Identificaci?n genot?pica de miembros del complejo Mycobacterium avium aislados de infecciones pulmonares en el Estado de Par?, Brasil

Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Par?. Bel?m, PA, Brasil. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil / Universidade Federal do Par?. Bel?m, PA, Brasil. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. INTRODU??O: O complexo Mycobacterium avium (MAC) compreende micobact?rias de crescimento lento, naturalmente encontradas no meio ambiente, capazes de causar infec??es em diversas esp?cies de seres vivos, incluindo aves, su?nos e humanos. Tais infec??es podem ser assintom?ticas, clinicamente significantes e, em alguns casos, fatais. No entanto, existe a necessidade de se disponibilizarem t?cnicas que ofere?am uma identifica??o conclusiva de bact?rias estreitamente relacionadas. As t?cnicas de biologia molecular se apresentam como ferramentas promissoras para uma identifica??o mais precisa. MATERIAIS E M?TODOS: Neste trabalho foram avaliados os marcadores moleculares RNAr 16S, hsp65 e rpoB aplicados ? distin??o de membros do MAC isolados no Laborat?rio de Micobact?rias do Instituto Evandro Chagas. RESULTADOS: Amostras de MAC colhidas em 15 pacientes foram previamente avaliadas pelo m?todo de an?lise de polimorfismo de fragmentos de restri??o do gene hsp65 (PRA-hsp65), que forneceu tr?s diferentes perfis: (I) BstEII: 235/115/100, HaeIII:145/130/60; (II) BstEII:235/210, HaeIII:130/105; e (III) : 235/210, HaeIII:145/130. ?rvores filogen?ticas foram constru?das ap?s an?lise do RNAr 16S, em que as amostras foram distribu?das em dois grupos, semelhante ao encontrado na an?lise de hsp65. Entretanto, os resultados de rpoB foram discordantes daqueles das outras ?rvores, devido ? modifica??o de topologia. CONCLUS?O: Os achados deste estudo sugerem que diferentes for?as evolucion?rias podem estar atuando sobre o gene rpoB, e, desta forma, ? necess?rio que se tenha precau??o ao estabelecer esse alvo para fins taxon?micos. Adicionalmente, recomenda-se que mais de um marcador, incluindo o RNAr 16S, seja avaliado para a identifica??o micobacteriana. INTRODUCTION: The Mycobacterium avium complex (MAC) is a group of slow-growing mycobacteria naturally found in the environment capable of causing infections in a wide variety of living species, including birds, swines and humans. These infections can be asymptomatic, clinically significant and, in some cases, fatal. There is a demand for techniques that are capable of conclusively identifying closely related bacteria. Molecular biological techniques are promising tools for a more precise identification. MATERIAL AND METHODS: In this study, we evaluated the ability of 16S rRNA, hsp65 and rpoB molecular markers to distinguish between members of the MAC isolated in the Mycobacteria Laboratory at the Instituto Evandro Chagas. RESULTS: MAC samples collected from 15 patients were previously evaluated using an hsp65 gene restriction fragment length polymorphism analytical method (RFLP-hsp65), and they showed three different profiles: (I) BstEII: 235/115/100, HaeIII: 145/130/60; (II) BstEII: 235/210, HaeIII: 130/105; and (III) BstEII: 235/210, HaeIII: 145/130. We constructed phylogenetic trees using 16S rRNA analysis in which the samples were distributed into two groups, similarly to those found in the hsp65 analysis. However, the results from the rpoB analysis disagreed with those of the other trees due to changes in topology. CONCLUSION: The findings from this study warrant that various evolutionary forces may be acting on the rpoB gene. Thus, it is necessary to be cautious when using this target for taxonomic analyses. Additionally, we recommend that multiple markers (including16S rRNA) be evaluated when identifying mycobacteria.