Využití imobilizovaného lysozymu pro fragmentaci bakteriálních buněk pro MS analýzu

V rámci diplomové práce byla optimalizována metoda stanovení aktivity lysozymu v mikrotitrační destičce pomocí substrátu Micrococcus luteus, přípraven magnetický nosič s imobilizovaným lysozymem, stanovena operační a skladovací stabilita tohoto imobilizovaného lysozymu a připravený nosič byl využit pro fragmentaci bakteriálních buněk pro jejich snazší identifikaci pomocí hmotnostní spektrometrie. K přípravě magnetického nosiče byly vybrány částice s hydroxylovými a karboxylovými funkčními skupinami. Pro fragmentaci buněk byly využity částice s hydroxylovými funkčními skupinami. U těchto částic byla také stanovena operační a skladovací stabilita imobilizovaného lysozymu s pomocí fluorescenčního substrátu 4-methylumbelliferyl-β-D-N,N',N''-triacetylchitotriosidu. Vedle lysozymu byl k fragmentaci buněčné stěny využíván také roztok acetonitrilu s kyselinou trifluoroctovou. Výsledky fragmentace byly ověřovány elektroforeticky a pomocí MALDI – TOF MS.
Within this thesis the method for the determination of lysozyme activity in a microtiter plate with the substrate Micrococcus luteus has been optimized, magnetic carriers with immobilized lysozyme were prepared, operational and storage stability of the immobilized lysozyme were determined and subsequently prepared carrier was used for the fragmentation of bacterial cells for their easier identification by mass spectrometry. Particles with the hydroxyl and carboxyl functional groups were selected for preparation of the magnetic carrier with immobilized lysozyme. Particles with hydroxyl functional groups were used for the fragmentation of cells. The operational and storage stability of the immobilized lysozyme for these particles was determined by using the fluorescent substrate 4-methylumbelliferyl-β-DN,N',N''-triacetylchitotriosid. Acetonitrile solution with trifluoroacetic acid was, in addition to the lysozyme, also used for fragmentation of the cellular walls. Efficiency of fragmentation was verified by electrophoresis and MALDI – TOF MS.
Katedra biologických a biochemických věd
1. Prezentace výsledků diplomové práce 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP