Structure, mécanisme et applications du ribozyme delta

Le virus de l'hépatite delta humaine possède un génome d'ARN circulaire simple brin de 1,7 kb. Durant sa réplication en cercle roulant, la coupure des copies multimériques en monomères est assurée par la présence de motifs autocatalytiques sur la molécule ( cis ). À partir de la séquence du motif autocatalytique antigénomique, il a été possible de générer un système où le ribozyme delta (domaine catalytique) a la capacité de couper un substrat en trans. L'activité catalytique des acides ribonucléiques (ARN) lui est assurée par sa structure tridimensionnelle dynamique. Les groupements 2'-OH sont parmi les artisans permettant l'adoption de la structure active et la catalyse. Ainsi, nous avons développé différents systèmes permettant d'étudier leur importance. Une première stratégie basée sur la synthèse d'oligonucléotides mixtes (ARN/ADN) a été développée. Limité par la longueur maximale de synthèse (40 nucléotides) des ribozymes mixtes ARN/ADN, le développement d'un ribozyme bimoléculaire a été nécessaire. Ce ribozyme bimoléculaire a permis l'identification d'un important groupement 2'-OH dans la catalyse par le ribozyme delta. Par contre, ce système possède des paramètres cinétiques différents du ribozyme delta unimoléculaire suggérant des différences dans l'adoption de leur structure active. Grâce à l'avancement de la technologie de la synthèse d'oligonucléotides mixtes (ARN/ADN), une seconde approche plus globale et rapide a été mise au point. Un ribozyme mixte contrôle composé de 26 désoxyribo- (spécialement les nucléotides des deux tiges structurales) et de 31 ribonucléotides (nucléotides formant le site catalytique) a été crée. Ce nouveau ribozyme mixte permet la coupure d'un petit substrat avec des paramètres cinétiques virtuellement identiques à ceux du même ribozyme constitué uniquement de ribonucléotides. Ainsi, par le remplacement de certains ribonucléotides (2'-OH) par des désoxyribonucléotides (2'-H), il a été possible d'établir la contribution des 57 gr