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1. Four hours after treatment of rats with lindane (60 mg/kg), hepatic GSH content was decreased (22%) and GSSG was increased (20%), while biliary concentration and excretion of both GSH and GSSG and bile flow were diminished. These changes coincide with the onset of hepatic lipid peroxidation. 2. The changes induced by lindane at 4 h disappeared at 6 h after treatment, but liver GSSG content (91%), biliary GSSG excretion (133%) and bile flow (42%) were enhanced at 24 h. 3. The data indicate that lindane treatment elicits marked changes in hepatocyte glutathione status, with a decrease in the GSH/GSSG ratio at early (2-4 h) and late (24 h) periods of poisoning.

Background Phenolic compounds combine antioxidant and hypocholesterolemic activities and, consequently, are expected to prevent or minimize cardiometabolic risk. Methods To evaluate the effect of an aqueous extract (AQ) and non-esterified phenolic fraction (NEPF) from rosemary on oxidative stress in diet-induced hypercholesterolemia, 48 male 4-week old Wistar rats were divided into 6 groups: 1 chow diet group (C) and 5 hypercholesterolemic diet groups, with 1 receiving water (HC), 2 receiving AQ at concentrations of 7 and 140 mg/kg body weight (AQ70 and AQ140, respectively), and 2 receiving NEPF at concentrations of 7 and 14 mg/kg body weight (NEPF7 and NEPF14, respectively) by gavage for 4 weeks. Results In vitro, both AQ and NEPF had remarkable antioxidant activity in the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH●) assay, which was similar to BHT. In vivo, the group that received AQ at 70 mg/kg body weight had lower serum total cholesterol (−39.8%), non-HDL-c (−44.4%) and thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) levels (−37.7%) compared with the HC group. NEPF (7 and 14 mg/kg) reduced the tissue TBARS levels and increased the activity of tissular antioxidant enzymes (superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase). Neither AQ nor NEPF was able to ameliorate the alterations in the hypercholesterolemic diet-induced fatty acid composition in the liver. Conclusions These data suggest that phenolic compounds from rosemary ameliorate the antioxidant defense in different tissues and attenuate oxidative stress in diet-induced hypercholesterolemic rats, whereas the serum lipid profile was improved only in rats that received the aqueous extract.

A pele humana está exposta, diariamente, tanto ao material particulado do ar (MP) quanto à radiação solar. A exposição ao MP tem sido associada ao envelhecimento prematuro da pele e ao agravamento de doenças cutâneas como a dermatite atópica. A radiação solar pode iniciar o processo inflamatório e promover danos ao DNA da pele. No entanto pouco se tem estudado sobre os efeitos da exposição simultânea da pele a radiação solar e ao MP do ar. Nosso objetivo foi desenvolver um modelo de exposição concomitante ao MP e radiação solar em modelo de epiderme humana reconstruída (EHR). O primeiro passo foi encontrar uma dose de radiação solar que não induzisse alterações graves na epiderme. Doses 5 e 10 J/cm2 de radiação total foram testadas (com e sem filtro AM1.5G). Uma segunda experiência foi realizada para encontrar o melhor volume da suspensão de MP a ser aplicado sobre a EHR. Foram realizadas análises histológicas e imunohistoquímicas para a proteína loricrina. Com esses resultados, a dose de 5 J/cm2 com filtro AM1.5G e 8,9 µg/cm2 de MP suspenso em 200 µL de PBS foi empregada no modelo de exposição EHR para estudar a exposição simultânea ao MP e à radiação solar. Foram analisadas a viabilidade e a função barreira dos equivalentes epidérmicos expostos ao MP e a radiação solar, isolados ou concomitantemente. Redução na viabilidade nas EHRs expostas à radiação foi observado. Em relação a barreira cutânea, o grupo de epidermes irradiadas demostrou alteração significativa quando comparado com todos os demais tratamentos. A secreção de IL-8 mostrou-se aumentada em relação ao controle nas epidermes irradiadas enquanto a exposição concomitante induziu uma redução desta citocina quando comparada com o controle. Nas análises histológicas e de imunohistoquímica não ocorreram alterações dignas de nota. Ocorreu aumento significativo da expressão de CK10 e notch1 na dupla exposição em relação ao irradiado e redução significativa da expressão de loricrina em comparação ao controle e irradiado, não ocorrendo alterações relevantes na expressão da proteína AQP3. Com nossos achados e levando em consideração trabalhos na literatura reiteramos a importância notch1 para a sinalização das proteínas de função barreira AQP3, CK10 e loricrina. A exposição concomitante ao MP e a radiação solar foi capaz de reverter o fortalecimento da barreira ocorrido apenas na exposição à radiação. Importante concluir que de todos os modelos descritos na literatura nenhum deles reproduz a condição de exposição humana a radiação solar e ao MP como em nosso estudo. Human skin is exposed daily to both airborne particulate matter (PM) and solar radiation. Exposure to PM has been associated with premature skin aging and the aggravation of skin diseases such as atopic dermatitis. Solar radiation can initiate the inflammatory process and promote damage to the skin\'s DNA. However, little has been studied about the effects of simultaneous exposure of the skin to solar radiation and PM from the air. Our objective was to develop a model of concomitant exposure to PM and solar radiation in a reconstructed human epidermis (RHE) model. The first step was to find a dose of solar radiation that would not induce serious changes in the epidermis. Doses of 5 and 10 J/cm2 of total radiation were tested (with and without AM1.5G filter). A second experiment was performed to find the best volume of PM suspension to be applied over the RHE. Histological and immunohistochemical analyzes were performed for the loricrin protein. With these results, the dose of 5 J/cm2 with AM1.5G filter and 8.9µg/cm2 of PM suspended in 200µL of PBS was used in the RHE exposure model to study the simultaneous exposure to PM and solar radiation. The viability and barrier function of the epidermal equivalents exposed to PM and solar radiation, alone or concomitantly, were analyzed. Reduction in viability in radiation exposed RHEs was observed. Regarding the skin barrier, the irradiated epidermis group showed a significant change when compared to all other treatments. IL-8 secretion was increased compared to control in irradiated epidermis, whereas concomitant exposure induced a reduction in this cytokine when compared to control. In the histological and immunohistochemical analyses, there were no noteworthy alterations. There was a significant increase in the expression of CK10 and notch1 in the double exposure compared to irradiated and a significant reduction in loricrin expression compared to the control and irradiated, with no relevant changes in the expression of AQP3 protein. With our findings and taking into account works in the literature, we reiterate the importance of notch1 for signaling barrier function proteins AQP3, CK10 and loricrin. The concomitant exposure of PM and solar radiation was able to reverse the strengthening of the barrier that occurred only in the exposure to radiation. It is important to conclude that of all the models described in the literature, none of them reproduces the exact condition of human exposure to solar radiation and PM as in our study.

A presença de resíduos de praguicidas em alimentos, somada à contaminação da água, oferece risco para a população em geral e representa, sem dúvida, um grande problema de saúde pública no Brasil. A livre disponibilidade dos praguicidas, a falta de levantamentos de dados que permitam conhecer qual a ingestão diária de seus resíduos nos diferentes centros populacionais e de uma efetiva preocupação por parte das autoridades de saúde pública colaboram significativamente para a ocorrência de freqüentes acidentes e tragédias no campo e na cidade. O primeiro passo para o desenvolvimento deste trabalho foi capacitar um órgão da rede estadual com uma estrutura laboratorial para auxiliar programas de controle e monitoramento da produção agrícola regional, do meio ambiente e de vigilância à saúde, para fazer frente ao problemas decorrentes do uso indiscriminado dos praguicidas. Foram implantados e validados um método multi-resíduos para a análise de inseticidas organoclorados e organofosforados e métodos específicos para a detecção de resíduos de metamidofós e etilenotiuréia (ETU) em tomates. A produção de tomate do Estado de Pernambuco foi escolhida para a avaliação dos problemas de saúde da população e para o meio ambiente provocados pelo uso de praguicidas pelas seguintes razões: (1) o Estado é o segundo maior produtor deste fruto no país; (2) essa cultura, no modelo dominante de produção, demanda uso intensivo de praguicidas e possui um ciclo curto de produção; (3) o tomate está enraizado no hábito alimentar da população em geral. Foram selecionadas duas regiões de produção do Estado, com o objetivo de comparar a agricultura modernizada, praticada nos perímetros irrigados e destinadas à produção industrial, com a agricultura tradicional. responsável por uma grande parcela do abastecimento da região metropolitana de Recife. Foram utilizados todos os dados disponíveis sobre os tipos de praguicidas empregados no Estado de Pernambuco com o objetivo de avaliar se o uso desses produtos em cada mesorregião é coerente com a produção agrícola existente. A aplicação de questionários foi o instrumento utilizado para a obtenção de informações sócio-ambientais e de morbidade referida em trabalhadores rurais envolvidos com a cultura de tomate das regiões estudadas. Três amostras da produção de tomate industrial (11,1%) estavam impróprias para consumo, em virtude dos níveis de metamidofós encontrados. A situação da produção de tomate de mesa foi mais grave, visto que 53,1% das amostras de tomate (n=17) violaram o estabelecido pela nossa legislação, com níveis não permitidos para os inseticidas organofosforado metamidofós e o organoclorado endosulfan. Os resultados obtidos nas duas regiões estudadas mostraram que a produção orientada da agricultura resulta na produção de tomate com melhor qualidade, no que se refere a resíduos de praguicidas. Porém, ficou constatado que as duas regiões estudadas, indiscriminadamente. carecem de ações que visem à proteção da saúde dos trabalhadores rurais que lidam com os praguicidas e de medidas contra os danos para ao meio ambiente, que se encontra gravemente comprometido. In addition to water contamination, the presence of pesticide residues in food is a risk to the population as a whole, which undoubtedly constitutes a severe public health problem in Brazil. The uncontrolled availability of pesticides, the lack of information and data on daily ingestion of these residues in food, and the lack of effective concern on the part of the public health authorities greatly contribute to the frequent occurrence of accidents and tragedies in both rural and urban areas. The first step in the development of this study was to provide a state institution with laboratory facilities to aid programs for monitoring and controlling regional agricultural production as well as environment and health surveillance, in order to address the problem posed by uncontrolled use of pesticides. A multi-residue method was validated to quantify organochlorine and organophosphorous insecticides as well as selective methods for detection of residues of methamidophos and ethylenathiourea (ETU). To evaluate problems resulting from the use of pesticides, which affect human health and the environment, tomate production in the state of Pernambuco was chosen for the following reasons: 1) Pernambuco is the second largest producer of tomatoes in the country; 2) tomato production, which has a short cycle, is characterized in the present development model, by intensive use of pesticides; and 3) tomato consumption is widely-spread and deeply rooted in the eating h a bits o f the population. To compare modern agricultural methods employed in irrigated areas designated for industrial production with traditional agriculture largely responsible for supplying the Recife metropolitan area, two production regions of the state were selected. All existing data on types of pesticides utilized in Pernambuco was considered in the evaluation of the use of these products on agricultural produce. Questionnaires were applied to obtain socio-environmental information as well as morbidity rates and data on rural workers involved in tomate production in regions under study. Three samples from industrial production (11,1 %) were considered improper for human ingestion because the metamidophos level was above the maximum residue limit. Fresh tomatoes for direct consumer use tested far worse: 53,1% of the samples (n=17) presented levels of metamidophos and endosulfan higher than those acceptable by consumer protection legislation. The results obtained in the two regions studied show that the modernization of agricultural methods does result in the production of better quality tomatoes in regard to lower pesticide residue. However, they also demonstrate that both regions lack effective policies to not only protect the health of rural workers who deal with pesticides, but also to protect the environment which has already been severely damaged.

A hipercolesterolemia é considerada um importante fator de risco para as doenças cardiovasculares, já que a hiperlipidemia associada ao estresse oxidativo é um dos fatores para estabelecimento destas doenças. Neste contexto, antioxidantes presentes em alimentos como vitaminas, compostos fenólicos, entre outros têm recebido crescente atenção devido sua função quimiopreventiva contra danos oxidativos. O alecrim (Rosmarinus officinalis L.) é um membro da família Labiatae, cujas propriedades antioxidantes têm sido atribuídas a uma variedade de compostos fenólicos capazes de finalizar as reações de radicais livres e varrer as espécies reativas de oxigênio. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade antioxidante in vitro dos extratos e frações de ácidos fenólicos obtidos das folhas de alecrim e seu efeito sobre ratos com hipercolesterolemia induzida pela dieta suplementada com 0,50% de colesterol e 0,25% de ácido cólico. Os resultados mostraram que tanto os extratos quanto as frações apresentaram altos teores de compostos fenólicos totais e expressiva atividade antioxidante in vitro nos métodos de cooxidação de substratos β-caroteno/ácido linoleico e na varredura do radical DPPH. No ensaio in vivo, observou-se aumento significativo (p≤0,05) de colesterol total e de LDL colesterol nos animais que consumiram a dieta hipercolesterolêmica. Os compostos fenólicos presentes tanto no extrato aquoso quanto na fração não esterificada do alecrim foram capazes de atuar sobre a atividade das enzimas antioxidantes endógenas CAT, GPx e SOD, confirmando a ação dos compostos antioxidantes presentes nesta especiaria sobre parâmetros do estresse oxidativo. O extrato aquoso na concentração 70 mg/Kg reduziu os valores de colesterol total (39,8%) e LDL-c (45,6%) e melhorou o estado antioxidante dos animais, uma vez que aumentou a atividade da GPx no tecido cardíaco (43,2%) e reduziu a formação de SRATB (32,3%) no soro dos animais. Não foi observado efeito dose resposta no lipidograma destes animais, sugerindo um limiar de atuação do extrato aquoso. Em um contexto geral, o extrato aquoso e a fração não esterificada do alecrim apresentaram capacidade antioxidante in vitro significativa e, nas condições do estudo, exerceram um papel importante sobre o estresse oxidativo presente na hipercolesterolemia experimental, uma vez que os resultados obtidos para o extrato aquoso administrado na concentração de 70 mg/Kg sugerem um papel importante dos compostos fenólicos presentes neste extrato sobre o metabolismo de colesterol. Hypercholesterolemia is considered an important risk factor for cardiovascular diseases, since hyperlipidemia associated to oxidative stress is one of the risk factors for these diseases. In this context, antioxidants derived from foods such as vitamins, phenolic compounds and others have been receiving increased attention due to their chemopreventive function against oxidative damages. Rosemary (Rosmarinus officinalis L.) belongs to the Labiatae family, whose antioxidant properties have been attributed to a variety of phenolic compounds capable of reacting with free radicals and quenching reactive oxygen species. The aim of this work was to evaluate the in vitro antioxidant capacity of extracts and phenolic acids fractions obtained from rosemary leaves and their effect on rats fed with 0.50% cholesterol and 0.25% cholic acid enriched diet. The results showed that extracts and fractions had high levels of total phenolic compounds and expressive antioxidant activity in vitro in both methods β-caroteno/ linoleic acid cooxidation and in the DPPH radical scavenge. Analysis in vivo showed a significant increase (p≤0.05) in total cholesterol and LDL cholesterol in hypercholesterolemic animals. Phenolic compounds present in rosemary aqueous extract and non-esterified fraction were capable to act on the activity of CAT, GPx and SOD, confirming the action of antioxidant compounds present in this spice on parameters of oxidative stress. Aqueous extract in concentration of 70 mg/Kg had reduced total cholesterol (39.8%) and LDL-c (45.6%) values and improved the animals\' antioxidant status, once it increased heart GPx activity (43.2%) and decreased SRATB production (32.3%) in the serum of this group. There was no dose response effect on serum lipids of these animals, suggesting a threshold of the aqueous extract activity. In a general context, the aqueous extract and non-esterified fraction of rosemary presented significant antioxidant capacity in vitro and in the conditions of the study, played an important role on the oxidative stress in experimental hypercholesterolemia, and the results obtained for the aqueous extract administered in the concentration of 70 mg/kg suggests an important role of phenolic compounds present in this extract on cholesterol metabolism.

Cloropropanóis são um grupo conhecido de contaminantes relacionados ao processamento de alimentos. Eles são formados na reação entre lipídeos e cloretos quando submetidos ao tratamento térmico, e podem ser encontrados na forma livre ou ligada. O 3-monocloro-1,2-propanediol (3-MCPD), é classificado pela IARC como possível carcinógeno humano (grupo 2B). O glicidol (e seus ésteres), é classificado também pela IARC como uma substância provavelmente carcinogênica para seres humanos (grupo 2A), e, recentemente, vem sendo encontrado em alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença do 3-MCPD e do glicidol em óleos vegetais comestíveis utilizando a cromatografia gasosa com detector de massa triplo quadrupolo MS/MS. A técnica utilizada foi a preconizada pela AOCS Cd 29c-13, sendo uma análise indireta, e foi possível adaptá-la visando as determinações do 3-MCPD e glicidol através da construção de curvas de calibração e análises de amostras de referência. O método foi validado e os resultados indicaram o limite de detecção do composto 3-MCPD, de 42,4 µg/kg e o limite de quantificação de 50 µg/kg, e para o Glicidol indicaram o limite de detecção de 43,5 µg/kg e limite de quantificação de 50 µg/kg. Os resultados para 3-MCPD obtidos nos ensaios da curva de calibração e linearidade demonstraram que o método foi capaz de expressar resultados com boa linearidade (0 - 10 mg/kg , r2, = 0.9991). Os resultados obtidos nos ensaios de exatidão obedeceram aos critérios de 70 a 120% de recuperação, e ±20% de variação entre os resultados de acordo com SANTE (2017). O método em questão demonstrou ser seletivo, uma vez que não foram observados picos interferentes nos tempos de retenção dos compostos estudados. Os ensaios de precisão nos níveis baixos, médio e alto e robustez demonstraram que o método é robusto e preciso, portanto a validação foi considerada adequada ao uso pretendido. Foram analisadas 368 amostras de óleos vegetais (76 amostras de óleo de canola, 48 amostras de óleo de milho, 69 amostras de óleo de algodão, 33 amostras de óleo de palma, 10 amostras de óleo de palmiste, 50 amostras de oleína de palma, 30 amostras de óleo de soja e 51 amostras de óleo de girassol). As concentrações das amostras analisadas apresentaram resultados para 3-MCPD com valores médios entre 203 a 1205 µg/kg. Para o Glicidol os valores foram de 2 a 1198 µg/kg, com elevado o desvio padrão entre os resultados analíticos, onde o óleo de palma apresentou a maior variação de 1600 a 5260 µg/kg. Através da avaliação do risco realizada para o composto 3-MCPD foi possível detectar, utilizando o critério do pior cenário de exposição e resultados analíticos, os valores diários de consumo de óleo de algodão de 0,044 µg/kg p.c., de óleo de girassol 0,045 µg/kg p.c., óleo de canola 0,18 µg/kg p.c., óleo de palma de 0,28 µg/p.c, óleo de milho de 0,0462 µg/kg p.c., e o óleo de soja, de maior consumo no Brasil (72%) apresentou o valor de 0,27 µg/kg p.c. O consumo de todos estes óleos, pela a população brasileira, pode ser considerado seguro ao comparar com o valor de TDI Ingestão Diária Tolerável - de 2µg/kg p.c.. Através da avaliação do risco realizada também utilizando o critério de pior cenário de exposição e e resultados analíticos para o composto glicidol foi possível verificar que os valores diários de consumo de óleo de algodão de 0,061 µg/kg p.c., de óleo de girassol 0,03 µg/kg p.c., óleo de canola 0,13 µg/kg p.c. e de óleo de palma de 0,57 µg/p.c, de óleo de milho de 0,11 µg/kg p.c, e o óleo de soja de maior consumo no Brasil (72%) não ultrapassam o valor de 0,288 µg/kg p.c indicando consumo seguro destes óleos para a população brasileira baseado na TDI de 1000µg/kg p.c. Chloropropanols are a known group of contaminants related to food processing. They are formed during the reaction process between lipids and chlorides when submitted to heat treatment and can be found in free or bound form. The 3-monochloro-1,2-propanediol (3-MCPD), is classified by IARC as a possible human carcinogen (group 2B). Glycidol (and its esters), also classified by IARC as a substance likely to be carcinogenic to humans (group 2A), has recently been found in food. The present study aims to evaluate the presence of 3-MCPD and glycidol in edible vegetable oils using gas chromatography with triple quadrupole MS/MS mass detector. The technique applied is recommended by AOCS, guide Cd 29c-13, an indirect analysis, and allows quantification of 3-MCPD and glycidol by building the calibration curves and analysis of reference samples. The method was validated and the detection limit of the contaminant 3-MCPD of 42,4 µg/kg and the quantification limit of 50 µg/kg was established. For Glycidol the detection limit of was 43,5 µg/kg and quantification limit was 50 µg/kg. The results obtained in the calibration and linearity curves demonstrated that the method could express results with good linearity (0 10 mg/kg, r2, = 0.9991). The results obtained in the trueness trials agreed to the criteria of 70 to 120% of recovery, and ± 20% of variation between the results according to what is preconized by SANTE (2017). The method showed to be selective, since no interfering peaks were observed in the retention times of the studied compounds. The tests performed on low, medium and high values demonstrated the robustness and precision of the method, so the validation was considered completed and suitable for the purpose. A total of 368 vegetable oil samples were analyzed (76 samples of canola oil, 48 samples of corn oil, 69 samples of cottonseed oil, 33 samples of palm oil, 10 samples of kern palm oil, 50 samples of palm olein, 30 samples of soybean oil and 51 samples of sunflower oil). The results found in samples for 3-MCPD were within mean values between 203 and 1205 µg/kg. The results found in samples for glycidol were within mean values between 2 to 1198 µg/kg where palm oil presented the highest variation for glycidol from 1600 to 5260 µg/kg. Through the risk assessment for the contaminant 3-MCPD it was possible to detect the values based on exposed worst case scenario and analytical results. The results for cottom oil were 0,044 µg/kg bw, sunflower 0,045 µg/kg bw, canola 0,18 µg/kg bw and palm oil 0,28 µg/kg bw, corn oil 0,0462 µg/kg bw, and for soybean, which is the most consumed oil in Brazil (72%) the value of 0,27 µg/kg bw. These results indicates safe consumption for these oils based in the Theoretical Daily Ingestion - TDI of 2µg/kg bw. The risk assessment for the glycidol based on exposure worst case scenario and analytical results presented for cottom oil the value of 0,061 µg/kg bw, sunflower 0,03 µg/kg bw, canola oil 0,13 µg/kg bw , palm oil 0,57 µg/kg bw, corn oil 0,11 µg/kg bw and for soybean, which is the most consumed in Brazil - 72% the value of 0,27 µg/kg bw. These results indicates safe consumption for these oils based in the TDI of 1000µg/kg bw.

Avaliou-se a atividade quimiopreventiva da tributirina (TB), e da vitamina A (VA) administradas em associação ou não, antes, durante e após a iniciação em ratos submetidos a modelo de carcinogênese de cólon. Ratos Wistar receberam VA [1 mg/100 g de p.c (grupo VA)], tributirina [200 mg/100 g de p.c (grupo TB)] ou associação de VA com TB (grupo VA+TB). Ratos tratados com óleo de milho e maltodextrina serviram como controle (GC). Avaliou-se a presença de focos de criptas aberrantes (FCA) e sua localização nos cólons, além de danos e do padrão de metilação global do DNA na mucosa colônica. No cólon total, distal e proximal, o grupo TB apresentou menor (p

Embora o melanoma represente apenas 4% das neoplasias malignas da pele, é considerado a mais grave por ser altamente etal. Em virtude da via MAPK (Mitogen activated protein kinase) estar intimamente ligada ao descontrole da proliferação celular, especialmente em melanoma, esta via se tornou um alvo para o desenvolvimento de terapias direcionadas a oncogenes, como os potentes quimioterápicos Vemurafenibe (inibidor da mutação V600E em BRAF - BRAFV600E) e Trametinibe (inibidor de MEK). Cada vez mais, melhores taxas de respostas vêm sendo alcançadas com os novos medicamentos, porém a maioria dos pacientes está sujeita a recidivas após 7 meses de tratamento devido ao desenvolvimento de quimioresistência, justificando a constante busca por novos compostos terapêuticos. Dados de nosso laboratório indicam que 4-nerolidilcatecol (4-NC) induz aumento na expressão de p53, produção de ROS e dano ao DNA, culminando em apoptose dependente de caspase-3 em células de melanoma por ser um inibidor proteassomal. Além disto, o 4-nerolidilcatecol (4- NC) demonstrou efeito inibitório na proliferação de células de melanoma em modelo de cultura organotípica de pele. Desta forma, este projeto visa avaliar a possibilidade de superação da quimioresistência aos inibidores de BRAF e de MEK, utilizando terapias combinatórias com 4-NC em células de melanoma humano resistentes a estes inibidores. Primeiramente, linhagens celulares de melanoma resistentes aos inibidores de BRAF (R) e BRAF/MEK (DR) foram geradas a partir de células parentais BRAF mutadas (P) e caracterizadas por MTT, microscopia de fluorescência e western blotting. Estas células foram submetidas ao tratamento com 4-NC que apresentou citotoxicidade na concentração de 30µM, inibição de formação de colônias e diminuição na invasão em modelos in vitro de culturas 2D e 3D em todas as linhagens estudadas (P, R e DR). O 4-NC foi ainda capaz de induzir estresse de retículo endoplasmático com indução de apoptose. Visando a explorar o efeito terapêutico in vivo do 4-NC, outro estudo foi conduzido em animais submetidos a enxerto xenográfico com células parentais de melanoma NRAS mutadas. Após desenvolvimento do tumor, os animais foram tratados 3 vezes por semana durante 3 semanas com 4-NC (10 mg/kg) por via i.p. O 4-NC foi capaz de inibir em até 4 vezes o crescimento dos tumores xenográficos (4/10) quando comparado com os controles, com remissão completa do tumor em um animal. A expressão de p53 e PARP clivada foi aumentada nos tumores dos animais tratados, sugerindo apoptose. A expressão gênica de MMP2 e MMP14 estava diminuída nas mesmas amostras, demonstrando o papel do 4-NC na inibição da invasão do melanoma in vivo. Finalmente, a toxicidade sistêmica do 4-NC foi avaliada nas mesmas doses empregadas no ensaio in vivo de tumorigênese. A baixa toxicidade observada nos ensaios toxicológicos com tratamentos sub-crônicos com 4-NC e a citotoxicidade demonstrada em modelos xenográficos nos leva a considerar este composto como promissor para estudos futuros e sua aplicação no tratamento do melanoma cutâneo humano, incluindo pacientes resistentes aos inibidores de BRAF e MEK. Melanoma accounts for only 4% of malignant neoplasms of the skin, but is considered the most serious because it is highly deadly. Because the MAPK (Mitogen activated protein kinase) pathway is closely linked to the lack of control of cell proliferation, especially in melanoma, this pathway has become a target for the development of oncogene-targeted therapies, such as the potent chemotherapeutic agents Vemurafenib (V600E mutation inhibitor in BRAF - BRAFV600E) and Trametinib (MEK inhibitor). Increasingly, better response rates have been achieved with the new drugs, but most patients are subject to relapses after 7 months of treatment due to several mechanisms, which justify the constant search for new therapeutic compounds. Data from our laboratory indicate that 4-nerolidylcatechol (4-NC) induces increased p53 expression, ROS production and DNA damage, culminating in caspase-3 dependent apoptosis in melanoma cells. The 4-NC compound demonstrated an inhibitory effect on melanoma cell proliferation in an organotypic skin culture model. Thus, this project aims to evaluate the possibility of overcoming the existing chemoresistance to BRAF and MEK inhibitors, using 4-NC combinatory therapies in human melanoma cells resistant to these inhibitors. Firstly, melanoma cell lines resistant to BRAF (R) and BRAF / MEK (DR) inhibitors were generated from naive cells mutated BRAF (N) and characterized by MTT, fluorescence microscopy and western blotting. These cells were submitted to 4-NC treatment that showed cytotoxicity with 30 µM, inhibition of colony formation and decrease in invasion in 2D and 3D in vitro models in all cell line studied (N, R and DR). Furthermore, 4-NC was able to induce endoplasmic reticulum stress with apoptosis induction. In order to explore the in vivo therapeutic effect of 4-NC, an additional study was conducted using xenograft model with NRAS-mutated melanoma cell line. After tumor development, the animals were treated 3 times per week for 3 weeks with 4-NC (10 mg / kg) by i.p. injection. 4-NC was able to inhibit up to 4- fold the growth of xenograft tumors (4/10) when compared to controls, with complete tumor remission in one animal. Cleaved PARP and p53 expression were increased in the tumors of treated animals, suggesting apoptosis. MMP2 and MMP14 gene expression were decreased in the same samples, demonstrating the role of 4-NC in inhibiting melanoma invasion in vivo. Finally, the systemic toxicity of 4-NC was evaluated at the same doses employed in the in vivo tumorigenesis assay. The low toxicity observed in the toxicological assays with sub-chronic 4- NC treatments and the demonstrated cytotoxicity in xenograft models leads us to consider this compound as promising for future studies and its application in the treatment of cutaneous human melanoma, including patients resistants to BRAF and MEK inhibitors.

Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) são uma classe de substâncias químicas que podem ser geradas na combustão de matéria orgânica, e 17 destas substâncias são consideradas como poluentes prioritários pela Agência de Proteção Ambiental dos EUA (US EPA), em função de seu potencial tóxico e carcinogênico. Para identificar e quantificar os HPAs no ambiente de trabalho por cromatografia gasosa / espectrometria de massas, foram realizadas coletas de amostras ambientais em um incinerador de resíduos de serviços de saúde localizado na região da grande São Paulo e em três fundições de metais nas cidades de Loanda e Santa Isabel do Ivaí, no Estado do Paraná. A concentração de HPAs totais nas amostras ambientais coletadas no Incinerador foi de 0,36 - 1,72 µg/m3; na Fundição 1 de 0,72 - 4,56 µg/m3; na Fundição 2 de 2,32 - 6,52 µg/m3; na Fundição 3 de 0,19 - 3,72 µg/m3. Foi realizada também a coleta de amostras biológicas de trabalhadores expostos e não expostos, para a identificação e quantificação do indicador biológico de exposição o 1-hidroxipireno por cromatografia líquida com detector de fluorescência. A concentração de 1-hidroxipireno nas amostrados biológicas dos trabalhadores no Incinerador apresentou diferença estatisticamente siginificante entre o grupo exposto e o grupo controle; na Fundição 1 houve diferença estatisticamente pouco significante entre os grupos estudados; nas Fundições 2 e 3 não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos estudados. The Polycyclic Aromatics Hydrocarbons (PAH) are a class of chemicals that can to be generated by organic matter burning, and 17 of that chemicals are considered priority pollutant by Environmental Protection Agency (US EPA), because their toxicity and carcinogenicity potentials. To identify and to quantitify the PAH at workplace atmosphere by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS), it was conducted a environmental sampling in a waste incinerator, settled in the metropolitan São Paulo Region, and at three metals foundry settled in the Loanda City and Santa Isabel do Ivaí City, at Paraná State. The concentration of total PAH in the environmental samples collected in a waste incinerator was 0,36 - 1,72 µg/m3; at metals foundry 1 was 0,72 - 4,56 µg/m3; at metals foundry 2 was 2,32 - 6,52 µg/m3; at metals foundry 3 was 0,19 - 3,72 µg/m3. The biological samples of the workers was collected to identify and to quantitify the biological indicator urinary 1-hydroxypyrene (1-OH-Pyr) by high performance liquid chromatography/fluorescence detector (HPLC-Flu). The 1-OH-Pyr concentration in the biological samples of the exposed and control group in a waste incinerator presented a statistical significant difference; in the metals foundry 1 was observed a slight statistical significant difference; and in the metals foundry 2 and metals foundry 3 was not observed statistical significant difference.

O composto estudado neste trabalho foi o corante comercial CI Disperse Blue 291 (DB291), que contém o aminoazobenzeno 2-[(2-bromo-4,6-dinitrofenil)azo]-5-(dietilamino)-4-metoxiacetanilida. Esse produto é um azo-corante disperso usado largamente pelas indústrias têxteis para o tingimento de poliéster e pode ser encontrado em ambientes aquáticos oriundo da descarga de efluentes industriais, podendo levar à exposição de humanos por meio da ingestão de água ou alimentos contaminados. Portanto, faz-se importante a avaliação toxicológica do DB291. Este produto apresentou atividade mutagênica para linhagens de Salmonella typhimurium que possuem alta expressão das enzimas nitrorredutase e Ο-acetiltransferase. Tais enzimas também são expressas pelas bactérias da flora intestinal humana e de roedores e, desempenham importante papel na biotransformação de substâncias presentes na luz intestinal. O objetivo deste trabalho foi investigar a atividade do corante DB291 na indução de lesões pré-neoplásicas no cólon de ratos, avaliada pelo teste do cometa e pelo desenvolvimento de focos de criptas aberrantes (FCAs). Resultados com 2, 8, 16 e 24 semanas de tratamento demonstraram que o DB291 não foi capaz de induzir FCAs em ratos tratados por gavage com a dose de 50mg/kg de peso corpóreo, três vezes por semana em dias alternados. Entretanto, resultados com o teste do cometa demonstraram que o corante foi capaz de causar danos ao DNA das células da mucosa do cólon de ratos tratados por via intra-retal. Estes resultados sugerem que o DB291 possui atividade genotóxica in vivo. Considerando a resposta genotóxica para o teste do cometa, a alta atividade mutagênica no teste Salmonella microssoma e o recente relato de que o DP291 causou danos em células de fígado humano (HepG2), faz-se necessário a realização de testes de carcinogênese de longa duração para avaliação segura do seu potencial carcinogênico, não somente em cólon, mas em outros órgãos tais como fígado e bexiga. The commercial disperse dye product CI Disperse Blue 291 , which contain the aminoazobenzene 2-[(2-bromo-4,6-dinitrophenyl)azo]-5-(diethylamino)-4-methoxyacetanilide (CAS registry no. 56548-64-2) is used for polyester fibers dyeing. It can be released in the aquatic environment through the discharge of industrial effluents. Humans can be exposed through the consumption of water and food contaminated with this product therefore its toxicological properties are important to be evaluated. This product showed elevated mutagenic activity with nitroreductase and Ο-acetyltransferase overproducing Salmonella strains. These enzymes are also expressed by human intestinal microflora, making intestines a possible target organ to the development of cancer after exposure to this product. The aim of this study was to investigate the effects of the commercial disperse dye product containing the CI Disperse Blue 291 on rat colon carcinogenesis, evaluated by the single cell gel assay (comet assay) and by aberrant crypt foci development. Results within different experimental periods showed the DB291 were not able to induce preneoplastic lesions in the colon of rats orally treated with 50mg/kg b.w., three times a week. The DB291 induced damages in the DNA of the rats colon mucosa, evaluated by the comet assay. These data indicate that the OB291 showed genotoxic activity in the colon mucosa cells. Considering these results, the mutagenic activity with Salmonella test and the recent data that the OB291 presents toxicity to human liver cells (HepG2), further long time carcinogenesis assays are needed to security evaluation of its carcinogenic potential, not only in colon, but also another organs like liver and kidney.

Os antimicrobianos são amplamente utilizados no tratamento e prevenção de doenças do gado leiteiro. A ocorrência de resíduos de gentamicina, resultante principalmente do tratamento da mastite bovina é uma das principais causas o aparecimento de resíduos no leite. Neste estudo utilizando como técnica LC/MS-MS, foram analisadas 48 amostras de leite adquiridas em estabelecimentos comerciais, apenas uma apresentou resíduos de gentamicina no valor de 0, 112 ug/mL, superior ao LMR de 100 µg/ml estabelecido pela União Européia (UE), já para o leite in natura, das 55 amostras analisadas, quatro amostras foram positivas apresentando os valores 0,155 ug/mL, 0,192 ug/mL, 0,130 ug/ml e 0,167 ug/mL, todos acima do LMR estabelecido pela União Européia (UE). O método apresentou limite de quantificação de e 0,1 ng/mL, linearidade de 0,1-1500 ng/mL e coeficientes de determinação de 0,992557, recuperação de 91,5 % e com precisão e exatidão adequadas. Conhecer a dimensão da exposição da população a esses compostos é de fundamental importância para promover as ações de controle visando à proteção do consumidor. Desta forma as políticas de inspeção e qualidade do leite criadas pelo governo devem ser aplicadas e servir de garantia para o consumo seguro deste alimento pela população. The antibiotics are widely used to treat and preventions diseases for dairy cattle. The occurrence of residues of gentamicin, resulting mainly from treatment of bovine mastitis are a major cause the appearance of residues in milk. In this study using the technique LC/MS-MS, were analyzed 48 samples of milk purchased in shops, only one sample present residues of gentamicin showing the value 0,112 ug/ml, exceeding the MRLs of µg/ml established by the European Union (EU) already for milk in nature, from 55 samples, four samples were positive showing the values 0,155 ug/mL, 0,192 ug/mL, 0,130 ug/ml and 0,167 ug/mL, All above the MRLs set by the European Union (EU). The method presented limit of quantification, and 0.1 ng/mL, linearity of 0,1-1500 ng/mL and coefficients of determination of 0.992557, recovery of 91.5% and with precision and accuracy appropriate. know the size of population\'s exposure to these compounds is of fundamental importance to promote measures to control aimed at protecting the consumer. Thus the politics of inspection and quality of milk created by the government should be implemented and serve as a guarantee for the safe consumption of food by the population.

O desenvolvimento de novos modelos de pele e novas metodologias in vitro segue uma tendência mundial na busca pela redução ou substituição de testes em animais. Nesse contexto, kits de epiderme humana reconstruída (RHE) apresentam-se como uma plataforma promissoras para essa proposta e, alguns modelos encontram-se validados para ensaios de irritação e corrosão cutânea in vitro. Entretanto, em países como o Brasil, enfrentam-se questões alfandegárias e perda do material por perecibilidade, dificultando e até impedindo, a importação desses kits para utilização por parte das indústrias e laboratórios nacionais. Em contrapartida, o desenvolvimento de um modelo de RHE apresenta-se como um avanço tecnológico e ganho de autonomia para esses países. Assim, no capítulo 1 explorou-se o desenvolvimento de um modelo nacional de RHE (USP-RHE) que atendesse às exigências internacionais descritas no guia OECD 439. O modelo desenvolvido apresentou uma epiderme bem diferenciada e atendeu aos parâmetros de qualidade (histologia, viabilidade e função barreira) bem como da funcionalidade, a qual é expressa na capacidade de distinção entre irritantes e não irritantes, apresentando 85,7% de especificidade, 100% sensibilidade e 92,3% de acurácia quando comparada com a classificação in vivo obtida pelo ensaio do linfonodo local (LLNA). No capítulo 2, células monocíticas THP-1 em monocamada foram capazes de distinguir entre agentes sensibilizantes e não sensibilizantes por meio da expressão de CD86, CD54 e liberação de IL-8. Após a obtenção de RHE e THP-1 funcionais, um cross-talking foi estabelecido gerando uma RHE imunocompetente. A RHEI distinguiu satisfatoriamente entre agentes sensibilizantes e não sensibilizantes por meio da expressão de CD86 e CD54 na membrana das células THP-1. A liberação de IL-8 também foi avaliada na RHEI, mas, não demonstrou ser um bom indicador para a avaliação de sensibilização, ao contrário de IL-1α, que distinguiu satisfatoriamente agentes sensibilizantes de não-sensibilizantes, mas não foi capaz de hierarquizá-los. No capítulo 3, avaliou-se o papel de interleucinas do tipo Th2 e da depleção de colesterol na membrana plasmática no desenvolvimento de características morfológicas e moleculares da dermatite atópica (DA) in vitro em um modelo de RHE. Os resultados demonstram que o uso de IL-4, IL-13 e IL-25 em combinação com a depleção de colesterol na membrana plasmática mimetiza in vitro, as principais características da DA. No capítulo 4, buscou-se avaliar os efeitos imunossupressores da radiação ultravioleta na RHEI. Os ensaios foram realizados em diferentes períodos de exposição, entretanto, não foi possível observar tais efeitos. Os resultados justificam-se pela ausência da liberação de IL-10 pelo RHE imunocompetente, por exemplo, e demonstram uma limitação do RHE imunocompetente para avaliações de inativação da reposta imune. Neste trabalho, concluímos que foi possível obter uma RHE competitiva, similar aos modelos internacionais validados e que pode ser utilizada como plataforma para ensaios de irritação e sensibilização cutânea, além de ser uma plataforma para estudos da dermatite atópica. No modelo é possível estudar a ativação do sistema imune, o que o torna promissor como uma plataforma para avaliação de resposta imunológica in vitro. Conclui-se, portanto, que os objetivos foram amplamente atendidos além de oferecermos um protocolo de livre acesso para reprodução por outros laboratórios e um modelo para validação futura. The development of new in vitro skin models and new methodologies follows a global trend in search for reductions or replacement of animal testing. In this context, Reconstructed Human Epidermis kits (RHE) are presented as a promising platform in the search for alternative methods to animal use, and some models are validated for skin irritation and corrosion in vitro tests. However, in countries such as Brazil, who face customs issues and loss of material due to perishability, making it challenging and even compromising the importation of these kits for use by industries and laboratories. In contrast, the development of an RHE model is presented as a technological breakthrough and gain of autonomy for these countries. Thus, in Chapter 1 we explored the development of a national model of RHE (USP-RHE) that meet international requirements described in OECD TG 439. The developed model presented a well-differentiated epidermis and met the quality parameters, for instance, histology, viability, and barrier function as well as the functionality expressed in the capacity of screening between irritants and nonirritants, with 85.7 % of specificity, 100 % of sensitivity and 91.7% of accuracy in comparision to in vivo UN GHS classification from Local limph node assay (LLNA). In chapter 2, monocytic THP-1 cell line, as monolayers, were able to distinguish between sensitizers and non-sensitizers by expression of CD86, CD54, and IL-8 release. In this model, functional RHE and THP-1 were used in a cross-talking, and thus an immunocompetent RHE (RHEI) was generated. The RHEI has distinguished satisfactorily between sensitizers and non-sensitizers through CD86 and CD54 expression that was larger and more sensitive in this model. The release of IL-8 was also evaluated in RHEI, however, did not demonstrate to be a good parameter for this evaluation, unlike IL-1α, which satisfactorily distinguished sensitizers from non-sensitizers, but was not able to hierarchize them. In chapter 3, we evaluated the role of Th2-related cytokines and plasma membrane cholesterol depletion (CD) in the development of atopic dermatitis (AD) morphological and molecular characteristics in an in vitro model of RHE. The results showed that combination of IL-4, IL-13 and IL-25 in combination with CD can reproduce the major features of AD in vitro. In Chapter 4, we sought to evaluate the ultraviolet radiation-induced immunosuppressive effects in RHE. The tests were performed at different times. However, it was not possible to observe such effects. The results are justified by the absence of IL-10 release by RHEI, for example, and show a limitation of RHEI for rating inactivation of the immune response. In this work, we conclude that it was possible to obtain a competitive RHE similar to the validated international models that can be used as a platform for irritation and skin sensitization tests, besides being a platform for the study of atopic dermatitis. Using this model is possible to explore the activation of immune system, which makes it promising as a platform for the evaluation of immune response in vitro. We conclude, therefore, that the objectives have been met as well as it is offering an open source protocol for breeding by other laboratories, thus offering the RHE model developed here for future validation tests.

O aumento na poluição ambiental é na atualidade uma das grandes preocupações em nível mundial. Especificamente, a poluição atmosférica por material particulado tem demostrado ser um fator determinante no desenvolvimento de doenças cardiopulmonares e câncer de pulmão nas populações expostas. O material particulado é constituído por uma mistura complexa de compostos orgânicos e inorgânicos, muitos dos quais possuem potencial mutagênico e genotóxico. As características destes compostos variam em função da suas propriedades físicas, químicas e em razão das condições meteorológicas prevalecentes. A maior parte dos estudos tem se focado em avaliar o potencial genotóxico da fração orgânica do material particulado e poucos estudos têm explorado a fração solúvel em água e a contribuição diferencial das diversas espécies químicas presentes nesta fração para o dano genotóxico. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos mutagênicos e genotóxicos in vitro da fração orgânica e da fração solúvel em água de material particulado (MP10) coletado em três locais diferentes do estado de São Paulo e estabelecer a relação entre a composição química e o efeito biológico observado. Para isto, realizou­-se a extração orgânica e solúvel em água de 12 amostras de MP10. A mutagenicidade e genotoxicidade foram avaliadas usando o ensaio de Salmonella/microssoma e o teste de micronúcleos (MN) em células A549 e 16 hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPAs) e 15 metais hidrossolúveis presentes nas amostras foram determinados quimicamente. Adicionalmente, foi determinada a metodologia de extração da fracção solúvel em água e se avaliou a estabilidade química e biológica desta fração. Os resultados indicam que a extração assistida por micro-ondas é um método eficiente para a extração da fração solúvel em agua do MP e que um tempo superior a 60 dias de armazenamento e congelamento deste tipo de extrato tem um efeito significativo sobre os resultados analíticos e a resposta biológica. Foi demonstrado ainda que as duas frações de MP estudadas são responsáveis pela indução do dano ao DNA e que não existe uma relação direta entre a concentração de MP e o efeito genotóxico observado, confirmando a importância do uso de bioensaios na avaliação da genotoxicidade de misturas complexas como o MP. Os HPAs prevalecentes nas amostras de PM10 foram fluorantene e benzo(ghi)perileno. Nos extratos solúveis em água, as maiores concentrações de metais foram determinadas para zinco, ferro e cobre. Confirmou-se que a indução de MN e o ensaio de Salmonella/microssoma representam uma poderosa ferramenta na avaliação da polução atmosférica e que as análises químicas por si só não são suficientes para a proteção e predição dos efeitos biológicos em populações expostas. The increase of environmental pollution is today one a major concern worldwide. Specifically, air pollution by particulate matter has been shown to be a determining factor in the development of cardiopulmonary disease and lung cancer in exposed populations. The particulate material consists of a complex mixture of organic and inorganic compounds, many of which have mutagenic and genotoxic activity. The characteristics of these compounds vary according to their physical and chemical properties and also to the prevailing weather conditions. Most studies have focused on evaluating the genotoxic potential of the organic fraction of particulate material, but few studies have explored the water­-soluble fraction, and the differential contributions of different chemical species present in this fraction to genotoxic damage. The aim of this study was to evaluate the in vitro mutagenic and genotoxic effects of organic and water-soluble fractions of 12 samples of particulate matter (PM10) collected at three different sites in the state of São Paulo and establish the relationship between the chemical composition and the biological effect observed. The mutagenicity and genotoxicity were evaluated using the Salmonella/microssome test and the micronucleus assay (MN) in A549 cells and 16 Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs) and 15 water-soluble metals present in the samples were chemically determined. Additionally, the extraction method of water- soluble fraction was determined and the chemical and biological stability of this fraction evaluated. The results indicate that the microwave­-assisted extraction is an efficient method for the extraction of the water-soluble compounds of PM and that the freezing and storage of the extract over 60 days has a significant effect on the mutagenic and analytical results of PM samples. It was demonstrated that the two PM fractions studied are responsible for the induction of DNA damage and that there is no direct relationship between the MP concentration and the genotoxic effect observed, confirming the importance of using bioassays in the genotoxicity evaluation of complex mixtures as PM. The PAHs prevailing in our samples were fluoranthene and benzo(ghi)perylene. In the water-soluble extracts, highest concentrations of the elements studied were found for zinc, iron, and copper in the three places of sampling. We confirmed that MN induction and Salmonella/microsome assay represents a powerful tool to evaluate the atmospheric air pollution and that the total concentration of PM and the chemical analyses alone would not be sufficient for the prognosis of biological effects in exposed populations

Diversos estudos têm demonstrado que os danos causados pela exposição da pele à radiação ultravioleta (RUV) são relacionados aos fotodanos ao DNA, geração de espécies reativas de oxigênio e ativação de mediadores do processo inflamatório. Há, portanto, um crescente interesse pelo uso de antioxidantes com potencial fotoquimiopreventivo, como o extrato de maçã e a rutina. O modelo mais utilizado para avaliação de agentes fotoquimiovreventivos é a exposição de camundongos sem pelos à RUV. Porém, os esforços para diminuir ou mesmo evitar a utilização de animais em ensaios científicos tem levado a busca por métodos alternativos à experimentação animal. Na primeira etapa desse trabalho visou-se a otimização de parâmetros relativos ao processo de extração do pó da maçã, bem como a caracterização do extrato obtido e da rutina. Assim, as condições de extração da maçã otimizadas foram tempo de extração de 22 h, teor de etanol no solvente de 60 % (p/p) e proporção solvente:planta de 18 (p/p). A concentração dos ativos presentes na maçã levou ao extrato enriquecido com polifenóis da maçã (EEPM), que apresentou elevada atividade antioxidante in vitro e teor de rutina de 6,1 ± 0.3 ?g/g de extrato. Ambos os ativos apresentaram baixa ou nenhuma toxicidade contra os fibroblastos MRC5, bem como protegeram os fibroblatos contra a morte induzida pela RUV e inibiram a formação de peróxidos lipídicos gerados pelas células irradiadas no tratamento com 4000 e 100 ?g/mL de EEPM e rutina, respectivamente. Na segunda etapa desse trabalho visou-se a avaliação do potencial fotoquimiopreventivo do EEPM e da rutina adicionados a uma formulação tópica em modelos de biópsia de pele humana e pele humana reconstruída in vitro e de camundongo sem pelos in vivo. O EEPM (1,25 %) e a rutina (0,75 %) em formulação foram avaliados quanto à retenção cutânea in vitro utilizando célula de difusão vertical de Franz e, embora não tenha sido possível detectar compostos do EEPM, foi demonstrado que 2,04 ± 0,19 ?g/cm2 da rutina ficou retida na biópsia de pele humana. Na avaliação da eficácia fotoquimiopreventiva em modelos de pele humana in vitro o EEPM e a rutina adicionados em formulação foram capazes de evitar/diminuir a formação de sunburn cells, a indução de caspase-3, dímeros de ciclobutanodipirimidina, metaloproteinases e peroxidação lipídica em pele exposta à RUV. Quanto a atividade funcional in vivo, o extrato enriquecido com polifenóis da maçã apresentou leve efeito inibidor do infiltrado inflamatório induzido pela RUV, enquanto que tanto a rutina como o extrato inibiram a depleção dos níveis de GSH endógeno, o que sugere uma potente atividade fotoquimiopreventiva para estes princípios ativos. Estes resultados são promissores e apontam para o uso do EEPM e da rutina na prevenção/tratamento dos danos induzidos pela RUV na pele. Several studies have shown that the ultraviolet radiation (UVR) - induced skin damage are related to DNA photolesions, generation of reactive oxygen species and activation of inflammatory mediators. Therefore, there is an increasing interest in the use of antioxidants with photochemoprotective potential, such as apple extract and rutin. The most used model for evaluation of photochemoprotective agents is the exposure of hairless mice to UVR. However, efforts to reduce or even avoid the use of animals in scientific trials has pursued for alternative methods to replace/reduce animal testing. The first step of this work aimed to optimize parameters for the extraction of apple powder and the characterization of the obtained extract and rutin. Thus, the optimized apple extraction conditions were extraction time of 22 h, ethanol content of 60% (w/w) and plant:solvent ratio of 18 (w/w). The apple extract concentration led to an enriched apple polyphenols extract (EEPM), which showed strong in vitro antioxidant activity and rutin content of 6.1 ± 0.3 ?g / g. The actives showed low or no toxicity against MRC5 fibroblasts, protected these cells against UVR - induced death and inhibited lipid peroxidation in irradiated cells (treatment with 4000 and 100 ?g/mL of EEPM and rutin, respectively). The second step of this study aimed to evaluate the photochemoprotective potential of EEPM and rutin added in a topical formulation and assayed in in vitro models of human skin biopsy and human reconstructed skin and in vivo hairless mouse. The EEPM (1.25%) and rutin (0.75%) formulations were evaluated for skin retention in vitro using the Franz diffusion cell and, although it was not possible to detect compounds of EEPM, rutin was retained in the human skin biopsy (2.04 ± 0.19 mg/cm2). As regard the The photochemoprotective efficacy in in vitro models of human skin, EEPM and rutin formulations were able to prevent/reduce the formation of sunburn cells, induction of caspase-3, cyclobutane pyrimidine dimers, matrix metalloproteinases and lipid peroxidation in skin exposed to UVR. As for in vivo functional activity, EEPM showed a slight inhibitory effect of UVR-induced inflammatory infiltrate, while both EEPM and rutin completely inhibited endogenous GSH levels depletion. These results are promising and suggest the use of EEPM and rutin in the prevention/treatment of ultraviolet radiationinduced damage to the skin.

Grande parte do desenvolvimento científico nas análises em alimentos está relacionado à identificação e quantificação de resíduos de drogas veterinárias e contaminantes ambientais em matéria-prima. Dentre as substâncias mais amplamente estudadas como resíduos em alimentos estão os praguicidas. Cada vez mais as legislações e normas reguladoras buscam garantir que os alimentos levados aos consumidores estejam apropriados à ingestão, diminuindo o risco negligenciável à saúde, através da exigência de níveis cada vez menores dos limites máximos de resíduo, e muitas vezes, banindo diversas substâncias com altos e médios graus de toxicidade. Para tal, tem sendo intensificado o desenvolvimento de métodos precisos, exatos, robustos e baratos para a identificação e quantificação de praguicidas, de forma que tanto os órgãos públicos como as empresas privadas possam realizar o monitoramento dos alimentos oferecidos pelos produtores e fornecedores, e assim identificar possíveis fontes de exposição à substâncias que levem risco através da ingestão diária. Os indivíduos que apresentam maior suscetibilidade aos efeitos nocivos causados pela presença de praguicidas em níveis tóxicos nos alimentos são crianças e idosos, o que exige cuidados e limites ainda mais rígidos. Para garantir que os alimentos infantis fornecidos no mercado se mantenham dentro das condições adequadas para a ingestão, a sua produção deve ser controlada e monitorada. O presente trabalho visa avaliar a presença de praguicidas em Solanum tuberosum (batata), Daucus carota (cenoura) e Arracacia xanthorrhiza (mandioquinha) destinadas para a produção de baby-food e produtos similares, cultivados na área de São José do Rio Pardo, no estado de São Paulo, e disponíveis no varejo da cidade de São Paulo, através da técnica QuEChERS e identificação e quantificação por LC-MS/MS. Através da otimização dos parâmetros de espectrometria de massas e validação do método de extração QuEChERS para 216 compostos, foram identificados quais praguicidas possuíam a capacidade de serem detectados e quantificados com a performance adequada por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em tandem nas commodities estudadas. Amostras de batata, cenoura e mandioquinha de fornecedores da área de São José do Rio Pardo e fontes de varejo da cidade de São Paulo foram analisadas para identificar a presença dos analitos validados. Para as amostras investigadas, somente a commodity cenoura apresentou praguicidas quantificados acima do valor da Capacidade de Detecção (CCβ), sendo eles o Linurom, o Tebuconazol e o Triciclazol. Realizada a Avaliação de Risco, verificou-se que a exposição aos praguicidas nas commodities, mesmo nos casos de maior concentração, não era evidenciada como um risco, tendo em vista que os mesmos obtiveram resultados de 0,25% (Linurom), 0,1% (Tebuconazol) e 0,03% (Triciclazol) dos valores de suas Ingestões Diárias Aceitáveis (IDA). Great part of the scientific development on food analysis is related to the identification and quantification of veterinary drugs and environmental contaminants residues in raw materials. Among the most studied residue substances in food are the pesticides compounds. Increasingly, legislations and regulatory standards seek to ensure that the food served to consumers are appropriate to the intake, reducing a negligible health risk, by requiring each time lower maximum residue levels, and often banning various substances with high and medium levels of toxicity. With this purpose, the development of accurate, robust and cheap methods has been intensified for the identification and quantification of pesticides, so that both public bodies and private companies are able to carry out the monitoring of food and feed offered by the producers and suppliers, and by doing so, identify possible sources of exposure to substances that lead to risk by daily intake. The individuals who are more susceptible to adverse effects caused by the presence of pesticides in toxic levels in food are children and the elderly, and because of this fact, the requirement for extensive care and limits even stricter is higher. In the attempt to ensure that children\'s food and feed market supplies fall within the right conditions for ingestion, its production should be controlled and monitored. The present study aims to evaluate the presence of pesticides in Solanum tuberosum (potato), Daucus carota (carrot) and Arracacia xanthorrhiza (mandioquinha) in samples grown in the area of São José do Rio Pardo, in the State of São Paulo, and directed to baby-food and similar products production, and in samples available at the market retail in the city of São Paulo, through the QuEChERS technique, and identification and quantification by LC-MS/MS. The pesticides molecules which had the ability to be detected and quantified with adequated performance by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry in the studied commodities were identified by optimizing the mass spectrometer parameters and validating the QuEChERS extraction method of 216 compounds. Potato, carrot and mandioquinha samples, provided by suppliers in the area of Sao Jose do Rio Pardo and retail sources from São Paulo, were analyzed for the presence of the validated pesticides. Among the investigated samples, only the carrot commodity presented quantified pesticides above the value of Detection Capability (CCβ), namely Linuron, the Tebuconazole and Tricyclazole. Held the chemical risk assessment, it was found that the exposure to pesticides by the commodities, even in cases of higher concentrations, was not shown as a risk, given that they achieved results of 0.25% (Linuron), 0, 1% (Tebuconazole) and 0.03% (Tricyclazole) of the Acceptable Daily Intakes (ADI) values.

A exposição excessiva à radiação Ultravioleta (UV) resulta em manifestações clínicas à pele humana como queimaduras, fotoenvelhecimento e câncer. A radiação UVA, preferencialmente, induz à formação de espécies reativas de oxigênio, enquanto que a radiação UVB é absorvida diretamente pelo DNA. Apesar de mecanismos endógenos auxiliarem na prevenção/reparação dos danos causados pela radiação UV, quando o dano excede a capacidade de reparação celular, diversos efeitos lesivos ocorrem na pele como alterações da matriz dérmica, resposta inflamatória e desidratação do estrato córneo. O uso de compostos fenólicos com atividade antioxidante pode auxiliar na prevenção das consequências patológicas da exposição à radiação UV. O presente trabalho teve como objetivo estudar em cultura de células da pele (HaCaT -queratinócito humano imortalizado e FHPD - fibroblasto humano primário dermal) exposta às radiações UVA e UVB a atividade fotoprotetora de 3 compostos fenólicos, ácido cafeico (AC), clorogênico (ACG) e rosmarínico (AR). Inicialmente, células HaCaT e FHPD cultivadas em monocamada foram expostas às doses crescentes de radiação UVA ou UVB e, após 24 horas, foram analisadas quanto a viabilidade, marcadores de morte celular, mediadores inflamatórios, presença de aquaporina e lesões de DNA. HaCaT quando exposta às radiações UVA e UVB são conduzidas à morte por apoptose, com aumento de Caspases 3 e 9, p53 e redução de PARP. Após a exposição à radiação UVA, HaCaT responde com aumento na liberação de IL-6, TNF-α e COX-2, internalização/redução de AQP3 da membrana, redução na liberação de MMP-2 e 9, aumento na liberação de MMP-1 e na produção de ERO. Quando expostos à radiação UVB, HaCaT aumenta a liberação de IL-6 e COX-2, promove internalização/redução de AQP3 na membrana e redução na liberação de MMP-2 e 9. FHPD são menos sensíveis à exposição a ambas as radiações, mostrando redução de viabilidade com parada de ciclo apenas frente à radiação UVA. Além disto, FHPD exposto a radiação UVA responde com aumento na liberação de IL-6 e danos no DNA do tipo 8-oxo-dG. Dentre os compostos, o ACG apresentou melhor atividade fotoquimioprotetora perante ambas as radiações UVA e UVB, pois foi capaz de reverter em HaCaT a morte celular induzida por ambas as radiações e de reverter a parada de ciclo em FHPD expostos à radiação UVA. HaCaT tratado com ACG e exposto à radiação UVA responde com aumento na expressão de AQP3 e PARP, aumento na expressão gênica de AQP3, redução na expressão gênica de CDKN1A e na liberação de MMP-1, 2 e 9. Após a radiação UVB, o tratamento com ACG aumenta a expressão gênica de AQP3, reduz a expressão gênica de CDKN1A, reduz a produção de COX-2 e aumenta a liberação de MMP-2 e 9. O tratamento com o AR apresentou atividade fotoquimioprotetora frente à radiação UVA, com HaCaT respondendo a radiação com aumento na população de células viáveis, aumento na expressão de AQP3 e PARP e na expressão gênica de AQP3, redução na liberação de MMP-1 e 9 e redução na produção de COX-2. FHPD tratados com AR apresentaram aumento na população em fase G1, na expressão de p21, e redução de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. O tratamento de HaCaT com AC foi capaz de reverter a morte celular, aumentar a expressão de p53 e aumentar a liberação de MMP-2 e 9 frente à radiação UVB e de reduzir a produção de ERO, a expressão de p21 e a liberação de MMP-1, 2 e 9 frente à radiação UVA. Para FHPD, o tratamento com AC foi capaz apenas de reduzir a formação de danos de DNA tipo 8-oxo-dG. Os resultados indicam que o modelo proposto foi capaz de discriminar a atividade fotoprotetora dos compostos frente à radiação UVA e UVB. Além disto, foi possível demonstrar que os compostos antioxidantes se comportam de maneira distinta enquanto fotoprotetores no modelo empregado. Excessive exposure to Ultraviolet radiation (UV) results in clinical manifestations in human skin such as burns, photo-aging and cancer. UVA radiation preferentially induces formation of reactive oxygen species, while UVB radiation is absorbed directly by the DNA. Although endogenous mechanisms are able to prevent/repair cellular damages caused by UV radiation, excess cellular damage retains cells repair capacity and also results on diverse harmful effects on skin, such as, changes in the dermal matrix, inflammatory response and dehydration of the stratum corneum. The use of phenolic compounds with antioxidant activity may help preventing pathological conditions caused by UV radiation. This work aimed to study the photoprotective activity of three phenolic compounds, caffeic (CA), chlorogenic (CGA) and rosmarinic acid (RA) in human skin cells (HaCaT - immortalized human keratinocytes and HDSF - human dermal skin fibroblast) exposed to UVA and UVB radiation. Initially, HDSF and HaCaT cells were exposed to increasing doses of UVA and UVB radiation. After 24 hours of exposure, we evaluated cell viability, cell death, inflammatory mediators, aquaporin and DNA damage. Exposure to UVA and UVB radiation in HaCaT cells results on apoptotic cell death, with an increase of caspases 3 and 9, p53 and reduction of PARP. HaCaT cells when exposed to UVA radiation resulted on increased levels of IL-6, TNF-α and COX-2, internalization of the membrane AQP3, reduction of MMP-2 and MMP-9 release, increase of MMP-1 and ROS production. After UVB radiation, HaCaT cells resulted on an increase of IL-6 and COX-2 production, it also promoted internalization of membrane AQP3 and reduced release of MMP-2 and 9. HDSF were less sensitive to both radiations. Moreover, HDSF resulted in cell viability decrease and cell cycle arrest only after UVA radiation. Furthermore, HDSF when exposed to UVA radiation resulted on an increase of IL-6 production and in DNA damage (8-oxo-dG). Among the studied compounds, CGA presented better photochemiprotective activity towards UVA and UVB radiation. Also, this compound was able to reverse cell death in HaCaT after exposure to both radiations and inhibited cell cycle arrest in HDSF after UVA radiation exposure. HaCaT cells treated with CGA and exposed to UVA radiation resulted on an increase in AQP3 and PARP expression, increased in AQP3 gene expression, reduction in CDKN1A gene expression and reduction in MMP-1, 2 and 9 release. After UVB radiation, GCA treatment increases AQP3 gene expression, reduces CDKN1A gene expression, reduces COX-2 production and increase MMP-2 and 9 releases. The AR treatment showed photochemiprotective activity towards the effects of UVA radiation, with HaCaT responding with an increase on cells viability, increased in PARP and AQP3 expression and in AQP3 gene expression, decreased MMP-1 and 9 releases and reduced COX-2c production. HDSF when treated with AR showed an increase in G1 phase population, in p21 expression and reduced DNA damage-type 8-oxo-dG. HaCaT cells treated with AC reversed cell death, increased p53 expression and increased MMP-2 and 9 releases after UVB radiation and reduced ROS production, p21 expression and MMP -1, 2, 9 release after UVA radiation. HDSF treated with AC was only able to reduce the formation of 8-oxodG DNA damage. These results indicated that the proposed model was able to discriminate the photochemiprotective activity of the studied compounds against the UVA and UVB radiation. In addition, it was demonstrated that the each studied antioxidant have different photoprotective mode of action.

O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade antioxidante de um extrato padronizado da raiz de Pothomorphe umbellata L. Miq, incorporado em diadermina (creme óleo em água - O/A), sobre a pele de camundongos Hairless e avaliar esta atividade antioxidante em comparação à atividade antioxidante do α-tocoferol, incorporado na mesma base. A peroxidação lipídica foi avaliada como medida de TBARS e de quimiluminescência. Animais tratados com o extrato de Pothomorphe umbellata demonstraram um decréscimo significativo nos parâmetros de peroxidação lipídica, em concentrações de até 0,1% p/p de 4-nerolidilcatecol (o que equivale a uma concentração de 4% p/p de extrato) incorporado na diadermina. Em nosso modelo o decréscimo significativo destes indicadores, nos animais tratados com α-tocoferol, só foi observado em concentrações superiores a 5%. Os resultados indicam uma potente atividade antioxidante do extrato da raiz de Pothomorphe umbellata, sugerindo sua aplicação em formulações cosméticas. Antioxidants may play a significant role in ameliorating or preventing oxidative damage to skin. In this work antioxidant activity of P. umbellata root extract, with known concentration of 4-nerolidylcathecol, incorporated to a hydrophilic ointment in different concentrations, was evaluated on skin of Hairless mice. This antioxidant activity was compared with that of different concentrations of α-tocopherol (Sigma) incorporated in the same vehicle. Lipid peroxidation of skin homogenates was evaluated as thiobarbituric acid reactants (TBARS) and chemiluminescense (CL). Animals treated with P. umbellata root extract showed a decrease up to 90% in the lipid peroxidation parameters, for concentrations higher than 0.1%. Our model demonstrated a significant decrease in TBARS an CL only for higher concentrations of α-tocopherol (5 and 10% w/w). The results indicate a potent antioxidant activity of the Pothomorphe umbellata root extract, suggesting its application in cosmetic formulations.

A poluição do ar é um importante fator ambiental de risco para muitos desfechos gestacionais e reprodutivos negativos. Neste estudo nós investigamos os efeitos da poluição particulada em dois períodos de exposição (antes da concepção e durante a gestação) sobre alguns desfechos reprodutivos e gestacionais em camundongos. Utilizando câmaras de exposição, uma recebendo ar filtrado (F) e outra ar não-filtrado (nF), observamos que as fêmeas expostas ao ar não filtrado apresentaram alterações na duração do ciclo estral, estro persistente e o número de folículos antrais reduziu cerca de 36% (75±35,2, P=0,04) comparado às expostas ao ar filtrado (118,6 ±18,4). Nossos resultados mostram ainda um aumento significativo no tempo necessário para que o acasalamento ocorra, uma diminuição nos índices de fertilidade e gestação (P=0.003) nos casais expostos ao ar não filtrado (nF). A taxa média de perdas pós implantacionais (PPI) está aumentada em 70% (P0,005) no grupo de fêmeas expostas ao ar não filtrado antes e durante a gestação quando comparada ao grupo exposto antes de durante a gestação ao ar filtrado. O peso fetal (PF) é significativamente maior no grupo exposto nos dois períodos ao ar filtrado quando comparado aos demais grupos expostos antes e/ou durante a gestação ao ar não filtrado. O PF e a taxa média de PPI são influenciados tanto pela exposição durante a gestação quanto a exposição que ocorre antes da gestação. A exposição materna prévia a gestação e durante a primeira fase gestacional são críticas para o aumento no risco de baixo peso em camundongos. Nós também verificamos que a exposição ao ar não filtrado está associada a uma redução no volume, calibre e área de superfície dos espaços sanguíneos maternos, a um aumento na área de superfície dos capilares fetais, e na condutância de difusão da placenta. Alterações morfológicas no cordão umbilical também foram encontradas. Este estudo demonstra que a exposição aos níveis ambientais de poluição particulada de origem veicular afeta diferentes funções e estágios do processo reprodutivo. Nossos resultados também indicam que a exposição materna prévia está ligada a desfechos gestacionais negativos mesmo quando a exposição ocorre somente antes da concepção Air pollution is an important environmental health risk factor for many different gestational and reproductive negative outcomes. In this study we have investigated the effects of two different timing of exposure (before conception and during pregnancy) to urban ambient particulate matter on reproductive and pregnancy outcomes in mice. Using exposure chambers receiving filtered (F) and non-filtered (NF) we observed that exposed females presented changes in the length of estrus cycle, extended estrus and antral follicles number declined by 36% (P=0.04) in mice exposed to non filtered air (75±35.2) compared to mice exposed to filtered air(118.6 ±18.4). Our results further indicate a significant increase in time necessary to mating and decreased fertility and pregnancy indices (P=0.003) in NF couples. Mean postimplantation loss (PIL) rate was increased by 70% (P0.005) in the group exposed before and during pregnancy to non-filtered air when compared to the group exposed before and during pregnancy to filtered air. Fetal weight (FW) was significantly higher in group exposed during both periods to filtered air when compared to other groups exposed before and/or during pregnancy to non filtered air. FW and PIL mean rate were influenced by both pre-gestational (p

O estresse oxidativo produzido no organismo relaciona-se com o aparecimento e/ou desenvolvimento de uma série de doenças crônico-não transmissíveis. Os compostos fenólicos, presentes nos vegetais, são capazes de neutralizar as estruturas radicalares; diminuindo, portanto, o risco de surgimento de patologias a elas associadas. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante do fruto e da amêndoa do pequi e a participação desta atividade na prevenção do processo oxidativo em ratos. Foram obtidos, de forma seqüencial, os extratos etéreo, alcoólico e aquoso, bem como as frações de ácidos fenólicos livres (AFL), esterificadas solúveis (AFS) e insolúveis (AFI) da polpa e da amêndoa do pequi. Todos os extratos e frações foram avaliados quanto à atividade antioxidante in vitro pelos ensaios de co-oxidação do β-caroteno/ácido linoléico, DPPH (radical 1,1-diphenil-2-picrilhydrazil), ABTS (radical 2,2\'azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), ORAC (Capacidade de Absorção de Radicais Oxigênio) e Rancimat; e apresentaram expressiva atividade antioxidante. Entre os extratos, o aquoso da polpa apresentou maior atividade; entre as frações, a AFL da polpa se destacou nos ensaios β-caroteno/ácido linoléico, DPPH e ABTS. Os extratos e frações foram também avaliados quanto à composição em ácidos fenólicos, por HPLC. Encontraram-se os ácidos elágico, gálico, 4-OH benzóico, p-cumárico e procianidina B2. O ácido elágico esteve presente em todos os extratos e/ou frações, sempre em maior concentração; a procianidina B2, apenas no extrato aquoso da amêndoa. Na avaliação da atividade antioxidante in vivo, em ratos normais, foi administrado, por gavagem, extrato aquoso (100 e 300 mg/kg v.o.) e AFL (40 e 100 mg/kg v.o.) obtidos da polpa do pequi. Evidenciaram-se redução da lipoperoxidação e elevação da atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR) no cérebro e no fígado dos animais que receberam o extrato aquoso a 300 mg/kg e a fração AFL a 100 mg/kg. Isso demonstra que o pequi possui propriedades antioxidantes tanto in vitro como in vivo. The oxidative stress produced in live organisms is related to the appearance and/or development of a series of non-transmissible chronic diseases. Phenolic compounds present in vegetables are able to neutralize these substances, thus reducing the risk of development of free radicals associated to pathologies. The aim of this work was to evaluate the antioxidant activity in the pulp and almond of the pequi fruit and its effects in preventing the oxidative process in rats. Extracts were obtained by means of sequential extraction in which solvents with different polarities (ether, ethanol and water) were used, as well as free phenolic acid fraction (and) soluble esters and insolublebound compounds from the pulp and almond of the pequi. The total antioxidant capacity was estimated through the following methods: β-carotene bleaching, DPPH (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl radical), ABTS (2,2\'azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), oxygen radical absorbance capacity (ORAC), and Rancimat assays. All extracts and fractions of phenolic acids showed a significant antioxidant activity. Among the extracts, the pulp aqueous extract showed higher activities than the others. Free phenolic acids fraction from the pulp of the pequi was better compared to other fractions in β-carotene bleaching, DPPH and ABTS assays. Phenolic acids composition was identified by HPLC. It was found ellagic, gallic, 4-Hydroxybenzoic, p-coumaric and procyanidin B2 acid being ellagic acid presents at larger amounts in all extracts and fractions, whereas procyanidin B2 was found only in the aqueous extract of the almond from pequi. For evaluating the antioxidant activity in vivo, aqueous extract (100 and 300 mg/kg b.w.) and free phenolic acids (40 and 100 mg/kg b.w.) obtained from pequi pulp were administered in rats by oral gavage. It was observed a decrease in the levels of lipid peroxidation and an increased activity of antioxidant enzymes catalase (CAT), superoxide dismutade (SOD), glutathione peroxidase (GSHPx), and glutathione reductase (GSSGr) in the brain and liver of animals that received aqueous extract at 300 mg/kg b.w. and free phenolic acids fraction at 100 mg/kg, which demonstrate that pequi fruit has both in vitro and in vivo antioxidative properties.

O uso de antioxidantes de origem natural apresenta uma perspectiva promissora na prevenção dos efeitos adversos causados pela radiação ultravioleta, incluindo o fotoenvelhecimento e a fotocarcinogênese. As atividades antioxidante, fotoprotetora e antienvelhecimento cutâneo foram demonstradas para o extrato de Pothomorphe umbellata. No entanto, seu potencial protetor da fotocarcinogênese ainda não foi estabelecido. O objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da aplicação tópica do gel de extrato de raiz de P. umbelallta nas alterações promovidas pelas exposições aguda (dose única - 0,20 KJ/m2) e crônica (4 semanas, dose total de 8,6 KJ/m2, 5 semanas, 13,17KJ/m2, 15 semanas, 55,51 KJ/m2) à radiação ultravioleta B na pele de camundongos sem pelo. Para avaliação dos antioxidantes não enzimáticos, ácido ascórbico e α-tocoferol, foram utilizados métodos de cromatografia líquida de alta eficiência e para avaliação dos enzimáticos, catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase e glutationa redutase, métodos espectrofotométricos. As modulações das proteínas p53 e PCNA foram avaliadas por imunohistoquímica. Os resultados demonstram que o tratamento com gel de extrato de raiz de P. umbellata é capaz de modular o sistema antioxidante na pele de camundongos sem pêlo, proporcionando maior proteção frente à exposição à radiação UVB. Além disso, os resultados sugerem que a aplicação tópica de extrato de P. umbellata protege contra os danos causados pela radiação modulando vias de reparo e/ou morte celular. Estes resultados contribuem para elucidação do mecanismo de ação do extrato de P.umbellata na pele exposta à radiação UVB, indicando sua capacidade em preservar a pele sadia após a irradiação. Topical application of botanical antioxidants has been appreciated as a viable approach to reduce the occurrence of deleterious damage cased by sunlight exposure, such as photoaging and photocarcinogenesis. The plant Pothomorphe umbellata has been shown to exert a potent antioxidant activity on the skin and to delay the onset and reduce the incidence of UVB-induced skin damage and photoaging. The purpose of this study was to evaluate the effects of topical P. umbellata treatment on acute (single dose 0.20 KJ/m2) and chronic (4 weeks, total dose 8.6 KJ/m2, 5 weeks, 13.17KJ/m2, 15 weeks, 55.51 KJ/m2) UVB-induced damage hairless mouse epidermis. Nonenzymic antioxidants, ascorbic acid and α-tocopherol, were assayed by high performance liquid chromatography and enzymic antioxidants, catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase and glutathione reductase, spectrophotometrically. UVB-induced p53 and PCNA were deteted by immunohistochemical technique. The data collected here suggest that topical application of P. umbellata extract affords strong protection against UVB-induced damages in skin epidermis by either preventing DNA damage or enhancing repair and inhibiting UVB-caused apoptosis and sunburn cell formation. Moreover, the results also suggest that P. umbellata extract modulates the cutaneous antioxidant network resulting in reduced susceptibility to UVB-induced oxidative damage. Together these results contribute for the elucidation of the mechanism of action of P.umbellata on UVB exposed skin and indicate the capacity of this extract to preserve skin health after irradiation.

Trabalhos experimentais demonstram o envolvimento de estresse oxidativo como mecanismo responsável pelas lesões cerebrais e hepáticas que acompanham a intoxicação pelo cloreto de metilmercúrio (CH3HgCI). A N-acetilcisteína (NAC) é capaz de ligar-se a metais e sequestrar radicais livres. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da NAC sobre os níveis de mercúrio (Hg) e no estresse oxidativo induzido pelo metilmercúrio. Neste trabalho em ratos preconizamos a exposição oral a 20 mg de CH3HgCl/kg e intraperitoneal (ip) a 200 mg/kg de NAC, avaliados após 6, 12 e 24 horas e exposição oral a 0,5 mg de CH3HgCI/kg e doses de NAC (i.p.). Não houve aumento de TBARS hepático e cerebral após exposição aguda e sub-crônica. Dos antioxidantes apenas o ácido ascórbico mostrou-se diminuído após 12 horas da exposição. A NAC apresentou-se eficaz apenas na exposição sub-crônica com animais apresentando níveis de Hg reduzidos em fígado e cérebro Experimental studies show oxidative stress to cause cerebral and hepatic lesions after methylmercury intoxication. N-acetylcysteine (NAC) is capable of binding to metals and scavenges free radicals. In this study we evaluated the influence of NAC on the levels of mercury (Hg) and on oxidative stress parameters after methylmercury chloride (CH3HgCI) exposure. A group of rats were treated by gavage with 20mg of CH3HgCl/kg body weight (b.w.) and 200mg/kg b.w. of NAC by intraperitoneal (ip) injection. These animals were killed after 6, 12 and 24hours. A second group received 0,5mg of CH3HgCl/kg b.w. by gavage during four weeks and five doses of NAC (200mg/kg b.w. ip) in the last week of exposure to CH3HgCI. There was no increase in hepatic and cerebral TBARS after the acute and subchronic exposure. Considering antioxidants, only ascorbic acid was reduced in liver after 12hours. NAC was effective decreasing mercury levels in brain, liver and kidney after subchronic exposure to CH3HgCI.

As plantas medicinais constituem importante recurso terapêutico no tratamento da saúde humana, principalmente das nações em desenvolvimento. Servem tanto à conhecida \"medicina caseira\", que faz parte da cultura popular destes países, como de matéria prima para elaboração de medicamentos fitoterápicos ou extração de compostos químicos farmacologicamente ativos. O presente trabalho estuda duas espécies medicinais da família Piperaceae, conhecidas popularmente como pariparoba, e usadas para o tratamento de problemas do fígado: Piper regnellii (Miq.) D.CD. e Pothomorphe umbellata (L.) Miq., esta inscrita na primeira edição da Farmacopéia Brasileira. Foram avaliadas, comparativamente, as capacidades antioxidantes dos extratos hidroalcoólicos das folhas, caules e raízes das duas espécies vegetais, utilizando uma combinação de modelos experimentais: 1) co-oxidação de substrato constituído por β-caroteno/ácido linoléico com determinação espectrofotométrica da cinética do processo oxidativo e por cromatografia em camada delgada, utilizando como revelador o carotenóide. 2) inibição da lipoperoxidação espontânea em homogenato de cérebro com determinação das substâncias geradas no processo e que reagem com o ácido tiobarbitúrico (TBARS), bem como a medida da inibição da quimiluminescência espontaneamente emitida. Do extrato das raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. foi isolado e caracterizado o composto fenólico 4- nerolidilcatecol como o responsável pela maior atividade antioxidante deste órgão vegetal. No modelo que utiliza o homogenato de cérebro como substrato, o composto catecólico demonstrou uma capacidade antioxidante aproximadamente 20 vezes superior à do α-tocoferol usado como referência. Complementarmente, as folhas da espécie Piper regnellii (Miq.) C.DC. mostraram-se potencialmente ativas, estimulando a continuidade do trabalho no sentido de caracterizar o(s) componente(s) ativo(s), à semelhança do que foi feito com as raízes de Pothomorphe umbellata (L.) Miq. Medicinal plants are an important therapeutic resource in human health care mainly in developing nations. They are used in herbal medicine, a tradition in those countries, as well as raw material for the manufacture of phytomedicinals and the extraction of pharmacological active compounds. In this research two medicinal species of the Piperaceae family are studied, known by the popular name pariparoba and used in treatment of liver diseases: Piper regnellii (Miq.)C.DC. and Pothomorphe umbellata (L.) Miq., the last one included in the first edition of the Brazilian Pharmacopoeia. The antioxidant properties of hidroalcoholic extracts of leaves, stems and roots of both species were appraised by means of a combination of experimental models: 1) co-oxidation of β-carotene/linoleic acid with spectrophotometric determination of the oxidation process kinetic and TLC apllying the carotenoid as detection agent 2) inhibition of spontaneous lipoperoxidation in rat brain homogenate, determining thiobarbituric reactants formed in the process (TBARS) and measuring the inhibition of the spontaneous chemiluminescence. From the root extract of Pothomorphe umbellata a phenolic compound, α-nerolidycathecol, was isolated and found to be the major antioxidant constituent of this plant organ. With the brain-homogenate model it was possible to demonstrate a 20 times higher activity of the catecholic compound when compared with a-tocopherol. In addition the leaves of Piper regnellii showed to be potentially active justifying further research to identify active compounds.

Avaliou-se os efeitos do β-caroteno e da vitamina A sobre o processo de proliferação de células ovais em modelo de diferenciação celular hepática. Para tanto, ratos machos Wistar foram tratados com β-caroteno (grupo BC - 70 mg/kg de peso corpóreo [pc]), vitamina A (grupo VA - 10 mg/kg pc) ou óleo de milho (CO - grupo controle) por via intragástrica e em dias alternados, durante 4 semanas consecutivas. Após este período, os animais foram submetidos ao modelo AAF/PH (6 x 20 mg AAF [2-acetilaminofluoreno] / kg pc e hepatectomia parcial) e sacrificados em diferentes dias após a cirurgia (HP). Foram colhidas amostras de fígado para determinação das concentrações de β-caroteno, retinol e palmitato de retinila (por CLAE - cromatografia líquida de alta eficiência); para análises histológica (hematoxilina e eosina) e imuno-histoquímica (com anticorpos anti-GST-P), bem como para avaliação das expressões gênicas (por northern blot) para as conexinas (cx) 43 e 32. Observou-se, através das análises histológica e imuno-histoquímica, que o pico de proliferação das células ovais foi deslocado para dias mais tardios após HP, de forma análoga nos grupos BC e VA, quando comparados ao grupo controle. Além disso, foi constatado que o pico de expressão gênica para cx 43 foi também deslocado para dias mais tardios pós-HP, de forma similar nos grupos BC e VA, e que houve um aumento na expressão gênica para cx 43 entre o 10º e 16º dias após HP no grupo VA, em relação ao controle. Não foi observada diferença na expressão gênica para cx 32 entre os grupos. Conclui-se que o β-caroteno modulou a proliferação de células ovais e a expressão gênica para cx 43, retardando ambos os fenômenos, e que esta ação foi mediada em parte via retinóides ativos. Ainda, o carotenóide mostrou uma tendência em induzir, de forma intrínseca, a diferenciação das células ovais em hepatócitos. The aim of this work was to investigate the β-carotene and vitamin A effects in the process of oval cells proliferation at hepatic cellular differentiation model. Wistar male rats were treated with β-carotene (BC group - 70 mg/kg body wt), vitamin A (VA group - 10 mg/kg body wt) or com oil (CO - control group) administrated by gavage, on alternate days, during 4 consecutive weeks. Since, the animals were submitted to a AAF/PH model (6 x 20 mg AAF [2-acetylaminofluorene] / kg body wt and partial hepatectomy - PH) and sacrified at different days after PH. Liver samples were picked for analysing β-carotene, retinol and retinyl palmitate concentration (by HPLC); for histology (HE) and immunohistochemistry (with antibody anti-GST-P), and for evaluating connexins 43 and 32 gene expression (by northem blot). Histological and immunohistochemical analysis showed that the oval cells proliferation peak was delayed to the late days after PH, by similar way in the BC and VA groups, when compared with control group. Northem blot evaluation revealed that the cx 43 gene expression was also delayed to the late days after PH, by analogue way in the BC and VA groups, and vitamin A enhanced cx 43 gene expression in the late days after PH. Connexin 32 gene expression did not change among the experimental groups. Thereby, the β-carotene and vitamin A delayed the oval cells proliferation and the cx 43 gene expression. Moreover, β-carotene showed a tendency to induce the oval cells differentiation to hepatocytes.

As metaloproteinases de matriz (MMP) são enzimas superexpressas em quase todos os tumores humanos, sendo que os subtipos MMP-2 e MMP-9 têm sido associados ao potencial metastático e prognóstico desfavorável em neoplasias malignas como, por exemplo, melanoma metastático e glioma. Compostos capazes de inibir a atividade destas enzimas podem representar potenciais agentes terapêuticos. O composto 4-nerolidilcatecol (4-NC), isolado de plantas do gênero Pothomorphe, apresentou resultados promissores para o tratamento do melanoma e glioma e foi capaz de atuar em várias etapas bioquímicas importantes envolvidas na progressão dessas patologias, inclusive inibindo MMP-2 e MMP-9. No entanto, o mecanismo de ação do 4-NC não está completamente elucidado. O presente estudo envolveu a aplicação de métodos de modelagem molecular e de formalismos do planejamento de novas moléculas auxiliado por computador, CAMD (Computer-Aided Molecular Design) a fim de explorar a interação entre esta molécula e as enzimas MMP-2 e MMP-9, além de planejar novos inibidores para estes alvos. Análise exploratória de dados, que compreende a análise de agrupamentos hierárquicos e de componentes principais. foi desenvolvida para um conjunto de hidroxamatos (N=64) descritos como inibidores de MMP-2 e MMP-9, a fim de identificar as propriedades moleculares que mais influenciavam o processo de discriminação dos compostos. As propriedades termodinâmicas, eletrônicas e estéricas foram importantes para descrever os compostos mais ativos no conjunto de dados da MMP-2. Para a MMP-9, o coeficiente de distribuição (ClogD) em pH 1,5 foi relevante no processo de discriminação do conjunto. A presença de substituintes volumosos na porção R3 parece ser crucial para o conjunto de inibidores investigados. Esta região está envolvida em interações moleculares com a cavidade S1 de ambas as enzimas, mas há um limite de volume a ser considerado para estes substituintes. O formalismo QSAR-4D independente do receptor (IR) foi aplicado ao mesmo conjunto de dados e permitiu estabelecer o mapeamento do farmacóforo, além de explorar diferentes alinhamentos para a obtenção da hipótese de conformação bioativa prevista pelo melhor modelo de QSAR. OS modelos QSAR apresentaram boa capacidade de previsão, auxiliaram na proposição de novos inibidores e estimaram a atividade do 4-NC. Com o melhor modelo QSAR para MMP-9 (N=64), a atividade prevista para o 4-NC foi classificada na faixa dos inibidores com atividade moderada. Entretanto, o melhor modelo QSAR obtido para MMP-2 (N=38) não foi capaz de prever, de forma adequada, a atividade de compostos com arcabouço químico diferente daqueles utilizados na construção dos modelos. Estudos de ancoramento molecular foram desenvolvidos para investigar a orientação do 4-NC no sitio catalítico das duas enzimas e as interações que poderiam ser estabelecidas nestes complexos. Duas conformações favoráveis foram encontradas. Simulações computacionais de dinâmica molecular foram desenvolvidas com os complexos mais promissores selecionados nos estudos de ancoramento, a fim de obter informações mais detalhadas e de maior confiabilidade. sobre suas interações intermoleculares. O 4-NC tende a se orientar no sítio de forma a acomodar sua cadeia lateral no bolso S1 adjacente ao sítio catalítico em ambas as enzimas. Ensaios de zimografia também foram realizados com o objetivo de elucidar possíveis contribuições da cadeia lateral e do núcleo catecólico do 4-NC na atividade inibitória frente às enzimas em estudo. O núcleo catecólico parece ser o responsável por sua atividade, pois o composto 1,2dimetoxibenzeno, que possui as hidroxilas bloqueadas por grupos metil, não foi capaz de exercer atividade inibitória significante frente à MMP-2 e MMP-9. Estudos de voltametria reforçaram a hipótese de que o 4-NC tem a capacidade de quelar os íons zinco presentes no tampão de incubação. Matrix metalloproteinases (MMP) enzymes are overexpressed in almost all human tumors, and MMP-2 and MMP-9 subtypes have been associated with metastatic potential and poor prognosis in malignant tumors, such as metastatic melanoma and glioma. Compounds capable of inhibiting the activity of theses enzymes would be considered as potential therapeutic agents. The 4-nerolidylcatechol compound (4-NC), isolated from plants of genus Pothomorphe, has showed promising results in the treatment of melanoma and glioma, and was able to act in several important biochemical steps involved in the progression of these diseases, as well as inhibiting MMP-2 and MMP-9. However, the 4-NC mechanism of action is not completely understood. This study has involved the application of molecular modeling methods and formalisms of computer-aided molecular design (CAMD) in order to explore the interaction between 4-NC and MMP-2/MMP-9, and to design new inhibitors for these targets. Exploratory data analysis, which comprises hierarchical cluster analysis and principal components analysis, was performed to a set of hydroxamates (N=64). previously reported as MMP-2 and MMP-9 inhibitors, in order lo identify the molecular properties that is most critical for the discrimination process regarding the investigated compounds. The thermodynamic, electronic, and steric properties were: quite important to describe the highly active compounds in the data set of MMP-2, whereas the apparent partition coefficient (ClogD) at pH 1.5 was the property more relevant for MMP-9 data set. The presence of bulky substituents on the R3 moiety seems to be crucial for this set of inhibitors due to the molecular interaction with the S1 subsite of both enzymes. However, there is a limit regarding the substituents volume in this region. Receptor independent (RI) 4D-QSAR analysis was applied lo the same data set and it was possible to establish the pharmacophore mapping, besides to explore different alignments in order to generate the hypothesized bioactive conformation through the best QSAR model. The QSAR models have presented good predictability, assisted in proposing new inhibitors, and estimated the activity of 4-NC. Regarding the best QSAR model for MMP-9 (N=64), the 4-NC predicted activity was classified in the range of the moderate active inhibitors. The best QSAR model obtained for MMP-2 (N=38), however was not able to properly predict the activity for compounds with different chemical scaffold from those used to build up the QSAR model. Molecular docking studies have been developed to investigate the 4-NC binding mode into the catalytic site of the two enzymes and the interactions that could be established in those complexes. The results have shown two favorable conformers regarding the MMP inhibition. Molecular dynamics computational simulation were combined to molecular docking studies in order to obtain more detailed and reliable information regarding the intermolecular interactions of each complex. The 4-NC molecule tends to accommodate the side chain in the S1 pocket adjacent to the catalytic site in both enzymes. Experimental zymography assays were also performed to elucidate the possible contribution of the side chain and the catechol core in the 4-NC inhibitory activity against the MMP-2 and MMP-9 enzymes. The catechol core seems to be responsible for its activity, since the 1,2 dimethoxybenzene compound, which has the hydroxyl blocked by a methyl group, was not able to exert any significant inhibition on enzymes. Voltametric assays confirmed the hypothesis that 4-NC chelates zinc ions present in the incubation buffer.

O carbaril (metilcarbamato de naftila), um inseticida de amplo espectro, foi recentemente associado ao desenvolvimento de melanoma cutâneo em estudo epidemiológico de coorte com trabalhadores agrícolas norte-americanos, expostos também à radiação solar, o principal fator etiológico para o desenvolvimento de tumores cutâneos. Apesar de abrangente e bem planejado, aquele estudo epidemiológico não é suficiente para caracterizar a contribuição direta do inseticida e da radiação solar na melanomagênese. Diversos estudos têm explorado o efeito sinérgico de determinadas substâncias químicas à radiação UV, potencializando seus efeitos deletérios sobre a pele, e possivelmente contribuindo para o desenvolvimento de tumores. A hipótese deste trabalho é de que a exposição ao carbaril associada à radiação solar possa estimular a transformação de melanócitos. Esse estudo visou caracterizar melanócitos humanos após exposição individual ou combinada ao carbaril (100uM) e à radiação solar (375 mJ/ cm2). Em ensaio de microarray, o carbaril, mas não a radiação solar, induziu uma importante resposta a estresse oxidativo, evidenciada pelo aumento da expressão de genes antioxidantes, como o Hemeoxigenase-1 (HMOX1), e pela diminuição da expressão do gene MiTF, regulador da atividade melanocítica; os resultados foram confirmados por qRT-PCR. Além disso, tanto o carbaril quanto a radiação solar induziram respostas que sugerem dano ao DNA e alteração de ciclo celular. A expressão dos genes nestas categorias, como p21 e BRCA1/2, foi notavelmente mais intensa no grupo de tratamento combinado e de fato, ensaios por citometria de fluxo demonstraram parada de ciclo celular na fase S, redução do número de células em apoptose e indução mais rápida de lesões do tipo CPD neste grupo experimental. Nossos dados sugerem que o carbaril é genotóxico para melanócitos humanos, especialmente quando associado à radiação solar Carbaryl (1-naphthyl-methylcarbamate), a broad spectrum insecticide, has recently been associated with the development of cutaneous melanoma in an epidemiological cohort study with U.S. farm workers also exposed to ultraviolet radiation, which is known to be the main etiologic factor for skin carcinogenesis. Although comprehensive and well designed, the epidemiological study is not sufficient to characterize the direct contribution of the insecticide and solar radiation in melanomagenesis. Several studies have explored the synergistic effect of certain chemicals with UV radiation, increasing its deleterious effects on the skin, possibly contributing to tumor development. We hypothesized that Carbaryl exposure associated with UV solar radiation may induce melanocyte transformation. This study aims to characterize human melanocytes after individual or combined exposure to Carbaryl (100uM) and solar radiation (375 mJ/ cm2). In a microarray analysis, Carbaryl, but not solar radiation, induced an important oxidative stress response, evidenced by the upregulation of antioxidant genes, such as Hemeoxygenase-1 (HMOX1), and downregulation of MiTF, the main regulator of melanocytic activity; results were confirmed by qRT-PCR. Moreover, both Carbaryl and solar UV induced a gene response that suggests DNA damage and cell cycle alteration. The expression of genes in these categories, such as p21 and BRCA1/2, was notably more intense in the combined treatment group in an additive manner and in fact, flow cytometry assays demonstrated cell cycle arrest in S phase, reduced apoptosis induction and faster induction of CPD lesions in this experimental group. Our data suggests that carbaryl is genotoxic to human melanocytes, especially when associated with solar radiation

A úlcera gástrica é uma doença crônica, de alta prevalência, e a eficácia dos tratamentos farmacológicos disponíveis é limitada pela alta incidência de efeitos adversos. Neste trabalho é mostrado o mecanismo de ação terapêutica e os efeitos toxicológicos da molécula indol-tiazolidínica LYSO-7 em diferentes modelos experimentais de úlcera gástrica. Camundongos Swiss machos foram tratados com veículo, LYSO-7 (5, 25 ou 50 mg/kg, v.o.) ou bezafibrato (25 ou 50 mg/kg, v.o.) 1 hora antes da administração oral de Et/HCl (60%/0,03 M) ou indometacina (100 mg/kg). Em outro conjunto de ensaios, animais foram pré-tratados com GW9962, um antagonista PPARγ (2 mg/kg, i.p.); anticorpo anti-granulócito (50 µL, i.p.), ou L-NAME (70 mg/kg, i.p) 1 hora antes dos tratamentos com veículo ou LYSO-7. Uma hora após administração da solução de Et/HCl, os neutrófilos foram quantificados no sangue e medula óssea, a rede microcirculatória gástrica foi estudada em in situ, utilizando a técnica de microscopia intravital; o tecido gástrico foi utilizado para quantificar a percentagem de área lesada, atividade da MPO, a expressão gênica e proteica de PPARγ, expressão proteica de iNOS e eNOS, e a atividade das enzimas catalase, SOD, GPx, GR e GST. Uma hora após a administração de indometacina, o tecido gástrico foi removido para avaliar a eficácia do tratamento e a secreção de mediadores inflamatórios. Ensaio de úlcera crônica, induzida por ácido acético, foi realizado em camundongos Balb/c WT ou ANXA1-/-, aplicando-se 20µL de ácido acético na camada subserosa do estômago e 24 horas após a indução, os animais foram tratados, uma vez ao dia, durante sete dias com LYSO-7 (50 mg/kg), bezafibrato (50 mg/kg) ou veículo. Foram realizados ensaios com macrófagos recrutados para o peritônio pela ação do tioglicolato de sódio (3%, i.p.) e com neutrófilos recrutados pela ação do glicogênio de ostra (1%, i.p.). Ensaios de toxicologia aguda, crônica e mutagenicidade também foram realizados. Os resultados obtidos mostram que o tratamento com LYSO-7 reduz a área lesada, o influxo de neutrófilos e a estase da rede microcirculatória provocada pela administração de Et/HCl. Os efeitos protetores foram revertidos em animais pré-tratados com GW9962, indicando a participação do PPARγ no efeito. O influxo de neutrófilos é determinante para a lesão, uma vez que a depleção destas células reduziu a ulceração gástrica, e indica que o bloqueio da mobilização de neutrófilos da medula óssea para o sangue e destes para o tecido lesado pela LYSO-7 pode ser um mecanismo de ação gastroprotetora desta molécula. A reversão da estase vascular na microcirculação, mas não o influxo de neutrófilos, é mediado pelo NO, pois o pré-tratamento com L-NAME aboliu os efeitos da LYSO-7 no restabelecimento do fluxo sanguíneo da microcirculação. Este efeito pode ser dependente da maior e menor expressão proteica de eNOS e iNOS, respectivamente. A LYSO-7 foi capaz de alterar favoravelmente a atividade das enzimas antioxidantes no tecido gástrico. Ainda, a LYSO-7 diminuiu a área lesada e reduziu a concentração de TNFα e aumentou a de IL-10 no tecido gástrico lesado pela indometacina. Na resolução do processo inflamatório, o tratamento com LYSO-7 diminuiu a percentagem de área lesada, aumentou a apoptose de neutrófilos e a eferocitose de neutrófilos por macrófagos peritoneais, inibiu a secreção de TNFα e aumentou a secreção de IL-10, TFG-1β e VEGF para o sobrenadante de macrófagos em fagocitose. A resolução de lesão gástrica, bem como a indução da fagocitose pela LYSO-7 foi reduzida em animais ANXA1-/-. As investigações destes últimos dados mostraram a relação da ANXA1 e PPARγ, já que a expressão do receptor é reduzida em macrófagos obtidos de animais depletados de ANXA1. Os estudos toxicológicos mostraram que a LYSO-7 apresenta baixa toxicidade aguda e crônica in vivo, além de não ocasionar mutagenicidade em eritrócitos da medula óssea. Os dados obtidos mostram que a molécula LYSO-7 atua como agonista PPARγ na modulação da úlcera gástrica e modula a migração de neutrófilos e o fluxo sanguíneo na microcirculação. A transativação e transrepressão de eNOS e iNOS, respectivamente, o bloqueio da migração de neutrófilos para a lesão e a inibição da atividade de enzimas oxidativa, ativação de enzimas antioxidantes no epitélio gástrico e a inibição da secreção de mediadores inflamatórios parecem ser os mecanismos de ação da LYSO-7 na citoproteção gástrica. Adicionalmente, a LYSO-7 atua na resolução do processo inflamatório promovendo downregulation na secreção de mediadores inflamatórios, aumento na apoptose de neutrófilos e eferocitose de neutrófilos apoptóticos. Gastric ulcer is a chronic disease that presents high prevalence, and effectiveness of pharmacological treatments available is limited by several adverse effects. In this study is shown the mechanism of action and toxicological effects of the molecule indole-thiazolidine LYSO-7 in different models of gastric ulcer. Male Swiss mice were treated with vehicle LYSO-7 (5, 25, or 50 mg/kg, p.o.) or bezafibrate (25 or 50 mg/kg, p.o.) 1 hour before the oral administration of Et/HCl (60%/0.03 M) or indomethacin (100 mg/kg). In another set of assays, animals were pre-treated with GW9962, a PPARγ antagonist (2 mg/kg, i.p.), anti-granulocyte antibody (50 µL, i.p.) or L-NAME (70 mg/kg, i.p.) 1 hour before the treatment with vehicle or LYSO-7. One hour after administration of the Et/HCl solution, neutrophils were quantified in the blood and bone marrow, the gastric microcirculatory network was studied in situ by intravital microscopy, in the gastric tissue were quantified the percentage of injured area, MPO activity, PPARγ gene and protein expression, iNOS and eNOS protein expression, and catalase, SOD, GPx, GR and GST activity. One hour after indomethacin administration, gastric tissue was removed to verify the efficacy of LYSO-7 on inflammatory mediator secretion. Chronic ulcer assay induced by acetic acid was carried out in Balb/c WT or ANXA1-/-, applying 20µL of acetic acid in the subserosal layer of the stomach and 24 hours after induction, animals were treated during seven days, once a day, with LYSO-7 (50 mg/kg), bezafibrate (50 mg/kg) or vehicle. Assays were performed with macrophages recruited to the peritoneum by sodium thioglycollate (3%, i.p.) and neutrophils by oyster glycogen (1%, i.p.). Acute and chronic toxicological and mutagenicity assays were also conducted. The results obtained show that LYSO-7 treatment decrease the injured area, neutrophil influx and microcirculatory stasis evoked by Et/HCl administration. Protective effects were reversed in animals pretreated with GW9962, indicating the involvement of PPARγ. Neutrophil influx is a determinant of the gastric lesion, once the depletion of these cells decreased the gastric damage, indicating that in the neutrophil mobilization blockade from the bone marrow to blood and to injured tissue may be a gastroprotective mechanism of LYSO-7. The vascular stasis reversion in the microcirculation is mediated by NO, but not the neutrophil influx, since the pretreatment with L-NAME abolished the effects of LYSO-7 on blood flow. This effect was dependent on increase and decrease of eNOS and iNOS protein expression, respectively. LYSO-7 positively altered the activity of antioxidant enzymes in the gastric tissue. Furthermore, LYSO-7 reduced the injured area and the concentration of TNFα and increased IL-10 in the gastric tissue in the indomethacin-induced ulcer model. In the resolution of inflammation, LYSO-7 treatment decreased the percentage of the injured area, increased the neutrophils apoptosis and the efferocytosis of apoptotic neutrophils by peritoneal macrophages, inhibited the TNFα release and increased the secretion of IL-10, IL-1β and VEGF in the supernatant of phagocytosis assay. The resolution of gastric lesions, as well as, the induction of phagocytosis by LYSO-7 was reduced in animals ANXA1-/-. This data shown the relation of PPARγ and ANXA1, as PPARγ expression is reduced in macrophages obtained from ANXA1-/- animals. Toxicological studies showed that LYSO-7 has low acute and chronic toxicity in vivo, and did not cause mutagenicity in bone marrow erythrocytes. The data obtained show that LYSO-7 acts as PPARγ in the modulation of gastric ulcer and modulate neutrophil migration and blood flow in the microcirculation. The transactivation and transrepression of eNOS and iNOS, respectively, blocking the neutrophil influx into the injury, antioxidant enzymes activation in the gastric epithelium and inhibition of inflammatory mediators release seem to be the mechanisms action of LYSO-7 in gastric cytoprotection. Additionally, LYSO-7 operates in the resolution of inflammation promoting downregulation in the secretion of inflammatory mediators and increases the neutrophil apoptosis and efferocytosis of apoptotic neutrophils.

Os óleos essenciais provenientes de plantas da flora Latino-americana, têm-se apresentado como candidatos à utilização em formulações cosméticas como fragrâncias, promotores de permeação cutânea, antioxidantes e conservantes naturais. A segurança de componentes da formulação deve ser avaliada por testes toxicológicos validados, que geram resultados reprodutíveis e confiáveis. Os ensaios de citotoxicidade (OECD/GD 129), fototoxicidade in vitro (OECD 432), micronúcleo in vitro (OECD 487) e atividade antioxidante intracelular correspondem a métodos alternativos pautados nos princípios dos 3R\'s: Refinament ou Refinamento; Reduction ou Redução; e Replacement ou Substituição. Com essa diretriz, o objetivo proposto foi avaliar a citotoxicidade, a fototoxicidade in vitro, o potencial genotóxico e a atividade antioxidante intracelular dos óleos essenciais das espécies Minthostachys setosa (Briq.) Epling, Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum e Drimys brasiliensis Miers provenientes de plantas da flora Latino-americana, candidatos ao uso em cosméticos. Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação e foi avaliada a sua dispersão em meio de cultura. A partir dos resultados dos ensaios de citotoxicidade na linhagem BALB/3T3 clone A31, foi calculado o valor de concentração que inibe e 50 % (IC50) de células desafiadas. Na avaliação da fototoxicidade in vitro na linhagem BALB/3T3 clone A31 e no ensaio do micronúcleo in vitro na linhagem CHO-K1, verificou-se respectivamente, os potenciais fototóxico e genotóxico das amostras. Com exceção do óleo essencial da Drimys brasiliensis, a atividade antioxidante foi avaliada na linhagem WS1. Os óleos essenciais da Minthostachys setosa, Pimenta pseudocaryophyllus e Drimys brasiliensis não apresentaram potencial citototóxico, fototóxico e genotóxico, além disso, a atividade antioxidante foi expressiva para Pimenta pseudocaryophyllus. Essential oils from plants flora Latin America, have been presented as candidates for use in cosmetic formulations as fragrances, skin permeation enhancers, antioxidants and natural preservatives. The safety of the formulation components should be assessed by validated toxicological tests. The cytotoxicity assays (OECD/GD 129), in vitro phototoxicity (OECD 432), in vitro micronucleus (OECD 487) and intracellular antioxidant activity correspond to alternative methods guided by the 3R\'s principles: Refinament, Reduction and Replacement. In this scenario, the proposed objective was to evaluate the cytotoxicity, phototoxicity in vitro, the genotoxic potential and intracellular antioxidant activity of Minthostachys setosa (Briq.) Epling, Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum and Drimys brasiliensis Miers essential oils, from Latin American plants candidates for use in cosmetics. The essential oils were extracted by hydrodistillation and its dispersion was evaluated in culture medium. The results obtained in cytotoxicity assays on line BALB/3T3 clone A31 was calculated the IC50. In vitro phototoxicity in BALB/3T3 clone A31 cell line and the micronucleus assay in vitro in the CHO-K1 cell line, it was verify phototoxic and genotoxic potential, respectively. With the exception of essential oil Drimys brasiliensis, the intracellular antioxidant activity was assessed in WS1 cell lines. In conclusion Minthostachys setosa, Pimenta pseudocaryophyllus and Drimys brasiliensis Miers essential oils showed no cytotoxic, phototoxic and genotoxic potential, moreover, the antioxidant activity was expressive for Pimenta pseudocaryophyllus.

A exposição à radiação ultravioleta promove o desenvolvimento de efeitos indesejáveis, incluindo o fotoenvelhecimento e fotocarcinogênese. Uma forma de prevenção é a utilização de antioxidantes de origem natural. O extrato de raiz de Pothomorphe umbellata (PU) apresenta conhecida atividade antioxidante e fotoprotetora, atividade esta atribuída, em parte, ao princípio ativo 4-nerolidilcatecol (4-NC). Artigos publicados sobre a atividade do extrato de raiz de PU, conhecida popularmente como \"pariparoba\" e do princípio ativo, 4-NC, mostraram que o extrato bruto de raiz é mais ativo do que o 4-NC isolado como inibidor de metaloproteinases (MMPs) e como antioxidante, sugerindo a presença de outros compostos com estas atividades, além de um possível efeito sinérgico. O objetivo deste estudo foi o de obter frações do extrato de PU isentas de 4-NC e avaliar a atividade antioxidante, fotoprotetora e inibitória de metaloproteinases 2 e 9 na pele. O extrato hidroalcoólico de raiz de PU foi submetido ao fracionamento líquido/líquido sucessivamente com hexano e n-butanol, restando um resíduo aquoso. As frações n-butanólica (NBUT) e aquosa (AQ) mostraram-se isentas de 4-NC. A avaliação da atividade antioxidante por DPPH e ORAC das 3 frações obtidas mostrou maior capacidade antioxidante para a fração hexânica (HEX), seguido das frações NBUT e AQ. O mesmo perfil foi observado quanto à presença de compostos fenólicos. Entretanto não foi detectada a presença de flavonóides nas frações. O tratamento tópico com formulação gel-creme contendo o extrato de PU, a fração NBUT e a fração NBUT+4-NC, 2h antes da exposição aguda à radiação UVB (2 MED - 204.36 mJ/cm2), mostrou-se insuficiente para repor os níveis basais do sistema antioxidante da pele depletados em aproximadamente 20% pela radiação após 12h quando comparado ao controle. O mesmo tratamento não foi capaz de reduzir a formação de dímeros de pirimidina (CPD) após 2h. A avaliação após 12h mostrou redução da marcação de células de queimadura solar (SBC) e do antígeno de proliferação nuclear (PCNA) para o grupo PU e NBUT. A marcação para p53 e p21 também foi diminuída para o grupo PU e NBUT+4NC, respectivamente. A atividade de metaloproteinases (MMPs) 2 e 9 ativas extraídas do homogenato de pele de camundongos sem pelo após 24h da exposição à radiação UVB, avaliada por zimografia foi inibida pela fração NBUT. Os resultados observados pela fração NBUT de menor atividade antioxidante, comparados à fração HEX, sugerem que a atividade inibitória de MMPs não esteja necessariamente relacionada à capacidade antioxidante. Neste estudo não foi possivel identificar o(s) composto(s) provavelmente responsável(is) pela ação inibitória de MMPs da fração NBUT. Ultraviolet radiation exposure induces the development of undesirable effects, including photoageing and photocarcinogenesis. One way of preventing these effects is the use of natural antioxidants. The Pothomorphe umbellata (PU) root extract shows antioxidant and photoprotective activities, which have been attributed, in part, to 4-nerolidylcatechol (4-NC), the main compound from this plant species. In previous studies, the plant extract was more efficient than 4-NC as an antioxidant and in metalloproteinases (MMPs) inhibitory activities, suggesting the presence of others compounds that could be related with these properties, as well as a possible synergic effect. The purpose of this study was to obtain fractions from PU without 4-NC, and to evaluate the antioxidant, photoprotection and skin MMPs 2 and 9 inhibitory activity of this fractionation. The P.umbellata hidroalcoholic root extract was submitted to liquid/liquid extraction with hexane followed by n-buthanol, from which derived a final residue of aqueous extract. The n-buthanolic (NBUT) and aqueous (AQ) fractions did not show the presence of 4-NC. The evaluation of the antioxidant activity by DPPH and ORAC for the 3 fractions showed higher antioxidant activity for the hexanic (HEX) fraction, followed by the NBUT and AQ fractions. The same profile was observed for phenolic compound concentration. However the presence of flavonols in the fractions and PU root extract was not detected. The gel-cream topic treatment containing PU root extract, NBUT fraction and NBUT+4NC, 2h before acute UVB exposure (2 MED - 204,36 mJ/cm2), was insufficient to promote the normal conditions of basal level antioxidant system depleted approximately 20% after 12h of the exposure compared with the control. The same treatment evaluated by immunohistochemistry, was not able to reduce the CPD (cyclobutane pyrimidine dimers) 2h after the exposure. In 12h reduction of SBC (sunburn cells) and PCNA (proliferating cell nuclear antigen) in PU and NBUT mouse groups was observed. The p53 and p21 proteins were reduced in PU and NBUT+4NC groups, respectively. The activity of metalloproteinases 2 and 9 (MMPs) of mouse skin homogenates after 24h acute UVB exposure, evaluated by zymography, was inhibited by the NBUT fraction. The observed results for NBUT that showed lower antioxidant activity than HEX suggest that the inhibitory effects of MMPs activity may not be related to the antioxidant capacity. It has not been possible to identify the compound(s) that are probably responsible for inhibitory activity of MMPs from the NBUT fraction.

Ilex paraguariensis (erva mate) é uma planta amplamente usada na América Latina sob a forma de infusão aquosa. Dentre as propriedades atribuídas a esta planta encontra-se a atividade antioxidante que sugere um papel importante desta droga vegetal na prevenção e tratamento de doenças associadas ao estresse oxidativo como a aterosclerose, fotocarcinogênese e fotoenvelhecimento, entre outras. No entanto alguns compostos presentes nesta planta se encontram sob a forma esterificada, o que poderia dificultar a sua adequada absorção. Uma maneira de aumentar a biodisponibilidade de antioxidantes em extratos vegetais é promover a sua hidrólise visando à liberação dos compostos ativos. O objetivo deste trabalho foi estudar comparativamente o extrato hidroetanólico de Ilex paraguariensis antes e após hidrólise enzimática quanto à composição fitoquímica, atividade antioxidante in vitro e in vivo, biodisponibilidade de compostos antioxidantes e distribuição tecidual destes compostos em animais de experimentação. Para tanto o extrato foi obtido por percolação etanol:água (50% v/v) e sua hidrólise realizada por reação enzimática. A caracterização fitoquímica foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria e a atividade antioxidante dos extratos pelos métodos de DPPH e ORAC. Para os ensaios in vivo os extratos (hidrolisado e não hidrolisado) foram administrados oralmente (por gavage) a ratos Wistar machos em sistema de dose única ou doses repetidas (30 dias). Coletou-se o sangue, pele, fígado e cérebro, analisando-se a concentração dos compostos de interesse e a atividade antioxidante destes tecidos pelo método de ORAC. O extrato apresentou boa atividade antioxidante e conteúdo fenólico, sendo que estes valores não foram significativamente alterados pela hidrólise. No entanto, a hidrólise possibilitou uma maior absorção dos compostos de interesse, aumentando a atividade antioxidante plasmática. Ilex paraguariensis (yerba mate) is a plant broadly used in Latin America as an aqueous infusion. Among its biological properties is the antioxidant activity, which suggests a important role in prevention and treatment of oxidative stress associated diseases, such as atheroclerosis, photocarcinogenesis and photoaging among other. However some of the compounds responsible for that activity are, in crude plant extract, under esterified form, which could make absorption more difficult. An approach to increase the bioavailability of antioxidants from plant extracts is to submit the extract to hydrolysis in order to release the active compounds. The goal of this work was comparatively evaluate the hydroethanolic extract of Ilex paraguariensis before and after enzimatic hydrolysis concerning phytochemical composition, in vivo and in vitro antioxidant activity, bioavailability and tissue distribution of antioxidant compounds in rats. The extract was obtained by percolation with ethanol:water (50% v/v) and the hydrolysis performed by enzymatic reaction. The phytochemical characterization was performed by high performance liquid chromatography (HPLC) and spectrophotometry and the antioxidant activity by DPPH and ORAC methods. Hydrolyzed and non hydrolyzed extracts were given orally (by gavage) to male Wistar rats in single and multiple dose (30 days) regimen. Blood, skin, liver and brain were removed, and the concentration of antioxidant compounds and antioxidant activity by ORAC method were evaluated. The crude hydroethanolic extract showed antioxidant activity and phenolic content, but these values were not significantly changed by hydrolysis. However the hydrolysis increased the absorption of the compounds and the plasma antioxidant activity.

Nesse projeto, foi desenvolvido um sistema biológico que denominamos Dosímetro de DNA, com o objetivo de avaliar a ação genotóxica da radiação UV solar a partir da produção de lesões na molécula de DNA. Para determinar os diferentes tipos de danos, utilizamos enzimas de reparo de DNA e anticorpos específicos. Complementando estas análises, foram ainda realizados ensaios de frequência de mutação e da taxa de inativação biológica de DNA. Através da utilização dessa tecnologia foi possível confirmar a produção de lesões CPDs e 6-4PPs após a irradiação em lâmpadas de UVB e UVA. Outro fator importante foi a maior indução de danos oxidativos que a banda de UVA apresentou em relação à de UVB. Exposições ambientais demonstram claramente que a luz solar possui diferentes perfís de indução de lesões de DNA, que variam de acordo com a localidade da irradiação, e que fenômenos biológicos como inativação de DNA e mutagênese são diretamente dependentes da presença de fotoprodutos na molécula de DNA e não estão associados aos danos oxidativos. Portanto, o sistema Dosímetro de DNA é capaz de fornecer uma ampla compreensão da ação genotóxica da luz solar e informações inovadoras que poderão ser utilizadas no desenvolvimento de substâncias fotoprotetoras mais eficientes. To better understand the impact of solar UV radiation upon DNA molecule, we developed a biological system based on the exposure of plasmid DNA to artificial and natural UV sources. The quantification of DNA lesions was performed through the use of specific DNA repair enzymes and antibodies. The biological effects of sunlight, as well as artificial UV-radiation, were evaluated through the determination of the DNA inactivation rate and mutagenesis frequency. Through the application of this technology, we could detect the induction of CPDs and 6-4PPs after exposures to UVB and UVA lamps. Interestingly, the induction of oxidative damages was significantly higher after UVA than UVB radiation. Surprisingly, the profiles of induction of DNA damages observed after sunlight exposures have presented variations especially according to the latitude. In addition, our data clearly indicate that the induction of these biological effects is directly related to the presence of photoproducts in UV-exposed DNA samples, and suggest that oxidative damages are not related to these biological processes. Therefore, a very suitable system was developed capable of providing a wide comprehension of the biological effects of solar-UV radiation upon the DNA molecule.

Algumas áreas do canal de Piaçaguera, localizado na Baixada Santista, SP-Brasil, apresenta alto nível contaminação por hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA) entre outros contaminantes nos sedimentos. O objetivo do presente estudo foi verificar diferentes biomarcadores de exposição em bile e de efeitos genotóxicos em sangue de peixes, coletados in situ, que poderiam ser utilizados como ferramenta de monitoramento. O canal de Bertioga foi selecionado como região de referência. Embora não seja uma região sem nenhuma interferência de contaminantes, os sedimentos apresentam baixos valores para HPA, metais e atividade mutagênica. A espécie Mugil curema foi selecionada por ser freqüentemente encontrada em ambas as regiões de estudo. Observamos que os peixes coletados no canal de Piaçaguera apresentaram maior porcentagem de micronúcleos e danos ao DNA (ensaio cometa) no sangue quando comparados com a região de referência. Para o teste de micronúcleo, realizamos leituras de 1000 e 4000 células/indivíduo e não foram observadas diferenças estatísticas, sugerindo que o número de 1000 células poderia ser suficiente para gerar dados confiáveis para a espécie Mugil curema. A avaliação de mutagenicidade da bile foi realizada pelo teste Salmonella/microssoma combinado à extração de bile utilizando Blue rayon (BR) com as linhagens TA98, TA100 e YG1041 com e sem S9 (ativação metabólica). As maiores respostas mutagênicas foram observadas para os peixes coletados no canal de Piaçaguera. A mutagenicidade com a linhagem YG1041 na presença de S9 foi mais elevada quando comparado à mutagenicidade observada na ausência de S9 e também em comparação com a sua linhagem parental TA98, indicando a provável presença de compostos da classe das aminas aromáticas na bile como responsáveis pelos efeitos observados. A quantificação de metabólitos equivalentes de HPA foi realizada por HPLC/fluorescência na bile bruta e embora os resultados não se correlacionem com a mutagenicidade, altos níveis também foram encontrados para os peixes coletados no canal de Piaçaguera em comparação com Bertioga. O protocolo de amplificação do gene ras para a espécie Mugil curema foi estabelecido e os genes foram seqüenciados para verificação da presença de mutações. Não foram observadas mutações nos poucos peixes analisados e mais estudos são necessários para verificar a utilização deste biomarcador. O teste de micronúcleo, ensaio cometa e análise de mutagencidade em bile extraída por Blue rayon parecem ser ferramentas biológicas adequadas para monitoramento da qualidade ambiental de estuários contaminados. Some areas of the Piaçaguera channel at Baixada Santista, SP, Brazil present high levels of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) among other contaminants in the sediment. The aim of the present study was to verify if biomarkers of exposure in bile and effect in blood of fishes collected in the field could be used as a monitoring tool. We selected Bertioga channel as a reference area. Although it is not a pristine area, the sediment presents low values of PAHs, metals and mutagenic activity. We selected the fish species Mugil curema, because they are frequently found in both areas during the entire year. We observed that the fish collected at the Piaçaguera channel showed a higher percentage of micronuclei and DNA damage (comet assay) in blood when compared to the Bertioga channel. The micronucleus readings were done in 1000 and 4000 cells/fish and no statistical difference was observed, suggesting that the number of 1000 cells would be sufficient to generate reliable data for the species Mugil curema , in the studied area. The mutagenicity of the bile was performed using the Salmonella/microsome assay combined with Blue rayon (BR) extraction with TA98, TA100 and YG1041 strains with and without rat liver S9. We observed that the mutagenic responses were higher in fish collected in Piaçaguera. The mutagenicity in YG1041 with S9 in fishes collected in the Piaçaguera channel was higher when compared to the mutagenicity observed in the absence of S9 and also higher than the response with the parental strain TA98. The results suggest that mutagenic polycyclic compounds, probably from the class of the aromatic amines are causing the observed effect. PAH metabolites-equivalent were also determined using HPLC/fluorescence in crude bile, and although the results did not correlate with the mutagenicity, higher levels were observed in fish collected in the Piaçaguera channel when compared to Bertioga. A protocol for amplification of the ras gene for the Mugil curema species was established and gene sequenced. No mutations were observed in the liver of the few fishes analyzed, and more studies are required to verify the utility of this biomarker in this fish. The micronuclei, comet assay and mutagenicity in bile extracted with blue rayon seem to be suitable biological tools to monitor the environmental quality of contaminated estuaries.

As ervas e especiarias são fontes de antioxidantes. Essa capacidade antioxidante está relacionada aos compostos fenólicos que apresentam papel importante nos processos de inibição da peroxidação e podem atuar sobre o estresse oxidativo, relacionado com diversas patologias, inclusive o diabetes. O alecrim é bastante apreciado por seu aroma e sabor, tendo como constituintes os seguintes compostos fenólicos: ácido carnósico, carnosol, ácido rosmarínico, ácido caféico e éster do ácido hidroxicinâmico. Objetivou-se avaliar a capacidade antioxidante in vitro de extratos e frações de ácidos fenólicos obtidos das folhas de alecrim e seu efeito sobre ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina. Constatou-se que tanto os extratos como as frações apresentaram altos teores de compostos fenólicos totais e expressiva atividade antioxidante in vitro nos três métodos utilizados: β-caroteno/ácido linoléico, varredura do radical DPPH e ORAC. No ensaio in vivo, foi utilizado modelo de diabetes tipo 1, apresentando as características principais: poliúria, polifagia, polidipsia e perda de peso. Observaram-se alterações na atividade das enzimas antioxidantes, nos parâmetros bioquímicos do sangue e aumento significativo (p

A glicação é uma reação não enzimática que ocorre entre proteínas e açúcares redutores e, é responsável pela formação de adultos e de ligações cruzadas entre proteínas, como por exemplo: a pentosidina, produto final de glicação avançada que se acumula em vários tecidos ao longo do tempo. A glicação é deletéria para o organismo e está associada a modificações estruturais em proteínas e alterações de suas funções específicas, tais como: atividade enzimática, capacidade de ligação e tempo de vida de proteínas, além de ser responsável pela produção de espécies reativas de oxigênio (EROS). O mecanismo de formação da pentosidina envolve reações oxidativas e, uma das estratégias para minimizá-Ia é o aumento da atividade antioxidante nos tecidos. A pariparoba (Pothomorphe umbellata (L.) Miq) demonstrou atividade antioxidante in vitro e in vivo quando aplicada sobre a pele. Essa atividade foi atribuída ao 4-nerolidilcatecol (4-NC), que se mostrou 10 vezes mais potente que o α-tocoferol. Os extratos de pariparoba também inibiram a lipoperoxidação espontânea da pele em camundongos sem pelo. Neste trabalho empregou-se o modelo de glicação de albumina de soro bovino (BSA) frente à D-ribose, com avaliação da fluorescência produzida pela pentosidina formada na reação. Avaliou-se igualmente a atividade do 4-NC em diferentes concentrações sobre a reação de glicação da BSA em presença de D-ribose após 24 horas, empregando-se a aminoguanidina como controle positivo. Nas condições experimentais o 4-NC não foi capaz de inibir a reação de glicação, ao contrário da aminoguanidina. Foi também utilizado modelo para avaliação da propriedade contrátil de fibroblastos em matriz tridimensional de gel de colágeno, glicado e não glicado com D-ribose. O 4-NC na concentração de 100 µM permitiu a manutenção da propriedade contrátil de fibroblastos em gel colágeno glicado. Estudos de glicação em maiores períodos de tempo devem ser realizados visando a confirmar a possível atividade anti-glicação deste composto. Glycation is a non enzymatic reaction which occurs between proteins and reductor sugars, responsible for the formation of adducts and crosslinkers between proteins, such as, pentosidine, an advanced glycation end-product (AGE) which accumulates in many tissues during aging. AGEs accumulation is deleterious to the body and is associated with structural modifications in proteins and imbalance in their specific functions, such as: enzymatic activity, binding capacity, protein turnover and also responsible for the production of reactive oxygen species (ROS). The mechanism of pentosidine formation involves oxidative reactions. One of the strategies to reduce pentosidine formation is by increasing antioxidant activity in tissues. Pariparoba (Pothomorphe umbellata (L.) Miq. has showed antioxidant activity in vitro and in vivo when applied on the skin. This activity was attributed to 4-nerolydilcatechol (4-NC), which is 10 times more potent than α-tocopherol. Extracts of Pariparoba also inhibited the spontaneous lipid peroxidation in the skin of hairless mice. In this work, the bovine serum albumin (BSA) model for glycation with D-ribose, evaluated by pentosidine fluorescence spectroscopy was employed. The activity of 4¬NC was evaluated in different concentrations in this model after 24 hours. Aminoguanidine was used as positive control. In this experimental condition, 4-NC was not capable to inhibit the BSA glycation. We also evaluated the contractile properties of fibroblasts on tridimensional matriz of collagen gel glycated or not with D-ribose. 4-NC (100 µM) was able to keep the contractile capacity of fibroblasts in glycated collagen. Studies of glycation in longer periods of time should be made in order to further evaluate the possible anti-glycation activity of this compound.

Ácidos graxos polinsaturados Omega-3 (n-3 PUFA) tais como o ácido eicosapentaenóico (C20:5 n-3, EPA) e docosahexaenóico (C22:6 n-3, DHA) reduzem a concentração plasmática de triacilgliceróis em humanos. Entretanto, uma alta proporção desses ácidos graxos na dieta poderia favorecer a susceptibilidade das células à peroxidação, aumentando o risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Embora modelos animais não sejam recomendados para avaliar o efeito de n-3 PUFA nas lipoproteínas plasmáticas, estes têm sido amplamente utilizados como modelo para avaliação de dano oxidativo. Diferenças nos procedimentos metodológicos também têm gerado dificuldade na comparação de resultados. Desta forma, o objetivo deste estudo foi aplicar os mesmos procedimentos metodológicos para comparar o efeito da suplementação de n-3 PUFA nos biomarcadores plasmáticos de estresse oxidativo utilizando um modelo humano e um modelo animal. Indivíduos foram aleatoriamente distribuídos em dois grupos num delineamento paralelo duplo cego e receberam uma suplementação de 460,0 mg/dia de n-3 PUFA (OMEGA) contendo 240,0 mg de EPA + 160,0 mg de DHA + 60,0 mg de outros n-3 PUFAs, ou óleo de soja (PLACEBO) durante 6 semanas. Ratos Wistar também foram distribuídos em dois grupos e receberam uma dieta contendo 192,5 mg/dia de n-3 PUFA (FO) sendo 116,3 mg de EPA + 61,5 mg de DHA + 14,7 mg de outros n-3 PUFAs ou óleo de soja (SO) durante 3 semanas. Indivíduos do grupo OMEGA apresentaram maior concentração de malondialdeído (MDA) no plasma medido por TBARS quando comparado aos respectivos valores no baseline. A suplementação com n-3 PUFA não alterou a concentração plasmática de α-tocoferol e a atividade antioxidante determinada pelo método DPPH. Apesar dos animais terem recebido doses 10 vezes maiores de n-3 PUFA (2,9 mg/kcal) quando comparadas aos humanos (0,3 mg/kcal) não foram observadas alterações entre os grupos FO e SO para as concentrações de MDA no plasma e no homogenato de cérebro. Em resumo, pode-se sugerir que o modelo animal usado neste estudo parece não ser o mais adequado para avaliar o estresse oxidativo após intervenções dietéticas com n-3 PUFAs em função de diferenças no metabolismo e nos mecanismos de proteção antioxidante observados entre os dois modelos. Omega-3 polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFA) such as eicosapentaenoic (C20:5 n-3, EPA) and docosahexaenoic (C22:6 n-3, DHA) reduce plasma triacylglycerol concentration in humans. However, higher proportion of these fatty acids in the diet could raise cells lipoperoxidation susceptibility, increasing the cardiovascular disease risk. Although animal models are not recommended to evaluate the effect of n-3 PUFA in plasma lipoproteins, they have been widely used as model for oxidative damage. Difference in methodological proceedings has also caused difficulties to compare data among assays. Thus, the objective of this study was to apply the same methodology to investigate the effect of n-3 PUFA supplementation on oxidative biomarkers in animal and human model. Individuals were randomly assigned in two groups in a parallel double blind design and received a supplement of 460.0 mg/day n-3 PUFA (OMEGA) containing 240.0 mg EPA + 160.0 mg DHA + 60.0 mg other n-3 PUFAs, or soybean oil (PLACEBO) during 6 weeks. Wistar rats were also assigned in two groups and received a diet containing 192.5 mg/day n-3 PUFA (FO) containing 116.3 mg EPA + 61.5 mg DHA + 14.7 mg other n-3 PUFAs or soybean oil (SO) for 3 weeks. Individuals in OMEGA group showed higher malondialdehyde (MDA) concentration in plasma measured by TBARS when compared to their baseline values. N-3 PUFA supplementation did not change plasma α-tocopherol concentration and antioxidant activity determined by DPPH method. Although animals have received a 10-fold higher dose of n-3 PUFA (2.9 mg/ kcal) than humans (0.3 mg/kcal), no alteration was observed between FO and SO groups for plasma and brain homogenate MDA concentration. In summary, it can be suggested that the model used in this study doesn\'t seem appropriate to evaluate oxidative stress after dietetic interventions with n-3 PUFA due to physiological differences involved in lipid metabolism and antioxidant protection observed between both models.

O metronidazol (MTZ), é uma droga com atividade antibacteriana e antiprotozoárias, utilizada no tratamento de várias infecções. O presente estudo tem por objetivo avaliar a segurança de dois análogos ao.metronidazol, o 1-[2-metanosulfonatoetil]-2-metil-5-nitroimidazol] (MTZ-Ms) e o 1-[2-iodoetil]-2-metil-5-nitroimidazol] (MTZ-I), por meio detestes de toxicidade pré-clínica, agudo e sub agudo. Nos teste de toxicidade aguda foram avaliadas as doses de 300 e 2000 mg/kg. Para o produto MTZ-MS não foi observada morte de nenhum animal. Para o MTZ-I foi detectada a morte de um animal na dose de 2000 mg/kg.Nos testes de toxicidade sub aguda, foram empregadas doses de 200, 400 e 600 mg/kg e para o MTZ-Ms foi utilizada a dose de 1000 mg/kg. Não foi observada alteração no comportamento dos animais tratados com MTZ-MS e com metronidazol, entretanto no grupo tratado com MTZ-I foi observada diminuição do ganho de peso além da morte de doisanimais. Na avaliação bioquímica, alguns parâmetros mostraram diferença significativa embora sem correlação clínica. Na avaliação hematológica foi observado aumento significativo na contagem de linfócitos, leucócitos e hemácias nos grupos tratados commetronidazol e MTZ-MS. Na avaliação histopatológica foi observada hiperplasia das placas de Peyer e hiperplasia da polpa branca do baço em todos os grupos tratados com metronidazol e MTZ-MS e degeneração dos testículos e atresia dos ovários nos grupos tratados com metronidazol na dose de 600 mg/kg e MTZ-MS. Podemos concluir que o aumento dos linfócitos associados à hiperplasia das placas de Peyer e aumento da polpa branca do baço, sugerem um mecanismo de imunoestimulação. MTZ-I demonstrou baixa segurança não sendo interessante prosseguir os estudos, entretanto para o MTZ-MS, maiores investigações são sugeridas uma vez que este fármaco demonstrou ser um produto seguro. Metronidazole (MTZ) is an antibacterial and antiprotozoal drug used in the treatment of several infections, included those caused by Helicobacter pylori. The present study aimed to evaluate the safety of two MTZ analogues, methanosulfonate (MTZ-Ms) and iodine (MTZI),that showed significant antibacterial activity even to MTZ-resistant strains, in rats through acute and subacute preclinical toxicity. In acute toxicity, 2000 mg/kg of MTZ-Ms was administered and no death was observed. 300 and 2000 mg/kg doses of MTZ-I were administered and one death was observed. In subacute toxicity, no abnormal behavior wasobserved with MTZ and MTZ-Ms. In the group treated with MTZ-I, it was detected a reduction in the weight gain and two death. The biochemical parameters evaluated showed a significant difference without a clinical correlation. Lymphocytes, leukocytes and red blood cells increased in the groups treated with MTZ and MTZ-Ms. Apoptose was observed in thePeyers patches and spleen. In histophatological examination it was observed hyperplasia of Peyers patches and degeneration of the testis and ovary in the groups treated with MTZ and MTZ-Ms. In conclusion, the raise of lymphocytes and Peyers patches suggest imunostimmulation action; MTZ-I presented a low degree of safety, the study suggests thatfurther investigations are needed for MTZ-Ms since it presents a greater degree of safety.

Avaliou-se os efeitos dos ácidos oleanólico (AO) e ursólico (AU), triterpenóides presentes em alimentos vegetais e especiarias, quando administrados a ratos F344 durante as etapas de iniciação e seleção/promoção do modelo de hepatocarcinogênese do \"hepatócito resistente\" (RH). Os ratos receberam durante 8 semanas, por entubação gástrica e dissolvido em óleo de milho (OM): AO ou AU (8 mg/100 g de peso corpóreo [p.c.]). Os grupos controle receberam apenas OM (0,25 mL/100 g de p.c; grupo OM), ou água (0,25 mL/100 g de p.c.; grupo Água). O grupo Normal não recebeu qualquer tratamento. O agente iniciante foi uma dose de dietilnitrosamina (DEN, 20 mg/100 g de p.c.). Após 2 semanas de entubação, aplicou-se 3 doses diárias consecutivas de 2-acetilaminofluoreno (2-AAF) (2 mg/100 g de p.c.) e fez-se uma hepatectomia parcial a 70%, acrescida de 1 dose de 2-AAF (0,5 mg/100 g de p.c.) 4 dias após a cirurgia. Em 6 semanas após a iniciação, os animais foram sacrificados. Resultados: A análise macroscópica demonstrou que AO não determinou alterações e AU tendeu a aumentar o número de nódulos de hepatócitos, comparados ao grupo OM. A análise morfométrica das lesões pré-neoplásicas (LPN) hepáticas positivas para glutationa S-transferase forma placentária (GST-p), demonstrou que AO e AU não determinaram alterações no número médio de LPN persistentes, porém reduziram o número médio de LPN em remodelação, comparados ao grupo OM (p < 0,05). AO e AU não determinaram alterações na área média das LPN persistentes, mas diminuíram a área média das LPN em remodelação, comparados ao grupo OM (p < 0,05). AO e AU não determinaram alterações na área do corte ocupada por LPN persistentes, mas diminuíram a área do corte ocupada por LPN em remodelação, comparados ao grupo OM (p < 0,05). Os grupos Água, OM e AU apresentaram aumento na concentração plasmática de colesterol, comparados ao grupo Normal. AO promoveu aumento da expressão do gene que codifica para a enzima HMG-CoA redutase, comparado ao grupo Normal (p < 0,05), e AU promoveu aumento de expressão quando comparado aos grupos Normal, Água, OM e AU (p < 0,05). AO e AU não determinaram alterações nos índices de proliferação celular (imunoistoquímica para bromodeoxiuridina [BrdU]) nas LPN persistentes. AU promoveu aumento (p < 0,05) na proliferação celular nas LPN em remodelação quando comparado ao grupo OM. AO e AU não determinaram alterações na apoptose em LPN persistentes, mas aumentaram o número médio de corpúsculos apoptóticos nas LPN em remodelação (p < 0,05). O índice de Crescimento Ajustado (apoptose/proliferação celular) dos grupos demonstrou que, nas LPN persistentes, a proliferação celular tem predominância sobre a apoptose. Nas LPN em remodelação, a apoptose tem preponderância sobre a proliferação celular. Os danos no DNA hepático (método do \"cometa\") foram maiores no grupo AO (p < 0,05) e AU (p = 0,061), comparados ao grupo OM. A análise por \"imunoblot\" revelou que o modelo do \"RH\" aumentou a expressão e a ativação do fator de transcrição NF-κB (p < 0,05). AO e AU aumentaram a expressão e a ativação de NF-κB, comparados ao grupo OM (p > 0,05). Observou-se que a proteína supressora de tumor p53 está acumulada no citoplasma dos hepatócitos de 77,2% (Água), 66,5% (OM), 69,6% (AO) e 69,7% (AU) das LPN persistentes, e de 22,8% (Água), 33,5% (OM), 30,4% (AO) e 30,3% (AU) das LPN em remodelação marcadas para p53. A proteína anti-apoptótica bcl-2 apresentou aumento de expressão em 78,4% (Água), 72,6% (OM), 73,0% (AO) e 70,4% (AU) das LPN persistentes, e de 21,6% (Água), 27,4% (OM), 27,0% (AO) e 29,6% (AU) das LPN em remodelação marcadas para bcl-2. Conclusões: AO e AU não apresentaram atividade quimiopreventiva nas condições de estudo, mas diminuíram as LPN em remodelação. O aumento da apoptose e diminuição da proliferação celular estão envolvidos com a remodelação. O fator de transcrição NF-κB está envolvido com a hepatocarcinogênese. AO e AU aumentaram a expressão e a ativação de NF-κB. O acúmulo de p53 no citoplasma, bem como a expressão aumentada de bcl-2 estão relacionados ao fenótipo das LPN persistentes. It was evaluated the effects of the oleanólico acid (OA) and ursolic acid (UA), triterpenoids present in vegetable foods and spices, when administered to rat F344 during the initiation and selection/promotion stages of the resistant hepatocyte model of hepatocarcinogenesis RH. The rat received for 8 weeks, by gavage and dissolved in com oil (CO): OA or UA (8 mg/100 g of body weight [b.w.]). The control groups just received CO (0,25 mL/100 g b.w.; CO group), or water (0,25 mL/100 g b.w.; group Water). Normal group did not receive any treatment type. The initiation agent was dietilnitrosamine (DEN, 20 mg/100 g b.w.). 2 weeks after gavage, it was applied 3 consecutive doses of 2-acetilaminofluoreno (2-AAF) (2 mg/100 g of b.w.) and it was made a 70% partial hepatectomy, added of 1 dose of 2-AAF (0,5 mg/100 9 b.w.) 4 days after the surgery. In 6 weeks after the initiation, the animals were sacrificed. Results: the macroscopic analysis demonstrated that OA did not alter and UA tended to increase the number of hepatocytes nodules, compared to the CO group. The morphometric analysis of the pre-neoplastic lesions (PNL) positive for glutatione S-transferase placentary form (GST-p), demonstrated that OA and UA did not alter the medium number of persistent LPN, however they reduced the medium number of remodeling LPN, compared to the OM group (p 0,05). It was observed that the p53 tumor suppresser protein is accumulated in the hepatocytes cytoplasm of 77,2% (Water), 66,5% (CO), 69,6% (OA) and 69,7% (UA) of persistent LPN, and of 22,8% (Water), 33,5% (CO), 30,4% (OA) and 30,3% (UA) of remodeling LPN marked for p53. The bcl-2 anti-apoptotic protein presented increase expression in 78,4% (Water), 72,6% (CO), 73,0% (OA) and 70,4% (UA) of persistent LPN, and of 21,6% (Water), 27,4% (CO), 27,0% (OA) and 29,6% (UA) of remodeling LPN marked for bcl-2. Conclusions: AO and AU did not present chemopreventive activity in the study conditions, but they reduced remodeling PNL. The apoptosis increase and cellular proliferation decrease are involved with the remodeling. The transcription factor NF-κB is involved with the hepatocarcinogenesis. AO and AU increased the expression and the activation of NF-κB. The p53 accumulation in the cytoplasm, as well as the increased expression of bcl-2 is related to the phenotype of persistent PNL.

Em um universo de centenas de casos envolvendo problemas de toxicologia ocupacional atendidos ao longo de 17 anos (1984 a 2001) por uma instituição governamental especializada em Saúde e Trabalho, foi constado que a grande maioria deles tinha sido anteriormente conduzido de forma equivocada pelos médicos do trabalho. Isto mostrou uma falha no ensino deste conhecimento a estes profissionais, e a partir deste fato, o ensino de toxicologia para os médicos, e especialmente para os médicos do trabalho, foi estudado, assim como os conceitos fundamentais das boas práticas da toxicologia ocupacional. A fim de se propor maneiras objetivas de melhoria dos cursos, foram analisados em profundidade dez casos extraídos do universo existente através do método qualitativo de estudos de casos, muito utilizado na área de educação, e a partir da compreensão das causas que levaram aos conceitos equivocados, e que tiveram suas conseqüências nos erros cometidos, foram elaboradas propostas de mudança da forma de se ministrar o conhecimento de toxicologia aos médicos do trabalho no Brasil. In a universe of hundreds of cases related to occupational toxicology, assisted over 17 years (from 1984 to 2001) in a governmental institution specialized in Occupational Health, it was observed that the great majority of them had been inadequately managed by the occupational physicians previously. This fact showed a flaw in the knowledge to these professionals. Based on this finding, a study was designed to evaluate the teaching of toxicology for physicians, particularly occupational physicians, as well as to assess the essential concepts of the good practices of occupational toxicology. In order to suggest objective measures to improve the courses, ten cases were deeply analyzed using a case study, a qualitative research methodology frequently used in the Education area. Based on the understanding of the causes responsible by the equivocal concepts, a set of proposals for changing the teaching of toxicology to occupational physicians in Brazil has been created.

A fração plasmática da lipoproteína de baixa densidade (LDL) é formada por partículas de diferentes tamanhos, carga e densidade. Baseada na diferença de carga das partículas, a LDL pode ser subfracionada em LDL nativa (nLDL) e LDL eletronegativa (LDL‾). A LDL‾ está presente no plasma e possui propriedades aterogênicas e pró-inflamatórias, assim como, possui menor concentração de antioxidantes lipossolúveis, maior concentração de dienos conjugados, alterações conformacionais da apoliproteína B-100 e menor afinidade para o receptor da LDL em comparação com a nLDL. Concentrações elevadas de LDL‾ têm sido observadas em pacientes com alto risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, incluindo hipercolesterolemia familiar, diabetes. Considerando-se que os mecanismos envolvidos na formação endógena da LDL‾ ainda não estão elucidados, neste estudo foi investigado o efeito da glicoxidação e da lipólise sobre a partícula LDL para avaliar a contribuição destes processos para a formação da LDL‾ in vitro e in vivo. As modificações químicas da LDL e da imunorreatividade com anticorpo monoclonal anti-LDL‾ foi analisada antes e depois da incubação do plasma com lipoproteína lipase (LPL) ou fosfolipase A2 (PLA2), assim como mimetizando-se a lipólise intravascular. Além disso, na lipólise in vivo foi monitorado no periodo pós-prandial em indivíduos normolipidêmicos para investigar a LDL‾ formada endogenamente. A contribuição da glicoxidação para a geração de LDL‾ foi avaliada in vitro pela incubação da LDL com glicose. O efeito da glicoxidação endógena foi monitorada pela medida, ex-vivo, dos os produtos de glicação avançada (AGEs) e LDL‾ no plasma de pacientes diabéticos tipo I (DM I), tipo II (DM II) e indivíduos intolerantes à glicose (IGT). O processo de glicação não enzimática, in vitro, resultou no aumento da concentração de LDL‾. Os indivíduos dos grupos DM I, DM II e IGT apresentaram concentrações plasmáticas elevadas de LDL‾ em relação aos seus respectivos controles, enquanto observou-se aumento de AGEs apenas nos grupos DM I e DM II. O processo de lipólise in vitro mediado pela LPL e PLA2, induziu aumento significante da concentração de LDL‾; entretanto, somente pela ação da LPL foi associada com modificações oxidativas. Em concordância, o processo de lipólise in vivo (pós-prandial) também promoveu aumento significativo da concentração de LDL‾ associado com modificações oxidativas. Conclusão, nossos dados mostram que, glicoxidação e de lipólise, poderiam contribuir na formação da LDL‾ in vivo. The low density lipoprotein (LDL) fraction in blood plasma is formed by particles with different size, charge and density. Based on particle charge differences, LDL fraction may be separated into native (nLDL) and electronegative (LDL‾) subfractions. LDL‾ is present in blood plasma and has atherogenic and proinflammatory properties, as well as, lower concentrations of lipid soluble antioxidants, higher content of conjugated dienes, conformational alterations of apolipoprotein B-100 and lower affinity by LDL receptor in comparison to nLDL. Increased LDL‾ concentrations have been found in subjects with high risk for cardiovascular diseases, including those with familiar hypercholesterolemia, diabetes and hyperlipidemia. Considering that the mechanisms involved in the endogenous generation of LDL‾ are not yet well elucidated, in this study the effect of glucoxidation and lipolysis of LDL particles was investigated in order to evaluate their contribution to in vitro e in vivo LDL‾ formation. LDL chemical modifications and its reactivity towards a monoclonal anti-LDL‾ antibody were analyzed before and after incubation of either plasma or LDL with lipoprotein lipase (LPL) or phospholipase A2 (PLA2) as an in vitro lipolysis biomimetic system. Moreover, in vivo lipolysis was monitored at the post-prandial period in normolipidemic subjects to investigate LDL‾ endogenously formed. The contribution of glucoxidation to LDL‾ generation was evaluated in vitro by incubating LDL with glucose. The effect of endogenous glucoxidation was monitored by ex-vivo measurement of advanced glycation end products (AGES) and LDL‾ in blood plasma of type I (DM I) and II (DM II) diabetic patients, as well as, in subjects with glucose intolerance (IGT). The in vitro non-enzymatic glycation resulted in increased LDL‾ formation. The DM I, DM II and IGT groups showed higher LDL‾ concentrations than the respective control groups, while AGEs were increased only in DM I e DM II groups. The in vitro lipolysis mediated by LPL and PLA2 induced a significant increase of LDL‾; however, only LPL action was also associated to LDL oxidative modification. In accordance, in vivo lipolysis (post-prandial) also promoted a significant increase of LDL‾ levels associated to LDL oxidative modification. In conclusion, our data show that both, glycoxidation and lipolysis, could contribute to in vivo LDL‾generation.

Caesalpinia férrea Martius, popularmente conhecida como pau-ferro e jucá, é utilizada na medicina tradicional para o tratamento de problemas hepáticos, respiratórios e, em especial, para distúrbios gastrintestinais e como cicatrizante. Deste modo, os objetivos do presente trabalho visaram avaliar os extratos brutos liofilizados de folha (EBLF) e caule (EBLC) quanto a caracterização botânica, o estudo químico e farmacológico, direcionando principalmente, às ações antiúlcera, antioxidante e cicatrizante, e toxicidade destes órgãos vegetais de C. ferrea. A triagem fitoquímica foi realizada com a droga vegetal constituída de folha (DF) e de caule (DC), bem como com os seus EBLF e EBLC. Os métodos empregados foram preconizados por Farnsworth (1966) e Matos (1988) onde foram pesquisados os seguintes compostos: flavonóides, glicósidos cardiotônicos, saponinas, antraderivados, alcalóides, cumarinas, taninos e óleo essencial. Além disso, foi realizada a quantificação de taninos e flavonóides segundo a metodologia proposta na Farmacopéia Européia (2001) e na Farmacopéia Brasileira (2003), respectivamente. Para a avaliação da Toxicidade de C. ferrea foram realizadas a Toxicidade Aguda de ambos os órgãos vegetais, a DL50 do EBLF e a Toxicidade subcrônica do EBLF e EBLC, todos os modelos seguiram a metodologia de Brito (1994). Para análise da atividade antiulcerogênica da espécie em estudo foi realizado o teste da indução de lesão gástrica aguda por etanol/HCI e lesão subcrônica por ácido acético. Grupos Tratados receberam EBLF ou EBLC ou frações ou extratos enriquecidos em flavonóides, Grupo Controle água ou tween 80 e Grupo de Referência Misoprostol ou Cimetidina. Três parâmetros foram avaliados neste modelo: Área Total de Lesão (ATL) , Área Relativa de Lesão (ARL) e índice de Lesão Ulcerativa (ILU). A atividade antioxidante \"in vitro\" foi medida através da inibição da autoxidação de homogenato de cérebro de Ratos (Stocks et aI., 1974). Os extratos foram solubilizados em etanol 70% e as diluições (0.05-0.003mg/mL) foram efetuadas em etanol 35%. O etanol 35% foi utilizado como controle. E na avaliação da Atividade Cicatrizante, os animais (ratos) sofreram uma incisão na região dorsal com auxílio de punch. Os Grupos Tratados receberam diariamente 1 mL de EBLF ou EBLC, solubilizados a 15% em água, e o Grupo Controle água destilada na mesma proporção por um período de 14 dias. Na triagem fitoquímica foram detectados para ambos os extratos, flavonóides, taninos, além de antraderivados e cumarinas nas Folhas. A porcentagem encontrada de Taninos na DF foi de 7.13% e no EBLF de 23.95% e na DC foi de 2.26% e no EBLC de 11.77%. Já a quantificação de flavonóides foi de 0.0095% na DF, 0.026% no EBLF, 0.00014% na DC e de 0.0017% no EBLC. No teste de toxicidade aguda, somente os animais que receberam EBLF apresentaram alterações comportamentais a partir dos primeiros tempos de observação e morte de 3 animais machos e 2 fêmeas (n=5/sexo). Dessa forma, a DL50 encontrada para este extrato vegetal foi de 5471.64 mg/Kg para as fêmeas e de 3112.94 mg/Kg para os machos. Na Toxicidade subcrônica, apenas os animais fêmeas que receberam EBLC (800 mg/Kg) apresentaram uma diferença significativa, em relação ao grupo controle, quanto ao peso do rim, porém não foi encontrada nenhuma alteração histológica neste órgão. EBLF e EBLC apresentaram significativa atividade antiulcerogênica no modelo de lesão gástrica aguda dentro dos parâmetros avaliados. O EBLC reduziu em 37% a ARL. Já o EBLF foi tão ativo como o Misoprostol reduzindo em 95%, 81% e 63% a ATL, a ARL e o ILU, respectivamente contra 92%, 70% e 59% do fármaco de referência. Porém, as frações e os extratos enriquecidos em flavonóides obtidos de ambos os extratos brutos liofilizados não apresentaram atividade antiulcerogênica em nenhum dos 3 parâmetros. Esses mesmos resultados foram obtidos no modelo de lesão gástrica subcrônica para ambos os extratos vegetais. Os EBLF e EBLC de C. ferrea promoveram uma atividade antioxidante de 94% e 84%, respectivamente, na concentração de 0.8196 µg/mL, e um Q 1/2de 0.2331 (Folha) e 0.5061 (Caule) µg/mL. Na avaliação da atividade cicatrizante de ambos os extratos vegetais, não foi encontrada diferença significativa entre os Grupos Tratados e Controle. No laudo histológico não se observou nenhum sinal de cicatrização tecidual. Apesar de C. ferrea ser utilizada pela população como cicatrizante, não foi possível confirmar tal atividade nas folhas e nos caules desta espécie. Caesalpinia ferrea Martius , populary, known as iron-wood or juca, is utilized in traditional medicine in the treatment of both hepatic and respiratory problems and, in special, for gastrointestinals disturbances and eventual healing. The objective of the present work is to evaluate the leiophyllized brute extracts of the leaf (lBEl) and the stem (lBES), the botanic caracterization, the chemical and pharmacological studies, focuzing principally, the antiulcer and healing action, and also the toxicity of these vegetable organs of C. ferrea. The phytochemical was ma de with the drug of the leaf (DL) and of the stem (DS)- LaEL and lBES. The method was precognized by Famsworth (1966) e Matos (1988) where doing research of: flavonoids, cardiotonic glicosids, saponins, antraderivates, alkaloids, coumarins, tannins and essential oi!. Beyond that, the quantification of tannins and flavonoids according to the metodology proposed in European Pharmacopeia (2001) and Brazilian Pharmacopeia (2003) were also undertaken, respectively. For the evaluation of the C. ferrea toxicity, the acute toxicity of both vegetable organs, the DL50 of LBEL and the subcronical toxicity of LBEL and LBES, were analyzed following the metodology of Brito (1994).The test of induction of acute gastric lesion for ethanol/HCI was used for antiulcerogenic activity analysis of the species studied. Treated Groups received LBEL or LBES or fractions or extracts enrich in flavonoids, Controls Groups water or tween 80 and misoprostol Reference Group. Three parameters were evaluated considering: Total Area of Lesion (TAL), Relative Area of Lesion (RAL) and Rate of Ulcerative Lesion (RUL). And for evaluation of subcronic gastric lesion by acetic acid 30%, the Treated Group received LBEL or LBES, Control Group water and cimetidine Reference Group. The ulcerative lesions were evaluated only in 2 parameters: RAL and RUL. An antioxidant activity \"in vitro\" was measured through inibition of antioxidation of homogenate of rat brain (Stocks et aI., 1974). The extracts were solubilized in ethanol 70% and dilutions (0.05-0.003mg/mL) were performed in ethanol 35%. The ethanol 35% was utilized like control. And for evaluation of healing activity, the animals (rats) suffered na incision in the dorsal region with a punch aid. The Treated Groups received daily 1mL of LBEL or LBES, solubilized by 15% in water, and Control Group distilled in the same proportion during a 14 day period. In phytochemical were detected for both extacts, flavonoids, tannins., beyond antradderivate and coumarins in leaves. The percentages of tannins found were 7.13% in DL, 23.95% in LBEL, 2.26% in OS and 11.77% in LBES. The quantification of flavonoids was 0.0095% in DL, 0.026% in LBEL, 0.00014% in DS and 0.0017% in LBES. During the acute toxicity test, it was observed a behaviour alteration among animais that received LBEL up tp the first time of observation and death pof 3 males and 2 females. The DL50 found to this vegetable extract was 5471.64 mg/Kg for the females and 3112.94 mg/Kg for the males. In subronic toxicity, only the females receiving LBES (800mg/Kg) presented a significant difference, according to the Control Group, as much as the weight of a kidney. However, no histologic alteration in this organ was found. LBEL and LBES presented antiulcerogenic significant activity in acute gstric lesions, based on the parameters evaluated. The LBES was reduced to 37% in RAL. The LBEL was so active as the misoprostol, being reducid to 95%,81% and 63% TAL, RAL and the RUL, respectively against 92%, 70% and 59% of pharmaco of reference. Nevertheless, nor the fractions nor the flavonoids enriched extracts obtained from both leiophyllized brute extracts showed antiulcerogenic activity at the 3 studied parameters. Up to the present time, in model subcronic gastric lesion, none of both vegetable extracts in question has showed active similar to TAL, RAL and RUL in relation to the Control Group. The LBEL and LBES of C. ferrea promoved an antioxidant activity of 93,56% and 84,38%, respectively, in concentration of de 0.8196 µg/mL, and a Q1/2 of 0.2331 (leaf) and 0.5061 (Stem) µg/mL. Conceming the healing activity evaluation of both vegetable extracts, no significant differences between Treats and Control Groups were found. Also in histologic award, no sign of tecidual cicatrization was observed. In spite of the fact that C. ferrea has been utilized by the population as cicatrizant, no clear evidence of its leaves and stems healing activity has been confirmed.

A produção de metais sanitários é um setor em constante fase de crescimento no país. O processo industrial envolve etapas como a evaporação, condensação e oxidação dos metais no ar que levam a formação de fumos metálicos em vários tipos de indústria, inclusive em fundições. A exposição do trabalhador ao ambiente contaminado pode levar ao aparecimento de alterações bioquímicas e, em algumas circunstâncias, de doenças profissionais. No setor de metais sanitários, são utilizadas ligas metálicas de latão, onde predomina o zinco e o cobre, sendo o chumbo, cádmio, manganês e níquel, metais que aparecem sob a forma de impurezas. Desses metais, apenas o chumbo sanguíneo (Pb-S) e o cádmio urinário (Cd-U) são regulamentados no Brasil, de acordo com a NR-7 do Ministério do Trabalho, como indicadores biológicos de exposição. No presente estudo, foram otimizados e validados métodos para a determinação de Pb-S, Cd-U, Mn-U e Ni-U por espectrometria de absorção atômica acoplado a forno de grafite. Posteriormente foram avaliados 273 indivíduos do sexo masculino (178 do grupo exposto e 95 do grupo controle) que trabalhavam em 8 fundições de metais sanitários de Loanda-PR. Os níveis de Pb-S apresentaram-se elevados, considerando o limite internacional. Os metais avaliados na urina Cd-U, Mn-U e Ni-U apresentaram concentrações relativamente baixas, sendo considerado o chumbo como o principal problema, relacionado aos fumos metálicos. Foram propostas medidas corretivas nos ambientes de trabalho e os níveis dos quatro metais em questão foram reavaliados em dois períodos diferentes (antes e após as modificações), apresentando no segundo momento reduções estatisticamente significativas. As médias observadas nos dois períodos foram de 42,74µg/dL e 26,54µg/dL para o Pb-S; 0,269 e 0,015µg/g de creatinina para o Cd-U; 1,94 e 0,39µg/g de creatinina para o Mn-U e 1,82 e 0,68µg/g de creatinina para o Ni-U, com níveis de significância (p) < 0,05, evidenciando assim a importância da adequação do ambiente de trabalho na garantia de exposições seguras para o trabalhador. The sanitary metal production is a sector in constant development in Brazil. This industrial process involves stages such as evaporation, condensation and oxidation of metals, therefore allowing the formation of metallic fumes in some types of industry, and also in foundries. The contaminated environment can induce, in the workers, biochemical alterations and, in some circumstances, occupational diseases. In the sanitary metal sector, alloys are used in which predominate the metals zinc and copper, being lead, cadmium, manganese and nickel, metals that can be found in the form of impurities. According to Brazilian legislation\'s (Ministry of Work) only lead in blood and cadmium in urine are regulated as biological monitoring of exposure. In the present study, methods based on graphite furnace atomic absorption spectrometry and zeeman background correction were validated for quantification of Pb-B, Cd-U, Mn-U and Ni-U, and 273 male individuais (178 exposed group and 95 non exposed - control group), working in 8 sanitary metal foundries, in Loanda, Paraná, a state located in the south of Brazil, were evaluated. The levels of Pb-B were higher than the international permissible limit. Relatively low concentrations were found for the other evaluated metals: Cd-U, Mn-U and Ni-U, thus lead can be considered, in this case, the main problem, associated with metallic fumes. Corrective measures in the work environment were proposed and implemented, thus the four metais were evaluated in two distinct situations (biological determinations were done before and after the modifications). The results of the second evaluation showed reductions those were statistically significant. The means obtained in the two determinations were 42,74µg/dL and 26,54µg/dL for Pb-B; 0,269 and 0,015µg/g creatinine for Cd-U; 1,94 and 0,39µg/g creatinine for Mn-U and 1,82 and 0,68µg/g creatinine for Ni-U, with leveis of significance (p) < 0,05, thus evidencing the importance of the adequacy of the work environment in the guarantee of safe exposures for the workers.

O arsênio está amplamente distribuído no ambiente, sendo encontrado sob formas orgânicas e inorgânicas. É classificado como cancerígeno humano, com base em estudos epidemiológicos. Sua presença na água potável é relacionada com efeitos à saúde como hipertensão, diabetes, câncer de pele e de órgãos internos. Devido aos efeitos adversos observados em populações expostas ao arsênio é interessante dispor de uma revisão atualizada sobre os aspectos toxicológicos deste elemento. Para a revisão foram utilizadas 308 publicações do período 1920 a 2003, considerando quatro temas: presença de arsênio no ambiente, toxicologia do arsênio, efeitos na saúde humana e biomarcadores para arsênio. As informações compiladas mostram que são necessários mais estudos sobre as formas químicas e biodisponibilidade do arsênio, temas identificados como pontos críticos para um melhor entendimento da toxicologia do arsênio. Também é sugerido o desenvolvimento de biomarcadores validados e específicos para sua utilização no processo de avaliação de risco do arsênio para humanos. Arsenic is widely distributed in the environment in the form of organic and inorganic compounds. Based on epidemiological studies, arsenic is classified as a carcinogenic substance. Several disorders (e.g., hypertension, diabetes, skin cancer and internal cancer) have been related to arsenic in drinking water. Thus the adverse effects of arsenic on exposed populations supports the idea of preparing a review on its toxicology and 308 publications from 1920 to 2003 were revised for this purpose. The review is focused on four selected subjects: arsenic in the environment, toxicological aspects, effect on human health and biomarkers for arsenic. From this study, speciation and bioavailability were identified as critical topics requiring further research for improving our understanding on arsenic toxicology. The development of validated and specific biomarkers for using in arsenic risk assessment on humans beings is also an important suggestion.

Os efeitos da exposição pré-natal ao praguicida organoclorado dicofol e ao estresse por contenção, como risco agregado, no desenvolvimento embriofetal e pós-natal da prole de ratas foram verificados no presente estudo. Foram utilizadas ratas Wistar prenhes que receberam as doses de 5, 10 ou 20 mg/kg/dia de dicofol ou óleo de milho (controle), por gavage, submetidas ou não ao estresse de contenção, em diferentes períodos da gestação. Para verificação dos efeitos no desenvolvimento embriofetal, os animais foram tratados e estressados nos dias 5 a 19 de gestação, e ao final do período de gestação os parâmetros maternos e fetais foram avaliados. A interação do dicofol e do estresse não resultou em toxicidade materna bem como não resultou em retardo de desenvolvimento, malformações e/ou variações externas, esqueléticas ou viscerais nos fetos. Para a verificação dos efeitos no desenvolvimento pós-natal, as ratas foram tratadas e estressadas nos dias 14 a 20 de gestação, deixadas parir a termo e a cuidar da sua prole. Não foram observados efeitos tóxicos maternos e reprodutivos, bem como alterações nos parâmetros físicos, reflexológicos e de atividade motora dos filhotes decorrentes da interação do dicofol e do estresse. Podemos concluir pois que, mães expostas a doses não tóxicas do dicofol, mesmo durante períodos sensíveis da gestação não apresentaram incidência maior de alterações em sua prole mesmo quando submetidas a estresse moderado. Effects of prenatal exposure to the organochlorine pesticide dicofol and restraint stress, as an aggregated risk, in the embryofetal and postnatal development of the offspring were verified in this study. Pregnant female Wistar rats, submitted or not to restraint stress, received doses of 5, 10 or 20 mg/kg/dia of dicofol or corn oil (control groups), by gavage, during different periods of gestation. For evaluation of embryofetal development, the animals were treated and stressed from days 5 to 19 of gestation and at the end of gestation period, maternal and fetal parameters were evaluated. Dicofol and stress interaction did not result in maternal toxicity, delayed development and external, skeletal, and soft tissue malformations and/or variations in fetuses. For evaluation of postnatal effects, female rats were treated and stressed from days 14 to 20 of gestation and allowed to litter and rear their pups. Maternal and reproductive toxicity were not observed as well as alterations in the physical and reflexological parameters and motor activity of the pups. We can conclude that maternal exposure of non-toxic doses of dicofol, even during sensitive periods of gestation, did not show increased incidence of alterations in the offspring even when submitted to moderate stress.

As vastatinas são inibidores da enzima HMG-CoA redutase que revolucionaram o tratamento e a prevensão das doenças isquêmicas e coronarianas. A resposta as vastatinas é influenciada por inúmeros fatores, incluindo deterinantes ambientais e genéticos, como proteínas variantes envolvidas no metabolismo lipídico e na biodisponibilidade de fármacos. CYP3A4 é a isoenzima mais abundante do citocromo P450 no fígado de humanos adultos e é de extrema importância no metabolismo de muitos fármacos, incluindo as vastatinas. A grande variabilidade na expressão da CYP3A4 entre os indivíduos pode ter alto impacto na eficácia de tratamentos farmacológicos. Para investigação da importância das variantes da CYP3A4 na resposta a atorvastatina, o gene CYP3A4 foi rastreado para mutações em 63 indivíduos brancos e 25 negros, brasileiros, sem vínculo familiar, com hipercolesterolemia primária, bem como 32 indivíduos brancos com hipercolesterolemia familiar, tratados com atorvastatina (10mg/dia/4sem e 20 mg/dia/4sem). O promotor, 13 éxons e as seqüências flanquedoras dos introns do gene CYP3A4 foram rastreados por PCR-SSCP e por sequenciamento de DNA. Foram detectadas a mutação missense R162Q (alelo CYP3A4*15A) no éxon 6 e uma mutação nova, no intron 7 (15752insG). Encontrou-se também uma mutação silenciosa (c.1134A>G) e cinco mutações missense novas (L373V, E374A, D380A, S3981, A403H) no éxon 11. As frequências das mutações no éxon 6 foram 0,060 e 0,000 em negros e brancos, respectivamente, enquanto as freqüências das mutações do éxon 11 variaram de 0,040 a 0,060 e de 0,008 a 0,016 em negros e brancos, respectivamente. As freqüências do alelo CYP3A4*1B da região promotora e da variante no intron 7 foram de 0,056 e 0,380 em indivíduos brancos e negros, respectivamente. Foi observada associação entre essas duas variantes. Após tratamento com atorvastatina (10mg/dia/4sem), indivíduos portadores dos alelos CYP3A4*1B ou CYP3A4*15 e da mutação no intron 7 tiveram resposta similar aos portadores do alelo comum. Por outro lado, portadores de mutações no éxon 11 tiveram maior redução (53%) nas concentrações de LDL-C do que os sem mutações neste éxon (38%). Esses resultados indicam que as mutações no éxon 11 do gene CYP3A4 podem estar associadas com maior resposta a atorvastatina em indivíduos hipercolesterolêmicos brasileiros. Portanto, a identificação de variantes da CYP3A4 podem contribuir para estabelecer o perfil farmacogenético de pacientes tratados medicamentos hipolipemiantes. Statins are HMG-CoA reductase inhibitors that have revolutionized the treatment and prevention of coronary heart diseases. The response to statins is influenced by a number of factors, including enviroment and genetic determinants, such as variants of proteins involved in lipid metabolism and drug bioavailability. CYP3A4 is the most abundant isoenzyme of cytochrome P450 in adult human liver and plays a pivotal role in the metabolism of many drugs, including some statins. The large variability of CYP3A4 expression among individuals may have a strong impact on the efficacy of drug treatment. In order to investigate the role of CYP3A4 variants in response to atorvastatin, CYP3A4 gene was screened for mutations in 63 white and 25 black unrelated Brazilian individuals with primary hypercholesterolemia and in 32 white familial hypercholesterolemic treated with atorvastatin (10mg/d/4w and 20 mg/d/4w). The promoter, 13 exons and the flanking intron sequences of the CYP3A4 gene were screened by PCR-SSCP analysis and by DNA sequencing. We found one missense mutation (R162Q, CYP3A4*15A allele) in exon 6 and one new intronic mutation in intron 7 (15752insG). We also found one novel silent (c.1134A>G) mutation and five novel missense (L373V, E374A, D380A, S3981, A403H) mutations in exon 11. Frequencies of mutations in exon 6 were 0.060 and 0.000, in black and white individuals, respectively, while frequencies of exon 11 mutations varied from 0.040 to 0.060 and from 0.008 to 0.016 in blacks and whites, respectively. Frequencies of the CYP3A4*1B allele (promoter region) and intron 7 variant were 0.056 and 0.380 in white and black subjects, respectively. An association between both variants was found. After treatment with atorvastatin (10mg/d/4w), individuals carring CYP3A4 *1B or CYP3A4*15 alleles and the novel 7 intronic mutation have similar therapeutic response to those with common allele. On the other hand, carriers of the exon 11 mutations have higher reduction (53%) of LDL-C levels than the non-carriers (38%) indicating that mutations in exon 11 of the CYP3A4 gene maybe associated with higher response to atorvastatin in Brazilian hypercholesterolemic individuals. Therefore, the identification of the CYP3A4 variants may contribute to the pharmacogenetic profile of patients treated with lowering-lipid drugs.

As informações sobre os efeitos adversos dos hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAPs) na saúde humana são de grande importância científica e social. O seu alto potencial carcinógeno, especialmente no que se refere ao câncer de pulmão, e, em alguns casos, câncer de pele e da bexiga, é demonstrado por meio de diversos estudos epidemiológicos. Tais estudos somados ao fato de que os HAPs possam ser encontrados em diversos ambientes de trabalho, afetando diretamente vários trabalhadores expostos, demonstram a relevância deste trabalho. É preciso considerar ainda que a detecção precoce de uma exposição constitui-se, à luz dos atuais conhecimentos, em um importante fator de prevenção de riscos químicos ocupacionais. Diante disso, propõe-se a realização de um plano de avaliação ambiental por meio do pireno e a avaliação biológica através do 1-hidroxipireno urinário, principal produto de biotransformação do pireno. Essas avaliações oferecem aos médicos, em particular aos médicos do trabalho, e à sociedade científica em geral, uma alternativa de um novo marcador biológico, o 1-hidroxipireno, já preconizado pela ACGIH (2003), o qual poderá ser normatizado pelos órgãos competentes do Governo Federal, abrangendo o Programa de Controle Médico de Saúde Ocupacional (PCMSO) da NR-7, a ser aplicado em diversas indústrias do país. Information about the adverse effects of the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in human health has great importance, both scientifically and socially. Their high carcinogen potential, especially regarding lung cancer, and in some cases, skin and bladder cancer, is shown in several epidemiological surveys. Such surveys, and the fact that the PAHs may be found in several work environment; affecting directly several exposed workers, show the relevance of the current paper. It is still necessary to consider that the early detection of an exposure constitutes, at the light of the current knowledge, an important factor in the prevention of occupational chemical risks. Due to this fact, the conduction of an environmental assessment by means of the pyrene and the biological evaluation by means of the urinary 1-hidroxipyrene, the main product of pyrene biotransformation. Such assessments grant to doctor, specially to Occupational and Industry doctor, and to the scientific community as a whole, an alternative of a new biomarker, the urinary 1 hidroxipyrene, already acclaimed by the ACGIH (2003), that may be regulated by the competent agencies and enclosing the Programa de Controle Médico de Saúde Ocupacional (PCMSO) of the NR-7 to be used in several companies around the country.

Entre as estratégias de fotoproteção encontra-se a inibição da formação e/ou o seqüestro de radicais livres e espécies reativas de oxigênio geradas em conseqüência da exposição à radiação UV, mediante aplicação tópica de antioxidantes. No presente trabalho avaliou-se a permeação cutânea e o efeito da aplicação tópica de um extrato de Pothomorphe umbellata nos efeitos da exposição aguda e crônica à radiação ultravioleta, na pele de camundongos sem pêlo. No estudo de permeação cutânea foram testadas três formulações (gel, gel-creme e creme) contendo o princípio ativo do extrato (4-nerolidilcatecol) isolado. Também foram testadas duas formulações (gel, e gel-creme) contendo o extrato hidroalcoólico liofilizado de Pothomorphe umbellata, quanto à permeação do princípio ativo 4-nerolidilcatecol. A formulação gel tanto para o princípio ativo isolado, quanto para o princípio ativo presente no extrato, apresentou o melhor desempenho, sendo o gel o veículo escolhido para preparação da formulação utilizada nos ensaios de exposição crônica e aguda à radiação ultravioleta. Nos estudos de exposição aguda à radiação UVB não foram observadas alterações significativas nos níveis de ácido ascórbico e na atividade enzimática, mas sim uma redução de 40% (p0,05). No estudo de exposição crônica dos camundongos sem pêlo à radiação ultravioleta, os grupos irradiados que não receberam tratamento com gel de P. umbellata apresentaram a pele fotoenvelhecida. O grupo irradiado e tratado com o gel de Pothomorphe umbellata não apresentou diferença significativa em relação ao grupo controle não irradiado, o que demostra que o extrato de Pothomorphe umbellata pode ser empregado com sucesso como agente foto protetor tópico no fotoenvelhecimento da pele. Topical administration of antioxidants provides an efficient way to enrich the endogenous antioxidant system and thus may be a successful strategy for diminishing ultraviolet radiation-mediated oxidative damage in the skin. The Brazilian Flora is rich in medicinal plants with a high potential to provide these antioxidant substances. Crude dried root ethanolic extracts of Pothomorphe umbellata, from the piperaceae family, demonstrated a significant activity in the prevention of in vitro spontaneous brain lipid peroxidation. This activity was attributed to 4-nerolidylcathecol, a compound isolated from the hexane extracts of roots and leaves of P. umbellata. In this work we evaluated the influence of topical application of P. umbellata root extract gel, containing 0,1% of 4-nerolidylcathecol, on the antioxidant network in ultraviolet-induced oxidative damage in hairless mouse skin. In this study we evaluated the influence of three different formulations (gel, gel-emulsion and emulsion) on the percutaneous absorption of 4-nerolidylcathecol, an antioxidant compound isolated from Pothomorphe umbellata root extracts. Also the absorption of the isolated 4-nerolidylcathecol was compared with its absorption when dried Pothomorphe umbellata root ethanolic extract was incorporated in gel and gel-emulsion formulations. The 4-nerolidylcathecolgel formulation presented the higher rate of penetration, leading to higher dry drug levels in the tissue.4-nerolidylcathecol was also absorbed in biological conditions and was stable when exposed to UV-irradiation. The UV-irradiation had no influence on ascorbic acid levels, or on the antioxidant enzymes activities, but topical P. umbellata treatment protected α-tocopherol from depletion after UV-irradiation. After UV-irradiation α-tocopherol concentration decreased significantly (≈40%, p0.05). We also tested the extract activity on animals chronically exposed to UV-radiation. The extract was able to prevent photoaging of the irradiated animals skin. These data demonstrate that P. umbellata may successfully employed as a topical photoprotective agent.

Campomanesia xanthocarpa Berg, espécie pertencente à família Myrtaceae, é conhecida popularmente como gabiroba. Diversas propriedades terapêuticas são atribuídas às espécies de Campomanesia, tais como, combate à disenteria, febre, cistites e uretrites. O presente trabalho objetiva contribuir para elaboração de monografia da espécie, através do estudo químico e farmacológico do extrato hidroalcoólico liofilizado e da droga vegetal constituída de folhas. Os caracteres farmacobotânicos da droga vegetal são apresentados com o intuito de auxiliar a diagnose. Dentre as principais características macroscópicas das folhas desidratadas podem ser citadas: ondulação nas bordas; pontos translúcidos na lâmina, tipo de venação, forma da lâmina e dos pecíolos, e odor aromático. As características anatômicas que se destacaram são: mesofilo dorsiventral; grandes idioblastos contendo cristal prismático na região paliçádica; predominância de estômatos anomocíticos nas folhas hipoestomáticas; cavidades secretoras globosas, associadas a ambas as superfícies, recobertas por células dispostas aos pares em que a parede comissural mostra-se reta, sinuosa ou de \"zig-zag\"; feixe vascular bicolateral e sistema disposto em arco aberto; cristais prismáticos na região floemática. Fotomicrografias ilustraram o trabalho. A triagem fitoquímica da droga vegetal e do extrato liofilizado (EHA) indicou a presença de flavonóides, taninos, saponinas e óleo essencial. O teor de óleo essencial nas folhas frescas, foi de 0,11 %. Linalol (29%) e globulol (20%) foram identificados como os principais componentes do óleo. O teor de taninos na droga foi de 2,86 % e no extrato EHA, de 8,49 %. O teor de saponinas na droga foi de 6,27 % e no extrato EHA de 16%. O extrato apresentou elevada atividade antioxidante no modelo de medida de produção de malonildialdeído, com Q1/2 =0,2891 µg/mL. No ensaio da inibição da lipoperoxidação, induzida por sulfato de cobre, o extrato EHA reduziu significativamente o tempo de indução (\"Lag-time\") e o tempo de terminação (\"Peak-time\") da oxidabilidade de lipoproteínas de baixa densidade (LDL). O extrato EHA apresentou atividade antiúlcera no modelo de indução aguda por ácido clorídrico em etanol, com percentual de proteção de 62%. O extrato EHA apresentou atividade antimicrobiana com: CMI >1.000 e 100 µg/mL para Salmonella cholerasuis e CMI 500 µg/mL em relação a Candida albicans. O extrato EHA mostrou atividade citotóxica no ensaio da letalidade de artêmias, com DL50 de 0,503 mg/mL. O extrato EHA não apresentou toxicidade no ensaio de toxicidade aguda, na dose de 5g/kg de peso do animal, por via oral. Campomanesia xanthocarpa Berg, a species that belongs to the Myrtaceae family, is popularly known as gabiroba. Several therapeutic properties are attributed to the various Campomanesia species, such as treating diarrhea, fever, cystitis and urethritis. This project aims at contributing through a chemical and pharmacological study of lyophilized hydrated alcohol extract and the vegetable drug made from leaves. The pharmacological and botanical features of the vegetable drug are indicated in order to help with the diagnosis. Main macroscopic features of the dehydrated leaves include: wavy edges, translucent blade spots, venation type, blade and leafstalk forms and scent. The main anatomical features are: dorsiventral mesophyll; large idoblasts containing prismatic crystal in the palisade parenchyma; predominance of anomocytic stomata in the hypostomatic leaves, globose segregating cavity associated to both surfaces, covered by cells organized in pairs where the commissure wall appears straight, sinuous, or in zigzag; bicollateral vascular bundle and system organized in an open arch, prismatic crystals in the phloem region. Photomicographs illustrate the study. The phytochemical screening of the vegetable drug and the lyophilized extract (EHA) indicated the presence of essential oil, flavonoids, tannins and saponins. The essential oil content in the fresh leaves was 0.11 %. Linalol (29%) and globulol (20%) were identified as the main oil components. Tannin content was 2.86% in the drug and 8.49% in the EHA extract. The saponin content was 6.27% in the drug and 16% in the EHA extract. The extract displayed a high antioxidant activity in the model of malonyl dialdehyde production measure with Q1/2 = 0,2891 µg/mL. In the copper sulfate-induced lipoperoxydation inhibition assay the EHA extract significantly reduced Lag-time and Peak-time for low-density lipoprotein (LDL) oxidability. The EHA extract displayed antiulceration activity in the acute induction model by hydrochloric acid in ethanol, with a 62% protection percentage. The EHA extract displayed antibacterial activity with: CMI >1,000 and 100 µg/mL for Salmonella cholerasuis and CMI 500 µg/mL regarding Candida albicans. The EHA extract displayed cytotoxic activity in the artemias lethality trial, with DL50 of 0,503 mg/mL. The EHA extract displayed no toxicity in the acute toxicity trial in the 5g/kilo oral dosage per animal body weight.

Na infecção pelo HIV o equilíbrio entre antioxidantes e pró-oxidantes e a produção de citocinas encontram-se alterados, causando estresse oxidativo crônico. Presume-se que o estresse oxidativo crônico e a ativação do sistema imunológico favorecem a replicação do vírus através da ativação do NF-kB e a apoptose de células mononucleares do sangue periférico. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação, durante 180 dias, com 600mg/dia de N-acetilcisteína (NAC), sobre a carga viral, os níveis de sub-populações de linfócitos, a viabilidade de linfócitos e sobre os níveis séricos de citocinas, proteínas, lipídeos, β2 microglobulina e outros marcadores da ativação do sistema imunológico em pacientes assintomáticos, submetidos ao primeiro tratamento anti-retroviral. Participaram deste estudo, duplo cego controlado por placebo, que teve a duração de 180 dias, 30 indivíduos que iniciaram a terapia anti-retroviral. O grupo estudo foi constituído por 14 indivíduos que além do tratamento anti-retroviral foram suplementados com NAC, enquanto o grupo controle foi constituído por 16 indivíduos que além do tratamento anti-retroviral receberam placebo. Os marcadores avaliados foram determinados no dia anterior ao início do tratamento a que foram submetidos e após 60, 120 e 180 dias. Verificou-se aumento significante dos linfócitos CD4+, da relação CD4/CD8, de linfócitos viáveis, albumina, cisteína e glutationa, bem como diminuição significante dos níveis de TNF-α, IL-8, haptoglobina e α1-glicoproteína ácida, β2-microglobulina, IgA e IgM, nos dois grupos estudados. Os níveis séricos de IL-6, colesterol total, LDL-colesterol, VLDL-colesterol e triglicerídeos não apresentaram alteração significante ao final deste estudo. Concluindo, a suplementação com 600 mg/dia de NAC, em pacientes submetidos ao tratamento anti-retroviral, não proporcionou benefícios adicionais àqueles decorrentes deste tratamento. In HIV infection, the balance between antioxidants and pró-oxidants and the production of citokines are disturbed leading to a chronic state of oxidative stress and immune activation. It is presumed that HIV takes advantage of the proinflammatory and prooxidative environment to replicate through the NF-kB pathway leading to the apoptosis of peripheral blood mononuc1ear cells. The aim of this work was to study the effect of oral administration of N-acetylcysteine (NAC) 600 mg per day during 180 days on viral load, viability of lymphocytes, cytokines, proteins, lipids, β2-microglobulin and other immune activation markers in asymptomatic patients under their first antiretroviral therapy. This was a double-blind, placebo-controlled study with 30 individuals who started antiretroviral therapy and were followed for 180 days. These individual were divided into two subgroups: the study group consisted of 14 participants who received NAC supplementation, whereas the control group had 16 individuals who received placebo. The studied markers were determined on the day before the beginning of treatment and after 60, 120 and 180 days of treatment. A significant increase was seen for CD4+ lymphocytes, the CD4/CD8 ratio, albumin, cysteine and glutathione; also, a significant reduction was found for levels of TNF-α, IL-8, β2 microglobulin, IgA, IgG, IgM, haptoglobin, and acid α1-glycoprotein as a consequence of antiretroviral treatment. After 180 days of treatment, the levels of total protein, globulins and HDL-cholesterol presented significant alteration on1y in the control group, while the serum levels of IL-6, total cholesterol, LDL-cholesterol, VLDL-cholesterol and triglyceride did not show significant alteration at the end of the present study. In conclusion, the supplementation of HIV-positive patients with 600 mg/day of NAC did not bring additional benefits to those resulting from antiretroviral treatment.

O objetivo deste trabalho foi esclarecer qual das frações protéicas da soja é mais alergênica, avaliando-se sua imunogenicidade e alergenicidade por imunoensaios e teste de anafilaxia cutânea passiva. Além desse propósito, este estudo visou a produção de anticorpos monoclonais para utilizá-lo como ferramenta na padronização de um ensaio imunoenzimático com a finalidade de detectar proteínas da soja, em produtos comercializados. A purificação das frações 2S,7S e 11S da soja foi realizada com base em estudos prévios, padronizando-se a metodologia dentro das condições experimentais do laboratório. A constatação da pureza foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida (gel de empilhamento a 5% e de separação em gradiente de 7 a 15%), onde se verificou as bandas protéicas características de cada fração. Evidenciou-se as subunidades α (63,17 KDa) α\' (58,06 KDa) e β (42,09 KDa), correspondentes à fração 7S da soja e as subunidades ácida (38,8 KDa) e básica (21,04 KDa), correspondentes à fração 11S da soja. A fração 2S da soja mostrou uma banda protéica de 20 KDa, nesse ensaio. Os resultados da cinética demonstraram que as frações 7S e 11S da soja são muito imunogênicas, visto que induziram uma grande produção de anticorpos das classes IgM e IgG, em camundongos BALB/c. Por outro lado, a fração 2S da soja induziu uma pequena produção de anticorpos IgG, principalmente no 30º dia após a imunização. No teste de anafilaxia cutânea passiva, quando se avaliou a capacidade das frações protéicas da soja de induzirem a produção de anticorpos IgE, em camundongos BALB/c, verificou-se que a fração 7S da soja é alergênica, nesse modelo experimental. Entretanto, as frações 2S e 11S não estimularam o sistema imunológico desses animais a produzir essa classe de anticorpo. Quando se investigou a presença de anticorpos IgE dirigidos contra as frações protéicas 2S, 7S e 11S da soja, no soro de pacientes alérgicos, obteve-se resultado negativo com todas as três proteínas estudadas. Entretanto, na análise da presença de IgG, tanto o soro dos pacientes alérgicos como o dos controles mostraram-se reativos às frações 2S e 7S da soja, sugerindo a presença do anticorpo IgG4 anafilático no soro teste. Os quatro anticorpos monoclonais reativos às frações 7S e 11S da soja, obtidos neste estudo, mostraram-se reativos até as diluições 1/8000 (2A8 e 1H4) e 1/10000 (1F9) para a fração 7S e 1/12000 (3F2) para a fração 11S da soja. A identificação dos determinantes antigênicos reconhecidos pelos anticorpos monoclonais foi realizado por Imunotransferência. Observou-se que os anticorpos monoclonais anti-fração protéica 7S da soja (1H4, 2A8 e 1F9) reconheceram as subunidades α, α e β (1F9), α\' e β (1H4) e β (2A8), além de outras proteínas. Por outro lado, o anticorpo monoclonal anti-fração protéica 11S da soja (3F2) reagiu apenas com a subunidade básica dessa proteína. A padronização do ensaio imunoenzimático com o objetivo de detectar proteínas de soja, em produtos comercializados, mostrou que os anticorpos monoclonais dirigidos contra as frações protéicas 7S e 11S reconhecem, apenas, as proteínas da soja. Em conclusão, esses resultados sugerem que as frações protéicas 7S e 11S da soja são imunogênicas em camundongos, enquanto que na espécie humana, essa resposta foi observada com as frações 2S e 7S da soja. No teste de anafilaxia cutânea passiva, a fração protéica 7S da soja mostrou a capacidade de induzir anticorpos da classe IgE em camundongos BALB/c, sugerindo que essa fração é alergênica nesse ensaio. Por outro lado, os anticorpos monoclonais reativos às frações 7S e 11S detectaram as proteínas da soja nos produtos comercializados testados. The goal of this study was to elucidate which of the soy protein fractions is more allergenic by using enzyme immunoassays and passive cutaneous anaphylactic activity test. Furthermore, monoclonal antibodies were obtained in order to standardize immunoassays to detect soy protein fractions in commercial soy-derived products. Purification of 2S, 7S and 11S fractions from soy was based on previous studies which were adapted to our experimental conditions. Purity of the isolated fractions was determined by polyacrilamide gel electrophoresis (7-15%). The subunits α (63,17 KDa) α\' (58,06 KDa) and β (42,09 KDa), corresponding to 7S fraction as well as the acid (38,8 KDa) and basic (21,04 Kda) subunits of 11S fraction were visualized. The 2S fraction showed a 20 KDa band only. Data showed that the 7S and 11S soy fractions are immunogenic as they elicited IgM and IgG antibodies in BALB/c mice. In contrast, the 2S fraction was not immunogenic in this specie. The passive cutaneous anaphylactic activity test showed that 7S fraction is allergenic as it elicited IgE production in BALC mice. However, this test was negative for 2S and 7S fractions. No IgE reactive against the 2S, 7S e 11S was found in sera of patients (n=5) presenting previous food allergy symptoms. However, either these patients or controls (n=5) showed IgG reactive against 2S and 7S fractions in their sera. The four monoclonal antibodies obtained in this study were reactive up to 1/8000 (2A8 and 1H4) and 1/10000 (1F9) against 7S fraction, and up to 1/12000 (3F2) for 11S fraction. Immunoblot analysis showed that the monoclonal antibodies anti-7S fraction (1H4, 2A8 e 1F9) recognized the α α\' and β (1F9), α\' and β (1H4) and α (2A8) subunits. The monoclonal antibody anti-11S fraction (3F2) reacted with the basic subunit of this fraction only. By using ELISA and the monoclonal antibodies anti-7S and anti-11S it was possible to detect especifically these soy protein fractions in commercial soy-derived products. In conclusion, data suggest that 7S and 11S soy protein fractions are immunogenic in mice while 2S and 7S fraction are immunogenic in humans. The IgE response to 7S fraction in BALB/c mice showed by the passive cutaneous anaphylactic activity test indicates that this soy protein fraction is allergenic in this experimental model. Finally, the monoclonal antibodies anti-7S and anti-11S obtained in this study did not react with other vegetable or animal proteins being suitable to be used in ELISA for detection of these proteins in commercial soy-derived products.

As isoflavonas da soja, em especial, a genisteína, atuam na sinalização intracelular inibindo as proteína tirosina quinases. Devido a este efeito, as isoflavonas podem modificar diversas vias metabólicas, incluindo a síntese de óxido nítrico C-NO) e das proteínas de choque térmico, fatores importantes no desenvolvimento da aterosclerose. Com o objetivo de verificar a influência das isoflavonas da soja sobre a produção de proteínas de choque térmico (HSP60, HSP70 e HSC70) e de •NO na aterosclerose experimental, alimentou-se um grupo de coelhos machos New Zealand com uma dieta aterogênica contendo 27% de caseína (CAS) e outro grupo com a mesma dieta suplementada com isoflavonas (5,1 mg/Kg/dia) purificadas da soja (ISO). Amostras de sangue foram coletadas mensalmente e, ao final de 6 meses, os animais foram sacrificados e as aortas foram retiradas para análise. O grupo ISO apresentou uma diminuição significativa do LDL-colesterol (36,2%) e do conteúdo de colesterol da aorta (36 %), além de um aumento do HDL-cholesterol (2,1 vezes), em relação ao grupo CAS. A concentração plasmática de nitrato (metabólito do •NO) e os níveis de anticorpos anti-HSP60, HSP70 and HSC70 no soro e na aorta foram significativamente menores no grupo ISO. A detecção de HSP60, HSP70 e HSC70 foi significativamente menor no grupo ISO. A detecção de NOSi (•NO sintase indutível) e nitrotirosina não mostrou diferenças entre os grupos. A suplementação com isoflavonas promoveu uma redução da área (40%) e do volume (35%) das lesões ateroscleróticas presentes na aorta. Portanto, as isoflavonas da soja, reduziram a hipercolesterolemia, a produção de HSPs e autoanticorpos anti-HSPs, além da área e do volume de lesões ateroscleróticas, em coelhos alimentados com uma dieta aterogênica contendo caseína. Soy isoflavones, mainly genistein, may modify cellular signaling and affect several metabolic pathways by inhibiting tyrosine protein kinases. Among these pathways, the synthesis of nitric oxide (•NO) and of heat shock proteins are important for atherosclerosis development. To investigate the influence of soy isoflavones on the production of •NO and heat shock proteins (HSP60, HSP70 and HSC70) in experimental atherosclerosis, one group of white New Zealand rabbits was fed an atherogenic diet containing 27% casein (CAS) and another group was fed the same diet supplemented with soy isoflavones (5,1 mg/Kg/dia) (ISO). Blood samples were obtained montly and after sis months of feeding the rabbits were sacrificed and the aortas were removed. The ISO group showed a significant reduction of cholesterol in LDL (36.2%) and in aorta (36.0%), as well as, an increase of HDL-cholesterol (2,1 times) in relation to the CAS group. The concentration of nitrate (•NO-derived metabolite) in blood plasma and the levels of autoantibodies against HSP-60, HSP-70 and HSC 70 in blood plasma and in aortic tissue were significantly decreased in the ISO group. No differences were found for iNOS (inducible •NO synthase) and nitrotyrosine between the studied groups. The isoflavone supplementations promoted a reduction of the area (40%) and volume (35%) of the aorta atherosclerotic lesions. Thus, soy isoflavones reduced the hypercholesterolemia, the production of HSPs and antibodies anti-HSPs, as well as, the atherosclerotic lesions in rabbits fed a casein-based atherogenic diet.