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Resumen Introducción: Las enfermedades producidas por micobacterias son de gran importancia clínica y epidemiológica presentando el complejo Mycobacterium tuberculosis (MTBc) una morbi-mortalidad mayor que la producida por micobacterias no tuberculosas (MNTB). La identificación tradicional está basada en sus características fenotípicas mediante procesos laboriosos e incapaces en algunos casos de distinguir entre especies. Actualmente, la mayoría de las técnicas utilizadas se basan en métodos moleculares que tienen alta veracidad, pero son complejas y de alto costo. La espectrometría de masas con desorción/ionización láser asistida por una matriz asociada a tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS) se basa en la comparación del espectro proteico producido con respecto al de una base de datos de referencia. Objetivo: Evaluar el rendimiento de MALDI-TOF MS en la identificación de micobacterias comparado con métodos moleculares: Material y Métodos: Se analizaron 28 aislados de nueve especies distintas mediante MALDI-TOF MS. Resultados: Se identificó correctamente 78,5% de las aislados (22/28), concordante en 100% (9/9) de MNTB de crecimiento rápido, 60% (9/15) en las MNTB de crecimiento lento y 100% (4/4) de MTBc. Todas las especies no identificadas (6/6) pertenecen al complejo M. avium/intracellulare. Conclusión: MALDI-TOD MS es una metodología rápida, fácil y de bajo costo, con adecuada veracidad respecto a los métodos moleculares.

La tuberculosis es una enfermedad causada por bacterias pertenecientes al Complejo Mycobacterium tuberculosis. El diagnóstico se dificulta por su sintomatología inespecífica y los métodos bacteriológicos que ofrecen resultados tardíos. El objetivo del presente estudio fue comparar el desempeño del sistema automatizado BacT/ALERT® 3D con los métodos convencionales de cultivo en medio Lowenstein-Jensen (L-J) y Ogawa-Kudoh (O-K) para el aislamiento de micobacterias. Se procesaron 266 muestras provenientes de pacientes con sospecha de tuberculosis entre mayo y octubre de 2013. Se aislaron 63 bacilos acido-resistentes: 46 M. tuberculosis y 17 micobacterias no tuberculosas (MNT). Al comparar los tres métodos, se observó que todos presentaron desempeño similar en el aislamiento de M. tuberculosis. Las tasas de recuperación obtenidas no mostraron diferencia estadísticamente significativa (p>0,05) sin embargo, con BacT/ALERT® 3D se aislaron mayor número de MNT, con diferencia significativa respecto al L-J (p 0.05). However, with the BacT/ALERT® 3D system, a larger number of MNT were isolated, with significant statistic difference for L-J (p

Introducción: La genotipificación del complejo Mycobacterium tuberculosis (cMtbc) permite conocer los genotipos geográficamente predominantes. Algunos genotipos se diseminan con mayor rapidez y se asocian a multi-resistencia, tal como Beijing, reportado en América Latina en Perú. Existe poca información al respecto en Chile, sin reportes de la presencia de Beijing. Objetivo: Conocer los genotipos prevalentes en dos centros de salud de la Región Metropolitana de Chile con énfasis en la búsqueda de Beijing. Métodos: Se utilizaron dos métodos moleculares complementarios basados en la variación de las regiones de repeticiones directa en el genoma de M. tuberculosis (espoligotipificación) y número variable de repeticiones en tandem de las unidades repetitivas de interespaciadores micobacterianos (MIRU-VNTRs) y posterior análisis en bases de datos internacionales. Resultados: Se asignó un genotipo conocido a 37 de las 43 cepas estudiadas (86%), mientras que en 14% no se asignó alguno. Los genotipos LAM y T fueron los más frecuentes (39,5 y 32,5%, respectivamente), seguidos por Haarlem (7,0%), Beijing (4,7%) y X (2,3%). Conclusión: Se describe por primera vez en Chile la presencia del genotipo Beijing en cepas de cMtb. Es necesario realizar una vigilancia epidemiológica molecular en el cMtb para conocer la dinámica de la transmisión en nuestro país. Background: Genotyping of Mycobacterium tuberculosis complex (cMtb) allows us to know geographically predominant lineages. Some lineages spread more rapidly and are associated with multidrug resistance, particularly Beijing, which has been reported in Latin America (Peru). There is little information about this topic in Chile and there are no reports of the presence of the Beijing genotype. Aim: To determine the most prevalent lineages in the Metropolitan Region of Chile with emphasis on the search for Beijing in two health centers. Methods: Two complementary molecular methods were used: spoligotyping, based on the variations of the direct repeat regions in the genome of cMtb and MIRU-VNTR, based in the variable number of tandem repeats of mycobacterial interspersed repetitive units, and subsequent analysis in international databases. A designed lineage was assigned to 37 of the 43 strains studied (86%); 6 isolates could not be assigned to any genotype. LAM and T genotype were the most frequent (39.5 and 32.5%, respectively) followed by Haarlem (7.0%), Beijing (4.7%) and X (2.3%). Conclusion: We describe for the first time the presence of the Beijing genotype in Chile. cMtb molecular surveillance should be implemented in our country in order to know the dynamics of its transmission.

We describe here a very simple modification of the auramine staining procedure based on preparation of a UV-fixed thick blotch which allowed us to reach an overall sensitivity of 0.82 (592 acid-fast bacillus [AFB]-positive specimens/722 initial respiratory specimens with positive mycobacterial culture) and sensitivities of 0.93 (526 AFB-positive specimens/564 culture-positive specimens) for Mycobacterium tuberculosis complex and 0.42 (66 AFB-positive specimens/158 culture-positive specimens) for nontuberculous mycobacteria.

Las micobacterias que causan tuberculosis en animales y humanos pertenecen al complejo Mycobacterium tuberculosis. Las técnicas de diagnóstico convencional, además de ser lentas y laboriosas, no permiten diferenciar entre miembros de este complejo. El objetivo de este estudio fue evaluar ensayos de RPC múltiple para contribuir a la identificación diferencial de micobacterias del complejo M. tuberculosis a partir de cultivos, en un laboratorio de referencia. Se utilizaron oligonucleótidos partidores basados en regiones de diferencia (RD) que consisten en segmentos de ADN que están presentes en M. tuberculosis, pero que han sido eliminados diferencialmente del genoma de otros miembros del complejo M. tuberculosis. El ensayo se aplicó sobre 86 aislados clínicos de micobacterias. El patrón de amplificación permitió diferenciar entre cepas de M. tuberculosis, M. bovis y M. bovis variedad BCG en una única RPC. Este ensayo de RPC múltiple puede ser utilizado en el Laboratorio de Referencia de Diagnóstico de Tuberculosis como prueba complementaria para diferenciar micobacterias del complejo M. tuberculosis, contribuyendo a un acortamiento en el período de reporte de resultados y un tratamiento adecuado del paciente, y podría ser aplicado también en estudios epidemiológicos de transmisión zoonótica de M. bovis a humanos Mycobacteria that cause tuberculosis in animals and humans belong to the Mycobacterium tuberculosis complex. Techniques for conventional diagnosis are time-consuming and do not differentiate between different strains belonging to the M. tuberculosis complex. The aim of this study was to evaluate a multiplex PCR assay applicable to mycobacteria in culture with the capacity to differentiate different strains belonging to the M. tuberculosis complex in a reference laboratory. Primers based on genomics regions of difference (RD) consisting in DNA segments that are present in M. tuberculosis, but differentially deleted in several members of M. tuberculosis complex were used in a PCR assay. The test was applied to 86 clinical isolates of mycobacteria. The pattern of amplification allowed differentiating between M. tuberculosis, M. bovis and M. bovis BCG in a single PCR reaction. This PCR multiplex assay may be used in a Reference Laboratory of Tuberculosis Diagnosis as a complementary test to differentiate mycobacteria strains belonging to the M. tuberculosis complex. This test significantly reduces the time period between culture and strain identification, and thus for could favor the adoption of better strain specific antimycobacterial regimens as well as identification of zoonotic transmission of M. bovis to humans

Las micobacterias que causan tuberculosis en animales y humanos pertenecen al complejo Mycobacterium tuberculosis. Las tecnicas de diagnostico convencional, ademas de ser lentas y laboriosas, no permiten diferenciar entre miembros de este complejo. El objetivo de este estudio fue evaluar ensayos de RPC multiple para contribuir a la identificacion diferencial de micobacterias del complejo M. tuberculosis a partir de cultivos, en un laboratorio de referencia. Se utilizaron oligonucleotidos partidores basados en regiones de diferencia (RD) que consisten en segmentos de ADN que estan presentes en M. tuberculosis, pero que han sido eliminados diferencialmente del genoma de otros miembros del complejo M. tuberculosis. El ensayo se aplico sobre 86 aislados clinicos de micobacterias. El patron de amplificacion permitio diferenciar entre cepas de M. tuberculosis, M. bovis y M. bovis variedad BCG en una unica RPC. Este ensayo de RPC multiple puede ser utilizado en el Laboratorio de Referencia de Diagnostico de Tuberculosis como prueba complementaria para diferenciar micobacterias del complejo M. tuberculosis, contribuyendo a un acortamiento en el periodo de reporte de resultados y un tratamiento adecuado del paciente, y podria ser aplicado tambien en estudios epidemiologicos de transmision zoonotica de M. bovis a humanos