Diagnosis of cytomegalovirus infections by qualitative and quantitative PCR in HIV infected patients

A high incidence of cytomegalovirus (CMV) infections is observed in Brazil. These viruses are causatives of significant morbidity and mortality among patients with advanced human immunodeficiency virus (HIV) infection. This work, shows the application of a PCR on determination of CMV load in the buffy coat and plasma. We analyzed the samples of 247 HIV infected patients in order to diagnose CMV infection and disease. We developed a semi-quantitative PCR that amplifies part of the glycoprotein B (gB) gene of CMV. The semi-quantitative PCR was carried out only in positive clinical samples in a qualitative PCR confirmed by a nested-PCR. CD4 lymphocyte count, HIV viral load and CMV disease symptom were correlated with CMV load. CMV genome was detected in the buffy coat of 82 of 237 (34.6%) patients, in 10 of these the CMV load was determined varying between 928 and 332 880 viral copies/mug DNA. None of these 237 patients developed any suggestive manifestation of CMV disease. For the other 10 HIV infected patients selected based on the suspicion of CMV disease, CMV genome was detected in only one case. This patient presented a high CMV load, 8 000 000 copies/mug DNA, and developed a disseminated form of CMV disease including hepatitis and retinitis. Our results were greatly influenced by the impact of the highly active antiretroviral therapy that reduced incidence of CMV viremia and occurrence of CMV disease in the HIV infected patients. Uma alta incidência de infecção pelo citomegalovirus (CMV) é observada no Brasil. Este vírus é responsável por significante morbi-mortalidade entre pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Neste estudo, mostramos a aplicação de uma PCR quantitativa para determinar a carga de CMV nos leucócitos do sangue periférico e no plasma de 247 pacientes infectados pelo HIV. As amostras clínicas foram previamente testadas por uma PCR qualitativa e confirmadas por uma nested-PCR para posteriormente serem quantificados. Contagem de linfócitos T CD4, carga viral do HIV e sintomas de doença citomegálica foram correlacionados com carga de CMV. O genoma de CMV foi detectado nos leucócitos do sangue periférico em 82 de um total de 237 (34%) pacientes, em 10 destes a carga de CMV foi detectada variando de 928 a 332880 cópias virais/mig de DNA. Nenhum destes 237 pacientes desenvolveu manifestação clínica sugestiva de doença pelo citomegalovírus. Para outro grupo de 10 pacientes infectados pelo HIV e selecionados com base na suspeita de doença pelo CMV, o genoma do CMV foi detectado em apenas um caso. Este paciente apresentava alta carga de CMV (8 000 000 de cópias virais/mig de DNA), desenvolvendo forma disseminada de doença pelo CMV o que incluiu hepatite e retinite. Nossos resultados foram fortemente influenciados pelo impacto da terapia antiretroviral que reduziu a incidência da viremia por CMV, bem como a ocorrência de doença citomegálica em pacientes infectados pelo HIV.