Développement et évaluation d’une méthode de criblage toxicologique en CG-SM grâce au logiciel MassHunter Unkown Analysis

Objectifs L’objectif de ce travail a ete de developper une methode de criblage toxicologique en chromatographie gazeuse couplee a spectrometrie de masse (CG-SM), methode de reference dans le domaine de la toxicologie hospitaliere [1] en utilisant le logiciel de retraitement MassHunter Unkown Analysis (MHUA), applicable en routine pour des echantillons de plasma et d’urine et de l’evaluer. Methode La preparation des echantillons suit celle decrite par Grapp et al. [2] . La prise d’essai est de 1 mL de matrice a laquelle est ajoute 50 μL d’etalon interne (prazepam 1 mg/L). L’extraction liquide-liquide est double a pH neutre et pH alcalin. La phase organique des 2 extractions est melangee et evaporee sous azote a 50 °C. Le residu sec est repris avec 100 μL d’acetate d’ethyle et 2 μL sont injectes dans le systeme CG-SM. Les analyses sont effectuees avec un appareil CG Agilent 7890A et un appareil SM Agilent 5975 C. Les injections sont realisees en mode splitless. Les analytes sont separes sur une colonne HP-5MS 30 m × 0,25 mm ; 0,25 μm (Agilent Technologies). Le gaz vecteur utilise est l’helium a un debit de 1 mL/min. Un gradient de temperature est utilise, il demarre a 100 °C pendant 2 min, puis augmente de 15 °C/min jusqu’a 325 °C, la duree totale est de 23 min. La source d’ionisation fonctionne par impact electronique a une energie constante de 70 eV. Les ions sont analyses en mode full scan entre 44 et 600 m/z. Les resultats ont ete retraites grâce aux logiciel AMDIS et MHUA v10.1 avec 3 bibliotheques : SWGDRUG (3346 spectres) NIST (220 460 spectres) et une bibliotheque maison (> 120 spectres). Les 58 echantillons de notre etude (12 urines et 46 plasmas) ont ete adresses par les hopitaux de l’agglomeration marseillaise au laboratoire de Pharmacocinetique et de Toxicologie de la Timone pour recherche de toxiques. Ils ont ete analyses en immunoanalyse et par CL-SM/SM sur une chaine Alliance couplee a un Quattro 1er (Waters, Etats-Unis). En cas de depistage positif pour les stupefiants, ou de demande specifique, une quantification est realisee en CL-SM/SM sur une chaine Acquity XEVO TQXS (Waters, Etats-Unis). Enfin, les echantillons sont analyses en CG-MS avec la methode developpee. Les resultats obtenus avec ces differentes methodes sont ensuite compares. Resultats Sur 58 echantillons, 65 molecules ont ete identifiees en CG-SM grâce au logiciel MH UA, 36 avec le logiciel AMDIS et 59 en CL-SM/SM. Dix-neuf molecules ont ete identifiees en CG-SM et dosees en CL-SM/SM a des concentrations relativement basses, notamment la codeine ( Conclusion Ce travail a permis de developper et d’optimiser une methode de criblage CG-SM et d’evaluer le logiciel MHUA. En comparaison avec les autres approches evaluees, le criblage CG-SM a permis d’identifier un nombre plus important de molecules, bien que certaines ne soient pas identifiees ou presentent des limites de detection plus elevees. La methode developpee est donc complementaire de la CL-SM/SM et de l’immunoanalyse et adaptee aux criblages toxicologiques realises dans le cadre hospitalier.