Investigation of functional expression profile of TRPC ion channels via post-transcriptional gene silencing

Bu çalışmada, yaşlanma sürecindeki sıçan aortunda belirlediğimiz TRPC1 iyon kanalı geninin ?down?-regülasyonunun işlevsel sonuçları, A7r5 sıçan embriyonik damar düz kas ve HuH-7 insan karaciğer kanseri hücre kültürleri olmak üzere iki farklı hücre hattında RNA'ya müdahale yöntemi ile araştırılmıştır. Bu amaçla, hücrelerde nicel gen ve protein ekspresyonunun yanı sıra işlevsel analizler de gerçekleştirilmiştir. mRNA ve protein düzeylerini belirlemek amacıyla sırasıyla nicel RT-PCR ve western blot çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Ayrıca, HuH-7 hücrelerinde tüm gen ekspresyonunu kapsayan transkriptom analizi gen çipi kullanılarak yapılmıştır. A7r5 hücrelerinde sadece TRPC1 ve TRPC6 mRNA'ları belirlenebilir düzeyde bulunmuştur. TRPC1 mRNA'sına özgü susturucu çift sarmal RNA dizisi (siTRPC1) uygulanan A7r5 hücrelerinde, TRPC1 mRNA ve protein düzeyleri azalmış (sırasıyla: P