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RESUMO: O Hialuronano (ou Ãcido Hialurónico) é um glicosaminoglicano presente na matriz intersticial do pulmão. sendo produzido por fibroblastos após diversos estímulos inflamatórios. O seu aumento no lavado broncoalveolar (LBA) tem sido descrito em diversas patologias pulmonares humanas e experimentais que evoluem para a fibrose e relacionado com a activação de fibroblastos. Objectivos: Partindo da hipótese de que a activação de fibroblastos acompanha o recrutamento intersticial de linfócitos T citotóxicos e de mastócitos na Suberose, caracteristicamente observados nas formas de Pneumonite de Hipersensibilidade (P.H.), medimos os niveis de hialuronano (RA) no LBA de 31 doentes com queixas respiratórias associadas à exposição ocupacional na indústria da cortiça. Tentámos, também, relacionar os niveis de HA no LBA com a intensidade do envolvimento intersticial, avaliado pelas características da alveolite e a detioração funcional respiratória. Doentes e Métodos: 31 doentes estudados por história clínica e ocupacionaJ, exame fisico, telerradiografia de tórax, pletismografia corporal espirometria, difusão de CO, gasometria arterial em repouso e broncofibroscopia com lavagem broncoalveolar. A classificação dos doentes- 20 com P.H., 8 com asma brônquica e 3 com bronquite crónica - foi feita de acordo com criterios clinicos, funcionais e da análise do líquido de lavagem broncoalveolar. O hialuronano no LBA foi quantificado por método radiométrico e a contagem celular diferencial e de mastócitos foi realizada em esfregaços de citocentrifuga. A Albumina e lgG no LBA foram medidas por nefelometria cinética. Principals Resultados: Os niveis de HA no LBA estavam significativamente mais elevados no grupo com P.H., com uma mediana (e âmbito interquartis) de 67,1 μg/L (33,7-111,5) versus 22,7μg/L (12,8-40,7) nos casos com doença obstrutiva das vias aéreas (p

RESUMO: A apoptose, ou morte celular programada, é um processo ubiquitário de morte celular com características morfológicas próprias, cujos mecanismos básicos parecem estar preservados desde os invertebrados. Após a sua descrição em tumores, há mais de 20 anos, numerosos estudos têm implicado a apoptose em múltiplos aspectos do funciona-mento do sistema imunológico, da resposta inflamatória, no controle da replicação vírica e do crescimento tumoral. Sabe-se hoje, também, que o produto de diversos genes tumorais supressores e de oncogenes regulam a apoptose e que a eficácia de muitas terapêuticas anti-tumorais depende da sua indução nas células neoplásicas. O autor aborda os principais aspectos morfológicos e bioquímicos da apoptose e as suas implicações num melhor conhecimento da biologia celular e molecular do pulmão em patologia inflamatória, infecciosa e tumoral. SUMMARY: Apoptosis, or programmed cell death, is a general and physiologic mechanism of cell death, with distinct morphological characteristics, whose basic mechanisms may be conserved in evolution since invertebrates. Since its description in tumours, over 20 years ago, a large number of investigations have implied apoptosis in several aspects of immunology, of the inflammatory response and in the control of viral replication and tumour growth. It is now well established that the products of several tumour supressor genes and oncogenes regulate a poptosis, and that the success of several anti-cancer treatments depend on apoptosis induction in tumour cells. The author addresses the basic morphological and biochemical characteristics of apoptosis and its impact in the understanding of the cellular and molecular biology of lung inflammatory, infectious and tumoural pathology.

Introdução: A susceptibilidade genética na ocorrência da sarcoidose é sugerida por alguns factores, nomeadamente pela observação de casos de agregação familiar e a associação da raça a diferentes tipos de incidência e gravidade da doença. Vários estudos têm evidenciado a associação da classe I e especialmente da classe II do sistema HLA com a susceptibilidade à sarcoidose. Objectivos: Estudo dos polimorfismos genéticos da classe I e II do sistema HLA e do TNF -á num grupo de doentes com sarcoidose, nomeadamente a sua influência na susceptibilidade, apresentação clínica e evolução da doença. Material e métodos: Foram incluídos 104 doentes com sarcoidose, tendo sido estudadas a apresentação clínica, funcional, radiológica e os resultados do LBA. Foram usados métodos de biologia molecular na genotipagem do HLA -A*, B*, C*, DRB1*, DQB1* e TNF -á. O ADN foi extraído do sangue periférico e foram usados os métodos PCR -SSP e PCR -reverse hibridization. As frequências alélicas foram comparadas com controlos da mesma região geográfica pelo teste ÷2, sendo usado o teste Kruskal -Wallis para variáveis contínuas. Resultados: Comparativamente com os controlos, os doentes incluídos apresentavam frequências aumentadas de: B*08 (10,6% vs 6,1%), OR=1,8, IC=[1,1;3,1], p=0,02; DRB1*12 (4,3% vs 1,7%), OR=2,63, IC=[1,1;6,1], p=0,03. Os doentes com eritema nodoso apresentaram aumento das frequências alélicas de DRB1*03 (28% vs 9,3%), RR=2,39, IC=[1,5;3,8], pc=0,01 e DQB1*02 (38% vs 18%), RR=2,1, IC=[1,3;3,3], pc=0,02. O alelo DQB1*03 está diminuído nos doentes que apresentam síndroma ventilatória obstrutiva, RR=0,53, IC=[0,3;0,9],pc=0,05. O alelo DRB1*15 encontra -se significativamente associado quer à síndroma ventilatória restritiva quer à diminuição da transferência alveolocapilar (21,1% vs 6,6%), RR=2,46, IC=[1,35;4,48], p=0,01 e (18,1% vs 3,8%), RR=1,87, pc=0,05, respectivamente. Por sua vez, o genótipo A/A (high) do TNF -á apresentou uma frequência aumentada (p=0,04) nos doentes com eritema nodoso. Conclusões: Os resultados obtidos adicionam evidência ao facto de, quer a classe I quer a classe II do sistema HLA influenciarem a susceptibilidade, o tipo de apresentação, o grau de gravidade e a evolução na sarcoidose. Por outro lado, o eritema nodoso parece relacionar -se com o genótipo de elevada produção de TNF -á, associação esta já anteriormente descrita.Introduction: Several factors suggest a genetic predisposition to sarcoidosis, namely the recognition of race as a risk factor and the occurrence of familial clustering of cases. Several studies have reported an association of sarcoidosis and HLA class I and especially class II alleles in different populations. Aim: HLA class I, class II and TNF-á genotyping in a group of sarcoidosis patients and its relation with clinical presentation and outcome. Material and methods: A total of 104 sarcoidosis patients were included. Clinical presentation, functional, radiology, BAL findings and organ involvement were studied. HLA- A*, -B*, -C*, DRB1*, DQB1* and TNF-á were genotyped by molecular biology methods. DNA was extracted from peripheral blood and PCR-SSP and PCR-reverse hybridisation methods were used. Allele frequencies were compared with controls from the same region. The X2 test was used for discrete values and the Kruskal-Wallis test for continuous values. Results: When patients were compared with controls we noticed increased frequencies of B*08 (10.6% vs. 6.1%), O.R.=1.8, C.I.=[1.1;3.1], p=0.02; DRB1*12 (4.3% vs. 1.7%), O.R.=2.63, C.I.=[1.1;6.1], p=0.03. Patients with erythema nodosum have increased frequencies of the alleles DRB1*03 (28% vs. 9.3%), R.R.=2.39, C.I.=[1.5;3.8], pc=0.01 and DQB1*02 (38% vs. 18%), R.R.=2.1, C.I.=[1.3;3.3], pc=0.02. Allele DQB1*03 is decreased in patients with obstructive pattern R.R.=0.53, C.I.=[0.3;0.9], pc=0.05. Allele DRB1*15 is related to restrictive pattern and reduced diffusion capacity (21.1% vs. 6.6%), R.R.=2.46, C.I.=[1.35;4.48], p=0.01 and (18.1% vs. 3.8%), R.R.=1.87, pc= 0.05 respectively. The TNF-á A/A (high) genotype is significantly associated with erythema nodosum (p=0.04). Conclusions: These data add support to the genetic association of HLA class I and II with sarcoidosis in terms of susceptibility, type of presentation, severity and outcome. Moreover as previously described in other populations, the TNF-á A/A (high) genotype has a significant association with erythema nodosum.

A coordenação das características humorais e celulares da resposta alérgica, sabe-se hoje, está dependente da regulação por linfócitos T. As vacinas de alergénios são uma terapêutica que consegue modular a resposta das células T, e cujos mecanismos imunológicos permanecem incompletamente esclarecidos. Objectivo: Avaliar o efeito da imunoterapia, após um ano de tratamento, na expressão de citocinas de perfil T1 e T2 em linfócitos de sangue periférico de doentes atópicos. Material e métodos: Estudaram-se dez doentes atópicos sensibilizados a aeroalergénios comuns a fazerem vacinas de alergénios num período médio de um ano. Dentre estes, seis foram estudados antes e após a vacina. Como controlo estudou-se um grupo atópico sem imunoterapia constituído por 14 doentes também sensibilizados a aeroalergénios comuns e um grupo de indivíduos não atópicos, saudáveis, constituído por 7 elementos. A activação dos linfócitos T fez-se com PMA, ionomicina e brefeldina e estudaram-se as citocinas intracitoplasmáticas IFN-g, IL-4, IL-5 e IL-10 por citometria de fluxo. Procedeu-se a análise estatística por testes não paramétricos (Teste de Mann-Whitney U e Wilcoxon), considerando-se significativo p£0,05. Resultados: A expressão de IL-4 e IL-5 nas células T, caracteristicamente aumentada nos doentes atópicos, respectivamente 13,8 (3,1-31,8) e 6,7% (1,0-20,4), é significativamente mais baixa no grupo que realizou a imunoterapia [5,4 (2,9-15,6) p= 0,007 e 2,1% (0,6-4,8) p=0,035] não diferindo do grupo controlo não atópico [5,1 (4,1-6,9) e 1,0 (0,4-2,1)]. Os níveis de IFN-g não variaram significativamente entre os três grupos estudados, mas a razão IFN-g//IL-4 nos linfócitos T CD4 aumentou significativamente nos doentes submetidos a imunoterapia. Por outro lado, houve um aumento da expressão de IL-10 nas células T circulantes do grupo sob imunoterapia, comparativamente a controlos não atópicos [1,9 (1,0-4,9) versus 1,4% (0,9-1,4) p=0,02], sendo mais evidente nos linfócitos T CD8. A IL-10 correlacionou-se de forma significativa com todas as citocinas de perfil T2 (IL-4 e IL-5) e com o fenótipo Tc2. Conclusão: Após um ano de imunoterapia, a resposta das células T do sangue periférico a uma estimulação policlonal evidenciou uma diminuição da expressão das citocinas (IL-4 e IL-5), caracteristicamente aumentadas na doença alérgica. O aumento da IL-10, que também verificámos, sugere a existência de uma população reguladora de perfil T2, sendo mais evidente nos linfócitos T CD8.Allergen-specific immunotherapy has been used for successful treatment of atopic diseases. They may act by modifying the patterns of cytokines produced by T cells. However, the precise mechanism by which it accomplishes these effects is still incompletely understood. Objective: To evaluate the effect of one year immunotherapy on cytokines profiles T1 and T2 of peripheral blood lymphocytes in atopic patients. Methods: We studied 10 atopic patients sensitised to common environmental allergens receiving immunotherapy over one year mean period. Six of these patients were studied before and after immunotherapy. Fourteen atopic patients untreated and 7 non-atopic subjects were used as control groups. Intracellular cytokine production (IFN-g; IL-4; IL-5; IL-10) was determined by flow cytometry following stimulation with phorbol myristate acetate (PMA), ionomycin and brefeldin. Mann-Whitney U and Wilcoxon non-parametric tests were utilized for the statistical analysis. Results: The expression of IL-4 and IL-5 in T cells, characteristically increased in atopic patients, respectively 13.8 (3.1 31.8) and 6.7% (1.0 -20.4), was significantly lower in the immunotherapy group [5.4 (2.9 -15.6) p=0.007 and 2.1% (0,6 4.8) p=0.035] and similar in the non-atopic control group. The levels of IFN-g did not differ between the studied groups but the ratio IFN-g / IL-4 produced by CD4+ T lymphocytes increased significantly in the patients receiving immunotherapy. In addition, there was an increase in the expression of IL-10 by T cells of the immunotherapy group compared to the non-atopic controls [1.9 (1.0 4.9) versus 1.4% (0.9 1.4) p=0.02], being more evident in CD8+ T lymphocytes. IL-10 correlated significantly with all the profile T2 cytokines (IL-4 and IL-5) and with the phenotype Tc2. Conclusion: After one year of immunotherapy the peripheral T cells response to a polyclonal stimulation revealed a reduction in IL-4 and IL-5 production, characteristically increased in atopic disease. The increase of IL-10 that we found in our study suggested the existence of a profile T2 regulatory population, more evident in CD8+T lymphocytes.

RESUMO: A lavagem broncoalveolar é um método largamente utilizado no estudo da patologia pulmonar. Nas doenças intersticiais, a análise da lavagem broncoalveolar fornece, com frequência, informações relevantes para o diagnóstico, orientação terapêutica, prognóstico e interpretação etiopatogénica das mesmas. Os autores abordam a técnica e metodologia do processamento da lavagem broncoalveolar, as suas principais indicações clínicas e os achados mais característicos em diferentes patologias pulmonares. SUMMARY: Bronchoalveolar lavage is a technic widely used in the study of pulmonary diseases. In interstitial lung diseases, its analysis reveals useful information for diagnosis, therapeutic orientation, prognosis and ethiopathogenic interpretation. The authors resume the technic and methodology of processing bronchoalveolar lavage, its indications, and the most characteristic findings in different pulmonary diseases. Palavras-chave: lavagem broncoalveolar, broncofibroscopia, citometria de fluxo, doenças pulmonares intersticiais, Key-Words: bronchoalveolar lavage, bronchofiberoscopy, flow cytometry, interstitial lung diseases