta contendo CA, corrigida com 1% de uréia+SA, com 50% de concentrado proporcionou produção de proteína microbiana semelhante à dieta à base de SM com relação V:C de 60:40, com base na MS. O N-uréia plasmático parece ser melhor indicador do metabolismo protéico em vacas leiteiras do que o N-uréia no leite. Twelve purebred and crossbred Holstein cows were allotted to three 4 x 4 Latin Squares to evaluate the nitrogen (N) balance, microbial protein production, plasma and milk urea concentration and different urine collections times. The experimental diets were based on corn silage (CS) (AG 1051) with forage:concentrate ratio (F:C) of 60:40, in dry matter (DM) basis, or in sugar cane basis (SC) (RB 855536) with F:C of 60:40 with .35 or 1% of urea+ammonium sulfate (AS) mixture or FC of 50:50 with 1% of urea+AS. Nitrogen balance (N) was higher for CS based diet, 88 g N/day, in relation to SC based diets with 40% concentrate, 67 or 69 g N/day. Among the SC diet based, difference on N balance was observed. Average total daily excretion of purine derivatives (DP), absorbed purine (AP) and estimated microbial N, 221 g/day, were higher for CS based diet, when compared to SC based diets with 40% concentrate, 180 ou 178 g microbial N/day. However, when compared to SC based diet with 50% concentrate, there was no difference for N balance, PD, AP and microbial N variables. There was no difference in the average total daily excretion of PD, AP and microbial N production among the diets containing SC. There was no difference on the daily mean urine excretion of creatinine (24 x 22 mg/ of kgLW), urea, allantoin (245 x 228 mmol/day) and uric acid relative to the urine collection of 24 or 8 hours, or else, total or partial urine collection. SC based diet, corrected for 1% of urea+AS, with 50% concentrate provided microbial protein production similar to that of CS based diet with F:C ratio of 60:40, in DM basis. N-urea plasma seems to be better indicator of the protein metabolism in dairy cows than N-urea in milk.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O presente trabalho foi desenvolvido a partir de quatro experimentos. No primeiro foram utilizados quatro animais de grau de sangue predominantemente Holandês, fistulados no rúmen, com peso médio de 259 kg, objetivando-se avaliar o efeito dos níveis de casca de algodão na dieta de bovinos sobre os consumos e digestibilidades totais e parciais da matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), extrato etéreo (EE), proteína bruta (PB), fibra em detergente neutro corrigida para cinzas e proteína (FDNcp), carboidratos não-fibrosos (CNF), o consumo de nutrientes digestíveis totais (NDT), a produção de proteína microbiana, a concentração de nitrogênio uréico no soro (NUS) e de amônia no rúmen e a excreção de compostos nitrogenados na urina. O delineamento experimental utilizado foi o quadrado latino 4X4, sendo quatro animais, quatro períodos experimentais e quatro tratamentos (níveis crescentes de casca de algodão peletizada: 0, 10, 20 e 30%, em substituição na base da matéria seca à silagem de capim-elefante como volumoso), sendo a dieta total constituída de 60% de volumoso. Verificou-se que os níveis de casca de algodão aumentaram linearmente o consumo diário de todos os nutrientes, tanto em kg quanto em % do peso vivo. As análises de variância não evidenciaram influência dos diferentes tratamentos sobre o pH e concentrações de amônia ruminais, as digestibilidades totais e parciais dos nutrientes e conseqüentemente, não houve efeito sobre o teor NDT das dietas que foi em média 59,53%. O NDT calculado da casca de algodão foi de 55,52%. A concentração de NUS e a excreção de uréia (em mg/kgPV) na urina diminuíram enquanto a excreção urinária de derivados de purinas (DP) na urina aumentou linearmente com a inclusão de casca de algodão nas dietas. A casca de algodão mostrou-se um bom volumoso alternativo, podendo ser fornecida até o nível de 30% na MS total na dieta de novilhos de origem leiteira. No segundo Experimento, objetivou-se avaliar o efeito do nível de produção de leite sobre os consumos e as digestibilidades da MS, MO, EE, PB, FDNcp e CNF, o consumo de NDT e de proteína degradável no rúmen (PDR), a produção de proteína microbiana, a concentração de amônia no rúmen e a excreção de compostos nitrogenados na urina. Avaliaram-se as concentrações de N uréico no soro (NUS) e no leite (NUL), de animais de diferentes produções de leite. Foram comparadas as metodologias de coleta de urina spot e total para a quantificação do fluxo de N microbiano. Foram utilizadas 15 vacas da raça Holandesa, puras e mestiças, alocadas em delineamento inteiramente casualizado, com três tratamentos em função do nível de produção de leite (produção de leite média de 5,88, 18,54 e 32,6 kg/dia para os tratamentos ALTA, MÉDIA e BAIXA). A dieta foi constituída de silagem de milho à vontade e um kg de concentrado para cada três kg da média de leite produzido. Os consumos de todos os nutrientes, exceto de FDNcp, foram influenciados pela produção de leite. As digestibilidades da MS e da MO e o teor de NDT não diferiram entre os tratamentos, enquanto as digestibilidades da PB e da FDNcp, foram influenciadas pelo nível de produção sendo maior e menor, respectivamente, no tratamento ALTA. A presença de cinzas e proteína na FDN subestimou a digestibilidade da FDN e superestimou a dos CNF. Os teores de NUS e NUL e a excreção de compostos nitrogenados na urina foram altamente correlacionados e superiores nos animais mais produtivos, indicando que a concentração ótima varia com o nível de produção de leite. A produção microbiana não diferiu entre as metodologias de coleta de urina spot e total, sendo inferior nos animais menos produtivos. No terceiro, 22 novilhas com diferentes pesos, foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos (peso médio de 523, 453, 315, 235 e 118 kg para os tratamentos I, II, III, IV e V, respectivamente). A alimentação foi constituída de silagem de milho a vontade e 1,5 kg de concentrado por dia para as novilhas dos tratamentos I, II, III e IV, e dois kg de concentrado para as novilhas do tratamento V. Os objetivos foram similares aos do segundo Experimento. Quando expresso em relação ao peso das novilhas, o consumo de MS foi negativamente correlacionado com o peso dos animais. As digestibilidades da MS e da MO e o teor de NDT não diferiram entre os tratamentos, enquanto as digestibilidades da PB e da FDNcp, foram distintas entre os tratamentos, sendo maior e menor, respectivamente, no tratamento V. A presença de cinzas e proteína na FDN subestimou a digestibilidade da FDN e superestimou a dos CNF. Os teores de NUS e a excreção de N e de uréia na urina (em mg/kgPV) foram altamente correlacionados e superiores nas novilhas menores, e variaram com o peso vivo e com o teor de PB e PDR na dieta. A produção microbiana não diferiu entre as metodologias de coleta de urina spot e total, sendo inferior nas novilhas menores. No quarto Experimento, foram utilizadas 15 vacas lactantes com produção de leite média de 24 kg/dia, em blocos ao acaso, objetivando-se avaliar quatro tempos de duração da coleta total de urina (seis, 12, 18 e 24 horas) sobre a estimativa da excreção diária de creatinina. Não foram encontradas diferenças entre a estimativa da excreção de creatinina, obtida pelos tempos de coleta de seis, 12 e 18 horas e a observada em 24 horas, logo a excreção nos períodos diurno e noturno foi similar. A excreção de creatinina pelas vacas do Experimento IV foi, em média, de 24,07 mg/kgPV. Também foram avaliadas as excreções de creatinina nos demais experimentos. Os níveis de casca de algodão não influenciaram a excreção de creatinina nos novilhos do primeiro Experimento, que foi em média de 27,99 mg/kgPV. A excreção de creatinina pelas vacas do segundo Experimento não foi influenciada pela produção de leite, apresentando valor médio de 24,04 mg/kgPV. No terceiro Experimento a excreção de creatinina (EC, em mg/KgPV) aumentou linearmente com a diminuição no peso das novilhas, de acordo com a seguinte equação: EC(mg/kgPV) =32,27 - 0,01093*PV(kg). This work was developed based on four experiments. In the first it was utilized four predominantly Holstein steers, fitted with rumen cannulae, with average weight of 259 kg, aiming to evaluate the effect of cottonseed hulls levels in the diet on intakes and total and partial digestibilities of the dry matter (DM), organic matter (OM), ether extract (EE), crude protein (CP), neutral detergent fiber corrected to ashes and protein (NDFap) and non-fiber carbohydrates (NFC), on the intake of total digestible nutrients (TDN), on the microbial protein synthesis, on the serum urea nitrogen (SUN) and ruminal ammonia concentration and on the urinary nitrogenous compounds excretion. The design was in 4x4 square lattice, with four animals, four periods and four treatments (increasing levels of peletized cottonseed hulls: 0, 10, 20 and 30% in dry matter basis in substitution of elephantgrass silage as roughage), being the total diet constituted of 60% roughage. It was verified that the cottonseed hulls levels increased linearly the daily intake of all nutrients, in kg and in % of the live weight. The variance analyses didn't evidence influence of the treatments on ruminal pH and ruminal ammonia xiiiconcentrations, on total and partials nutrients digestibilities and consequently there wasn’t effect on TDN of the diets, which was, in average, 59.53%. The calculated TDN of cottonseed hulls was 55.52%. The SUN concentration and urinary urea excretion (in mg/kgLW) decreased while the urinary purine derivatives (PD) excretion increased linearly with the cottonseed hulls inclusion on the diets. The cottonseed hulls was a good alternative roughage, could be supplied until 30% (DM) of the dairy steer’s diet. In the second experiment, it was aimed to evaluate the effect of the milk production level on intakes and digestibilities of the DM, OM, EE, CP, NDFap, NFC, on the TDN and ruminally degraded protein (RDP) intakes, on the microbial protein synthesis, on the ruminal ammonia concentration and on the urinary nitrogenous compounds excretion. It was evaluated the SUN concentration and milk urea nitrogen (MUN) concentrations in cows with different milk production. The spot urine sampling and urine total collection methodologies were compared to quantify de microbial N flow. 15 Holstein cows, pure and crossbred, were allocated in a completely randomized design, with three treatments in function of the milk production level (average milk production of 5.88, 18.54 and 32.6 kg/day to treatments HIGH, MEDIUM and LOW). The diet was constituted of corn silage ad libitum and one kg of concentrate to each three kg of average milk produced. The intakes of all nutrients, except NDFap, were influenced by milk production. The DM and OM digestibilities and TDN content didn’t differ among the treatments, while the CP and NDFap digestibilities were influenced by the production level being larger and smaller in the treatment HIGH, respectively. The presence of ashes and protein in NDF underestimated the digestibilities of NDF and overestimated the digestibilities of NFC. The MUN and SUN concentrations and the urinary N excretion were highly correlated and superiors in the most productive animals, indicating that the optimum concentration varies with the milk production level. The microbial synthesis didn’t differ among the urinary sampling spot and total collection methodologies, and was smaller in the less productive cows. In the third, 22 heifers with different live weight, were allocated in a completely randomized design with five treatments (average 523, 453, 315, 235 and 118 kg to treatments I, II, III, IV and V, respectively). The diet was constituted of corn silage ad libitum and 1.5 kg/day of xivconcentrate to heifers of the treatments I, II, III and IV, and two kg/day of concentrate to heifers of the treatment V. The objectives were similar to those of the second Experiment. When expressed in relation to live weight, the DM intake was negatively correlated with the heifer’s live weight. The DM and OM digestibilities and the TDN content didn’t differ among the treatments, while the CP and NDFap digestibilities were different among the treatments, being higher and smaller in treatment V, respectively. The presence of ashes and protein in NDF underestimated the digestibilities of NDF and overestimated the digestibilities of NFC. The SUN concentration and urinary N excretion (in mg/kgLW) were highly correlated and superiors in the smaller heifers, and varied with the live weigh and with the CP and RDP content of the diet. The microbial synthesis didn’t differ among the urinary spot sampling and total collection methodologies, and was smaller in the smaller heifers. In the forth Experiment, 15 lactating cows with average milk production of 15 kg/day were distributed in randomized blocks design, aiming to evaluate four different total urine collection times (6, 12, 18 and 24 hours) on the daily creatinine excretion. There were not detected differences among the estimation of creatinine excretion, obtained by the times of collection of six, 12 and 18 hours and the observed in 24 hours, soon the excretion in the periods of the day and night was similar. The creatinine excretion by the cows of the Experiment IV was, on average, of 24.07 mg/kgLW. They were also evaluated the creatinine excretion in the others experiments. The cottonseed hulls levels didn't influence the creatinine excretion in the steers of the first Experiment, which was, on average, of 27.99 mg/kgLW. The creatinine excretion by the cows of the second Experiment was not influenced by the milk production, and was, in average, of 24.04 mg/kgLW. In the third Experiment the creatinine excretion (CE, in mg/KgLW) increased linearly with the decrease in the live weight of the heifers, in agreement with the following equation: CE(mg/kgLW) =32.27 – 0.01093*LW (kg).

bSumarios (En, Es)Se realizó un experimento con vacas Holstein con el fin de medir la excreción de alantoína en la leche. Se utilizaron tres hembras en la fase final de la lactancia, pertenecientes al hato de ordeño del C.I. Tibaitatá, que se alimentaron bajo confinamiento con pasto Kikuyo cortado diariamente de praderas pastoreadas por el hato completo. El experimento tuvo una duración de 14 días: siete de acostumbramiento y siete de muestreo, durante los cuales las vacas se alimentaron dos veces por día. Se medía el forraje ofrecido y el rechazado al día siguiente, así mismo, se tomaron 200 ml de leche de cada hembra, en los dos ordeños, durante los siete días de muestreo. Se midió el valor diario de alantoína en suero de leche, valor que se utilizó para calcular la cantidad digerida de nitrógeno microbial y para relacionarla con la materia orgánica digerida (MOD). Estos resultados se compararon con los generados en simulación por el programa CNCPS. Con el método colorimétrico los resultados fueron variables y poco satisfactorios. Con HPLC, la concentración de alantoína en suero de leche varió entre 2.74 mMol y 7.99 mMol·L-1. Los valores calculados de flujo de N microbial al intestino fueron de 260.4 ± 32 g día-1, equivalentes a 1.628 g de proteína microbial digerida. El consumo de forraje fue de 12.1 kg de MS vaca/día-1 (2.35 del peso vivo). La eficiencia de la síntesis de proteína microbial estimada fue de 55.3 g·kg-1 de MOD. La cuantificación cromatográfica de alantoína se acercó a los valores reportados por la literatura y a las estimaciones de NM obtenidas por simulación con CNCPS (18 de desviación). Cuando se incluyó el consumo de MS, la estimación de NM se acercó al valor de simulación (13 de desviación), considerándose que la cuantificación de alantoína por HPLC es un método aceptable Ganado de leche-Ganadería leche

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:49:09Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2013-08-22T18:49:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-01-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-01-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T14:21:21Z No. of bitstreams: 0 Made available in DSpace on 2014-05-20T14:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-01-01 Isolou-se do extrato etanólico de galhos de Aristolochia chamissonis espatulenol, sitosterol, sitosterol-beta-D-glicosídeo, colavelool, 13-epi-2-oxo-colavelool, trans-N-p-coumaroiltiramina, alantoína, ácido aristolóquico I e aristolactama AII. As estruturas da aristolactama AII e da piperolactama A são revisadas com base em análises espectrométricas e derivatizações químicas. From the ethanol extract of the stems of Aristolochia chamissonis, spathulenol, sitosterol, beta-sitosteryl-D-glucoside, kolavelool, 13-epi-2-oxo-kolavelool, trans-N-p-coumaroyltyramine, allantoin, aristolochic acid I, and aristolactam AII were isolated. The structures of aristolactam AII and piperolactam A have been revised by means of spectroscopic methods and chemical derivatizations. UNESP Instituto de Química Departamento de Química Orgânica UNESP Instituto de Química Departamento de Química Orgânica

O objetivo deste trabalho foi avaliar o conteúdo em nitrogênio protéico, não-protéico e ureídeos (alantoína e ácido alantóico) em raízes e folhas de plantas de confrei,(Symphytum officínale L.). Os resultados mostraram que, nas folhas, 12% do nitrogênio era não-protéico, 28% do qual era de ureídeos. Nas raízes, 54% de nitrogênio total era não-protéico, 71% do qual proveniente de ureídeos. Alantoína representou 92% e 79% dos ureídeos de raízes e folhas respectivamente.The objective of this study was to verify the contents of protein and non-protein nitrogen and ureides (allantoin and allantoic acid) in leaves and roots of comfrey plants (Symphytum officinale L.). The results showed that 12% of the nitrogen was non-protein nitrogen and 28% of which was from ureides. Non-protein nitrogen amounted to 54% of the total nitrogen of the roots, and 71% of which was from ureides. Allantoin contents per leaves and roots were 79% and 92% of the total ureides, respectively.

São apresentadas características físicas e químicas e a determinação do teor de alantoina nos extratos fluidos de Cordía ecalyculata Vell, planta medicinal popularmente conheaida como "chá de bugre" e "porangaba". A alantoina foi encontrada em teores variando de 0,36 a 0,73% nos extratos fluidos, preparados com drogas de procedências diferentes. Verificou-se também a presença de ácido alantóico, produto de decomposição da alantoina, nos extratos fluidos, que ao mesmo tempo tiveram o valor do pH alterado. Physical and chemical characteristics and allantoin content of Cordia ecalyculata Vell fluid extract are presented. Allantoin content varied from 0,36% to 0,73% in these fluid extracts, depending on the source of plant material. Allantoic acid, a by-product of allantoin, was also detected on TLC, mainly in ph-altered fluid extracts.

Cordia Ecalyculata Vell é planta da família Boraginaceae, de porte arbóreo, que vem sendo muito utilizada popularmente como diurético, emagrecedor e cicatrizante. Neste trabalho é apresentado método espectrofotométrico para quantificação de um de seus componentes principais, a alantoina. Este componente foi encontrado em teores variando de 0,36 a 1,77% nos extratos fluidos e drogas de diferentes procedências e épocas de colheita. Made available in DSpace on 2016-10-03T22:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1988AP001SaitoDeterminacao3034.PDF: 3726355 bytes, checksum: 7c0faae4a935296e76085050402ece9d (MD5) Previous issue date: 1996-02-29

Cordia ecalyculata Vell., planta medicinal conhecida vulgarmente pelos nomes de chá de bugre e porangaba, foi estudada do ponto de vista de sua composição química. Foram isolados de seu extrato hexanico o tritriacontano e um hidroxi-ester alifatico; do extrato etanólico, a alantoina e cloreto de potássio. Made available in DSpace on 2016-10-07T22:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1985AP004SaitoAlantoina3036.pdf: 125518 bytes, checksum: fe597c6c839ed43d4d09052bd5bd48a8 (MD5) Previous issue date: 1996-02-29

O objetivo deste trabalho foi avaliar o conteúdo em nitrogênio protéico, não-protéico e ureídeos (alantoína e ácido alantóico) em raízes e folhas de plantas de confrei,(Symphytum officínale L.). Os resultados mostraram que, nas folhas, 12% do nitrogênio era não-protéico, 28% do qual era de ureídeos. Nas raízes, 54% de nitrogênio total era não-protéico, 71% do qual proveniente de ureídeos. Alantoína representou 92% e 79% dos ureídeos de raízes e folhas respectivamente.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o conteúdo em nitrogênio protéico, não-protéico e ureídeos (alantoína e ácido alantóico) em raízes e folhas de plantas de confrei,(Symphytum officínale L.). Os resultados mostraram que, nas folhas, 12% do nitrogênio era não-protéico, 28% do qual era de ureídeos. Nas raízes, 54% de nitrogênio total era não-protéico, 71% do qual proveniente de ureídeos. Alantoína representou 92% e 79% dos ureídeos de raízes e folhas respectivamente. The objective of this study was to verify the contents of protein and non-protein nitrogen and ureides (allantoin and allantoic acid) in leaves and roots of comfrey plants (Symphytum officinale L.). The results showed that 12% of the nitrogen was non-protein nitrogen and 28% of which was from ureides. Non-protein nitrogen amounted to 54% of the total nitrogen of the roots, and 71% of which was from ureides. Allantoin contents per leaves and roots were 79% and 92% of the total ureides, respectively.