Search

Dissertação de Mestrado em Química Medicinal apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia As infeções por microrganismos multirresistentes (MDR) são um dos grandes desafios para os sistemas de saúde e para as empresas farmacêuticas e prevê-se que este problema aumente, consideravelmente, ao longo das próximas décadas. A Organização Mundial da Saúde (OMS) informou que podemos retornar à época onde infeções comuns e ferimentos leves podem matar, causando consequências desastrosas ao longo da vida. Existe, assim, uma necessidade urgente de uma nova classe de antibióticos ou de um novo tratamento que seja eficaz contra as espécies multirresistentes. As infeções podem ser causadas por diferentes tipos de microrganismos, como bactérias, vírus, fungos ou parasitas. Do ponto de vista biológico, as bactérias podem ser dividas em dois grupos, as gram-positivas ou as gram-negativas. Estes dois grupos possuem diferenças nas suas paredes celulares. Uma grande parte dos estudos de terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) são realizados com bactérias na forma planctónica, contudo as bactérias persistem em ecossistemas de biofilmes e raramente em culturas de uma única espécie. Nos biofilmes, os microrganismos são notavelmente menos suscetíveis aos antimicrobianos em comparação com os seus homólogos planctónicos. Para além das infeções causadas por células bacterianas, os vírus são muito abundantes e podem ser encontrados em uma ampla variedade de formas. Eles têm a capacidade de infetar células eucarióticas ou procarióticas para forçá-las a produzir milhares de cópias do vírus infetante. A terapia fotodinâmica antimicrobiana surgiu, deste modo, como uma proposta promissora para o tratamento de infeções localizadas, especialmente infeções cutâneas ou mucosas. A terapia fotodinâmica (PDT) consiste na administração de um medicamento ou de um corante não tóxico, designado como fotossensibilizador (PS, do inglês photosensitizer). Após um determinado intervalo de tempo, a lesão é iluminada com luz visível, com um comprimento de onda específico absorvido pelo PS administrado. O PS após absorver a luz fica num estado eletrónico excitado e reage com moléculas de oxigénio levando à formação de espécies reativas de oxigénio (ROS). O objetivo deste trabalho consistiu em avaliar o potencial de uma clorina catiónica como possível fotossensibilizador em terapia fotodinâmica antimicrobiana. Primeiramente, foi avaliada a capacidade deste composto em reduzir a carga viral, em células HEK que expressam o recetor ACE2 e que se encontram infetadas com partículas lentivirais pseudotipadas, garantindo a viabilidade celular destas células. Numa das experiências, o fotossensibilizador foi ativado juntamente com o vírus e só depois foi adicionado às células. Nesta experiência, verificou-se que ocorria uma redução de cerca de 50 % da carga viral em condições que eram mantidas a viabilidade celular. Numa segunda condição, as células foram incubadas com o vírus e com o PS e só depois ocorreu a irradiação diretamente nas células. Nas condições de realização deste ensaio, a viabilidade celular após tratamento foi muito baixa e é necessário a realização de um novo ensaio de forma a garantir condições em que haja viabilidade celular elevada. Numa segunda parte do trabalho, o objetivo consistiu em avaliar a atividade do fotossensibilizador para iluminação de bactérias gram-positivas e gram-negativas na forma planctónica e na forma de biofilmes, garantindo sempre, condições de viabilidade celular para as células hospedeiras. Os resultados obtidos mostram que com apenas 0,3 µM de fotossensibilizador, incubado por 1 hora e com apenas 5 J/cm2 já é possível obter uma redução de 3 log de CFU/ml nas bactérias S. aureus, enquanto que com as E. coli são precisos 0,4 µM de fotossensibilizador para se verifica esta redução.Nos biofilmes, a redução de pelo menos 3 log de CFU/ml só foi atingida usando uma concentração de 50 µM com 1h de incubação e 4 J/cm2. Por fim, com 10 µM de PS foi realizado um estudo para verificar se o tempo de incubação tinha influência e verificamos que ao aumentar o tempo de incubação do fotossensibilizador em contacto com o biofilme antes da irradiação, a inativação era maior. Infections by multidrug-resistant microorganisms (MDR) are a major challenge for health systems and pharmaceutical companies, and this problem can be expected to increase considerably over the coming decades. The World Health Organization (WHO) has reported that we can return to a time when common infections and infectious diseases can kill. There is thus an urgent need for a new class of antibiotics or a new treatment that is effective against multidrug-resistant species. Infections can be sensitive to different types of microorganisms such as bacteria, viruses, fungi, or parasites.From a biological point of view, bacteria can be divided into two groups: gram-positive or gram-negative. These two cell groups have differences in their walls. A large part of the studies done on antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) is carried out with bacteria in planktonic form, but persistent bacteria form biofilm ecosystems and rarely of a single species. In biofilms, bacteria are notably less accessible to antimicrobials compared to their planktonic counterparts.In addition to very flexible bacterial cell infections, viruses are plentiful and can be found in a variety of forms. They all have the common ability to infect eukaryotic or prokaryotic cells and force them to produce copies of infective viruses.Antimicrobial photodynamic therapy has emerged as a promising proposal for the treatment of localized infections, especially skin infections or infections of mucous membranes. Photodynamic therapy (PDT) consists of the administration of a drug, which is a non-toxic dye called a photosensitizer (PS). After a certain time, the lesion is illuminated with visible light, with a specific wavelength absorbed by the administered PS. The PS after absorbing light is in an excited oxygen state and reacts with oxygen molecules, forming reactive oxygen species (ROS).The objective of this work is to evaluate the potential of a cationic chlorin as a possible photosensitizer in antimicrobial photodynamic therapy. First, the ability of this compound to reduce viral load was evaluated in HEK cells that express the ACE2 receptor and that are infected with pseudo typed lentiviral particles, guaranteeing the cell viability of these cells. In one of the experiments, the photosensitizer was activated together with the virus and only then was it added to the cells. In this experiment, a reduction of about 50% in viral load was found to occur under conditions that maintained cell viability. In a second condition, the cells were incubated with the virus and with the PS, and the irradiation occurred directly in the cells. Cell viability was low in this assay, and it is necessary to carry out new experiments to guarantee conditions in which cell viability is high.In a second part of the work, the objective was to evaluate the activity of the photosensitizer towards gram-positive and gram-negative bacteria in planktonic and biofilm form, always ensuring cell viability conditions for the human cells. The results show that it is possible to obtain a reduction of 3 log CFU/ml in S. aureus bacteria with only 0.3 µM of photosensitizer, incubated for 1 hour, and with only 5 J/cm2, whereas in E. coli, 0.4 µM of photosensitizer is required to verify this reduction.In biofilms, a reduction of at least 3 log CFU/ml was only achieved using a concentration of 50 µM with 1 h of incubation and 4 J/cm2. Finally, with 10 µM of PS, a study was carried out to verify if the incubation time had an influence, and we found that by increasing the incubation time of the photosensitizer in contact with the biofilm before irradiation, the inactivation was greater.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2022-08-18T22:12:53Z No. of bitstreams: 1 Rita de Cássia Ferreira.pdf: 2521179 bytes, checksum: 7eb3a233ae5088ec5a5f26d004b2930b (MD5) Made available in DSpace on 2022-08-18T22:12:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rita de Cássia Ferreira.pdf: 2521179 bytes, checksum: 7eb3a233ae5088ec5a5f26d004b2930b (MD5) Previous issue date: 2022-06-23 Diabetic foot is one of the main complications of diabetes mellitus with high mortality, morbidity and large use of public resources in long clinical and surgical treatments. The treatment of these lesions is challenging due to their multifactorial etiology. This study aimed to evaluate the clinical evolution of patients with diabetic foot treated with photodynamic therapy using the Bates-Jensen (BJ) scale. Twenty-one patients from the vascular surgery clinic of the Conjunto Hospitalar do Mandaqui in the city of São Paulo were followed up, 16 men and 5 women, with a mean age of 58 years. Patients underwent standard institutional care plus antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) using a 0.01% methylene blue photosensitizer and laser irradiation (660 nm, 100 mW, 1W/cm2, 60 J/cm2, 6J per point). The primary dressing used as a dressing was hydrofiber with silver applied after PDT. The BJ scale was used before and after the end of PDT to assess the evolution of the lesions, as well as the area, characteristics of the tissue bed, characteristics and amount of exudate, perilesional edema, granulation tissue and epithelialization. Patients were divided into 4 groups (discharged, discharged due to worsening, in treatment and loss) that were compared using the SPSS Statistics software with a significance of 0.05. The results showed that in the total sample there was a significant difference in the values of the BJ scale before and after aPDT. Regarding the BJ items evaluated after aPDT in the general sample, no significance was found in the size of the lesion, but there was significance in the detachment, amount and type of necrotic tissue and perilesional hardening. When evaluating these same BJ items in patients who were discharged, there was a statistical difference in lesion size, type and amount of necrotic tissue, type and amount of exudate and perilesional edema. In this follow-up, aPDT proved to be an effective, safe, low-cost, well-tolerated treatment, with high patient adherence and feasibility of implementation in the public health service. O pé diabético é uma das principais complicações da diabetes mellitus com alta mortalidade, morbidade e grande utilização de recursos públicos em longos tratamentos clínicos e cirúrgicos. O tratamento dessas lesões é desafiador devido a sua etiologia multifatorial. Este estudo teve como objetivo avaliar a evolução clínica de pacientes portadores de pé diabético tratados com terapia fotodinâmica utilizando da escala de Bates-Jensen (BJ). Foram acompanhados 21 pacientes, da clínica de cirurgia vascular do Conjunto Hospitalar do Mandaqui na cidade de São Paulo, sendo 16 homens e 5 mulheres, com média de 58 anos de idade. Os pacientes realizaram o tratamento padrão da instituição acrescido da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) usando o fotossensibilizador azul de metileno 0,01% e irradiação com laser (660 nm, 100 mW, 1W/cm2, 60 J/cm2, 6J por ponto). A cobertura primária utilizada como curativo foi a hidrofibra com prata aplicada após a PDT. A escala BJ foi usada nos momentos pré e pós término da PDT para avaliar a evolução das lesões, bem como a área, características do leito tecidual, característica e quantidade de exsudato, edema perilesional, tecido de granulação e epitelização. Os pacientes foram divididos em 4 grupos (alta, alta por piora, em tratamento e perda) que foram comparados utilizado o software SPSS Statistics com significância de 0,05. Os resultados demonstraram que na amostra geral houve diferença significativa nos valores da escala BJ pré e pós aPDT. Em relação aos itens da BJ avaliados após a aPDT na amostra geral não se encontrou significância no tamanho da lesão, porém houve significância no descolamento, quantidade e tipo de tecido necrótico e endurecimento perilesional. Ao avaliar esses mesmos itens da BJ nos pacientes que tiveram alta houve uma diferença estatística no tamanho da lesão, tipo e quantidade de tecido necrótico, tipo e quantidade de exsudato e edema perilesional. Neste acompanhamento a aPDT se mostrou um tratamento eficaz, seguro, de baixo custo, bem tolerado, com alta adesão de pacientes e viabilidade de execução no serviço público de saúde.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2022-07-26T19:56:24Z No. of bitstreams: 1 Claudio Teruo Kassa.pdf: 3464643 bytes, checksum: 318ae7a68e941f565b6d2b573f7f09e4 (MD5) Made available in DSpace on 2022-07-26T19:56:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudio Teruo Kassa.pdf: 3464643 bytes, checksum: 318ae7a68e941f565b6d2b573f7f09e4 (MD5) Previous issue date: 2022-06-23 Periodontal disease is an inflammation that affects the supporting tissues of the teeth in response to the presence of microorganisms. Antimicrobial photodynamic therapy aims at the production of reactive oxygen species and is used as an adjunct therapy for the elimination of microorganisms. This phototoxic effect requires photosensitizer – methylene blue in this case -, light irradiation of adequate wavelength and oxygen. The molecules of methylene blue in water can become dimers reducing the effect of therapy. Sodium dodecyl sulfate controls this aggregation. Thus, this study evaluated the photodynamic effect of 0.003% - 100µM methylene blue delivered in 0.25% sodium dodecyl sulfate in chronic periodontitis. For this, thirty six participants were included that were treated with scaling and root planning, randomly allocated in four groups: 1) treated with photodynamic therapy and methylene blue conveyed in sodium dodecyl sulfate (n=9); or 2) with photodynamic therapy and methylene blue in water (n=10); 3) with methylene blue in water without light irradiation (n=9), or 4) treated with photosensitizer in sodium dodecyl sulfate without light irradiation (n=8). The pre- irradiation time was 1min and the irradiation time was 2min, single application. Laser (Therapy EC, DMC, São Carlos, Brazil) with wavelength of 660nm and 100mW of power was used. Quantitative microbiological evaluation was realized by counting colony-forming units from cultivated subgingival biofilm samples, in anaerobiosis, before and after irradiation procedures. This microbial count was the primary outcome and clinical probing depth was the secondary one. There was no significant difference between the groups in both bacterial reduction and the clinical parameter evaluated. It was concluded that the phototoxic effect of methylene blue in sodium dodecyl sulfate in the adjuvant treatment of periodontitis was not enough to reduce the amount of bacteria in biofilm or the pocket probing depth. A doença periodontal é uma inflamação que afeta os tecidos de suporte dos dos dentes em resposta à presença de microrganismos. A terapia fotodinâmica antimicrobiana visa a produção de espécies reativas de oxigênio e é usada como terapia adjuvante para eliminação de microrganismos. Este efeito fototóxico necessita de fotossensibilizador – que neste trabalho foi o azul de metileno - irradiação de luz de comprimento de onda adequado e oxigênio. As moléculas do azul de metileno em água podem dimerizar, reduzindo o efeito da terapia. O dodecilsulfato de sódio controla essa agregação. Isto posto, este estudo avaliou o efeito fotodinâmico do azul metileno a 0,003% - 100µM - veiculado em dodecilsulfato de sódio a 0,25% na periodontite crônica. Para isto, foram incluídos 36 participantes que foram tratados com a raspagem e alisamento radicular e alocados aleatoriamente em quatro grupos, sendo 1) tratado com terapia fotodinâmica e o azul de metileno veiculado em dodecilsulfato de sódio (n=9); ou 2) com terapia fotodinâmica e o azul de metileno veiculado em água (n=10); 3) com o fotossensibilizador em água sem irradiação de luz (n=9), ou 4) tratado com fotossensibilizador em dodecilsulfato de sódio sem irradiação de luz (n=8). O tempo de pre-irradiação foi de 1min e o de irradiação 2min, aplicada em sessão única. Foi utilizado o laser (Therapy EC, DMC, São Carlos, Brasil) com comprimento de onda de 660nm e 100mW de potência. Foi realizada a avaliação microbiológica quantitativa, por contagem de unidades formadoras de colônias, cultivando as amostras de biofilme subgengival, em anaerobiose, antes e após os procedimentos de irradiação. A profundidade clínica de sondagem foi avaliada 30 e 60 dias após o tratamento com raspagem e alisamento radicular. A contagem microbiana foi o desfecho primário e a profundidade clínica de sondagem foi o desfecho secundário. Não foi observado diferença significante entre os grupos tanto na redução bacteriana quanto no parâmetro clínico avaliado. Concluiu-se que o efeito fototóxico do azul de metileno veiculado em meio surfactante no tratamento adjuvante da doença periodontal crônica não foi o suficiente para reduzir a quantidade de bactérias no biofilme e nem a profundidade clínica de sondagem.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2021-11-25T17:39:27Z No. of bitstreams: 1 Adriana Leal Rossi.pdf: 602732 bytes, checksum: 3d3b37c00381fdfe7b41247d0361266a (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-25T17:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana Leal Rossi.pdf: 602732 bytes, checksum: 3d3b37c00381fdfe7b41247d0361266a (MD5) Previous issue date: 2021-10-14 Candida albicans (C. albicans) is a pseudofilamentous dimorphic fungus that can survive and infect humans with difficult resolution by antifungal therapy. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) generates reactive oxygen species with the potential to kill microorganisms. The erythrosine dye has photodynamic potential and can act on oral microorganisms; therefore, the aim of this work was to investigate the effect of erythrosine-mediated aPDT and blue light on Candida albicans. The cell death time and the incorporation of erythrosine into the fungal cell were evaluated. For the execution of this work, the Candida albicans ATCC 90028 strain was selected, properly prepared for the irradiation test. Irradiation was carried out with a LED dental light-curing device (DMC, São Carlos, SP, Brazil), emitting a wavelength at ʎ = 430 nm – 490 nm and a radiant power of 1000 mW. The samples were irradiated from the top of a 24-well microtiter plate with an irradiance of I = 500 mW / cm2 and radiant exposure of 0 to 377 J/cm2, with irradiation times ranging from 0 to 720 s. The photosensitizer used was Erythrosine at concentrations of 100 μM. Yeast suspensions were divided into groups: Control without irradiation and photosensitizer (L-FS-), irradiated group without photosensitizer (L+720FS-), photosensitizer group without irradiation (L-FS+), and groups that received photosensitizer and irradiation called aPDT groups and described by the acronym L+ followed by the irradiation time in seconds and FS+. To assess the absorption and incorporation of erythrosine, fluorescence microscopy and optical absorption spectroscopy were performed. Erythrosine eradicated the tested microorganisms with total inactivation after 120 s of irradiation and incorporation of photosensitizer into the fungus was observed. APDT mediated by erythrosine and blue light was effective in inactivating Candida albicans. A Candida albicans (C. albicans) é um fungo dimórfico pseudofilamentar, que pode sobreviver e infectar humanos com difícil resolução por terapia antifúngica. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) gera espécies reativas de oxigênio com potencial para eliminação de micro-organismos. O corante eritrosina tem potencial fotodinâmico e pode ter ação em micro-organismos orais, portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da aPDT mediada por eritrosina e luz azul em Candida albicans. Foi avaliado o tempo de morte celular e a incorporação da eritrosina dentro da célula fúngica. Para a execução do presente trabalho foi selecionada a cepa Candida albicans ATCC 90028 devidamente preparada para o ensaio de irradiação. A irradiação foi realizada com um equipamento LED fotopolimerizador odontológico (DMC, São Carlos, SP, Brasil), emitindo comprimento de onda em ʎ = 430 nm – 490 nm e uma potência radiante de 1000 mW. As amostras foram irradiadas do topo de uma placa de microtitulação de 24 poços com irradiância de I = 500 mW / cm2 e exposição radiante de 0 a 377 J/cm2, com tempos de irradiação variando de 0 a 720 s. O fotossensibilizador utilizado foi a Eritrosina em concentrações de 100 μM. As suspensões de leveduras foram divididas em grupos: Controle sem irradiação e fotossensibilizador (L-FS-), grupo irradiado sem fotossensibilizador (L+720FS-), grupo fotossensibilizador sem irradiação (L-FS+), e os grupos que receberam fotossensibilizador e irradiação chamados grupos aPDT e descritos pela sigla L+ seguido do tempo de irradiação em segundos e FS+. Para avaliar a absorção e incorporação da eritrosina foi realizada a microscopia de fluorescência e a espectroscopia de absorção óptica. A eritrosina apresentou erradicação dos micro-organismos testados com total inativação após 120 s de irradiação e foi observado incorporação de fotossensibilizador dentro do fungo. A aPDT mediada por eritrosina e luz azul foi efetiva na inativação de Candida albicans.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2021-11-25T17:59:47Z No. of bitstreams: 1 Camila Basilio Lopes.pdf: 2230226 bytes, checksum: 1a9e2e02d53fcd1b7f61251dfee1bc17 (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-25T17:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camila Basilio Lopes.pdf: 2230226 bytes, checksum: 1a9e2e02d53fcd1b7f61251dfee1bc17 (MD5) Previous issue date: 2021-03-09 Parameters such as wavelength, energy, application time and number of sessions can vary according to the problem and the characteristics of the procedure and the patient. It is necessary to provide information with scientific evidence in an accessible way to the clinician who is not familiar with analyzing evidence of academic works. In this context, the proposal of the present project is the elaboration of the recommendation synthesis of clinical protocols for the use of photodynamic therapy in endodontics in permanent teeth. For this purpose, high methodological quality protocols will be identified based on systematic literature search and quality assessment using the validated instrument, Appraisal of Guidelines Research & Evaluation Instrument (AGREE-II). Following the identification of the studies, a synthesis of the recommendations of the studied procedures was carried out. The synthesis was submitted to a group of experts for evaluation and adaptation in a consensus process using the Delphi methodology. Analysis of the literature on the application of aPDT in endodontics has shown that clinical trials with good levels of evidence and clinical recommendation are available, with two studies classified as A1A of clinical recommendation and level A of evidence. The writing of the protocol reached a satisfactory level and an appropriate content validity index after the second round of evaluation by the expert judges. The studies included in this research showed a predominantly explanatory level, demonstrating the need for pragmatic designs to increase the degree of clinical applicability. A escolha dos parâmetros como comprimento de onda, energia, tempo de aplicação e número de sessões podem variar de acordo com o problema e as características do procedimento e do paciente. Se faz necessário disponibilizar informações com evidência científica de maneira acessível ao clínico que não possui familiaridade com análise de evidência de trabalhos acadêmicos. Nesse contexto, a proposta do presente projeto é a elaboração da síntese de recomendação de protocolo clínico do uso da terapia fotodinâmica em endodontia em dentes permanentes. Para tanto, foram identificados os protocolos de alta qualidade metodológica a partir de busca sistemática da literatura e avaliação de qualidade por meio do instrumento validado, Appraisal of Guidelines Research & Evaluation Instrument (AGREE-II). Seguida da identificação dos estudos, foi realizada a síntese das recomendações dos procedimentos estudados. A síntese foi submetida a um grupo de especialistas para avaliação e adaptação em um processo de consenso por meio da metodologia Delphi. A análise da literatura sobre a aplicação da aPDT em endodontia demonstrou que estão disponíveis ensaios clínicos com bons níveis de evidência e recomendação clínica, com dois estudos classificados como A1A de recomendação clínica e nível A de evidência. A redação do protocolo alcançou nível satisfatório e índice de validade de conteúdo apropriado após a segunda rodada de avaliação pelos juízes especialistas. Os estudos incluídos nessa pesquisa apresentaram nível predominantemente explicativo, demonstrando a necessidade de delineamentos pragmáticos para aumentar o grau de aplicabilidade clínica.

Submitted by Rodrigo Passos Evangelista (rodrigopse@gmail.com) on 2020-01-09T21:21:31Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao final de mestrado COMPLETA.pdf: 2853924 bytes, checksum: 2088dc6c4afb0d7350fd46dcdab1f524 (MD5) Dissertacao final de mestrado PARCIAL.pdf: 876062 bytes, checksum: e6593379a986f2092f0abc7bd6d1e53e (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito (irani@fcfar.unesp.br) on 2020-01-10T14:04:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 francisco_em_me_arafcf_par.pdf: 652327 bytes, checksum: f6f78e07ab02baf09a66688183d47b00 (MD5) Made available in DSpace on 2020-01-10T14:04:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 francisco_em_me_arafcf_par.pdf: 652327 bytes, checksum: f6f78e07ab02baf09a66688183d47b00 (MD5) Previous issue date: 2019-12-04 O avanço tecnológico cresce rapidamente no mundo, inclusive na área farmacêutica. Nesse contexto, sistemas nanoestruturados ganham progressivo destaque, porquanto carregam um enorme potencial para o aperfeiçoamento das práticas terapêuticas atuais. A administração de fármacos na forma livre pode apresentar problemas como baixa concentração no sítio ativo, inadequada distribuição pelo organismo, baixa biodisponibilidade, presença de efeitos adversos, entre outros. As nanocápsulas poliméricas são capazes de contornar tais vieses, possibilitando, inclusive, a diminuição da toxicidade com a diminuição de doses e aumento da estabilidade de fármacos em meios biológicos. Foram desenvolvidas nanocápsulas poliméricas contendo Anfotericina B (AMB) e Fenil-tio-ftalocianina de zinco (ZnS4Pc) na concentração teórica de 0,05 mg.mL-1 objetivando, com a associação entre os dois ativos, melhorar a atividade antifúngica conseguida pelo antifúngico isoladamente utilizando-se a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana. A avaliação das características físico-químicas das nanocápsulas mostraram diâmetro médio de partícula de 253,8 ± 17,3 nm, índice de polidispersidade médio de 0,36 ± 0,01 e potencial Zeta médio de – 31,03 ± 5,54 mV. Tais análises revelaram-se satisfatórias já que o diâmetro de partícula conseguido pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado utilizado na produção das nanocápsulas varia de 250 a 500 nm (MORA-HUERTAS et. al., 2010), enquanto que o potencial zeta considerado para uma formulação estável deve ser maior que 30 mV em módulo (RAVAL et al., 2019). Análises de espectroscopia de absorção e emissão realizadas na região do UV-Vis não encontraram alterações nas propriedades fotofísicas no estado estacionário de NC/ZnS4Pc e NC/ZnS4Pc + AMB em relação a ZnS4Pc livre. Os ativos nas NC foram quantificados utilizando-se uma curva analítica de correlação de absorção e concentração variando de 0,255 a 2,04 µg.mL-1 para a ZnS4Pc e 0,50 a 10,00 µg.mL-1 para AMB, de cuja análise obtivemos uma quantificação, para as NC com ativos isolados, de 43,8% para ZnS4Pc e 75,0% para AMB; Para as NC mistas, isto é, NC/ZnS4Pc + AMB, esses teores foram de 30,7% e 67,7%, respectivamente. No que diz respeito ao teor de encapsulação, para as nanocápsulas com ativos isolados, notou-se um alto valor de 89,6% para ZnS4Pc e que se manteve com 89,2% para as NC Mistas. Além disso, um estudo morfológico das formulações de NC foi realizado com Microscopia de Força Atômica denotando a presença de nanocápsulas de formato esférico e com distribuição homogênea. O ensaio de viabilidade celular com as células NIH/3T3 ATCC® CRL-1658™ não demonstrou citotoxidade para as mesmas na presença das NC mistas com fatores de diluição de até 15% (v/v). Para o ensaio de atividade fotodinâmica, foram utilizadas NC mistas diluídas de 1% e 5% (v/v) junto às leveduras Candida albicans ATCC® 90028 e, diferentemente do que ocorreu para as células NIH/3T3, as NC mistas apresentaram toxicidade fúngica tanto na ausência de luz quanto na presença da mesma com irradiação de 12 J/cm2 e 25 J/cm2. Todos os resultados foram tratados estatisticamente através do teste de análise de variância One-way ANOVA seguido do pós teste Tukey t-test para múltiplas comparações (p

Orientador: Prof. Dr. Anderson Orzari Ribeiro Coorientadora: Profa. Dra. Fernanda Dias da Silva Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2019. Com o aumento de casos de resistencia microbiana a tratamentos comuns (antibioticos e antimicrobianos), a terapia fotodinamica antimicrobiana (TFDa) aparece como uma nova modalidade de tratamento, pois a interacao de tres componentes: um fotossensibilizador (FS), luz e oxigenio do meio, resulta na formacao de especies reativas capazes de atingir diferentes alvos celulares (proteinas, enzimas, lipidios) levando a comprometimentos da parede e da membrana celular. Este trabalho avalia a eficiencia da hipericina como FS em Staphylococcus aureus (S. aureus) e Escherichia coli (E. coli). Analisamos a concentracao inibitoria minima (CIM) por testes liquidos de inibicao para a determinacao da condicao de tratamento. A captacao de hipericina pela bacteria foi realizada a partir de estudos indiretos utilizando o metodo do espectrofotometro ultravioleta-visivel e citometria de fluxo. O estudo tambem determinou o mecanismo de acao desencadeado pela aTFD, a partir da cinetica de crescimento microbiano sob as melhores condicoes de tratamento. Os resultados apresentaram CIM50 na concentracao de 10 ¿ÊM de hipericina e nao foram observadas diferencas significativas no ensaio de captacao para ambas as bacterias. Ao avaliarmos o tempo de pre-incubacao e a dose de luz, observamos que o tempo de pre-incubacao nao foi um fator determinante no estudo, sendo estabelecido em 5 minutos (min) para ambos os microrganismos, entretanto, a dose de luz induziu uma maior inibicao do crescimento das colonias, sendo de 38,4 e 57,6 J/cm2 para E. coli e S. aureus, tal fato foi evidenciado pelo teste de cinetica, que demonstrou a acao antimicrobiana da hipericina como um composto bacteriostatico. Em conclusao, a hipericina foi capaz de inibir as celulas microbianas, por um mecanismo bacteriostatico, demostrando sua potencial aplicacao na aTFD. With the increase of cases of microbial resistance to common treatments (antibiotics and antimicrobials), the antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) appears as a new treatment modality, the interaction of three components: a photosensitizer (PS), light and oxygen of the medium, resulting in the formation of reactive species capable of to reach different cellular targets (proteins, enzymes, lipids) leading to cell wall and membrane compromises. In this work we analized the efficiency of hypericin as a PS on Staphylococcus aureus (S. aureus) and Escherichia coli (E. coli). We analyzed the minimum inhibition concentration (MIC) by liquid inhibition tests to determine the treatment condition. Bacterial uptake of hypericin was performed from indirect studies using the ultraviolet-visible spectrophotometer method and flow cytometry. The study also determined the mechanism of action triggered by aTFD from microbial growth kinetics under the best treatment conditions. For MIC determination tests we obtained a MIC50 at a concentration of 10 ¿ÊM hypericin and no significant differences were observed in the uptake assay for both bacteria. When evaluating the pre-incubation time and the light dose, we observed that the incubation time was not a determining factor in the study, being established at 5minutes for both microorganisms, however, the light dose induced the inhibition of colony growth, being 38,4 and 57.=,6 J/cm2 for E. coli and S. aureus, this fact was evidenced by the kinetic test, which demonstrated the antimicrobial action of hypericin as a bacteriostatic compound. In conclusion, hypericin was able to inhibit microbial cells by a bacteriostatic mechanism, demonstrating its potential application in aTFD.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2021-11-03T22:03:30Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Costa da Mota Ciarcia.pdf: 1797077 bytes, checksum: 39ad829969ac413663b62c4f39654b51 (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-03T22:03:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Costa da Mota Ciarcia.pdf: 1797077 bytes, checksum: 39ad829969ac413663b62c4f39654b51 (MD5) Previous issue date: 2018-12-18 Halitosis is the term used to describe any unpleasant odor relative to expired air. The prevalence of halitosis in the population is approximately 30%, of which 80-90% of the cases originate in the oral cavity resulting from proteolytic degradation by gram negative anaerobic bacteria. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) has been widely used and with quite satisfactory results in the health sciences, it involves the use of a non-toxic dye, called photosensitizer (PS), and a light source of a specific wavelength in the presence of the oxygen in the medium. This interaction can create toxic species that generate cell death. In view of the above, the objective of this controlled clinical study was to verify the effect of aPDT in the treatment of halitosis by the evaluation of the formation of volatile sulfur compounds with gas chromatography. Thirty-fi ve young adults aged 18 to 25 years, with gas chromatographic halitosis were included in the study. The selected subjects were divided into 3 groups, G1 aPDT with 0.005% methylene blue with red LED 660nm, 4 irradiation points, 90s per point, 400mW of power, 36J per point, G2 Scraper and G3 Scraper and aPDT. All subjects underwent Oral ChromaTM evaluation before, after treatment and controls of 7, 14, 30. Wilcoxon test was used for the analysis of data from Oral ChromaTM intragroup and for the intergroup analysis the Kruskal Wallis test. A significance level of 95% (p

Submitted by Maria Lúcia Frade (marifrad@hotmail.com) on 2018-06-25T15:04:46Z No. of bitstreams: 1 Dissertação com artigo versão de arquivamento 25_06_2018.pdf: 5490840 bytes, checksum: 7f04a23e5fbc4a98d7cc0bd23f546892 (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito null (irani@fcfar.unesp.br) on 2018-06-25T19:35:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 frade_ml_me_arafcf_int.pdf: 5490840 bytes, checksum: 7f04a23e5fbc4a98d7cc0bd23f546892 (MD5) Made available in DSpace on 2018-06-25T19:35:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 frade_ml_me_arafcf_int.pdf: 5490840 bytes, checksum: 7f04a23e5fbc4a98d7cc0bd23f546892 (MD5) Previous issue date: 2018-05-30 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A acne vulgar é uma das dermatoses mais frequentes em jovens e a infecção causada pela bactéria Cutibacterium acnes (antigo Propionibacterium acnes) tem importante papel na patogênese da acne. Existem várias opções de tratamento que variam de acordo com a gravidade da doença, porém são associados com reações indesejadas e resistência aos antimicrobianos. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) então é proposta como tratamento alternativo para inativar C. acnes juntamente com a incorporação do fotossensibilizador (FS) em uma formulação tópica para otimizar a terapia. Este trabalho objetivou avaliar a eficácia in vitro da TFDa mediada pelo azul de metileno (AM) incorporado em hidrogel de quitosana e poloxamer (HG-AM) contra C. acnes em fase planctônica e biofilme. A viabilidade celular após TFDa foi avaliada através da quantificação das colônias formadas por mililitro de amostra (UFC/mL). Para caracterizar estruturalmente os HGs foram realizadas as análises oscilatórias e de comportamento de fluxo em reômetro de estresse controlado com geometria placa-cone e a bioadesão em pele de orelha de porco utilizando um texturômetro. A análise estatística dos dados feita foi a Análise de Variância (one way ANOVA) com pós-teste de Tukey. Os resultados deste estudo mostrou que a TFDa contra C. acnes foi eficaz utilizando HG-AM em fase plactônica. A concentração bactericida mínima foi de 12,5 µg/mL associada a uma fluência de 90 J/cm2. O biofilme de C. acnes não foi totalmente eliminado pela TFDa com HG-AM nas condições testadas. A máxima redução microbiana alcançada com o HG-AM foi de 1,9 log10 com 75 µg/mL do FS utilizando 150 J/cm2 e 30 minutos de pré-incubação do biofilme com o HG-AM. O HG a 0,25% de quitosana (HG1) mostrou-se adequado para aplicação na superfície da pele pois concentrações maiores de quitosana aumentam a elasticidade do hidrogel, podendo atrasar a liberação do FS. A incorporação do AM não afetou suas características reológicas e bioadesivas de forma significativa. Foi possível concluir que a TFDa mediada por HG-AM foi mais eficiente do que AM em solução para a redução total da carga microbiana em fase planctônica nas mesmas condições. Acne vulgaris is one of the most frequent dermatosis in young people and the infection caused by the bacteria Cutibacterium acnes (formerly Propionibacterium acnes) plays an important role in the pathogenesis of acne. There are several treatments options that vary according to the severity of the disease, but are associated with unwanted reactions and antimicrobial resistance. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) is then proposed as an alternative treatment to inactivate C. acnes together with the incorporation of the photosensitizer (PS) into a topical formulation to optimize therapy. This work aimed to evaluate the in vitro efficacy of methylene blue (MB) mediated TFDa incorporated in chitosan and poloxamer (HG-MB) hydrogels against planktonic and biofilm C. acnes. Cell viability after aPDT was evaluated by quantifying the colonies formed per milliliter of sample (CFU / mL). To characterize structurally the HG were performed the oscillatory and behavior of flow in a controlled stress rheometer with cone-plate geometry and bioadhesion in pig ear skin using a texture analyser. The statistical analysis of the data was the Analysis of Variance (one way ANOVA) with post-test of Tukey. The results of this study showed that aPDT was effective using HG-MB in planktonic phase. The minimum bactericidal concentration was 12.5 μg/mL associated with a fluence of 90 J/cm2. The C. acnes biofilm was not totally eliminated by the aPDT with HG-MB under the conditions tested. The maximum microbial reduction achieved with HG-MB was 1.9 log10 with 75 μg/mL of the PS using 150 J/cm2 and 30 minutes biofilm incubation with HG-MB. HG at 0.25% of chitosan (HG1) was adequate for application to the skin surface because higher concentrations of chitosan increase the elasticity of the hydrogel and may delay PS release. The incorporation of MB did not significantly affect its rheological and bioadhesive characteristics. It was possible to conclude that HG-MB mediated aPDT was more efficient than MB solution for the total reduction of planktonic microbial load under the same conditions. 133456/2016-1

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2022-04-11T20:50:53Z No. of bitstreams: 1 Camila Basilio Okamoto.pdf: 913886 bytes, checksum: 79173dbe02f659a2461e89c9b40b7912 (MD5) Made available in DSpace on 2022-04-11T20:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camila Basilio Okamoto.pdf: 913886 bytes, checksum: 79173dbe02f659a2461e89c9b40b7912 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 The success of the treatment is based on the decontamination of the root canal. Thus, efficacious methods have been studied as to the disinfection of the root canal systems (RCS). Of the methods studied, a highlight is the combination of conventional root canal therapy associated with laser and Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT). The aim of this work was to evaluate bacterial reduction and both clinical and radiographic aspects of the root canal treatment in deciduous teeth when associated with photodynamic therapy. 32 deciduous anterior teeth diagnosed with pulp necrosis were selected. The patients were randomly divided into two groups, which underwent distinct treatments: Group I: conventional root canal treatment (n=15); Group II: conventional root canal treatment associated with aPDT (n=17). For the aPDT, Chimiolux® methylene blue (0.005%) was used as photosensitizer, applied with sterile paper cone into the root canal for 3 minutes, associated with laser application at a wavelength of 660nm (DMC, Laser THERAPY XT – EC), the canal was irradiated for 40 seconds, with the apparatus previously set at energy 4J and power 100mw. Direct contact method has been used at the entrance of the root canal. For the microbiological analysis, two samples of intracanal content were collected with paper cones. One sample was collected before and another immediately after the treatments administered in both groups. Radiographic aspects were evaluated, taking into consideration the recovery process, and we clinically observed fistula and mobility. The evaluations were carried out both 1 and 3 months after treatment. The data obtained went through statistical analysis Mann-Whitney (5%) and showed that G II had 99% bacterial reduction, whereas G I had 93%, though this difference was not statistically significant. Satisfactory tissue recovery was clinically and radiographically observed in both groups. It was therefore possible to conclude that the conventional treatment associated with aPDT was efficacious, however, it did not turn out as superior to conventional treatment alone, as far as this study is concerned. O sucesso do tratamento endodôntico baseia-se na descontaminação do canal radicular. Desta forma, métodos têm sido pesquisados para a obtenção da sanificação do interior do sistema de canais radiculares (SCR) com eficácia; dentre estes, destaca-se a combinação da terapia endodôntica convencional associada ao uso do laser e da terapia fotodinâmica (aPDT). O objetivo deste estudo foi avaliar a redução bacteriana e os aspectos clínicos e radiográficos do tratamento endodôntico em dentes decíduos quando associado à terapia fotodinâmica. Foram selecionados 32 dentes decíduos anteriores com diagnóstico de necrose pulpar. Os pacientes foram divididos aleatoriamente em dois grupos, que receberam tratamentos distintos: Grupo I: tratamento endodôntico convencional (n=15); Grupo II: tratamento endodôntico convencional associado aPDT(n=17). Para aPDT foi utilizado como fotossensibilizador o azul de metileno da marca Chimiolux®, na concentração de 0,005%, aplicado com cone de papel estéril no interior do canal radi cular por 3 minutos, associado a aplicação do laser com comprimento de onda de 660nm (DMC, Laser THERAPY XT), o canal foi irradiado por 40s, com o equipamento previamente calibrado com energia de 4J e potência de 100mW. Foi utilizado o método de contato direto, na entrada do canal radicular. Para análise microbiológica, foram realizadas duas coletas do conteúdo intracanal com cones de papel, uma antes e outra logo após os tratamentos propostos nos dois grupos. Os aspectos radiográficos foram avaliados, considerando o processo de reparação e clinicamente observou-se presença de fístula e mobilidade, as avaliações foram realizadas nos períodos de 1 e 3 meses após o tratamento. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística Mann-Whitney (5%), demonstrando que o Grupo II apresentou 99% de redução bacteriana, enquanto o Grupo I apresentou 93%, porém esta diferença não foi estatisticamente significante. Observou-se reparo satisfatório dos tecidos clínica e radiograficamente nos dois grupos. Concluiu-se que o tratamento convencional associado a aPDT foi eficaz, no entanto não apresentou-se superior ao tratamento convencional unicamente neste estudo.

Submitted by SARAH RAQUEL DE ANNUNZIO null (sarinha_annunzio@hotmail.com) on 2018-01-16T18:07:43Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO SARAH RAQUEL DE ANNUNZIO FINAL.pdf: 2067589 bytes, checksum: 44d58c0bd5abc16c0266a0235585bb7b (MD5) Approved for entry into archive by Maria Irani Coito null (irani@fcfar.unesp.br) on 2018-01-18T13:08:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 annunzio_sr_me_arafcf_par.pdf: 2077627 bytes, checksum: 07295c62df1c340637e0b38dbd244f3d (MD5) Made available in DSpace on 2018-01-18T13:08:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 annunzio_sr_me_arafcf_par.pdf: 2077627 bytes, checksum: 07295c62df1c340637e0b38dbd244f3d (MD5) Previous issue date: 2017-12-18 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) A Acne vulgar é uma das mais comuns doenças dermatológicas atingindo adolescentes e adultos. A principal causadora da acne é a infecção pela bactéria Propionibacterium acnes (P. acnes). Atualmente, as opções de tratamento para acne vulgar são numerosas, porém muitas vezes com extensos efeitos colaterais. Fatores como resistência aos antibióticos, e a ação inicial lenta das terapias tópicas têm levado pesquisadores a buscar tratamentos alternativos. Desta forma, o presente estudo objetivou avaliar a eficácia da inativação fotodinâmica mediada por curcumina dissolvida em caldo (TrypcticSoyBroth) TSB e solução de sacarose 0,5% e a combinação dessa terapia com a tetraciclina, contra P. acnes em fase planctônica e biofilme. A viabilidade celular foi avaliada através da quantificação das colônias formadas por mililitro de amostra (UFC/mL). A concentração bactericida mínima (CBM) da tetraciclina sobre P. acnes foi determinada através do método de microdiluição em caldo. Foi realizada a avaliação da biomassa total e inibição da formação do biofilme através do método de coloração por cristal violeta 0,5%. A análise estatística dos dados foi feita através do teste de Análise de Variância (oneway ANOVA) com pós-teste de Tukey. Os resultados do presente estudo mostraram que a terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) mediada por curcumina foi eficiente na redução microbiana quando realizada a quantificação das colônias formadas, comparada ao grupo controle negativo em forma planctônica bem como em biofilme tanto diluída em caldo TSB quanto em solução de sacarose 0,5% sendo capaz de reduzir toda a carga bacteriana. Uma redução de mais de 28% da biomassa total do biofilme e uma inibição de mais de 70% foi alcançada após o tratamento. Foi possível concluir que aTFDa mediada por curcumina dissolvida em caldo TSB e solução de sacarose 0,5% foi eficiente para a redução total da carga microbiana em fase planctônica e biofilme. A curcumina dissolvida em solução de sacarose 0,5% possibilitou essa redução utilizando menores concentrações e doses de luz. A terapia combinada não apresentou efeito sinérgico. Acne vulgar is one of the most common dermatological and adult diseases. The main cause of acne is an infection by the bacterium Propionibacterium acnes (P. acnes).Currently there are many treatment options for acne vulgaris, although often with extensive side effects. Factors such antibiotics resistance and slow initial action of topical therapies that led researchers to seek alternative treatments. Thus, the present study aimed to evaluate the efficacy of curcumin-mediated photodynamic inactivation in broth (Tryptic Soy Broth) TSB and 0.5% sucrose solution and the combination of this therapy with tetracycline against planktonic phase P. acnes and biofilm. Cell viability was evaluated by quantification of the colonies formed per milliliter of sample (CFU / mL). The minimum bactericidal concentration (MBC) of tetracycline over P. acnes was determined by the broth microdilution method. The evaluation of the total biomass and inhibition of the formation of the biofilm was performed through the method of staining by violet crystal 0.5%. The statistical analysis of the data was done through the variance analysis (ANOVA one way) test with Tukey's post test. The results of this study showed that curcumin-mediated photodynamic antimicrobial therapy (TFDa) was efficient in microbial reduction when quantification of the colonies was performed, compared to the negative control group in planktonic form as well as in biofilm both diluted in TSB broth and in solution sucrose 0.5% being able to reduce all bacterial load. A reduction of more than 28% of the total biofilm biomass and an inhibition of more than 70% was achieved after treatment. It was possible to conclude that curcuminmediated TFDa dissolved in TSB broth and 0.5% sucrose solution was efficient for the total reduction of the planktonic and biofilm microbial load. Curcumin dissolved in 0.5% sucrose solution allowed this reduction using lower concentrations and doses of light. Combination therapy had no synergistic effect. 130182/2016-8

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2021-10-25T22:01:06Z No. of bitstreams: 1 Estefani Regina Leite Belinello de Souza.pdf: 1479591 bytes, checksum: 3e2e666027ba4eab6a4570b1640d364b (MD5) Made available in DSpace on 2021-10-25T22:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Estefani Regina Leite Belinello de Souza.pdf: 1479591 bytes, checksum: 3e2e666027ba4eab6a4570b1640d364b (MD5) Previous issue date: 2016-12-14 Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) has been used as an adjuvant treatment for periodontitis. It combines a photosensitizer with a light source to induce reactive oxygen species and kill microbial cells. PpNetNI is a protoporphyrin derivated, and it has a chemical binding site at biofilm and great affinity to microbial cells. The aim of this study was to investigate the effects of aPDT as an adjuvant treatment for periodontitis. Thirty healthy male rats Wistar (Rattus norvegicus) were used in this study (Approved by UNINOVE Ethical committee AN0029/2015). Periodontitis was induced by placing a cotton ligature around the first mandibular molar in a subgengival position. The contralateral mandibular first molar received neither a ligature nor any treatment, and was used as a control. After 7 days, the ligature was removed and all animals received scaling and root planing (SRP) and were divided according to the following treatments: SRP group (received SRP and irrigation with PpNetNI, 10 µM) and PDT group (PpNetNI 10 µM followed by LED irradiation). PDT was performed with a LED (630 nm) with an output power of 400 mW (fluence-rate 200 mW/cm2; fluence 18 J/cm2). Rats were euthanized at 24 h, 48 h and 7 days postoperatively. The area of bone loss in vestibular region of the first molar was evaluated by Optical Coherence Tomography (OCT). Data were analyzed statistically (ANOVA and Tukey tests, p˂0.05). Inflammatory markers IL-1, IL-6 and IL-10 were also evaluated. The animals treated by aPDT showed bone gain of approximately 30% compared to the SRP group following 7 days from the treatment. PDT reduced periodontal tissue destruction and may be useful as an adjuvant to SRP in the treatment of periodontitis. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT) tem sido utilizada como tratamento adjuvante para periodontite. Ele combina um fotossensibilizador com uma fonte de luz para induzir espécies reativas de oxigênio e destruir células microbianas. A Protoporfirina IX NetNI (PpNetNI) é um derivado de protoporfirina IX que tem sítios de afinidade para ligação às células microbianas. Esta é a primeira utilização deste fotossensibilizador em modelo experimental in vivo. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da PDT como um tratamento adjuvante para periodontite. Trinta ratos saudáveis Wistar (Rattus norvegicus) foram utilizados neste estudo (Aprovado pelo Comitê de Ética UNINOVE AN0029 / 2015). A periodontite foi induzida pela colocação de uma ligadura de algodão ao redor do primeiro molar mandibular em posição subgengival. O primeiro molar mandibular contralateral não recebeu nem ligadura nem tratamento, sendo utilizado como controle. Após 7 dias, a ligadura foi removida e todos os animais receberam raspagem e alisamento radicular (RAR) e foram aleatoriamente distribuídos de acordo com os seguintes tratamentos: grupo RAR (RAR e irrigação com PpNetNI, 10 μM) e grupo PDT (RAR, PpNetNI 10 μM seguido por LED irradiação). A PDT foi realizada com um LED (630 nm) com uma potência de saída de 400 mW (irradiância 200 mW/cm2, exposição radiante 18 J/cm2). Os ratos foram eutanasiados 24 h, 48 h e 7 dias após o tratamento. A área de perda óssea na região vestibular do primeiro molar foi avaliada por Tomografia de Coerência Óptica (OCT). Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA e testes de Tukey, p˂0,05). Os animais tratados com PDT apresentaram ganho ósseo de aproximadamente 30% em comparação com o grupo RAR após 7 dias do tratamento. E para podermos verificar melhor os resultados, foi feita a análise da expressão de marcadores inflamatórios no tecido periodontal, onde pudemos constatar que 7 dias após o tratamento houve a diminuição da inflamação levando ao reparo do tecido ósseo. A PDT reduziu a destruição do tecido periodontal e pode ser útil como adjuvante no tratamento da periodontite.

Submitted by MIRIAN MARCOLAN DE MELLO null (marcolanmirian@yahoo.com.br) on 2016-02-16T08:13:42Z No. of bitstreams: 1 TESE Doutorado Mirian14_02_2016REPOSITÓRIO.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-17T13:45:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mello_mm_dr_sjc.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-17T13:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mello_mm_dr_sjc.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Devido ao rápido aumento dos micro-organismos resistentes aos antibióticos e ao desenvolvimento limitado de novos agentes antimicrobianos, as infecções por bactérias Gram-negativas estão se tornando um desafio para os profissionais da saúde e uma ameaça para a saúde pública internacional. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito sinérgico dos antibióticos convencionais associados a terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT) no controle de Acinetobacter baumannii. Para realização desse trabalho, foram obtidos isolados clínicos de A. baumannii do Laboratório de Análises Clínicas Valeclin da cidade de São José dos Campos/SP, identificados pelo método de bioquimismo e submetidos ao teste de difusão em disco para verificar a sensibilidade antimicrobiana. Os isolados selecionados foram transferidos para o ICT/UNESP, onde foi realizado testes para determinação da Concentração Inibitória Mínima aos antibióticos Imipenem e Meropenem seguindo as normas da CLSI. Cepas sensíveis e resistentes aos antibióticos foram avaliadas quanto a sensibilidade in vitro à terapia fotodinâmica antimicrobiana. Além disso, foram testados os efeitos dos antibióticos convencionais, da PDT e da terapia combinada de antibióticos e PDT nas infecções experimentais induzidas em G. mellonella por isolados clínicos de A. baumannii resistentes aos antibióticos. Os resultados das terapias na infecção experimental foram avaliados por meio da curva de sobrevivência das lagartas de G. mellonella. Os dados dos testes in vitro foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Nos resultados desse estudo, observou-se que o Laboratório Valeclin identificou 1,54% de amostras positivas para A. baumannii entre as 13.715 amostras clínicas analisadas em um período de 8 meses. Entre os isolados de A. baumannii, 58% demonstraram resistência aos antibióticos imipenem e meropenem por meio de teste de difusão em disco. A seguir 3 isolados clínicos sensíveis e 18 isolados resistentes a esses antibióticos foram selecionados para o presente estudo. O valor de CIM para os isolados sensíveis variou de ˂ 0,5 a 1µg/mL e para os isolados resistentes de 64 a >128µg/mL. A PDT in vitro reduziu o número de células de A. baumannii em todos os isolados testados, mas o percentual de redução foi dependente dos isolados analisados. Além disso, verificou-se nos testes in vivo, que o tratamento com PDT, antibióticos (Imipenem e Meropenem) e associação de PDT+Antibióticos resultaram na sobrevivência das lagartas de G. mellonella, porém sem efeito sinérgico. Conclui-se que a PDT teve ação antimicrobiana contra isolados clínicos de A. baumannii sensíveis e resistentes aos carbapenêmicos, mas não apresentou efeito sinérgico quando associada com antibióticos. Due to the rapid growth of microorganisms resistant to antibiotics and the limited development of new antimicrobial agents, infections by Gram-negative bacteria are becoming a challenge for health professionals and a threat to international public health. The aim of this study was to evaluate the synergistic effect of conventional antibiotics associated with antimicrobial photodynamic therapy (PDT) in control of Acinetobacter baumannii. In order to conduct this project were obtained clinical isolates of A. baumannii at the Clinical Laboratory Valeclin situated in the city of São José dos Campos / SP, identified by bioquimismo method and submitted to disk diffusion test to verify the antimicrobial sensitivity. The selected isolates were transferred to the ICT / UNESP, which were conducted tests to determine the Minimum Inhibitory Concentration to Imipenem and Meropenem antibiotics following the rules of the CLSI. Sensitive and resistant strains to antibiotics were evaluated in vitro sensitivity to antimicrobial photodynamic therapy. Besides, the effects of conventional antibiotics, and combined PDT, and PDT of antibiotics in experimental infections induced in G. mellonella by clinical isolates of A. baumannii resistant to antibiotic therapy were tested. The results of therapies in experimental infection were evaluated by survival curve of worms G. mellonella. Data from in vitro tests were submitted to ANOVA and Tukey test. The data obtained in G. mellonella survival curve were analyzed by log-rank method. In all tests it was considered 5% significance level. The results of this study, it was observed that the Valeclin Laboratory identified 1.54% of positive samples for A. baumannii between the 13,715 clinical specimens analyzed in a period of 8 months. Among the isolates of A. baumannii, 58% were resistant to antibiotic imipenem and meropenem by disk diffusion test. Next, 3 isolates clinical sensitive and 18 isolates resistant to those antibiotics were selected for this study. The MIC value for sensitive isolates ranged from 0.5 to ˂ 1μg / mL and resistant isolates from 64 to> 128μg / mL. The PDT in vitro reduced the number of A. baumannii cells in all isolates tested, but the percentage of reduction was dependent on the analyzed isolates. Furthermore, it was found in in vivo tests, treatment with PDT, antibiotic (Imipenem and Meropenem) and PDT + Antibiotics association resulted in the survival of G. mellonella caterpillars, but no synergistic effect. It was concluded that PDT has antimicrobial activity against clinical isolates of A. baumannii sensitive and resistant to carbapenems, but it had no synergistic effect when combined with antibiotics.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The aim of this study was to evaluate the effects of methylene blue (MB) photosensitizer (PS) solubilized in ethanol in antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as an adjuvant periodontal treatment, at oxidative stress (OS) parameters and vascular behavior in rat model. Besides, investigate greater involvement of angiogenesis at the destruction or healing stages of periodontal disease (PD). One hundred and twenty male adult Wistar rats were divided randomly into five groups. The control groups were negative control (NC) (no PD, n=15) and positive control (PC) (with PD, without any treatment, n=15). The other groups had PD and underwent different types of treatment, such as scaling and root planing (SRP) and irrigation with 1mL of saline solution (SRP, n=30); SRP and aPDT with MB solubilized in water (aPDT I, n=30); SRP and aPDT with MB containing ethanol (aPDT II, n=30). The PD was induced via the installation of a ligature around the mandibular right first molar. After 7 days, the ligature was removed and animals received treatment. At 7, 15 and 30 days, rats were euthanized and the gingival tissue surrounding the induction area was removed for histomorphometric analysis of the number and diameter of blood vessels by staining with hematoxylin and eosin (H&E). The collected blood was centrifuged and the plasma was used to determine lipid peroxidation by quantifying thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), vitamin C (VIT C) and glutathione reduced (GSH) levels. The oxidative status showed higher TBARS levels in PC group in 7, 15 and 30 days, and indicated a protective influence of aPDT II on plasma observed from lower lipid peroxidation. GSH levels were consumed in PC, aPDT I and aPDT II groups throughout the experiment. Furthermore, aPDT II also increased antioxidant defenses in plasma: i) higher levels of GSH, and ii) increased levels of VIT C. Interestingly, the VIT C plasmatic levels were restored in the aPDT II group in the 30th experimental day. Histomorphometric findings in 7 days showed that treated groups (SRP, aPDT I and aPDT II) showed higher number of blood vessels, and the aPDT II group showed the highest values among them. From these results, aPDT modifies PD course, reducing oxidative systemic damage and stimulating the antioxidant defense system, thus protecting the areas closely affected by PD in rats. Moreover, was observed a relationship between increased expression of angiogenesis and repair stage of the PD. In summary, we suggest that the aPDT with MB solubilized in ethanol provides better therapeutic responses in periodontal treatment. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do fotossensibilizador (Fs) azul de metileno (AM) solubilizado em etanol na terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) como um tratamento periodontal adjuvante, sob parâmetros de estresse oxidativo (EO) e de comportamento vascular em modelo de rato. Bem como, investigar o maior envolvimento da angiogênese no estágio de avanço ou reparo da doença periodontal (DP). Cento e vinte ratos Wistar adultos machos foram randomizados e divididos em cinco grupos. Os grupos controles eram controle negativo (CN) (sem DP, n = 15) e controle positivo (CP) (com DP, sem qualquer tratamento, n = 15). Os demais grupos apresentavam DP e foram submetidos a diferentes tipos de tratamentos, como raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação com 1 mL de solução salina (RAR, n = 30); RAR e TFDa com AM solubilizado em água (TFDa I, n = 30); RAR e TFDa com AM contendo etanol (TFDa II, n = 30). A DP foi induzida através da colocação de uma ligadura ao redor do primeiro molar inferior direito. Após 7 dias, a ligadura foi removida e os animais receberam tratamento. Aos 7, 15 e 30 dias, os ratos foram eutanasiados e o tecido gengival circundante à área de indução foi removido para análise histomorfométrica do número e diâmetro dos vasos sanguíneos através da coloração com Hematoxilina e Eosina (HE). O sangue recolhido foi centrifugado e o plasma foi utilizado para determinar os níveis de peroxidação lipídica mensurados pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), vitamina C (VIT C) e glutationa reduzida (GSH). O status oxidativo demostrou maiores níveis de TBARS no grupo CP em 7, 15 e 30 dias, e indicou uma influência protetora da TFDa II no plasma observada a partir de menor peroxidação lipídica. Níveis de GSH foram consumidos nos grupos CP, TFDa I e TFDa II durante o experimento. Ainda, TFDa II também aumentou as defesas antioxidantes no plasma: a) níveis mais elevados de GSH, e b) aumento dos níveis de VIT C. Interessantemente, os níveis plasmáticos de VIT C foram restaurados no grupo TFDa II no trigésimo dia experimental. Os achados histomorfométricos mostraram em 7 dias que os grupos tratados (RAR, TFDa I e TFDa II) apresentaram elevado número de vasos sanguíneos, e o grupo TFDa II apresentou os maiores valores entre eles. A partir destes resultados, fica evidente que TFDa modifica a DP, reduzindo o dano oxidativo sistêmico, e estimula o sistema de defesa antioxidante, protegendo, assim, as zonas afetadas intimamente pela DP em ratos. Além disso, foi observado uma relação entre a maior expressão da angiogênese e o estágio de reparo da DP. Em síntese, sugerimos que a TFDa com AM solubilizado em etanol proporciona melhores respostas terapêuticas no tratamento periodontal.

FACEPE A Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (TFDa) tem sido proposta como um método alternativo para o tratamento de infecções causadas por micro-organismos como bactérias e fungos. Tal técnica baseia-se na ação simultânea de uma fonte luminosa e um agente fotossensibilizador, que na presença de luz, geraa produção de oxigênio singleto e espécies reativas de oxigênio que ao interagirem com componentes celulares, promovem a morte celular desses micro-organismos. Esse estudo teve como objetivo avaliar a ação da TFDa explorando nanopartículas de prata (com tamanho médio de 13 nm) e moléculas de riboflavina(157 μM) em conjunto com um LED (Light Emitting Diode) com comprimento de onda no azul (λ=455 ± 20nm), sobre cepas de Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosae Candida albicans. As cepas de S. mutans foram repicadas em BHI (Brain Infusion Heart) e incubadas em estufa bacteriológica a 37ºC, em atmosfera de 5% de CO2 por 48 he os inóculos de P. aeruginosa foram cultivados e estocados em TSA (Tryptic Soy Agar), em presença de O2, a 37º C, por 24 horas. Decorrido o tempo de incubação, colônias dos micro-organismos foram suspensas em Phosphate Buffered Saline (PBS) a uma densidade de1x107 Unidades Formadoras de Colônia (UFC)/mL.As culturas de Candida albicansforam cultivadas em meio SAB+Y (Agar Sabouraud Dextroseenriquecido com extrato de levedura). A incubação foi realizada à temperaturade 37ºC, durante período de 24 horas. Em seguida,foram preparadassuspensões com concentração de 5x106 células/mL,correspondente à turbidez de 0,5 na escala McFarland.O experimento foi dividido em doze grupos–o grupo controle, o grupo apenas com o tratamento com a luz (L), tratamento com a riboflavina (Rb), utilização da prata (Ag) e o sistema NPsAgRb+L. Posterior aotratamento, foi realizado diluição seriada e as placasincubadas a 37 ºC por 24 horas para bactérias e 48 hs para Candida sp. Ao final foi realizada a contagem de UFC/mLde ambos os micro-organismos. Os resultados foram submetidos à análise estatística descritiva. Na redução de UFC/mL foi estatisticamente significante em culturas de S. mutans com redução de 3 logs no número de células viáveis após 6 minutos de irradiação (p ˂0,05).A inativação fotodinâmica contra P. aeruginosa não foi observada estatística significativa após tratamento (p > 0,05). O mesmo foi observado nas culturas de C. albicans(p > 0,05), concluindo-se que a utilização de nanopartículas próximas ao fotossensibilizador foi eficiente contra bactérias Gram-positivas. Antimicrobial Photodynamic Therapy (TFDA) has been proposed as an alternative method for treating infections caused by microrganisms such as bacteria and fungi. This technique is based on the simultaneous action of a light source and a photosensitizing agent, in the presence of light, generates the singlet oxygen and reactive oxygen species to interact with cellular components and promote cell death of these microrganisms. This study aimed to evaluate the action of TFDa exploring silver nanoparticles (with an average size of 13 nm) and riboflavin molecules (157 mM) in conjunction with an LED (Light Emitting Diode) with a wavelength in the blue (λ = 455 ± 20nm) on Streptococcus mutans, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans. The strains of S. mutans were subcultured in BHI (Brain Heart Infusion) and incubated in bacteriological incubator at 37 ° C in an atmosphere of 5% CO2 for 48 h and the inocula of P. aeruginosa were grown and stored in TSA (Tryptic Soy Agar) in the presence of O2 at 37ºC for 24 hours. After the incubation time, colonies of microrganisms were suspended in Phosphate Buffered Saline (PBS) at a density of 1x107 colony forming units (CFU)/mL. The Candida albicans cultures were grown in SAB + Y (Sabouraud Dextrose Agar enriched with yeast extract). Incubation was carried out at 37°C temperature for 24 hours. Then, suspensions were prepared with a concentration of 5x106 cells/mL, corresponding to 0.5 on the McFarland turbidity scale. The experiment was divided into twelve groups - a control group, the only group with treatment with light (L), treatment with riboflavin (Rb), use of silver (Ag) and NPsAgRb + L system. After the treatment was carried out serial dilutions and the plates incubated at 37°C for 24 hours for bacteria and 48 hours for Candida sp. At the end it was performed CFU counts / ml of both microrganisms. The results were submitted to descriptive statistical analysis. The reduction of CFU/mL was statistically significant in cultures of S. mutans to 3 logs reduction in the number of viable cells after 6 minutes of irradiation (p ˂ 0.05). The photodynamic inactivation against P. aeruginosa was no statistically significant after treatment (p> 0.05). The same was observed in cultures of C. albicans (p> 0.05), it was concluded that the use of nanoparticles next to the photosensitizer was effective against Gram-positive bacteria.

Our goal was to optimize the antimicrobial photodynamic effect of methylene blue (MB) by adding ethanol or oxygen carrier in the formulation. Pseudomonas aeruginosa PA01 biofilms were formed on acrylic disks for 5 days. Photoactivated formulations contained MB (250 μM) in: buffered water, 10% ethanol (buffer:ethanol, 90:10), 20% ethanol (buffer:ethanol, 80:20) and emulsion carrier (perfluorodecalin:buffer:triton-X100, 60:35:5). The buffer used was a Tris-HCl solution to a pH of 7.4; and sodium acetate/acetic acid to solutions at pH 5.6. Untreated biofilms and exposed to the buffer, 10% ethanol and 20% without polymerization were evaluated as controls. Production of singlet oxygen was measured by photo-oxidation of 1.3-difenilisobenzofuran (75μM). Data of photo-oxidation and CFU (log10) were evaluated by One-Way ANOVA and post hoc Tukey and Dunnett, respectively. Student t-test assessed differences between the same formulation with different pH. Increased production of singlet oxygen was determined on MB diluted in 10% ethanol and 20% at pH 7.4. However, these formulations showed no statistical difference compared to pH 5.6; or in comparison to the MB diluted in buffer. Average data of CFU log10 for compositions of pH 7.4 containing MB/ethanol 10%, MB/ethanol 20% and MB/carrier were 3.99 ± 1.74; 4.04 ± 1.82; 3.82 ± 1.63, respectively. The average microbial reduction of these formulations were 2.47 (P=0.03); 2.42 (P=0.03); and 2.64 (P=0.02), respectively. The other formulations had no significant antimicrobial effect. Nosso objetivo foi otimizar o efeito fotodinâmico antimicrobiano do azul de metileno (AM) por meio da inclusão de etanol ou carreador de oxigênio na formulação. Biofilmes de Pseudomonas aeruginosa PA01 foram formados sobre discos de acrílico por 5 dias. Formulações fotoativadas continham AM (250 μM) em: água tamponada, etanol 10% (tampão:etanol, 90:10), etanol 20% (tampão:etanol, 80:20) e emulsão com carreador (perfluordecaleno:tampão:triton-X100, 60:35:5). O tampão utilizado foi o Tris-HCl para as soluções em pH 7,4; e acetato de sódio/ácido acético para as soluções em pH 5,6. Biofilmes sem tratamento e expostos ao tampão, etanol 10% e 20% sem fotoativação foram avaliados como controles. Produção de oxigênio singleto foi mensurada pela fotoxidação do 1,3-difenilisobenzofuran (75μM). Dados de foto-oxidação e UFC (log10) foram avaliados por One-Way ANOVA e post hoc Tukey e Dunnett, respectivamente. Teste t-Student avaliou diferenças entre a mesma formulação com diferente pH. Maior produção de oxigênio singleto foi verificada com AM diluído em etanol 10% e 20% no pH 7,4. Contudo, estas formulações não apresentaram diferença estatística em relação ao pH 5,6; ou em comparação ao AM diluído no tampão. Dados médios de UFC log10 para formulações com pH 7,4 contendo AM/etanol 10%, AM/etanol 20%, e AM/carreador foram de 3,99 ± 1,74; 4,04 ± 1,82; 3,82 ± 1,63, respectivamente. A redução microbiana média dessas formulações foi de 2,47 (P=0,03); 2,42 (P=0,03); e 2,64 (P=0,02), respectivamente. As demais formulações não apresentaram efeito antimicrobiano estatisticamente significante.

The persistence of microorganisms in the root canal system after chemical-mechanical preparation plays an important role in the success rate of endodontic treatment. Photodynamic Therapy in endodontics appeared to be a supplement to the disinfection of root canals aiming resolve this persistence. When questioning what the actual antibacterial effect of this treatment in clinical endodontics, we face numerous formulations and concentrations of the photosensitizer used, as well as numerous methodologies to test its antimicrobial activity, offering confusing and inconclusive results. The aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial activity against two strains of Enterococcus faecalis ATCCs 29212 and 51299, of the methylene blue photosensitizer (PS) in different formulations and concentrations cited in the literature. The method used to evaluate the antibacterial activity of the photosensitizer was the microdilution to determine the minimum inhibitory concentration. The 18 test substances, in the literature, were left in contact for five minutes in each well and then followed by the application of the laser (660 nm, Kondortech®, São Carlos, SP, Brazil) for three minutes. The tests were performed according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). After the incubation period at 35 ± 2 ° C 18-24hs, read visually observing the bacterial growth and is considered where the inhibitory substances were wells without turbidity and / or deposition of sediments at the bottom was carried out. Dissolved in a mixture of 2% chlorhexidine and H₂O₂ (substance 15), and a mixture of glycerol, ethanol, water, hydrogen peroxide and Triton X100 detergent (substance 10) PS inhibited the growth of Enterococcus faecalis resistant microorganism 29212. For the addition of these the mixture PS glycerol, ethanol, and water (substance 13) also showed an inhibitory power. No concentration of methylene blue dissolved in water (300 to 7.5 μmol / L) had able to inhibit the growth of the strains analyzed. Given the literature reviewed and the results of the study to predict the efficacy of PDT against microorganism problem in endodontics, a standardization of the optimal formulation of PS, its contact time and also of important laser parameters is still necessary, as full power , creep and irradiation time. A permanência dos microrganismos no sistema de canais radiculares após o preparo químico-mecânico desempenha um importante papel na taxa de sucesso do tratamento endodôntico. A Terapia Fotodinâmica surgiu na endodontia para ser um suplemento à desinfecção dos canais radiculares visando dirimir essa persistência. Ao questionarmos qual o real efeito antibacteriano desse tratamento na clínica de endodontia, nos deparamos com inúmeras formulações e concentrações usadas do fotossensibilizador, bem como inúmeras metodologias para testar sua atividade antimicrobiana, oferecendo resultados confusos e não conclusivos. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a atividade antibacteriana, frente a duas cepas de Enterococcus faecalis ATCCs 29212 e 51299, do agente fotossensibilizador (FS) azul de metileno em diferentes concentrações e formulações citadas na literatura. O método empregado para avaliar a atividade antibacteriana do fotossensibilizador foi a microdiluição em caldo com a determinação da concentração inibitória mínima. As 18 substâncias-teste, citadas na literatura, foram deixadas em contato por cinco minutos em cada poço e então, seguiu-se a aplicação do laser (660nm, Kondortech®, São Carlos, SP, Brazil) por três minutos. Os testes foram realizados de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). Após o período de incubação de 18-24hs a 35±2ºC, foi realizada a leitura visual observando o crescimento bacteriano, sendo consideradas inibitórias as substâncias onde os poços estavam sem turbidez e/ou depósito de sedimentos no fundo. O FS dissolvido numa mistura de H₂O₂ e clorexidina 2% (substância 15) e numa mistura de glicerol, etanol, água, peróxido de hidrogênio e detergente Triton X100 (substância 10) inibiram o crescimento do Enterococcus faecalis 29212. Para o microrganismo resistente além destas, a mistura do FS em glicerol, etanol e água (substância 13) também apresentou poder inibitório. Nenhuma concentração de azul de metileno dissolvido em água (300 a 7,5 μmol/L) apresentou poder de inibir o crescimento das cepas estudadas. Diante da literatura pesquisada e dos resultados do estudo, para predizer a eficácia da TFD frente ao microrganismo problema na endodontia, ainda é necessário uma padronização da formulação ideal do FS, seu tempo de contato e ainda, de parâmetros importantes do laser, como potência total, fluência e tempo de irradiação.