Purification et caractérisation de la D-bêta-hydroxybutyrate déshydrogenase de mitochondries de foie de chamelon

La D-beta-hydroxybutyrate deshydrogenase (BDH) est une proteine membranaire mitochondriale. Elle est situee sur la face interne de la membrane interne, fortement liee a la membrane. C'est une oxydoreductase a NAD+ (H). Elle intervient dans le metabolisme des corps cetoniques en catalysant la transformation du D-beta-hydroxybutyrate et de l'acetoacetate. Une nouvelle technique a ete mise au point pour extraire et purifier cette enzyme a partir de mitochondries de foie de chamelon. Elle consiste en une chromatographie sur colonne en deux etapes : la premiere sur matrice echangeuse d'ions (DEAE-sephacel) la seconde sur matrice hydrophobe (phenyl Sepharose CL 4B). Les resultats obtenus ont montre que la BDH delipidee est inactive ; elle ne retrouve son activite qu'en presence de phospholipides contenant des lecithines. La BDH a ete reconnue par un anticorps polyclonal anti BDH mitochondriale de foie de rat. La masse moleculaire de l'enzyme a ete estimee a 70 000, par electrophorese sur gel de polyacrylamide en presence de sulfate de dodecyl de sodium. La masse moleculaire et les conditions optimales de reactivation de la BDH sont differentes par rapport a celles deja obtenues chez d'autres especes. (Resume d'auteur)