SARS-CoV-2 u okolišu: predstavljaju li otpadne vode i školjkaši mogući izvor infekcije?

Od pojave prvog slučaja bolesti krajem 2019. godine u Kini, virus SARS-CoV-2 je uzrokovao pandemiju bez presedana. Unatoč velikom napretku u razvoju i primjeni cjepiva, očekuje se da će bolest postati endemska s puno otvorenih pitanja glede dinamike infekcija virusom SARS-CoV-2. Pojavnost ovog virusa u okolišu je opisana puno puta naročito pretraživanjem otpadnih voda te se smatra da je na taj način moguće dokazati rastuću incidenciju bolesti COVID-19 čak 1-3 tjedna prije pojave u populaciji ljudi. Pretraživanje školjkaša na moguću kontaminaciju virusom SARS-CoV-2 značajno zaostaje, sa svega dva do sada opisana istraživanja. Cilj našeg istraživanja je bio utvrditi cirkulaciju virusa SARS-CoV-2 u otpadnim i površinskim vodama u Republici Hrvatskoj te proširiti trenutne spoznaje o mogućnosti kontaminacije školjkaša u Jadranu tijekom drugog vala epidemije. Ovo istraživanje obuhvatilo je 13 uzoraka otpadnih i površinskih voda s početka epidemije u Republici Hrvatskoj i 17 uzoraka ulaznih i izlaznih otpadnih voda podrijetlom iz devet pročišćivača u sedam gradova (Zagreb, Vinkovci, Slavonski Brod, Koprivnica, Karlovac, Zadar i Split) tijekom drugog vala epidemije. Pročišćivači otpadnih voda su bili različitog stupnja obrade, od prvog do trećeg stupnja. Tijekom tog razdoblja potječe i većina od 77 uzoraka školjkaša, a zastupljene vrste su dagnje (Mytilus galloprovincialis, N= 52), kamenice (Ostra edulis, N= 23) i brbavice (Venus verrucosa). Postupak koncentracije virusnih čestica, u gore navedenim uzorcima, proveden je djelomično modificiranim postupkom opisanim u normi EN ISO 15216-1 2017 uz primjenu mengovirusa kao procesne kontrole. Dokazivanje virusa SARS-CoV-2 provedeno je primjenom metode RT-PCR u stvarnom vremenu ili konvencionalno za gene koji koji kodiraju virusne proteine E, N i nsp14. Također je primijenjena i metoda RT-PCR u stvarnom vremenu za dokazivanje dijela genomskog segmenta VP2 rotavirusa A (RVA) u svrhu dodatne potvrde postupaka koncentracije virusa. Dobiveni rezultati potvrđuju cirkulaciju virusa SARS-CoV-2 u osam od devet pročišćivača otpadnih voda lociranih u svih sedam gradova. Od 11 SARS-CoV-2 pozitivnih uzoraka, devet je ulaznih i dva izlazna uzorka nakon sekundarne obrade otpadnih voda. Svi uzorci otpadnih voda nakon tercijarne obrade su polučili negativan rezultat na SARS-CoV-2 kao i svi uzorci otpadnih i površinskih voda s početka epidemije. Nije utvrđena prisutnost kontaminacije školjkaša virusom SARS-CoV-2. Rotavirus A je potvrđen u svim uzorcima otpadnih voda (N= 21), u 22, 2% uzoraka površinskih voda i u 23% uzoraka školjkaša. SARS-CoV-2 dokazano cirkulira u otpadnim vodama diljem Republike Hrvatske, a sustav pročišćavanja, naročito treći stupanj učinkovito reducira ili uklanja virus. Naši rezultati su u suglasju s mnogim istraživanjima provedenim u svijetu. Uzorci otpadnih voda tijekom početka epidemije su negativni ponajviše zbog strategije uzorkovanja usmjerene na izlazne vode gdje zbog niske incidencije u populaciji nije bilo moguće dokazati prisutnost virusa. Važno je istaknuti da dosadašnje spoznaje ne ukazuju na infektivnost otpadnih voda pozitivnih na RNA virusa SARS-CoV-2, ali pozivaju na oprez, poglavito djelatnika u postrojenjima pročišćivača. Negativan rezultat na prisutnost virusa SARS-CoV-2 u školjkašima u Jadranu je sličan rezultatima provedenim u Francuskoj. Važno je istaknuti da je naše istraživanje po prvi puta obuhvatilo razdoblje uzorkovanja tijekom jeseni i zime kada su enterične infekcije najčešće, a ujedno je to bilo i razdoblje drugog i najizraženijeg vala epidemije virusa SARS-CoV-2. Međutim, pokusno je dokazana mogućnost kontaminacije kamenica inaktiviranim virusom SARS-CoV-2, a u Španjolskoj je dokazana prisutnost neaktivnih virusnih čestica SARS-CoV-2 u školjkama u uzgajalištu, ali u području ušća rijeke pod utjecajem izljeva otpadnih voda. Rezultati dokazivanja RVA potvrđuju da se radi o široko rasprostranjenom enteričnom virusu s izraženom redukcijom u izlaznim vodama. Povrh toga ovi rezultati ukazuju i na dinamiku te sezonalnost RVA u populaciji tijekom epidemije koronavirusa. Zaključno možemo istaknuti da naši rezultati u kombinaciji s dosadašnjim spoznajama ukazuju na vrlo mali javnozdravstveni rizik otpadnih voda i školjkaša kao mogućih izvora infekcije virusom SARS-CoV-2. Međutim kako su istraživanja i dalje u tijeku, posebno po pitanju infektivnosti virusa SARS-CoV-2 u navedenim matriksima, potreban je oprez.