Development of a solid-phase extraction - spectrofluorimetric method for trace glutathione determination.

A simple and efficient solid-phase extraction - spectrofluorimetric method has been developed to determine glutathione (GSH). Fluorescent probe N-(4,4-difluoro-5,7-dimethyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene-3-yl)methyl)iodoacetamide (BODIPY Fl-C1-IA) was used as the derivatization reagent. The procedure was based on a BODIPY Fl-C1-IA selective reaction with GSH to form the highly fluorescent product BODIPY Fl-C1-IA-GSH, using a solid-phase extraction column and spectrofluorimetric determination. The variables affecting analytical performance were studied and optimized. The calibration graph using the preconcentration system for GSH was linear over the range of 1-200 nmol/L with a limit of detection of 0.05 nmol/L (signal-to-noise ratio = 3). The relative standard deviation for six replicate determinations of GSH at the 100 nmol/L concentration level was 3.9%. The method was applied to water samples and average recoveries between 87.5% and 111.5% were obtained for spiked samples. On a développé une méthode simple et efficace d'extractoin spectrofluorimétrique en phase solide pour déterminer le glutathion (GSH). On a utilisé la sonde fluorescente N-(4,4-difluoro-5,7-diméthyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacène-3-yl)méthyl)iodoacétamide (BODIPY F1-C1-1A) comme réactif pour obtenir des dérivés. La méthode repose sur le fait que le BODIPY F1-C1-1A donne une réaction sélective avec le GSH conduisant à la formation du produit hautement fluorescent BODIPY F1-C1-1A-GSH qui peut être isolé par extraction en phase solide sur colonne et soumis à une détermination spectrofluorimétrique. On a étudié et optimisé les variables qui affectent la performance analytique. Le graphique de calibration à l'aide du système de préconcentration du GSH est linéaire sur la plage de 1 à 200 nmol/L, avec une limite de détection de 0,05 nmol/L (rapport signal à bruit = 3). La déviation relative standard pour six déterminations de GSH en duplicata, à un niveau de concentration de 100 nmol/L, est de 3,9 %. On a appliqué la méthode à des échantillons d'eau et on a obtenu des taux de récupérations moyens variant de 87,5 % à 111,5 % pour les échantillons ensemencés. [ABSTRACT FROM AUTHOR]