Level of infection and humoral imune response against Arthrographis kalrae and the effect of coinfection with Paracoccidioidesbrasiliensis in C57BL/6 mice

Arthrographis kalrae é um fungo dimórfico, patógeno humano oportunista. Os modelos experimentais em camundongos Swiss e BALBc infectados pelo fungo A. kalrae tem demonstrado lesões em diversos órgãos (rins, fígado, pulmões, baço, cérebro) e. efeito neurológico com alteração de comportamento. Neste trabalho foi proposto analisar alteração comportamental, grau de infecção e resposta imune humoral em camundongos C57BL/6, infectados com A. kalrae, bem como avaliar o efeito da infecção concomitante de A. kalrae com o fungo patogênico Paracoccidioides brasiliensis. Trinta e seis camundongos C57BL/6, machos, foram divididos em seis grupos (n=6). Cada Grupo recebeu 100µL de PBS contendo ou não fungo por via endovenosa: Grupo 1 (controle) PBS estéril, Grupo 2 P. brasiliensis (1x106 ), Grupo 3 A. kalrae (1x106 ), Grupo 4 A. kalrae (1x107 ), Grupo 5 A. kalrae (1x106 ) e P. brasiliensis (1x106 ) e Grupo 6 A. kalrae (1x10 7 ) e P. brasiliensis, (1x106 ). Após 21 dias, foi determinado o grau de infecção por Unidade Formadora de Colônia (UFC) em amostras de homogeneizado de órgãos (baço, cérebro, coração, fígado, pulmão, rim) e adicionalmente de algumas amostras de urinas. Parte das amostras de órgãos foram utilizadas para o exame histológico. Para avaliação da resposta humoral foi determinado o nível sérico de IgG anti-A. kalrae utilizando Elisa. Os resultados obtidos demonstraram UFC positiva para baço, cérebro, coração, fígado, pulmão e rim, porém sem diferença significativa entre os grupos (p > 0,05). Duas amostras de urina demonstraram positividade em UFC, apresentando características morfológicas de A. kalrae. Nenhum camundongo infectado com A. kalrae demonstrou alteração comportamental. A histologia comprovou a presença de A. kalrae e A. kalrae + P. brasiliensis nos órgãos de camundongos mono e com infecção associada, respectivamente. Elisa resultou em nível significativamente elevado de IgG anti A.kalrae no grupo infectado com A. kalrae 1x107 em relação ao 1x106 (p < 0,05) porém sem diferença significativa em relação aos grupos concomitantemente infectados (p > 0,05). Em conclusão, camundongo da linhagem C57BL/6 é susceptível à infecção sistêmica com A. kalrae; porém resistente quanto à alteração comportamental. A resposta imune humoral anti-A. kalrae em camundongos C57BL/6 é dependente da concentração de A. kalrae inoculado, mas não é influenciado pela infecção concomitante com P. brasiliensis. Este trabalho demonstra pela primeira vez a presença de A. kalrae em urina de camundongo infectado, evidenciando a possibilidade de ocorrer eliminação do referido fungo via urinária. Arthrographis kalrae is a dimorphic fungus and an opportunistic human pathogen. The experimental models of infection with A. kalrae of Swiss and BALBc mice have demonstrated lesion in many organs (kidneys, liver, lungs, spleen and brain) and neurologic effect with behavior changes. Current research aimed to analyze behavior changes, level of infection and the humoral immune response of C57BL/6 mice, infected with A. kalrae, and also to evaluate the effect of coinfection of A. kalrae and the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis. Thirty-six C57BL/6 male mice were divided in six groups (n=6). Each group received, endovenously, 100 µL of PBS, with or without the fungi: Group 1 (control) sterile PBS; Group 2 P. brasiliensis (1x106 ), Group 3 A. kalrae (1x106 ); Group 4 A. kalrae (1x107 ); Group 5 A. kalrae (1x106 ); and P. brasiliensis (1x106 ); Group 6 A. kalrae (1x107 ) and P. brasiliensis, (1x106 ). After 21 days, the level of infection was evaluated by Colony Forming Units (CFU) of homogenates of organs (spleen, brain, heart, liver, lung, kidney) and additionally of some urine samples. Samples of the organs were histologically examined. The evaluation of humoral response was by the serum level of IgG anti-A. kalrae by ELISA. There were positive UFC in spleen, brain, heart, liver, lung and kidney, though without significant difference between groups (p > 0.05). Two urine samples had positive UFC, with morphological characteristics of A. kalrae. No mouse infected with A. kalrae presented behavior changes. Histology confirmed the presence of A. kalrae and A. kalrae + P. brasiliensis in the organs of mice mono and coinfected, respectively. ELISA resulted in a significantly higher level of IgG anti-A. kalrae in the group infected with A. kalrae 1x107 in comparison to 1x106 (p < 0.05), but without difference to the coinfected groups (p > 0.05). In conclusion, the C57BL/6 mouse is susceptible to the systemic infection with A. kalrae; notwithstanding, it is resistant to the behavior changes. The humoral immune response anti-A. kalrae in C57BL/6 mice depends on the concentration of the inoculated A. kalrae, but it is not affected by the coinfection with P. brasiliensis. Current research demonstrates, for the first time, the presence of A. kalrae in the urine of infected mice, which indicates the possible elimination of the fungus through the urinary tract.