Calogênese, isolamento e cutivo de protoplastos dos porta-enxertos de macieira M9 (Malus pumila) e marubakaido (Malus prunifolia)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais. No Brasil, a produção de maçãs está concentrada na região sul do país, e o Estado de Santa Catarina é responsável por cerca de 50% da oferta nacional. A cultura da macieira apresenta um panorama de crescimento com resultados altamente positivos nos últimos 30 anos. Porém, para a manutenção destes índices, os porta-enxertos devem ser adaptados às regiões de cultivo e ser resistentes aos principais problemas fitossanitários da cultura. Entretanto, os programas de melhoramento genético via hibridação sexual encontram limitações devido às características reprodutivas da macieira. A tecnologia de protoplastos para a hibridação somática constitui-se numa alternativa para contornar estas barreiras. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo eficiente de isolamento e cultivo de protoplastos de porta-enxertos de macieira M9 e Marubakaido, visando à hibridação somática. Uma série de experimentos foi realizada avaliando-se diferentes meios de cultura para a calogênese, metodologias de isolamento e formas de cultivo de protoplastos. Para a calogênese de folhas do cultivo in vitro dos dois porta-enxertos o meio MS com 30g.L-1 de sacarose, 17,76µM de BAP e 1,00µM de 2,4-D promoveu o maior índice de formação de calos compactos. Quando este meio suplementado com 30g.L-1 de maltose, ao invés de sacarose ocorreu a regeneração por organogênese direta dos explantes do porta-enxerto M9. Para a calogênese de nucelos dos dois porta-enxertos obteve-se uma alta percentagem de oxidação e não houve a formação de calos friáveis. Para a calogênese de anteras do porta-enxerto M9 o meio NN suplementado com 30g.L-1 de sacarose, 4,52 M de 2,4-D, 2,85 M de AIA e 4,56 M de KIN promoveu o maior índice de formação de calos friáveis, possibilitando o estabelecimento de suspensões celulares. Para o isolamento de protoplastos de mesofilo foliar de ambos os porta-enxertos e de calos e suspensões de anteras do porta-enxerto M9, o uso do meio KM para diluição da solução enzimática aliado ao tempo máximo de digestão de 8 horas, proporcionaram os maiores rendimentos e viabilidade dos protoplastos para todas as fontes de protoplastos avaliadas neste trabalho. O cultivo dos protoplastos em meio líquido resultou nos maiores valores de viabilidade promoveu os resultados mais consistentes, sendo esta considerada a fonte de explante mais promissora para futuros trabalhos. Os progressos alcançados neste estudo são pioneiros no Brasil para estes genótipos e os resultados obtidos contribuíram com informações técnicas relevantes que servem como base para os futuros estudos nesta área