Search

Tesis para obtener el grado de Doctor en Ciencias Agrarias, de la Universidad Nacional de Mar del Plata, en noviembre de 2022 La bacteria Campylobacter fetus, es uno de los principales agentes etiológicos que provocan pérdidas reproductivas en bovinos en Argentina. Hay dos subespecies de C. fetus relevantes para la salud del bovino: C. fetus subsp. fetus (Cff) que habita el tracto gastrointestinal y causa abortos ocasionales tras bacteriemia materna, y C. fetus subsp. venerealis (Cfv) (incluye el biovar intermedius; Cfvi), que es huésped exclusivo del tracto genital y causante de la campilobacteriosis genital bovina (CGB), una enfermedad de transmisión sexual que causa bajos porcentajes de preñez. Se estudió la infección de las 3 subespecies de C. fetus (Cff, Cfv y Cfvi) y el comportamiento de técnicas diagnósticas convencionales y moleculares en un modelo experimental bovino. En el mismo se infectaron experimentalmente vaquillonas con la subespecie de C. fetus respectiva, y se realizó servicio natural con toros sanos. Se recolectaron muestras de mucus cérvico vaginal (MCV) de las vaquillonas y esmegma prepucial (EP) de toros durante un período de 9 meses, y se procesaron por cultivo bacteriológico, IFD y qPCR (dos métodos de extracción de ADN; In-house y kit comercial), con el objetivo de evaluar el método de diagnóstico adecuado y clarificar la patogénesis de las subespecies. El 87% de las vaquillonas resultó infectada tras inoculación experimental, y al menos una por cada subespecie se mantuvo infectada durante todo el ensayo (285 días). En MCV el cultivo bacteriológico fue la técnica más adecuada (43%). Su consistencia viscosa fue una limitación para la qPCR, donde la recuperación de C. fetus con el método de extracción de ADN con kit comercial fue baja (29%), mientras el método de lisis In-house de lisis resultó inadecuada (8%). Todos los toros se infectaron tras servicio natural con respectiva subespecie. La qPCR con extracción de ADN In-house (75%) resultó una alternativa prometedora en EP, comparado con la IFD (63%) actualmente utilizada de rutina. En casos naturales de 7 establecimientos, la detección de C. fetus de MCV (n=53) resultó baja siendo el cultivo la técnica más adecuada (13%) seguida de qPCR (7,5%) e IFD (5,6%). Esto se asocia a la capacidad autolimitante de la bacteria y el tiempo de muestreo. De estos establecimientos se analizaron seis fetos abortados, todos identificados como Cff. La diferenciación de subespecie por métodos moleculares y pruebas bioquímicas fueron inconsistentes siendo de escaso valor, por lo que es necesario avanzar en estudios que permitan diferenciar las mismas de forma correcta, y que confirmen la relevancia clínico-epidemiológica de cada subespecie en bovinos. Por primera vez se reporta el aislamiento de Cfv desde vesículas seminales de un toro naturalmente infectado. Este hallazgo pone de manifiesto otro probable nicho que permita la persistencia de la bacteria y posible contaminación del semen. Se realizaron otros dos ensayos experimentales con Cff para estudiar su patogénesis, tras la alta persistencia observada en el modelo experimental, comprobándose la transmisión venérea entre vaquillonas y toros. El uso de qPCR en muestras clínicas resultan prometedoras en EP. Más estudios sobre los métodos de extracción de ADN y diagnóstico molecular son necesarios en muestras de MCV para mejorar su eficiencia. La capacidad venérea, la colonización y la persistencia de Cff en el tracto reproductor de vaquillonas y toros, y alta presencia en fetos bovinos abortados evidencia un alto riesgo en la salud reproductiva de los bovinos, sugiriendo sea incluida en la CGB junto al Cfv. The bacterium Campylobacter fetus is one of the main etiological agents that cause reproductive losses in cattle in Argentina. There are two subspecies of C. fetus relevant to bovine health: C. fetus subsp. fetus (Cff) which inhabits the gastrointestinal tract and causes occasional abortions after maternal bacteremia, and C. fetus subsp. venerealis (Cfv) (includes the biovar intermedius; Cfvi), which is an exclusive host of the genital tract and causes bovine genital campylobacteriosis (BGC), a sexually transmitted disease that causes low pregnancy rates. The infection of the 3 subspecies of C. fetus (Cff, Cfv and Cfvi) and the use of conventional and molecular diagnostic techniques in a bovine experimental model were studied. In it, heifers were experimentally infected with the respective subspecies of C. fetus, and natural mating was carried out with healthy bulls. Samples of cervical vaginal mucus (CVM) from heifers and preputial smegma (PS) from bulls were collected over a 9-month period, and processed by bacteriological culture, DIF and qPCR (two DNA extraction methods; In-house and commercial kit), with the aim of evaluating the appropriate diagnostic method and clarifying the pathogenesis of the subspecies. An 87% of the heifers were infected after experimental inoculation, and at least one for each subspecies remained infected throughout the trial (285 days). In CVM, bacteriological culture was the most appropriate technique (43%). Its viscous consistency was a limitation for qPCR, where the recovery of C. fetus with the DNA extraction method with a commercial kit was low (29%), while the In-house lysis method of lysis was inadequate (8%). All bulls were infected after natural mating with their respective subspecies. The qPCR with in-house DNA extraction (75%) was a promising alternative for detection of C. fetus in PS, compared to DIF (63%) currently used routinely. Diagnostic techniques were evaluated in natural cases from 7 cattle farms, where CVM (n=53) and aborted fetuses (n=6) were analyzed. The detection of C. fetus from CVM was low, with culture being the most appropriate technique (13%) followed by qPCR (7.5%) and DIF (5.6%). This is associated with the self-limiting capacity of the bacteria and the sampling time. All fetuses analyzed were identified as Cff. The differentiation of subspecies by molecular methods and biochemical tests were inconsistent and of low value, so it is necessary to advance in studies that allow them to be correctly differentiated, and that confirm the clinical-epidemiological relevance of each subspecies in cattle. For the first time, the isolation of Cfv from the seminal vesicles of a naturally infected bull is reported. This finding highlights another possible niche that allows the persistence of the bacteria and possible contamination of the semen. Two other experimental tests with Cff were carried out to study its pathogenesis, after the high persistence observed in the experimental model, verifying the venereal transmission between heifers and bulls. The use of qPCR in clinical samples is promising in PS samples. More studies on DNA extraction and molecular diagnostic methods are needed on CVM samples to improve their efficiency. The venereal transmissión, and colonization and persistence of Cff in the reproductive tract of heifers and bulls, with the high presence in aborted bovine fetuses show a high risk to bovine reproductive health, suggesting that it be included in the BGC along with Cfv. EEA Balcarce Fil: García, Juan Agustín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fil: García, Juan Agustín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina.

RESUMEN Las enfermedades de transmisión sexual en los animales domésticos adquieren importancia ya que no representan solamente una pérdida o disminución de algunos parámetros reproductivos y productivos, o alteraciones en los eventos reproductivos fisiológicos, sino que además significan una pérdida de la genética de los individuos afectados, del status sanitario del establecimiento y por supuesto las pérdidas económicas que todas estas situaciones acarrean [1]. Las pérdidas reproductivas por causas infecciosas en bovinos a nivel nacional permiten aún identificar a los agentes casuales de enfermedades de transmisión sexual. Si a ellas les sumamos otros agentes infecciosos como las enfermedades virales, bacterianas y a protozoarios, hace que debamos implementar medidas de prevención para atenuar sus efectos [2]. Algunos ejemplos de estas enfermedades son la tricomoniasis y campilobacteriosis bovina que causan muerte del embrión, abortos y reducción de la fertilidad en la hembra siendo el toro asintomático y portador crónico de la infección [2]. Las enfermedades venéreas en animales de zootecnia tienen una elevada prevalencia, especialmente en las áreas ganaderas extensivas [2]. Los ganaderos pueden hacer pruebas en laboratorio para descartar o confirmar la presencia de enfermedades venéreas, sobre todo con los animales que se usarán en el proceso de reproducción [2]. Para evitar estas enfermedades se toman medidas de prevención como lograr que los sementales tengan los dos controles prepuciales pre-servicio negativos a ETS sucesivos con suficiente antelación, emplear en el servicio toros jóvenes, controlados y negativos a estas enfermedades venéreas, vacunar contra las enfermedades venéreas y repetirlas anualmente en los rodeos en riesgo o con enfermedad endémica, revisar y muestrear sistemáticamente todo toro que ingrese al establecimiento y no rotar los toros en diferentes lotes durante el servicio [2]. Se considera prioritaria la mejora en las técnicas diagnósticas, el desarrollo de vacunas eficientes y estrategias de control. El trabajo mancomunado de los sectores privados y públicos puede acortar esta brecha para el bien de todos [2]., {"references":["Yamin P, Quint C. Enfermedades de transmisión sexual en animales domésticos. [Internet]. Laboratorio de Biología Celular y Molecular. http://repositorio.umaza.edu.ar/bitstream/handle/00261/1758/Yamin%2C%20Quintero%20-%202020%20-%20ENFERMEDADES%20DE%20TRANSMISIO%CC%81N%20SEXUAL%20EN%20ANIMALES%20DOME%CC%81STICOS.pdf","Campero C. Las enfermedades de transmisión sexual en los bovinos: su persistencia en los sistemas de cría. [Internet]. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria Uruguay. https://www.produccion-animal.com.ar/sanidad_intoxicaciones_metabolicos/enfermedades_reproduccion/127-transmision_4.pdf"]}

The objective of this study was to genetically identify virulence and antimicrobial resistance in DNA from Campylobacter spp. from sheep in the state of Pernambuco, Brazil. The presence of virulence genes was investigated from the polymerase chain reaction. The genetic profile of antimicrobial resistance in samples of sheep origin was investigated by sequencing of the 23S rDNA region to identify A2074G and A2075G mutations and gyrA gene fragments to identify C257T and A256G mutations. Forty samples of Campylobacter spp. Of these, 11 were from Campylobacter jejuni, 12 from Campylobacter fetus subsp. fetus and 17 Campylobacter coli from sheep herds. In virulence analysis, 37 samples (92.50%) were positive for the cdtA gene, 30 (75.00%) for cdtB and 28 (70.00%) for cdtC. In the cadF gene research, 38 (95.00%) samples were positive. For the racR, dnaJ and ciaB genes, 32 (80.00%), 19 (47.50%) and 8 (20.00%) positivity were respectively. Only one sample presented the pldA gene and none presented wlaN and virB11. In genotypic analysis of antimicrobial resistance, all samples had the C257T mutation in the gyrA gene, but the A256G mutation was absent. Mutations in 23S rDNA, A2074G and A2075G were also not identified. From the results obtained, we can observe the presence of most virulence genes researched, with high resistance to fluoroquinolones. Thus, studied samples of Campylobacter spp. demonstrated the potential to cause infection and stay in the hosts. El objetivo de este estudio fue realizar la identificación genética de virulencia y resistencia antimicrobiana en ADN de Campylobacter spp. de ovejas en el estado de Pernambuco, Brasil. La presencia de genes de virulencia se investigó mediante la reacción en cadena de la polimerasa. El perfil genético de la resistencia antimicrobiana en muestras de origen ovino se investigó mediante la secuenciación de la región 23S rDNA para identificar las mutaciones A2074G y A2075G y los fragmentos del gen gyrA para identificar las mutaciones C257T y A256G. Se analizaron 40 muestras de ADN de Campylobacter spp, de las cuales 11 eran de Campylobacter jejuni, 12 de Campylobacter fetus subsp. fetus y 17 Campylobacter coli de rebaños de ovejas. En el análisis de virulencia, 37 muestras (92,50%) resultaron positivas para el gen cdtA, 30 (75,00%) para cdtB y 28 (70,00%) para cdtC. En la investigación del gen cadF, 38 (95,00%) muestras resultaron positivas. Para los genes racR, dnaJ y ciaB, 32 (80,00%), 19 (47,50%) y 8 (20,00%) fueron positivos, respectivamente. Solo una muestra tenía el gen pldA y ninguna tenía wlaN y virB11. En el análisis genotípico de resistencia antimicrobiana, todas las muestras tenían la mutación C257T en el gen gyrA, pero la mutación A256G estaba ausente. Tampoco se identificaron mutaciones en 23S rDNA, A2074G y A2075G. De los resultados obtenidos se observa la presencia de la mayoría de los genes de virulencia investigados, con una alta capacidad de resistencia a las fluoroquinolonas. Así, las muestras estudiadas de Campylobacter spp. demostró el potencial de causar infección y permanecer en los huéspedes. Objetivou-se com este estudo realizar a identificação genética da virulência e resistência antimicrobiana em DNA de isolados de Campylobacter spp. procedentes de ovinos do estado de Pernambuco, Brasil. A presença de genes de virulência foi investigada a partir da Reação em Cadeia da Polimerase. O perfil genético de resistência aos antimicrobianos nas amostras de origem ovina foi pesquisado por sequenciamento da região de 23S rDNA, para identificação das mutações A2074G e A2075G e de fragmentos do gene gyrA, para identificação das mutações C257T e A256G. Foram analisadas 40 amostras de DNA de Campylobacter spp, destas, 11 eram de Campylobacter jejuni, 12 Campylobacter fetus subsp. fetus e 17 Campylobacter coli procedentes de rebanhos ovinos. Na análise de virulência, 37 amostras (92,50%) foram positivas para o gene cdtA, 30 (75,00%) para cdtB e 28 (70,00%) para cdtC. Na pesquisa do gene cadF, 38 (95,00%) amostras foram positivas. Para os genes racR, dnaJ e ciaB houve positividade de 32 (80,00%), 19 (47,50%) e 8 (20,00%), respectivamente. Apenas uma amostra apresentou o gene pldA e nenhuma apresentou wlaN e virB11. Na análise genotípica de resistência antimicrobiana, todas as amostras apresentaram a mutação C257T no gene gyrA, mas a mutação A256G estava ausente. As mutações em 23S rDNA, A2074G e A2075G também não foram identificadas. A partir dos resultados obtidos, observa-se a presença da maior parte dos genes de virulência pesquisados, com alta capacidade de resistência às fluoroquinolonas. Assim, amostras estudadas de Campylobacter spp. demonstraram o potencial de causar infecção e se manter nos hospedeiros.

La tricomonosis bovina (TB) y campylobacteriosis genital bovina (CGB) son enfermedades de transmisión sexual (ETS) que causan muerte embrionaria temprana, infertilidad transitoria y abortos, impactando en el rendimiento reproductivo de los rodeos. El objetivo del presente estudio fue estimar la prevalencia general y por zonas fitogeográficas (Z1: Este pampeana, Z2: Monte central Z3: Monte occidental), así como los factores de riesgo asociados a ambas enfermedades en la provincia de La Pampa, Argentina. Se realizó un estudio transversal entre enero y diciembre del 2006 que abarcó a 4018 propietarios de rodeos con un stock de 684116 vacas y 33969 toros (54% y 51,5% del stock provincial, respectivamente). Se detectaron 622 (15,5%) rodeos con al menos 1 toro positivo a TB y/o CGB. Las prevalencias halladas fueron de 2,15% (Z1:1,62%; Z2:1,90%; Z3:4,61%) y 2,36% (Z1:2,08%; Z2: 2,28%; Z3: 3,51%) para TB y CGB, respectivamente. Los factores de riesgo asociados a la presencia de ETS fueron: traspaso de animales vecinos al establecimiento (Odds Ratio – OR = 1,8; Intervalo de Confianza-IC: 1,5-2,2) realización de servicio continuo (OR=1,3; IC: 1,1-1,6), productores que no realizan el tacto rectal (OR=1,2; IC: 1,0-1,5) y alta relación vaca/toro (χ2 =35,1, p=

Campylobacter fetus is an important animal pathogen that causes infectious infertility, embryonic mortality and abortions in cattle and sheep flocks. There are two recognized subspecies related with reproductive disorders in livestock: Campylobacter fetus subsp. fetus (Cff) and Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv). Rapid and reliable detection of this pathogenic species in bulls is of upmost importance for disease control in dairy and beef herds as they are asymptomatic carriers. The aim of the present work was to assess the performance a real-time PCR (qPCR) method for the diagnosis of Campylobacter fetus in samples from bulls, comparing it with culture and isolation methods. 520 preputial samples were both cultured in Skirrow's medium and analyzed by qPCR. The estimated sensitivity of qPCR was 90.9% (95% CI, 69.4%–100%), and the specificity was 99.4% (95% CI, 98.6% - 100%). The proportion of C. fetus positive individuals was 2.1% by isolation and 2.5% by qPCR. Isolates were identified by biochemical tests as Cfv (n = 9) and Cff (n = 2). Our findings support the use of qPCR for fast and accurate detection of C. fetus directly from field samples of preputial smegma of bulls. The qPCR method showed to be suitable for massive screenings because it can be performed in pooled samples without losing accuracy and sensitivity. EEA Balcarce Fil: Delpiazzo, Rafael. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Veterinaria. Estación Experimental "Dr. Mario A. Cassinoni"; Uruguay. Fil: Barcellos, Maila. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay. Fil: Barros, Sofía. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay. Fil: Bentacor, Laura. Universidad de la República. Facultad de Medicina; Uruguay. Fil: Fraga, Martín. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay. Fil: Gil, Jorge. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Veterinaria. Estación Experimental "Dr. Mario A. Cassinoni"; Uruguay. Fil: Iraola, Gregorio. Institut Pasteur de Montevideo. Laboratorio de Genómica Microbiana; Uruguay. Universidad Mayor. Facultad de Ciencias; Chile. Wellcome Genome Campus, Wellcome Sanger Institute; United Kingdom. Fil: Morsella, Claudia Graciela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Fil: Paolicchi, Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Fil: Pérez, Ruben. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay. Fil: Riet-Correa, Franklin. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay. Fil: Sanguinetti, Margarita. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay. Fil: Silva, Alfonso. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay. Fil: Silva Silveira, Caroline da. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria. Estación Experimental La Estanzuela; Uruguay. Fil: Caballeros, Lucía. Universidad de la República Oriental del Uruguay. Facultad de Ciencias; Uruguay.

Estudios realizados en Uruguay muestran que las principales causas de aborto en bovinos son de origen infeccioso. El diagnóstico etiológico de pérdidas reproductivas en bovinos es complejo, y la identificación y determinación de las prevalencias de los diferentes agentes involucrados puede ser realizada mediante el uso de diferentes técnicas de laboratorio aplicables sobre muestras del feto, de la madre que abortó, del toro y/o del rodeo. El objetivo de este trabajo fue estudiar a nivel poblacional la neosporosis, la leptospirosis, la campilobacteriosis, la tricomoniasis y la diarrea viral bovina mediante técnicas directas e indirectas utilizadas en el abordaje diagnóstico de enfermedades infecciosas abortivas. Para esto, fueron realizados los diagnósticos en muestras clínicas de bovinos recibidas entre los años 2016 y 2019 en la Plataforma de Investigación en Salud Animal para el diagnóstico de patógenos involucrados con pérdidas reproductivas. Además, se muestrearon, por conveniencia, los rodeos de 20 tambos para determinarar la prevalencia de dichas enfermedades y factores asociados en esta población de estudio. Para Neospora caninum se determinó una seroprevalencia de 36,1% de las vacas en ordeñe (406/1200) y 100% (20/20) de los predios positivos a N. caninum. Se demostró que la presencia de perros nacidos en los tambos está asociada a una mayor seroprevalencia a este parásito (p=0,001). Además del kit ELISA utilizado para determinar la prevalencia en este estudio, otros 2 kits ELISA comerciales fueron comparados entre ellos para una aproximación diagnóstica del aborto por N. caninum en bovinos lecheros en la región de este estudio. Resultando en una variación de débil a fuerte entre los kits (coeficiente Kappa de Cohen=0.58 a 0.83). Sin embargo, los 3 kits fueron eficaces en la asociación del aborto con la seropositividad a N. caninum. Para Leptospira spp. se observó que 19,4% de los animales fueron seroreactivos al menos a uno de los serovares evaluados. El serovar más prevalente fue Pomona con 24,7%, pero no hubo asociación estadística entre aborto y seropositividad para los serovares estudiados. La qPCR reveló que 0,35% (4/1138) de los sueros de las vaquillonas analizadas fueron positivos para vDVB y el subtipo identificado fue el BVDV-1a. Se identificaron BVDV-1a y BVDV-2b asociado a los casos clínicos de enfermedad de la mucosa, infecciones transitorias postnatales asociadas con salmonelosis entérica y septicémica, bronconeumonía por Histophilus somni, coinfecciones del tracto urinario con Escherichia coli y Streptococcus sp., coinfección entérica con coccidios, infecciones fetales transplacentarias y abortos con coinfección por N. caninum. Por PCR se detectó que en 2,25% (7/310) de los toros (leche: 6/121 y carne: 1/189) muestreados fueron positivos para Tritrichomona foetus. Campylobacter fetus venerealis no fue diagnosticado en ninguna de las muestras prepuciales analizadas. La determinación de las frecuencias de los agentes que causan abortos sugiere, en esta población de estudio, que neosporosis es la principal enfermedad involucrada en las pérdidas gestacionales en los rodeos lecheros. Además, el desarrollo y validación de un kit ELISA comercial anti-N. caninum se hace necesario para minimizar costos de diagnósticos una vez que la serología es una herramienta clave para el control de la enfermedad. La detección de T. foetus en toros revela que este protozoario sigue circulando en el país. Futuros estudios deberían estimar el impacto económico de BVDV en bovinos en Uruguay, debido a las evidencias de que el virus está asociado con enfermedad y muerte de bovinos en los rodeos uruguayos. Un avance importante registrado en este proyecto es el desarrollo de técnicas de diagnóstico que permitirán, no solo el diagnóstico, sino también la continuidad de los trabajos de investigación para estudiar la epidemiología, la importancia económica y los métodos de control para las diferentes enfermedades reproductivas en el ganado lechero y cárnico del Uruguay. Studies in Uruguay show that the main cause of abortion in cattle are of infectious origen. Considering the complexity of the etiological diagnosis of reproductive losses in cattle, the identification and determination of the prevalence of the different agents involved can be done using different laboratory techniques on samples of the fetus, the aborted dam, the bull and/or the herd. The objective of this work was to study neosporosis, trichomonosis, campylobacteriosis, leptospirosis, and bovine viral diarrhea by direct and indirect techniques used in the diagnostic approach of abortive infectious diseases. For this, different diagnostic tests were carried out from clinical samples of bovines that arrived between 2016 and 2019 in the PSA for the diagnosis of pathogens involved in reproductive losses. In addition, the herds of 20 dairy farms were sampled for convenience to determine the prevalence of these diseases and associated factors in this study population. A seroprevalence of 36.1% of the dairy cow (406/1200) and 100% (20/20) of the positive farms for N. caninum was determined. It was shown that the presence of dogs born in dairy farms is associated with a greater seroprevalence to this parasite (p = 0.001). In addition to the ELISA kit used to determine the prevalence in this study, another 2 commercial ELISA kits were compared to each other for a diagnostic approach to abortion by N. caninum in dairy cattle in the region of this study. It was determined a variation from weak to strong among the kits (Cohen's Kappa coefficient = 0.58 to 0.83), however, all 3 kits were effective in the association of abortion with seropositivity to N. caninum. For Leptospira spp. it was observed that 19.4% of the animals were seroreactive to at least one of the serovars evaluated. The most prevalent serovar was Pomona with 24.7%, but there was no statistical association between abortion and seropositivity for the serovars studied. The qPCR revealed that 0.35% (4/1138) of the sera of the heifers analyzed were positive for vDVB and the subtype identified was BVDV-1a. BVDV-1a and BVDV-2b were associated with clinical cases of mucosal disease, postnatal transient infections associated with enteric and septicemic salmonellosis, Histophilus somni bronchopneumonia, urinary tract coinfections with Escherichia coli and Streptococcus sp., enteric coinfection with coccidia, and transplacental fetal infections and abortions with coinfection by N. caninum. By PCR it was detected that in 2.25% (7/310) of the bulls (milk: 6/121 and beef: 1/189) sampled were positive for Tritrichomonas foetus. Campylobacter fetus venerealis was not diagnosed in any of the prepucial samples analyzed. The determination of the frequencies of the agents that cause abortions suggests, in this study population, that neosporosis is the main disease and may be involved in gestational losses in dairy herds. In addition, the development and validation of a commercial anti-N. caninum ELISA kit becomes necessary to minimize diagnostic costs once serology is a key tool for disease control. The detection of T. foetus in bulls reveals that this protozoan continues to circulate in the country. Future studies should estimate the economic impact of BVDV in cattle in Uruguay, due to the evidence that the virus is associated with bovine disease and death in Uruguayan herds. An important advance registered in this project is the development of diagnostic techniques that will allow, not only the diagnosis, but also the continuity of research works to study the epidemiology, economic importance and control methods for the different reproductive diseases in dairy and meat cattle in Uruguay.

El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de Campylobacter fetus y Tritrichomona foetus en muestras de esmegma prepucial de toros, y poder calcular la prevalencia estimada de estos agentes. También se realizó la comparación entre la rtPCR y el cultivo y aislamiento (gold standard), realizando las dos técnicas a partir de la misma muestra de esmegma prepucial, para poder estimar la sensibilidad y especificidad de la rtPCR. Se realizaron 12 muestreos en los cuales se obtuvieron 315 muestras de esmegma prepucial de toros de descarte enviados a planta de faena y de predios con sospecha de la enfermedad. Todas las muestras se procesaron y analizaron siguiendo el mismo protocolo. Se sembraron en medio de cultivo Skirrow y se realizó la rtPCR en el Laboratorio de Genética de Microorganismos de la Sección Genética Evolutiva de Facultad de Ciencias dentro de las 24 horas de obtenidas en todos los casos. También se sembró 1 ml de la misma muestra en medio de cultivo Diamond TYM para Tritrichomona foetus en el Laboratorio de la Plataforma de Salud Animal de INIA La Estanzuela, dentro de las 24 horas de obtenidas. La sensibilidad estimada de la rtPCR fue del 100% (entre 92,9% y 100%) y la especificidad del 99,4% (entre 98,3% y 100%), con un intervalo de confianza del 95%. Se obtuvieron 7 aislamientos de C. fetus; 6 se identificaron como C. fetus venerealis, y 1 como C. fetus fetus. La prevalencia por toro de C. fetus estimada fue de 2,2% por cultivo y aislamiento, y de 2,9% por rtPCR. La prevalencia por establecimiento de C. fetus estimada fue de 9,7% por cultivo y aislamiento, y de 12,9% por rtPCR, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas entre los resultados, con un intervalo de confianza del 95%. No se encontró presencia de Tritrichomona foetus en ninguno de los cultivos realizados. En conclusión, se estima que C. fetus sigue estando presente en nuestro país, en establecimientos de diferentes regiones. Además, la rtPCR utilizada es una técnica adecuada para la detección de C. fetus directamente a partir de muestras de esmegma prepucial como técnica de screening.

Termorolerantne vrste bakterijskog roda Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis) su najčešći uzročnici bolesti kampilobakterioze koja se prenosi hranom u razvijenim zemljama. Meso peradi, osobito svježe pileće meso, smatra se najznačajnijim izvorom infekcije za ljude. Križna kontaminacija je najznačajniji put prijenosa ovog uzročnika pa stoga prevencija predstavlja ključan način zaštite zdravlja ljudi. Širenje ove zoonoze se može spriječiti poštivanjem higijensko-sanitarnih mjera u uzgoju, transportu, klaoničkoj obradi, preradi proizvoda animalnog porijekla, plasmanu hrane na tržište i pripremi hrane u kućanstvima., Thermotolerant species of the bacterial genus Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis) are the most common cause of food- borne disease campylobacteriosis in developed countries. Poultry meat, especially fresh chicken meat, is considered the most important source of infection in humans. Cross-contamination is the most signicant route of transmission of pathogens and therefore, prevention presents the key of protecting human health. The spread of this zoonotic disease can be prevented by compliance with health and sanitary measures in the breeding, transport, slaughtering process, processing of products of animal origin, placing food on the market and the preparation of food in households., tipi di batteri termotolleranti appartenenti al genere Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis) sono le cause più frequenti della campylobatteriosi, una malattia che si trasmette mediante l’ingestione di cibo nei paesi sviluppati. La carne del pollame, in particolare la carne di pollo cruda, è considerata la principale fonte d’infezione per l’uomo. La contaminazione crociata è il modo più signiƒcativo di trasmissione di questo batterio; la prevenzione, quindi, rappresenta un momento cruciale nella tutela della salute umana. La propagazione di questa zoonosi può essere evitata attenendosi a speciƒche misure igienico – sanitarie nell’allevamento, nel trasporto, nel processo di macellazione, nella lavorazione di prodotti d’origine animale, nella distribuzione degli alimenti sul mercato e nella preparazione del cibo in ambiente domestico., Las cepas termotolerantes del género Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis) son los más comunes causantes de la enfermedade campilobacteriosis que se transmite mediante la comida en los países desarrollados. La carne de aves de coral, especialmente la carne fresca de pollo, se considera como la fuente más importante de la infección de los humanos. La contaminación cruzada es la manera más signiƒcante de la transmisión de este causante y por lo tanto la prevención es la clave de la protección de la salud de los humanos. La propagación de este zoonosis puede inhibirse con atenerse a las medidas de higiene y sanitarias durante la crianza, el transporte, durante el procesamiento en el matadero, durante el procesamiento del producto de origen animal, en la puesta de la comida en el mercado y durante la preparación de la comida en las viviendas., Thermotolerante Arten der Bakteriengattung Campylobacter (C. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis) sind die häugsten Verursacher der Krankheit Campylobakteriose, die in den entwickelten Ländern durch die Nahrung übertragen wird. Ge#ügel#eisch, insbesondere frisches Hühner#eisch, betrachtet man als die Hauptinfektionsquelle für den Menschen. Die Kreuzkontamination ist der wichtigste Übertragungsweg dieses Verursachers, weshalb die Vorbeugung den wichtigsten Schutz der menschlichen Gesundheit darstellt. Die Verbreitung dieser Zoonose kann durch Einhaltung der Hygiene- und Gesundheitsmaßnahmen bei der Aufzucht, dem Transport, der Bearbeitung in der Schlachterei, der Verarbeitung von Produkten tierischen Ursprungs, dem Absatz auf dem Markt und der Zubereitung der Nahrung in den Haushalten verhindert werden.

La campilobacteriosis es una enfermedad infecciosa producida por bacterias del géneroCampylobacter, que supone en la actualidad la zoonosis más importante a nivel mundial. Encontraste, en los animales, Campylobacter puede estar presente como comensal en el tractodigestivo sin causar enfermedad clínica.Se ha realizado un estudio microbiológico y epidemiológico de la infección de las distintasespecies del género Campylobacter en broilers de Andalucía desde el año 2010 hasta el 2012,tanto a nivel de granja como de matadero con objeto de determinar la prevalencia deinfección, los factores de riesgo asociados con esta bacteria y las posibles fuentes de infección;así como los puntos de control crítico durante el procesado de las canales y el nivel decontaminación de la carne de pollo que llegará hasta el consumidor. Además, este trabajoincorpora el estudio microbiológico y epidemiológico de las especies de Campylobacter enperros domésticos de Córdoba desde el año 2007 hasta el 2008, determinándose en estaespecie animal la prevalencia de infección con Campylobacter y las distintas especies, así comolos factores de riesgo asociados con este organismo. Por otra parte, debido a su repercusiónen salud pública, se ha determinado el perfil de resistencia de aislamientos de Campylobacterprocedentes de broilers, carne de pollo y perros domésticos frente a diversos antimicrobianos.El estudio microbiológico se realizó a partir de las 2.221 muestras cloacales y las 747muestras ambientales tomadas en granjas de broilers, las 1.298 muestras tomadas enmatadero (cloaca, canales e instalaciones) y las 306 muestras rectales procedentes de perrosde clínicas veterinarias. Se utilizaron medios de aislamiento selectivos para Campylobacter,confirmándose las colonias morfológica y bioquímicamente compatibles mediante PCR. Elanálisis de la sensibilidad antimicrobiana se realizó utilizándose el método de difusión en placade agar para los aislamientos de broilers y carne de pollo, y el de difusión de disco en agar paralos de perros. Para el estudio epidemiológico de las granjas de broilers y los perros de clínicasveterinarias se diseñaron encuestas epidemiológicas incluyendo los factores de riesgopotencialmente asociados a la infección.En referencia al estudio en granjas, la prevalencia de infección por lotes de broilers deAndalucía fue del 62,9 por ciento (183/291), estando el 31,7 por ciento (58/291) de los lotes..., Campylobacteriosis is an infectious disease caused by bacteria in the genusCampylobacter. It is nowadays the most important zoonoses in the world. In contrast, thisinfection is considered to be asymptomatic in animals. Campylobacter species are generallycommensal in the digestive tract of domestic and wild animals.A microbiological and epidemiological study on Campylobacter infection has been carriedout in dogs in Cordoba during 2007 and 2008 and in broilers from Andalusia from 2010 to2012. The aims of the study were to determine the prevalence of Campylobacter infection inbroilers flocks as well as to identify the risk factors associated with this infection and thepotential sources of infection at farm level; to detect the critical control points during theprocessing and the level of contamination of chicken meat in the slaughterhouse; and todetermine the prevalence and the species involved in the infection of dogs as well as toidentify the risk factors Furthermore, because of its impact on public health, the resistanceprofile of isolates of Campylobacter from broilers, chicken meat and domestic dogs to severalantimicrobials has been determined.Seven hundred and forty seven environmental samples and 2,221 cloacal samples werecollected in broiler farms, 1,298 samples in slaughterhouse (from cloacae, carcasses andequipment) and 306 rectal samples were collected from dogs in clinics. Selective culture mediafor Campylobacter were used, confirming the morphologically and biochemically compatiblecolonies by PCR. The antimicrobial susceptibility was performed using the agar plate dilutionmethod for the isolates from broilers and chicken meat, and the disk agar diffusion method forthe isolates from dogs. For the epidemiological study in broiler farms and veterinary clinics,epidemiological questionnaires were designed including the risk factors potentially associatedwith Campylobacter infection.Regarding the study in farms, the prevalence of infection by broiler flocks in Andalusia was62.9 per cent (183/291), being infected the 31.7 percent (58/291) of the flocks exclusively withC. jejuni and the six per cent (11/291) with C. coli. Risk factors which have been associated withCampylobacter infection in the broiler farms from Andalucia were: age of the broilers (morethan 30 days), the thinning, the presence of windows with canvas blinds in the house, the use...

Campylobacteriosis is an infection frequently acquired through the consumption of animal origin products. Chicken can be considered the main responsible cause in the transmission chain of this disease. Ionizing radiation was used to verify the reduction of the microbiological load of Campylobacter jejuni present in chicken liver, which, in natura, can present contamination in up to 100% of the cases. The doses of irradiation used were: 0.20 kGy, 0.27 kGy, 0.30 kGy and 0.35 kGy. The samples of chicken liver were acquired in aviaries, local supermarkets and large chain supermarkets. The samples were analyzed for Campylobacter at FIOCRUZ. Irradiation was performed at COPPE/UFRJ, using a Gamma Cell Irradiator with a 60Co gamma source. Only the frozen sample acquired at the local supermarket did not contain the bacterium. Campylobacter sp. was present in all other samples, even when using procedures and technologies that aimed at the impediment of the presence of this bacterium in food and, consequently, at the protection of human health. On the whole, the results were satisfactory; nevertheless, it is known that the bacterial growth conditions required by this bacterium are uncommon when compared to other enteropathogenic bacteria. A campilobacteriose é uma infecção frequentemente adquirida pelo consumo de produtos de origem animal. O frango é o principal responsável na cadeia de transmissão da enfermidade. A radiação ionizante foi utilizada para verificar a redução da carga bacteriológica de Campylobacter jejuni presente em fígados de frango, que podem apresentar, in natura, contaminação em até 100% dos casos. As doses de irradiação utilizadas foram 0,20 kGy, 0,27 kGy, 0,30 kGy e 0,35 kGy, sendo as amostras adquiridas em aviário, supermercado de bairro, supermercado popular e supermercado de grande porte. O processamento das amostras foi feito no Setor de Campylobacter, FIOCRUZ, e as irradiações feitas na COPPE na UFRJ, com irradiador gama provido de fonte de Cobalto 60. Somente a amostra congelada, adquirida em supermercado de bairro, não continha a bactéria. Em todas as outras amostras, pôde-se observar a presença de Campylobacter sp., mesmo quando usados procedimentos e tecnologias que visam impedir sua presença no alimento e, consequentemente, proteger a saúde humana. Alguns resultados se apresentaram abaixo do esperado, porém é sabido que as condições de crescimento exigidas por esta bactéria são incomuns quando comparadas às de outros enteropatógenos.