Co-expression and characterization of enterocin CRL35 and its mutant in Escherichia coli Rosetta

Even though many sequences and structures of bacteriocins from lactic acid bacteria have been fully characterized so far, little information is currently available about bacteriocins heterologously produced by Escherichia coli. For this purpose, the structural gene of enterocin CRL35, munA, was PCR-amplified using specific primers and cloned downstream PelB sequence in the pET22b (+) expression vector. E. coli Rosetta (DE3) pLysS was chosen as the host for production and enterocin was purified by an easy two-step protocol. The bacteriocin was correctly expressed with the expected intramolecular disulfide bond. Nevertheless, it was found that a variant of the enterocin, differing by 12 Da from the native polypeptide, was co-expressed by E. coli Rosetta in comparable amount. Indeed, the mutant bacteriocin contained two amino acid substitutions that were characterized by matrix assisted laser desorption ionization-time of flight (MALDI-TOF) and HPLC-electrospray (ESI)-Q-TOF tandem mass spectrometry (MS/MS) sequencing. This is the first report regarding the production of mutants of pediocin-like bacteriocins in the E. coli expression system. Fil: Masias, Ruth Emilse. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina Fil: Picariello, Gianluca. Consiglio Nazionale delle Ricerche (CNR). Istituto di Scienze dell’Alimentazione; Italia Fil: Acuña, Leonardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina Fil: Chalon, Miriam Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina Fil: Sesma, Fernando Juan Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Centro de Referencia Para Lactobacilos (i); Argentina Fil: Morero, Roberto Dionisio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina Fil: Saavedra, Lucila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Centro de Referencia Para Lactobacilos (i); Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina Fil: Minahk, Carlos Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto Superior de Investigaciones Biológicas; Argentina. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. Instituto de Química Biológica; Argentina