Mise au point d’épidermes reconstruits chez la souris : analyse de l’expression des Toll-Like Receptors et réponse aux cytokines pro-inflammatoires

De nombreuses etudes in vitro sont realisees a partir de cultures primaires de keratinocytes en monocouche. Ces cultures cellulaires sont composees majoritairement de cellules progenitrices de la couche basale, presentant un potentiel proliferatif important mais un etat de differenciation epidermique peu avance. Afin d’etudier in vitro la physiologie du keratinocyte dans un systeme plus differencie, nous avons mis au point un protocole d’obtention d’epidermes reconstruits murins (RME) a partir de keratinocytes primaires issus de souriceaux nouveau-nes. La caracterisation des RME en immuno-histofluorescence montre une expression similaire a celle de la peau de souris des marqueurs de differenciation epidermique, tels que les cytokeratines 6/10, la loricrine ou la filaggrine, de cadherines et de connexines des j5. Ces RME permettent egalement de mettre en evidence le blocage de la differenciation induit par les cytokines pro-inflammatoires telles que l’oncostatine M ou l’IL-22. Nous avons egalement compare les profils d’expression des Toll-like Receptors des RME avec les cultures de keratinocytes en monocouche et la peau de souris. Outre l’etude des reponses des RME en conditions infectieuses et/ou inflammatoires, ce protocole ouvre la possibilite de generer des RME a partir de souris transgeniques knock-out ou knock-in.