Construction of bacterial artificial chromosome (BAC) libraries of banana (Musa acuminata and Musa balbisiana).

Introduction. This protocol applies to the characterization of genome structure and evolution of M.?acuminata and M.?balbisiana genomes;?construction of physical maps around markers of interest and QTLs;?comparative genomic studies with other monocot species; and study of banana streak virus (BSV) integration patterns in banana nuclear genomes. The principle, key advantages, starting plant material, time required and expected results are presented. Materials and methods. This part describes the required materials, and the protocols for isolation and lysis of banana nuclei; high-molecular-weight (HMW) DNA Hind III digestion and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) analysis; large-scale HMW DNA Hind III digestion and ligation to the pINDIGOBAC?5 vector; and analysis of recombinant BAC clones. It mentions the main problems which can occur. Results. The described protocols will enable the efficient construction of BAC libraries from Musa species. These libraries can be used to construct physical maps and select specific genomic regions to be sequenced.Introduction. Le protocole s''applique ? la caract?risation de la structure du g?nome et ? l''?volution des g?nomes de M.?acuminata et de M.?balbisiana ; ? la construction de cartes physiques autour des marqueurs d''int?r?t et des QTLs ; aux ?tudes de g?nomique comparative avec d''autre esp?ce de monocotyl?dones ; ? l??tude des mod?les d''int?gration du virus BSV dans les g?nomes nucl?aires de la banane. Le principe, les principaux avantages, le mat?riel v?g?tal utilis?, le temps n?cessaire et les r?sultats attendus sont pr?sent?s. Mat?riel et m?thodes. Cette partie d?crit le mat?riel de laboratoire n?cessaire, et les protocoles permettant l''isolement et la lyse des noyaux de cellules de bananier ; la digestion Hind III de ADN ? haut poids mol?culaire (HPM) et l?analyse ?lectrophor?se sur gels ? champ puls??; la digestion Hind III ? grande ?chelle de ADN ? HPM et ligation au vecteur pINDIGOBAC-5 ; l?analyse des clones recombinants de BAC. Elle mentionne les principaux probl?mes pouvant se poser. R?sultats. Les protocoles pr?sent?s permettent de construire des biblioth?ques de BAC ? partir d''esp?ces du genre Musa. Ces biblioth?ques peuvent ?tre utilis?es pour construire des cartes physiques et s?lectionner des r?gions du g?nome ? s?quencer. [ABSTRACT FROM AUTHOR]