004 Caractérisation des cellules obtenues lors de la culture des explants limbiques humains

Objectif La culture de cellules epitheliales limbiques est actuellement utilisee pour traiter les insuffisances limbiques. Neanmoins les techniques de cultures utilisees sont variees et la nature exacte des cellules greffees n’est pas connue avec precision. Notre but est d’analyser le type des cellules et d’evaluer l’expression de divers marqueurs par ces cellules en culture. Materiels et Methodes Des cultures de keratocytes ainsi que des cultures primaires de cellules epitheliales limbiques sont realisees a partir d’explants limbiques. Les explants sont preleves sur un greffon corneen juste apres prelevement post-mortem ou apres conservation en organo-culture. Des cornees ayant un endothelium non conforme sont utilisees. Des explants de stroma sont cultives afin d’obtenir des cultures de keratocytes. Des explants limbiques sont utilises pour obtenir des cultures primaires de cellules epitheliales. En fin de culture, les cellules dissociees sont caracterisees a l’aide d’anticorps monoclonaux anti-vimentine pour identifier les keratocytes et anti-cytokeratine 3 pour identifier les cellules epitheliales corneennes differenciees. Resultats Les cultures obtenues a partir des explants limbiques et celles obtenues a partir des explants stromaux comportent des populations cellulaires mixtes. La presence simultanee des deux populations cellulaires ameliore la croissance cellulaire. Discussion Un effet feeder de cellules fibroblastiques humaines sur la croissance epitheliale semble probable. La nature precise de ces cellules et leur interaction avec les cellules epitheliales corneennes restent a determiner. Conclusion Il semble difficile d’obtenir de cultures pures de keratocytes et/ou de cellules epitheliales a partir d’explants limbiques.