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Un lot de 40 mâles d'une souche de truite arc-en-ciel (Salmo gairdneri) à reproduction printanière a été suivi. Seuls les spermes d'un volume supérieur ou égal à 6 ml ont été caractérisés et congelés en boulettes. L'analyse factorielle des correspondances entre les caractéristiques et la fécondance du sperme après 5 à 9 mois de congélation a montré en particulier que l'aptitude à la cryoconservation peut être caractérisée par l'analyse du plasma séminal : les spermes médiocres sont associés à une osmolarité plasmatique élevée (260 m-osmoles) et/ou une teneur élevée en protéine 42 KD, l'un des constituants majeur de la membrane des spermatozoïdes; les très bons spermes sont associés à l'absence de protéine 42 KD dans le liquide séminal. Ces résultats renforcent l'idée que l'aptitude à la cryoconservation du sperme de truite dépend en premier lieu de la qualité de la membrane des spermatozoïdes., Milt was obtained from 40 males of a spring-spawning strain of rainbow trout (Salmo gairdneri). Only semen with a volume greater or equal to 6 ml were characterized and frozen in pellets. Factorial analysis of correspondences between the physico-chemical characteristics and the fertility of sperm after 5 to 9 months freezing revealed that the fitness for cryopreservation can be particularly characterized by the composition of the seminal plasma: sperm with the lowest capacity to fertilize were associated with a plasma osmolality greater than 260 m-Osm and/or a high level of 42 KD protein, one of the major components of the spermatozoan membrane; sperm with the highest fertilizing ability lacked 42 KD protein in the seminal plasma. These results support the idea that the fitness for cryopreservation of trout sperm primarily depends on the condition of the spermatozoan membrane.

Des embryons somatiques de caféiers (#C. arabica$ L.), obtenus à partir d'explants foliaires, survivent à une congélation à -196°C. Les jeunes embryons sont isolés puis cultivés pendant 24 heures sur un milieu enrichi en saccharose (0,75 M). Ils sont ensuite mis à incuber pendant 2 heures dans une solution cryoprotectrice contenant la même concentration en saccharose et 5 % de diméthysulfoxyde. Placés dans des ampoules cryobiologiques, ils sont alors congelés lentement, jusqu'à -40°C, avant d'être plongés et conservés dans de l'azote liquide. Après un réchauffement rapide dans un bain-marie à 40°C, les embryons sont repiqués chaque jour sur des milieux dont la concentration en saccharose est progressivement abaissée jusqu'à la valeur standard de 0,1 M. Le taux de reprise de l'embryogenèse adventive atteint 50 %, 17 semaines après le réchauffement. Les premières plantules, obtenues in vitro à partir de matériel congelé, ont un développement apparemment normal. Dans un proche avenir, la technique mise au point pourrait être élargie à d'autres espèces actuellement entretenues en champ par les stations de recherche caféière. (Résumé d'auteur)

La méthode décrite utilisant du sucrose comme cryoprotecteur a été une réussite pour la cryoconservation d'embryons issus de deux clones pendant sept mois dans l'azote liquide. On a observé un bon taux de croissance des embryons

Des massifs de jeunes embryons somatiques de palmier à huile, obtenus après 2 mois de culture sur un milieu contenant 0,3 M de saccharose, survivent à une congélation à - 196oC. Dans les essais réalisés ici, ils sont placés pendant 7 jours sur un milieu enrichi en saccharose, avant d'être plongés directement dans l'azote liquide. Après un réchauffement de 1 mn dans un bain-marie à 40oC, ils sont transférés pendant 3 semaines sur des milieux progressivement appauvris en saccharose. La reprise de leur prolifération n'est observée qu'en présence de l'acide 2.4 dichlorophénoxyacétique (2.4-D). Une cinquantaine de pousses feuillées d'apparence normale ont déjà été obtenues. (Résumé d'auteur)

ResumeDes embryons somatiques de cafeiers (C. arabica L.), obtenus a partir d'explants foliaires, survivent a une congelation a - 196°C. Les jeunes embryons sont isoles puis cultives pendant 24 heures sur un milieu enrichi en saccharose (0,75 M). Ils sont ensuite mis a incuber pendant 2 heures dans une solution cryoprotectrice contenant la meme concentration en saccharose et 5% de dimethylsulfoxyde. Places dans des ampoules cryobiologiques, ils sont alors congeles lentement, jusqu'a-40°C, avant d'etre plonges et conserves dans de l'azote liquide. Apres un rechauffement rapide dans un bain-marie a 40°C, les embryons sont repiques chaque jour sur des milieux dont la concentration en saccharose est progressivement abaissee jusqu'a la valeur standard de 0,1 M. Le taux de reprise de l'embryogenese adventive atteint 50%, 17 semaines apres le rechauffement. Les premieres plantules, obtenues in vitro a partir de materiel congele, ont un developpement apparemment normal. Dans un proche avenir, la technique mise au...

International audience; Cryopreservation trials on rainbow trout (Salmo gairdneri) sperm were carried out using two basic extenders : Mounib's medium (M) and Ménézo's medium (Me) to which were added bovine serum albumin (BSA) and tellurite egg yolk (Institut Pasteur). After 10 p. 100 of DMSO was added to these different deep-freeze diluents (DD), they were mixed with the sperm and then deep-frozen into 100 !Ll pellets on dry ice. The pellets were stored in liquid nitrogen for periods lasting from 3 days to 6 months. The intensity of sperm motility and fertilizing ability were measured before and after cryopreservation. After the sperm was diluted in Ménézo's medium, slight spermatozoon motility was noticed, which probably caused their early exhaustion and would explain the lower fertilizing ability observed after thawing. Mounib's medium gave better results, especially after 10 p. 100 of egg yolk was added. The optimal deep-freeze conditions were : 1/3 dilution, no equilibration after dilution but immediate deep-freezing at a rate of 10 to 40 °C¡min. Thawing had to be carried out rapidly in 10 sec. However, the spermatozoa were altered during the freezing-thawing process, and during insemination more frozen spermatozoa had to be used to equal the fertilization rate obtained with non-frozen sperm. However, the fertile spermatozoa gave normal embryogenesis and no abnormal development was seen up to the vesicle resorption stage. At the end of spermiation, sperm fitness for deep-freezing decreased, perhaps due to sperm senescence. Pooling the sperm of several males partially compensated for the loss of fertilizing ability seen at the end of the reproductive period.

International audience; Des expériences ont été conduites dans le but de définir la nature et la molarité du tampon à utiliser avec les deux dilueurs d'insémination et de conservation définis précédemment. Les effets des différents tampons ont été testés d'une part sur la stabilité du pH du dilueur après introduction de quantités croissantes de NaOH et HCI, de liquide coelomique et d'ovules et d'autre part sur le pourcentage de fécondation établi sur de petits lots de 200 ovules. Les conclusions sont les suivantes : 1) Le dilueur d'insémination (solution de NaCI à 250 mosm) peut être avantageusement tamponné avec un tampon carbonate-bicarbonate 0 ,02 M, pH de 9,2 a 9,5 Ce tampon se révèle plus stable après introduction de grande quantité d'ovules que les autres tampons testés (Tvis- HCl, Glycocolle-NaOH), mais le pourcentage de fécondation reste le même avec chacun de ces tampons. 2) Lorsque le milieu minéral de liquide séminal (MMLS) est utilisé comme dilueur de conservation, la conservation du pouvoir fécondant du sperme est meilleure si le tampon utilisé est le Tris-HC1 ; le pH optimum est voisin de 9,0.

La cryoconservation de jeunes embryoïdes de palmier à huile est réalisée en utilisant une vitesse de congélation rapide (200oC min-1). Les taux de survie obtenus varient de 50 à 80 p. 100 et l'embryogenèse adventive reprend sur 10 à 20 p. 100 des massifs congelés. Après le traitement rhizogène des pousses feuillées issues des embryoïdes congelés, les vitroplants sont acclimatés en serre et leur développement s'effectue normalement jusqu'à présent. L'utilisation d'un congélateur programmable pour la congélation des massifs d'embryoïdes, qui permet d'obtenir des vitesses de refroidissement plus précises et parfaitement reproductibles, conduit aux mêmes résultats. La reprise de l'embryogenèse adventive a été observée sur des massifs d'embryoïdes stockés respectivement 7 et 15 mois dans l'azote liquide. Ces résultats permettent d'envisager l'application rapide de cette technique de cryoconservation pour le stockage des lignées d'embryoïdes produits par la culture in vitro et son extension par la suite à la conservation des ressources génétiques du palmier à huile. (Résumé d'auteur)

Biology of gametes, eggs and embryos

Several methods to control gamete availability in northern pike were investigated. Precocious induction of ovulation was achieved with a single injection of partially purified salmon gonadotropin, but the treatment should be administered soon after capture in order to avoid ovarian atresia. Ovulated oocytes should be inseminated within 24 hours after ovulation. Loss of fertility due to aging occurred 1-3 days after ovulation. High doses of progesterone induced a threefold increase of sperm release. Cryopreservation of diluted sperm at -196 C led to variable fertilizing capacities after thawing, depending on the donor male. A diluent originally tested for trout was used successfully for artificial insemination.

L'effet de la température de prérefroidisseemnt sur le taux de survie des graines cryoconservées de #C. arabica" et des embryons zygotiques excisé a été étudié. Les graines ont été déshydratées à 0,2 g H2O/g MS, puis congelées à 1°C/min jusqu'à différentes températures de prérefroidissement. Le taux de germination optimal (70%) des graines cryoconservées a été obtenu en prérefroidissant les graines jusqu'à -50°C. Après 4 mois de culture, 30% des graines se sont développées en plantules normales. Pour les embryons extraits des graines cryoconservées après réchauffement, le taux de survie maximal (97%) a été observé lorsque les graines ont été immergées dans l'azote liquide directement après la déshydratation (sans prérefroidissement). Tous les embryons viables se sont développés en plantules normales après 2 mois de culture. (Résumé d'auteur)

Apices sampled on in vitro plantlets of sugarcane were cryopreserved using the encapsulation-dehydration technique, comprising pregrowth for 24 h in liquid medium with 0.75 M sucrose, dessication to 20-25% moisture content (fresh weight basis) and rapid immersion in liquid nitrogen. Apices of one variety were stored for up to one year at -196°C, -70°C or -25°C, with or without previous transitory immersion in liquid nitrogen. Whereas the recovery percentage of apices stored at -196°C remained high and constant throughout the experiment, recovery of apices conserved at -70°C and -25°C decreased dramatically within 0.5 day, and was nil after 10 or 120 days in storage at -25°C and -70°C, respectively. The recovery percentage of apices of four additional varieties remained stable throughout a 1-year storage period at -196°C. No differences were noted for 6 agronomic traits between plants regenerated from control and cryopreserved apices of two sugarcane varieties. (Résumé d'auteur)

National audience

Deux protocoles de cryoconservation, l'un utilisant un processus classique de congélation et l'autre une technique simplifiée, ont été développés pour des cals embryogènes d'un clone commercialisé d'hévéa. Dans les deux cas, une préculture sur un milieu contenant 1 M de saccharose et 10% de DMSO a été réalisée. Dans le protocole classique, les cals embryogènes ont été congelés à 0,2°C/min jusqu'à -40°C à l'aide d'un congélateur programmable, tandis que la méthode simplifiée consiste à redroidir les cals dans un bain d'isopropanol, contenu dans une boite en polystyrène et placé dans un congélateur ménager à -20°C. Cette méthode simplifiée a permis de reproduire une vitesse de congélation de 0,2°C/min jusqu'à -40°C. Un taux de survie et une reprise de croissance élevés, ainsi que la régénération d'embryons zygotiques, ont été obtenus avec les deux techniques. La technique simplifiée a été utilisée avec succès pour un second clone. (Résumé d'auteur)

Ex situ collections offer the potential to reduce extinction risks, affording option to society in maintaining future breeding opportunities for productivity and heritage traits. However, how much should we be seeking to collect and conserve in gene banks, and where? We developed a mathematical model to optimize logistical decisions of breed conservation choices and to evaluate alternative scenarios for efficiently re‐allocating genetic materials currently stored in different European gene banks, allowing for cross‐country collections, cost and cryogenic capacity differentials. We show how alternative allocations for the breeds that are currently stored in 11 European gene banks could reduce overall conservation costs by around 20% by selecting cryogenic banks that have relatively lower combination of fixed and collection costs, and are geographically closer to collection regions. Our results show that centralizing collections in one gene bank would double the costs, relative to collective European collections approaches. We also calculate marginal costs of collections and show that increasing diversity within the gene banks implies in higher costs per conserved breed.

A simplified freezing process was developed and successfully applied to embryogenic calluses of three sugarcane commercial hybrids (Saccharum sp. cv. CP 5243, C 91-301 and C 1051-73). To obtain optimal survival, the calluses were pretreated with a cryoprotective solution containing 10% DMSO and 0.3 to 0.75M sucrose. For freezing, the samples were immersed in an alcohol bath placed in a -40 degrees C freezer, thus allowing a freezing rate comprised between 0.4 and 0.6 degrees C/min. Samples were held at that temperature for 2 h before immersion in liquid nitrogen. The highest survival rates of cryopreserved calluses ranged between 20 and 94% depending on the variety, and fully developed plantlets could be obtained from regenerating calluses. Embryogenic calluses of one variety were stored for 14 months in liquid nitrogen without any effect on their survival rate and plantlet production., Comment: 6 pages, 3 tables