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Pretende-se problematizar a relação do povo indígena Pataxó (sul da Bahia) com a política pública de Assistência Social (AS). Para tanto, a análise incidirá sobre o trabalho social dos Centros de Referência em Assistência Social (CRAS) das cidades de Prado e Porto Seguro, que abarcam territórios reconhecidos pelo Estado como “Terra Indígena” e outras áreas categorizadas pelos indígenas como de “retomada”. Os CRAS são unidades estatais descentralizadas formalmente responsáveis pela organização e oferta dos serviços socioassistenciais cujo objetivo é prevenir a ocorrência de situações de vulnerabilidades e riscos sociais em seus respectivos territórios de abrangência. Ocorre que as noções indígenas de território têm pouca (ou nula) incidência na efetivação desta política pública, comprometendo os direitos à autonomia e protagonismo dos chamados “usuários”, contrariando a Constituição Federal e a legislação infraconstitucional. A apresentação tem como base dados coletados durante trabalho de campo realizado, no ano de 2014, para o Governo Federal.

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: O enovelamento incorreto de proteínas pode ocasionar diversas doenças e até mesmo o envelhecimento. Ele pode levar à perda de função das proteínas ou acarretar na formação de agregados proteicos amiloidogênicos, os quais estão envolvidos com diversas doenças. Para se proteger desses agregados, diversos organismos expressam chaperonas moleculares da família Hsp100 (ClpB em bactéria, Hsp104 em levedura e Hsp101 em plantas, por exemplo), que são capazes de desagregar outras proteínas levando à reativação das mesmas. Surpreendentemente, metazoários não possuem um gene para a família da Hsp100. Contudo, estudos recentes mostraram que a co-chaperona Hsp110 tem função desagregase. Dessa forma, o objetivo desta dissertação é caracterizar a HSPH1, uma co-chaperona Hsp110 humana, através da expressão, purificação e caracterização da sua relação estrutura e função. O gene hsph1 clonado no vetor pPROEX-Htb foi expresso na forma solúvel em Escherichia coli (E. coli) BL21(DE3) e a proteína recombinante foi purificada em duas etapas cromatográficas, afinidade e exclusão por tamanho. As análises de espectropolarimetria de dicroísmo circular (CD) determinaram que a HSPH1 foi expressa e purificada enovelada e estável, com estrutura secundária predominante do tipo hélice ?, conservada até 48 ºC e na presença de ureia 3 mol/L. Além disso, a análise da emissão de fluorescência indicou que pelo menos um dos resíduos de triptofano se encontra parcialmente localizado no interior da proteína enovelada. As propriedades hidrodinâmicas (massa molecular, coeficiente de difusão e raio de Stokes), obtidas através das técnicas de cromatografia de gel filtração analítica (GFA), cromatografia de exclusão por tamanho acoplada ao detector multiângulo (SEC-MALS) e espalhamento de luz dinâmica (DLS), mostraram que a HSPH1 se comportou como um monômero com conformação alongada. Finalmente, os experimentos funcionais mostraram que a proteína possui atividade chaperona seletiva, sendo capaz de proteger de maneira diferente proteínas-cliente contra a agregação. Os resultados obtidos têm potencial para acrescentar significativamente ao conhecimento sobre a homeostase proteica na célula, podendo gerar insumos que tenham aplicação médica e biotecnológica Abstract: The incorrect protein folding can cause many diseases and even aging. It can lead to loss of function or to the formation of protein amyloid aggregates, which are involved in several diseases. In order to protect from these aggregates, many organisms express the Hsp100 chaperone (ClpB in bacteria, Hsp104 in yeast and Hsp101 in plants), which is able to disaggregate other proteins leading to their reactivation. Surprisingly, metazoa does not have a gene for the Hsp100. Nevertheless, recent studies have suggested that Hsp110 co-chaperone have disaggregation function. Thus, the aim of this dissertation is to characterize HSPH1, a human Hsp110 co-chaperone, by expressing, purifying and performing structure and functional characterization. The hsph1 gene in pPROEX-Htb vector expressed a soluble protein into Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) and two chromatography steps were used to purify de protein (affinity chromatography followed by size exclusion chromatography). Circular dichroism (CD) and fluorescence emission spectroscopy assays showed that HSPH1 was expressed and purified as a folded and stable protein, with ? helical content of about 34% and it kept its secondary structure content up to about 48 °C and 3 mol/L of urea. Analysis of the emission fluorescence spectroscopy indicated that at least one of the tryptophan residues was partially buried in the native protein. Hydrodynamics properties (molecular mass, diffusion coefficient and Stokes radius) obtained from analytical gel filtration (AGF), size exclusion chromatography combined with multi-angle light (SEC-MALS) and dynamic light scattering (DLS) techniques results suggested that HSPH1 was an elongated monomer. Functional experiments showed that the protein has selective chaperone activity with different protection effects depend on the client-protein tested. The results have the potential to increase significantly the knowledge about protein homeostasis in the cell, which can generate inputs that have medical and biotechnological application Mestrado Química Orgânica Mestra em Química FAPESP 2016/04246-2 CNPQ

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: As proteínas estão envolvidas com as mais diversas funções biológicas. No entanto, para realizar sua função adequadamente, uma proteína deve estar enovelada, ou seja, em sua conformação nativa. Para garantir isso, existe nas células, um elaborado sistema que envolve chaperones moleculares, capaz de auxiliar na prevenção do enovelamento incorreto e da agregação de proteínas Chaperones, de uma maneira geral, são proteínas que ligam e estabilizam polipeptídeos, facilitando seu enovelamento correto sem contribuir com informações conformacionais. O aumento no número de doenças provocadas pelo enovelamento incorreto de proteínas que se depositam nos tecidos na forma de amilóides (também chamadas de doenças conformacionais), tem chamado a atenção para estudos de agregados protéicos, que outrora foram considerados artefatos quando se trabalhava com esse tipo de macromolécula. Nesse sentido, o estudo de chaperones tem ganhado um interesse particular, já que são fortes candidatos ao combate de doenças amiloloidogênicas. Neste trabalho, são apresentados estudos sobre duas famílias de chaperones, a Hsp40 da subfamília A humana e duas sHsps de classe I de cana-de-açúcar, as quais estão envolvidas com o reconhecimento e a apresentação de substratos (proteínas parcialmente desenoveladas) para outras famílias de chaperones responsáveis pelo processo de reenovelamento. Essas duas famílias de chaperones em particular são também conhecidas como 'holdases¿, e são muito diversas, característica necessária para interagir com a grande diversidade de substratos em potencial que existe na célula. As duas sHsps estudadas aqui, as mais expressas em cana-de-açúcar, e a caracterização de suas estruturas e suas eficiências como chaperones, tornou possível a elaboração de uma hipótese sobre o mecanismo de ação dessas proteínas em função do aumento de temperatura. Nesse sentido, é mostrado neste trabalho que sHsps, respondem ao aumento de temperatura passando por expansão conformacional, provavelmente para aumentar a superfície hidrofóbica para a interação com os substratos. O efeito do calor sobre a Hsp40 também foi estudado e os resultados mostraram que essa proteína forma agregados com propriedades amiloidogênicas. Esta é a primeira vez que tais características são descritas para um chaperone de eucarioto. De maneira geral, as implicações dos resultados apresentados aqui podem aumentar o conhecimento geral sobre chaperones e sobre a pesquisa de tratamentos para as doenças conformacionais Abstract: Proteins are involved with a large variety of biological functions. However, to function properly, proteins must be folded, i.e., they must reach their native conformation. According to that, an elaborated system involving molecular chaperones exists in the cell that helps to prevent the incorrect folding of proteins and also their aggregation. Chaperones, in a general way, are proteins that bind and stabilize polypeptides, facilitating its correct folding without contributing with conformational information. The increasing number of diseases caused by the incorrect folding of proteins that deposit in the form of amyloids (also called conformational diseases) has raised the interest in the study of protein aggregates, which, not long ago, where considered just purification artifacts. In this way, the study of chaperones has gained particular interest because they are potential candidates against amyloidogenic diseases. In this work, we present studies on two families of chaperones, a human Hsp40 from subfamily A and two sugar cane sHsps from class I, which are involved in substrate (partially unfolded proteins) recognition and presentation to other chaperone families that are more active in the protein refolding process. These particular chaperones are also know as 'holdases¿ and they are usually diverse, a characteristic necessary to interact with a large variety of substrate in the cell. The two sHsps studied here are the most expressed in sugar cane and their structure and chaperone efficiency characterization made possible to elaborate a hypothesis on the mechanism of action of these proteins when temperature increases. In that matter, we were able to show that sHsps respond to an increase in temperature by undergoing conformational expansion, likely to increase the hydrophobic area for substrate interaction. The effect of heat on Hsp40 has also been studied and our results showed that this protein form aggregates with amyloidogenic properties. To our knowledge, this is the first time that such characteristics are described for an eukaryotic chaperone. To sum up, we believe that the implications of the results shown here may add to the general knowledge on chaperones and to the search of a treatment for conformational diseases Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular