人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序

【目的】用RT-PCR 法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列, 并建立优化方法。【方法】 从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA , 自行设计引物, 采用两步RT-PCR 法扩增出长约1 550 bp 的基因片断, 凝胶回收后与高 效克隆PCR 产物的新型载体T-载体连接, 并转化入大肠杆菌, 通过蓝白斑反应筛选出重组体, 质粒提取后进行重组体的酶切 鉴定及基因测序。【结果】BamH Ⅰ 和Hin dⅢ 酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接, 基因测序证实了所克隆的 片断为人AADC 基因。【结论】本实验通过对引物, Taq 酶的选择及反应条件的优化, 保证了扩增的有效性和特异性。新型 的克隆载体明显提高了克隆效率。基因测序证实了AADC 基因扩增的成功。本研究为AADC 基因治疗帕金森病等多巴胺能 缺乏疾病的研究打下了基础。