RESISTENCIA A LA APOPTOSIS EN LINFOCITOS T EN SANGRE PERIFERICA EN PACIENTES CON E. DE CROHN (EC)

En la EC existe una resistencia a la apoptosis en lamina propia intestinal, no existen estudios homogeneos en celulas mononucleres en sangre periferica. Objetivo Estudiar la susceptibilidad a la apoptosis de los linfocitos no activados de sangre periferica de pacientes EC, despues de activar la celulas in vitro y anadirles un estimulo apoptotico externo (anticuerpo (Ac) agonista Fas). Metodos Se obtuvo sangre heparinizada de sujetos control (n=11) y de EC al debut y sin medicacion (n=8). Los pacientes fueron diagnosticados siguiendo los criterios Leonard-Jones y la actividad segun el Harvey-Bradshaw. Los linfocitos fueron aislados mediante centrifugacion en gradiente con Histopaque ® , seguido de una purificacion en negativo de los linfocitos T no activados (Depletion Dynabeads ® ). Las celulas asi aisladas, fueron cultivadas durante 5 dias en presencia (o ausencia) de Ac CD3 unido a la placa y Ac CD28 diluido en medio X Vivo-15 (Lonza). Transcurrido este tiempo necesario para activar las celulas, se anadio Ac Fas (1 μg/mL) y transcurridas las incubaciones de 5 y 24 h, se detecto la apoptosis mediante citometria de flujo (Annexin-V). Resultados La activacion de los linfocitos T mediada por la exposicion a los Ac CD3/CD28 resulto en un incremento de la apoptosis, tanto en los controles (52,37±5,2) como en la EC (36,54±3,9) p=0,052. Al anadir el Ac Fas, se incremento el porcentaje de celulas apoptoticas (controles 66,09±3,2 vs EC 53,37±6,2); pero fue necesaria una exposicion de 24 h para que este efecto fuera significativo: controles 69,05±3,7 vs EC 53,35±5,6 (p=0,033). Conclusiones La resistencia a la apoptosis, puede ser una caracteristica que presenten los linfocitos T de sangre periferica antes de alcanzar la mucosa intestinal. Esta alteracion intrinseca en la capacidad apoptotica ayuda a clarificar la relacion entre, respuesta inmune innata y adquirida en la EC y la fisiopatologia de la enfermedad.