Pendahuluan: Enzim bromelin dari bagian daging dan bonggol buah nanas (Ananas comosus (L.) Merr,) berpotensi sebagai bahan chemo-mechanical caries removal (CMCR) berbasisenzim yang aman dan ekonomis. Namun, belum ada penelitian yang membahas lebih lanjut mengenai waktu aplikasi yang efektif bagi enzim bromelin dalam melakukan degradasi jaringan karies pada dentin. Tujuan penelitian adalah menganalisis waktu aplikasi yang efektif bagi enzim bromelin konsentrasi 10% dalam mendegradasi jaringan karies pada dentin dengan waktu aplikasi selama 1, 2, dan 3 menit. Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratories menggunakan 36 sampel gigi premolar permanen rahang atas dengan kondisi karies klas I yang dibagi menjadi 9 kelompok penelitian. Bahan uji yang digunakan dalam penelitian merupakan gel enzim bromelin konsentrasi 10% yang diperoleh melalui proses presipitasi menggunakan ammonium sulfat 60% dan dilanjutkan dengan proses sentrifugasi. Seluruh sampel diukur kedalaman degradasi jaringan karies yang terbentuk menggunakan SEM. Data yang diperoleh dilakukan uji statistic Kruskall Wallis kemudian dilanjutkan uji Mann Whitney. Hasil: Uji Kruskall Wallis menyatakan terdapat perbedaan yang bermakna dengan nilai p=0,002 (p0,05), sedangkan pada kelompok dengan waktu aplikasi 2 menit dan 3 menit terdapat perbedaan yang bermakna secara statistik dengan nilai p=0,000 (p0.05), whereas, in the group with 2 minutes and 3 minutes of application time, there was a statistically significant difference with a value of p = 0.000 (p