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Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:47:12Z No. of bitstreams: 1 S0100-204X2011000900012.pdf: 451597 bytes, checksum: e01a22a0a9bd3365c17975ce7550556a (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:47:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0100-204X2011000900012.pdf: 451597 bytes, checksum: e01a22a0a9bd3365c17975ce7550556a (MD5) Previous issue date: 2011-09-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:36:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-204X2011000900012.pdf: 451597 bytes, checksum: e01a22a0a9bd3365c17975ce7550556a (MD5) S0100-204X2011000900012.pdf.txt: 34803 bytes, checksum: 3e14b26c92dc130c0c2a7414cf973b52 (MD5) Previous issue date: 2011-09-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T13:13:05Z No. of bitstreams: 2 S0100-204X2011000900012.pdf: 451597 bytes, checksum: e01a22a0a9bd3365c17975ce7550556a (MD5) S0100-204X2011000900012.pdf.txt: 34803 bytes, checksum: 3e14b26c92dc130c0c2a7414cf973b52 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T13:13:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0100-204X2011000900012.pdf: 451597 bytes, checksum: e01a22a0a9bd3365c17975ce7550556a (MD5) S0100-204X2011000900012.pdf.txt: 34803 bytes, checksum: 3e14b26c92dc130c0c2a7414cf973b52 (MD5) Previous issue date: 2011-09-01 O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os genes cry3, vip1, vip2 e vip1/vip2 em uma coleção de 1.078 isolados de Bacillus thuringiensis potencialmente tóxicos para larvas de coleópteros. Foram utilizados pares de oligonucleotídeos iniciadores gerais obtidos a partir de regiões conservadas dos genes e do alinhamento de sequências consenso. Posteriormente, os isolados positivos foram caracterizados por meio da técnica de PCR‑RFLP, tendo-se utilizado enzimas de restrição específicas, para identificar novas subclasses de genes nos isolados. Cento e cinquenta e um isolados foram positivos para os genes avaliados, com maior frequência para o gene vip1/vip2 (139 isolados). Pela técnica de PCR‑RFLP, foram observados 14 perfis polimórficos, o que indica a presença de diferentes alelos e, consequentemente, de distintas subclasses desses genes. The objective of this work was to identify and characterize cry3, vip1, vip2 and vip1/vip2 genes in a collection of 1,078 Bacillus thuringiensis isolates potentially toxic against Coleoptera larvae. Pairs of primers derived from conserved regions of genes and from sequence alignment consensus were used. Subsequently, positive isolates were characterized by PCR‑RFLP, using specific restriction enzymes to identify new subclasses of genes in the isolates. One hundred and fifty‑one isolates were positive for the evaluated genes, with higher frequency for the vip1/vip2 gene (139 isolates). By PCR‑RFLP, 14 polymorphic profiles were observed, indicating the presence of different alleles, and, therefore, of distinct subclasses of these genes. Universidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias Universidade de São Paulo Universidade Estadual Paulista Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:46Z : No. of bitstreams: 1 marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf: 42548 bytes, checksum: 705ccf6a74fac7e11f4cb25dc8fb9403 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:51Z: marucci_sc_me_jabo_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:35Z : No. of bitstreams: 1 000638549.pdf: 1096070 bytes, checksum: 93634385c53868612602ba315f79ea43 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Como uma alternativa para diminuir as agressões constantes que o ecossistema vem sofrendo, devido à grande quantidade de produtos químicos utilizados no controle de pragas, pesquisas envolvendo microrganismos capazes de promover o controle biológico tem se intensificado. Dentre estes microrganismos a bactéria Bacillus thuringiensis tem se destacado. Essa bactéria caracteriza-se pela produção de proteínas tóxicas a representantes de diversas ordens de insetos. Em particular, as proteínas Vip3A, estão em amplo estudo devido a sua especificidade, alto potencial ativo e como alternativa para o controle da resistência de insetos às proteínas Cry. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi selecionar, a partir de 1080 isolados de diferentes regiões brasileiras, aqueles portadores de genes vip3A e obter a sequência de nucleotídeos completa dos mesmos. As linhagens padrão B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 e o isolado I187 tiveram seus DNAs amplificados com oligonucleotídeos baseados na sequência de genes vip3A, descritos no banco de dados de B. thuringiensis e, a partir dos amplicons obtidos, a sequência completa de nucleotídeos dos mesmos foi determinada, utilizando-se da estratégia de “primer walking”. A proteína Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) da linhagem HD1 demonstrou ser 100% idêntica às proteínas Vip3Aa já descritas. Já as proteínas Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) da linhagem HD125 e Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) do isolado I187 demonstraram similaridade de 99% com as proteínas descritas Vip3Aa35 e Vip3Ag2, respectivamente, demonstrando serem duas novas proteínas Vip3A, devido às substituições de aminoácidos ocorridas. Os três genes vip3A obtidos poderão ser utilizados na produção de plantas Bt, piramidadas ou não, visando ao manejo da resistência dos insetos praga As an alternative to decrease the constant aggressions that the ecosystem has suffered due to the large amount of chemical products used in pest control, researches involving microorganisms able to promoting biological control have been intensified. Among these microorganisms the bacterium Bacillus thuringiensis has been stood out. This bacterium is characterized by the production of toxic proteins to representatives of several insect orders. In particular, the Vip3A proteins are in large study due to its specificity, and high active potential as an alternative to control of insect's resistance to Cry proteins. According to this, the aim of this work was to select from 1080 isolates in different Brazilian regions, those carrying vip3A genes and obtain the complete nucleotide sequence of the same. The standard strains B. thuringiensis var. kurstaki HD1, B. thuringiensis var. tolworthi HD125 and the isolate I187 had their DNA amplified with primers based on vip3A gene sequence described in database of B. thuringiensis, and from the amplicons obtained, the full sequence of nucleotides was determined, by the use of the strategy of primer walking. The protein Vip3Aa43 (GenBank: [HQ594534]) of HD1 strain showed to be 100% identical to Vip3Aa proteins already described. However, the proteins Vip3Aa42 (GenBank: [HQ587048]) of HD125 strain and Vip3Ag5 (GenBank: [HQ542193]) of the isolate I187 showed 99% similarity with the Vip3Aa35 and Vip3Ag2 proteins described, respectively, showing been two new Vip3A proteins due to amino acid substitutions occurred. The three vip3A genes obtained can be used in the production of Bt crops, pyramidal or not, aiming to resistance management of pest insects

Novel vegetative insecticidal proteins (Vips) identified in the supernatant of Bacillus thuringiensis (B.t.) cultures have shown to provide adequate control over a wide spectrum of economically important crop pests. To evaluate the potential applicability of these proteins against fall armyworm (Spodoptera frugiperda Smith) larvae, the most important insect pest for tropical maize, the characteristics and mortality effects of culture supernatants from five B.t. strains were investigated. Striking differences among strains were detected, not only in terms of efficiency in killing the insect, but also regarding to mortality effects of heated and non-heated supernatants, which were used to distinguish the heat-sensitive protein-derived insecticidal fraction from a thermostable one, with a non-protein nature (b-exotoxinas). The qualitative, quantitative and temporal patterns of total protein secretion in the medium (supernatant) were assessed through spectrophotometry and polyacrylamide gel electrophoresis. The strains showed remarkably distinct rates of growth and timing for protein secretion relative to cell density in culture. Moreover, the electrophoretic-banding patterns also varied in a strain-specific manner, both in denaturing and non denaturing conditions. Polypeptides displaying a molecular weight that is very close to the expected for previously identified Vip3A proteins were found for the strains with high supernatant-mortality ratios. The data suggest the feasibility and usefulness of searching for protein-derived (Vip-like) insecticidal fractions in B.t. supernatants as a mean of developing especific and efficient alternatives of biological control to be employed in integrated pest management programs of S. frugiperda in tropical maize. Recentemente, proteínas inseticidas vegetativas (Vips), identificadas no sobrenadante da cultura de certas cepas de Bacillus thuringiensis (B.t.), foram capazes de controlar alguns insetos-praga economicamente importantes. Como avaliação do potencial de aplicabilidade destas proteínas contra a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda Smith), o inseto-praga mais importante da cultura do milho, as características e o efeito de mortalidade do sobrenadante da cultura de cinco cepas de B.t. foram investigadas. Notáveis diferenças entre as cepas foram detectadas, não somente em termos de eficiência na mortalidade dos insetos, mas também nas diferenças de mortalidade entre os sobrenadantes aquecido e não-aquecido, tratamentos estes que foram usados para distinguir a fração protéica inseticida termo-sensível de outra fração termo-estável, de natureza não-protéica (b-exotoxinas). Os padrões qualitativo, quantitativo e temporal de secreção da proteína total no meio (sobrenadante) foram avaliados por espectrofotometria e eletroforese em gel de poliacrilamida. As cepas apresentaram distintas taxas de crescimento e tempos de secreção de proteínas em relação a densidade de células na cultura. Além disso, o padrão de bandas eletroforéticas também variou de maneira cepa-específica, em ambas condições desnaturantes e não-desnaturantes. Polipeptídeos que apresentaram peso molecular semelhantes aos esperados para proteínas Vip3A identificadas anteriormente foram encontrados em cepas com alta taxa de mortalidade do sobrenadante. Os dados sugerem a possibilidade e a utilidade de pesquisar frações inseticidas de natureza protéica (do tipo Vip) em sobrenadantes de B.t., como forma para desenvolver alternativas específicas e eficientes de controle biológico que possam ser empregadas em programas de manejo integrado de S. frugiperda em milho tropical.

O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os genes cry3, vip1, vip2 e vip1/vip2 em uma coleção de 1.078 isolados de Bacillus thuringiensis potencialmente tóxicos para larvas de coleópteros. Foram utilizados pares de oligonucleotídeos iniciadores gerais obtidos a partir de regiões conservadas dos genes e do alinhamento de sequências consenso. Posteriormente, os isolados positivos foram caracterizados por meio da técnica de PCR‑RFLP, tendo-se utilizado enzimas de restrição específicas, para identificar novas subclasses de genes nos isolados. Cento e cinquenta e um isolados foram positivos para os genes avaliados, com maior frequência para o gene vip1/vip2 (139 isolados). Pela técnica de PCR‑RFLP, foram observados 14 perfis polimórficos, o que indica a presença de diferentes alelos e, consequentemente, de distintas subclasses desses genes. The objective of this work was to identify and characterize cry3, vip1, vip2 and vip1/vip2 genes in a collection of 1,078 Bacillus thuringiensis isolates potentially toxic against Coleoptera larvae. Pairs of primers derived from conserved regions of genes and from sequence alignment consensus were used. Subsequently, positive isolates were characterized by PCR‑RFLP, using specific restriction enzymes to identify new subclasses of genes in the isolates. One hundred and fifty‑one isolates were positive for the evaluated genes, with higher frequency for the vip1/vip2 gene (139 isolates). By PCR‑RFLP, 14 polymorphic profiles were observed, indicating the presence of different alleles, and, therefore, of distinct subclasses of these genes.