Caracterización de bacteriófagos de flavobacterium psychrophilum: posible participación del profago 6h en cambios de susceptibilidad frente a la infección por fagos

Flavobacterium psychrophilum es una bacteria patógena de peces, que causa la"enfermedad de agua fría" o el "síndrome de alevines de salmónidos", frecuente en sitios de cultivos de salmónidos. La prevención y el tratamiento de la infección por F. psychrophilum espor lo tanto de alta prioridad en la acuicultura.La utilización de fagos para el control de bacterias patógenas (fagoterapia), especialmente para aquellas resistentes a antibióticos, es un método alternativo para el control de bacterias enacuicultura. Sin embargo, el uso efectivo de los bacteriófagos requiere de un mayorconocimiento debido a la diferencia de sensibilidad de las bacterias a la infección y a la diversidad genética y fenotípica de las bacterias resistentes a la infección en esta especie. Por este motivo, planteamos como hipótesis que existe una diferencia de sensibilidad entre cepas de F. psychrophilum frente a la infección por sus fagos, originada por diferentes propiedades.El objetivo general de esta Tesis fue examinar la diversidad de sensibilidad de distintas cepas de F. psychrophilum frente a la infección por sus fagos y elucidar posibles factores queintervienen en dicho evento. De esta manera, los primeros esfuerzos se orientaron hacia la caracterización de los bacteriófagos capaces de infectar F. psychrophilum para evaluar lafrecuencia de resistentes en pares fago/bacteria. De los fagos obtenidos, el aislado 6H presentó el rango de hospedero más amplio infectando 8 de las 49 cepas de F. psychrophilum aisladas en diferentes países: Chile, Dinamarca y USA Sin embargo, formó placas de lisis turbias en las cepas heterólogas (aquellas cepas de F. psychrophilum aisladas independientemente en que nofue seleccionado el fago 6H). Además, aunque en la cepa hospedera original MH1 forma placas claras, se observó un 2,5-5% de bacterias resistentes al infectar un cultivo líquido de esta cepa.Para una caracterización más detallada del fago 6H, se secuenció su genoma usando la técnica de "shotgun cloning". El número de posiciones nucleotídicas calculado para su genoma completo fue de 44.450 con 51 marcos de lectura abiertos (ORFs). La presencia de una región en el genoma ya secuenciado de la cepa virulenta F. psychrophilum JIP02/86 (ATCC 49511), 90% similar a la secuencia del fago 6H, indicó que un fago muy similar a 6H está presente como profago en esta cepa. La presencia de un ORF (ORF1) en el fago que codificaría para una integrasa refuerza la idea que el bacteriófago 6H es un fago temperado. La presencia de unprofago similar a 6H en otros aislados de F. psychrophilum obtenidos en Chile, Dinamarca y USA fue estudiada por PCR utilizando partidores para el gen de la integrasa, la proteína estructural que envuelve la cola y 2 proteínas hipotéticas. Los resultados mostraron que sobre el 80% de las cepas aisladas en Dinamarca y en Chile contenían uno o más de estos genes, indicando que probablemente el profago 6H pertenece a un grupo de fagos temperados que halisogenizado a un gran grupo de cepas.El rango de hospedero de los fagos aislados en Chile y Dinamarca fue evaluado contra 49 cepas de F. psychrophilum, provenientes de Chile, Dinamarca y USA Los resultados mostraronun rango de hospedero muy estrecho para los fagos aislados en Chile que raramente infectaron cepas diferentes a la utilizada para su aislamiento. Por el contrario, los fagos aislados enDinamarca mostraron un rango de hospedero más amplio infectando un 70% de todas lascepas probadas.El estudio de los aislados de bacterias resistentes provenientes de la cepa danesa 950106-1/1 después de infectar con los fagos entregó interesantes resultados. Todos los aisladosresistentes perdieron el profago 6H y algunas cepas, conjuntamente con la adquisición de resistencia, se hicieron sensibles a fagos para los cuales eran originalmente resistentes. De losaislados resistentes provenientes de la cepa de Dinamarca, un 25% se hizo sensible a la infección de uno o más fagos para los cuales la cepa original era resistente. Los resultados con las cepas chilenas fueron diferentes. Los aislados resistentes obtenidos después de infección con uno o más fagos, mantuvieron el profago 6H. Pero al igual que con las cepas danesas, unafracción (50% en este caso) adquirió sensibilidad a fagos para los cuales la cepa originaria es resistente. Nuestras observaciones sugieren que la sensibilidad y resistencia a acteriófagos está relacionada con varias propiedades, entre las que la presencia del profago 6H podría ser un factor determinante. Doctor en Microbiología TERMINADA PFCHA-Becas 83p. PFCHA-Becas