Production and application of anti-nucleoprotein IgY antibodies for influenza A virus detection in swine

Os anticorpos são importantes ferramentas em testes de diagnóstico. A utilização de anticorpos IgY apresenta diversas vantagens em relação aos anticorpos de mamíferos e vários estudos mostram sua aplicação em técnicas de imunodiagnóstico. Assim, esse trabalho teve como objetivo produzir anticorpos IgY anti-nucleoproteína do vírus influenza A (IAV) e avaliar sua aplicação na detecção do vírus IAV por imunocitoquímica (ICQ) e imunohistoquímica (IHQ). Para tanto, galinhas poedeiras da linhagem White Leghorn foram inoculadas com 20 µg da nucleoproteína (NP) nos dias 1, 14, 28, 42, 84, 126 e 168 do experimento. Sete dias após a 3ª, 5ª e 7ª inoculação, os ovos foram coletados e os anticorpos IgY foram extraídos por precipitação com sulfato de amônio. Os títulos e a especificidade dos anticorpos purificados foram determinados por ELISA, western blotting, ICC e IHC. As galinhas poedeiras inoculadas com a proteína NP produziram altos níveis de anticorpos específicos anti-NP após a 7ª inoculação. Além disso, foi detectada uma coloração positiva em células MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) infectadas com IAV e incubadas com anticorpo IgY anti-NP. No entanto, em tecidos pulmonares de suínos infectados não foi observada nenhuma coloração através do teste IHC. Os dados obtidos mostraram que os anticorpos IgY anti-NP purificados das gemas de ovos se ligam especificamente ao IAV, com o reconhecimento dos principais subtipos de vírus circulantes em suínos (H1N1, H1N2 e H3N2), reforçando sua utilidade no diagnóstico de IAV. Antibodies are important tools in diagnostic tests. The use of IgY antibodies present several advantages over mammalian antibodies and studies show its application in immunodiagnostic techniques. Thus, this work aimed to produce anti-nucleoprotein IgY antibodies from the influenza A virus (IAV) and to evaluate its application in the detection of IAV virus by immunocytochemistry (ICQ) and immunohistochemistry (IHC). For the study, laying hens of the White Leghorn line were inoculated with 20 ?g of the nucleoprotein (NP) on days 1, 14, 28, 42, 84, 126 and 168 of the experiment. Seven days after the 3rd, 5th, and 7th inoculation the eggs were collected and the IgY antibodies were extracted by precipitation with ammonium sulfate. The titers and specificity of the purified antibodies were determined by ELISA, western blotting, ICC and IHC. Laying hens inoculated with NP protein produced high levels of anti-NP specific antibodies after the 7th inoculation. In addition, a positive staining in IAV-infected MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) cells incubated with anti-NP IgY antibody was detected. However, no staining was observed in lung tissues from infected swine through the IHC test. The data obtained showed that anti-NP IgY antibodies purified from eggs yolks bound specifically to IAV, with the recognition of the main virus subtypes circulating in swine (H1N1, H1N2, and H3N2), reinforcing their usefulness in the diagnosis of IAV.