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Resumen Introducción: En las últimas décadas los estudios relacionados con la búsqueda y caracterización de moléculas bioactivas en organismos marinos han aumentado de una manera exponencial, lo que demuestra la enorme riqueza de metabolitos secundarios de diversa composición estructural que no pueden ser encontrados en organismos presentes en el medio terrestre. Estas nuevas moléculas halladas poseen numerosas actividades biológicas que ayudan a resolver muchos problemas que ha tenido el hombre a lo largo de su existencia, lo que las convierte en productos de gran importancia para la humanidad. Objetivo: El propósito de este estudio es la identificación de los ácidos grasos presentes en el pepino de mar Holothuria princeps recolectado en costas del Caribe colombiano, además del análisis de las actividades antibacterianas y antifúngicas de su extracto metanólico frente a cepas de referencia y aislados clínicos. Métodos: Del material biológico recolectado se realizó una extracción metanólica usando el método de maceración en frío. El extracto obtenido se fraccionó usando cromatografía en columna y se lograron obtener los ácidos grasos, los cuales fueron derivatizados e identificados por medio de cromatografía de gases en acople con espectrometría de masas. La actividad antibacteriana y antifúngica del extracto metanólico de Holothuria princeps se realizó a través del método de microdilución. Resultados: Los resultados arrojaron la identificación de 16 ácidos grasos presentes en Holothuria princeps de acuerdo con el análisis de sus espectros de masas. La actividad antibacteriana mostró que Enterococcus faecalis fue la bacteria más susceptible al efecto del extracto a bajas concentraciones, mientras que a las más altas lo fue Pseudomonas aeruginosa. A nivel general en el tratamiento antifúngico, el hongo que presentó una mayor inhibición fue el aislado clínico de Candida albicans (muestra de sangre). Conclusiones: Teniendo en cuenta estudios previos en organismos del mismo género, se puede considerar en cuanto a los ácidos grasos identificados, que el entorno juega un papel fundamental en la presencia y composición de estos compuestos. La evaluación de la actividad antibacteriana contra cepas de referencia de Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Enterococcus faecalis, demostró la existencia de un efecto considerable en la reducción del crecimiento bacteriano por parte de los extractos utilizados, principalmente a bajas concentraciones (menos de 1 000 ppm). En cuanto a la actividad antifúngica frente a la cepa de referencia de Candida albicans y a los aislados clínicos de Candida albicans (muestra de sangre) y Candida krusei (muestra de catéter), el extracto mostró que los mejores resultados se presentaron concentraciones por encima de 1 500 ppm. Abstract Introduction: In recent decades, studies related to the search and characterization of bioactive molecules in marine organisms have increased exponentially, demonstrating the enormous wealth of secondary metabolites of diverse structural composition that cannot be found in organisms present in the terrestrial environment. A significant number of the new marine natural compounds discovered have contributed to solving some of the problems of humanity, mainly those related to human health. Objective: The purpose of this research is to evaluate the bactericidal and fungicidal activities of the methanolic extract of sea cucumber Holothuria princeps collect from the bay of Cispatá in the Colombian Caribbean, in addition to chemically identifying its fatty acids. Methods: A methanolic extraction was performed from the collected biological material, by the cold maceration method. The extract obtained was fractionated using chromatographic techniques and the fatty acids were obtained, which were derivatized and identified by means of gas chromatography in coupling with mass spectrometry. The antibacterial and antifungal activities of the methanolic extract of Holothuria princeps was performed through the microdilution method against reference strains and clinical isolates. Results: We found 16 fatty acids present in Holothuria princeps according to the analysis of their mass spectra. Antibacterial activity showed that Enterococcus faecalis was the most susceptible to the extract at low concentrations, while Pseudomonas aeruginosa was the highest at the higher concentrations. In antifungal treatment, the fungus with the highest inhibition was the clinical isolate of Candida albicans (blood sample). Conclusions: Taking into account previous studies in the genus Holothuria, it is considered that the environment plays a fundamental role in the presence and diversity of fatty acids. The evaluation of the antibacterial activity against reference strains of Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Enterococcus faecalis demonstrated the existence of a considerable effect in the reduction of bacterial growth by the extracts applied, mainly at low concentrations (less than 1 000 ppm). On the other hand, the antifungal activity against the reference strain of Candida albicans and the clinical isolates of Candida albicans (blood sample) and Candida krusei (catheter sample), the extract showed that the best results were presented at higher concentrations (above 1 500 ppm).

La exposición crónica a grandes cantidades de ácido palmítico (pal) causa daño celular y muerte, un fenómeno que se conoce como lipotoxicidad. La acumulación de pal en el cerebro induce las características distintivas de algunas enfermedades neurodegenerativas (NDs), y causa daño en los diferentes tipos de células cerebrales; particularmente los astrocitos reaccionan volviéndose reactivos e induciendo un bloqueo inicial de la autofagia que, acompañado de otras alteraciones como la inflamación o el estrés de retículo endoplásmico, disminuye la viabilidad de los astrocitos. Al tener diversas funciones en el sistema nervioso como captación de glutamato, soporte metabólico y estructural para el cerebro, liberación de factores neurotróficos y participación en la respuesta inmune en el cerebro, entre otras, es importante la búsqueda de estrategias que permitan proteger a los astrocitos del efecto lipotóxico de pal. Diferentes compuestos esteroidales han sido estudiados como agentes efectivos en el control de enfermedades inflamatorias, sin embargo, su prescripción es limitada debido a efectos adversos como el aumento de la incidencia de cáncer de útero y mama. Algunos esteroides sintetizados en el sistema nervioso llamados “neuroesteroides”, tienen propiedades neuroprotectoras, que son de particular interés en el tratamiento de enfermedades como demencia, isquemia, trauma cráneo encefálico, epilepsia, enfermedad de Alzheimer (EA) y Parkinson (EP). Debido a estos efectos protectores a nivel cerebral, la investigación se ha centrado en fármacos que generen esos efectos protectores de los estrógenos, pero sin aumentar la incidencia de cáncer de útero y mama, entre estos fármacos se han destacado los (SERMs) por su sigla en inglés Selective Estrogen Receptor Modulators y los (STEARs) por su sigla en inglés Specific Tissue Estrogenic Activity Regulators. Entre estos últimos se resalta la tibolona, un fármaco que cuenta con amplios estudios de sus efectos en la salud y siendo promisorio como agente neuroprotector. A pesar de que existen amplias investigaciones en neurodegeneración y al tener en cuenta que son enfermedades que pueden activar diferentes vías de señalización haciendo necesarios estudios menos reduccionistas para entender estas enfermedades. Hasta la fecha no se tienen suficientes aproximaciones que evalúen desde una perspectiva holística los cambios a nivel de productos funcionales de proteoma que tienen lugar durante el daño lipotóxico por pal, que nos permitan identificar biomarcadores y proteínas o rutas metabólicas como posibles blancos de terapias, o que 11 analicen la respuesta a compuestos que potencialmente tienen actividad neuroprotectora con el objetivo de identificar proteínas y sus rutas metabólicas asociadas, relevantes en el proceso de neuroprotección. Asimismo, en la actualidad son escasos los medicamentos o tratamientos efectivos para los procesos neurodegenerativos típicos de estas lesiones, y más allá, es limitado el entendimiento del daño lipotóxico y la respuesta protectora de la tibolona en los diferentes tipos de células del cerebro (neuronas, oligodendrocitos, microglía y astrocitos), haciendo relevante su estudio como posible agente neuroprotector ante un daño lipotóxico inducido por pal. En general, existe la necesidad de mejorar la calidad de vida de dichos pacientes, aliviar los costos asociados tanto a los diferentes proveedores de salud y las familias que asumen gran parte de los cuidados y del soporte económico. Considerando este panorama que impone un claro problema de investigación, en este estudio se realizó un análisis proteómico exhaustivo del daño lipotóxico desencadeno por pal y la evaluación del efecto neuroprotector del esteroide sintético tibolona, en una línea celular de astrocitos humanos. Los resultados indican la expresión diferencial de proteínas no consideradas anteriormente como las principales causas de daño por pal en los astrocitos humanos. También, se identificaron 27 proteínas expresadas diferencialmente con alto grado de conectividad. A partir del desarrollo del presente estudio, se encontró que pal alteró la expresión de proteínas vinculadas a la síntesis y transporte de proteínas, respuesta viral, y la tibolona moduló la expresión de algunas de esas proteínas a niveles similares a los del control, evito disrupciones de la autofagia y redujo la expresión de proteínas vinculadas a señales proapoptóticas, demostrando así que la tibolona podría revertir algunas de las alteraciones a nivel de proteínas generada por pal en los astrocitos humanos. Colciencias Pontificia Universidad Javeriana Chronic exposure to large amounts of palmitic acid (pal) causes cell damage and death, a phenomenon known as lipotoxicity. The accumulation of pal in the brain induces the distinctive characteristics of some neurodegenerative diseases (NDs) and causes damage in the different types of brain cells; particularly astrocytes that become reactive and inducing an initial block of autophagy that, accompanied by other alterations such as inflammation or endoplasmic reticulum stress, decrease the viability of astrocytes. As it has various functions in the nervous system such 12 as glutamate uptake, metabolic and structural support for the brain, the release of neurotrophic factors, and participation in the immune response in the brain, among others, it is important to search for strategies to protect astrocytes of the lipotoxic effect of pal. Different steroidal compounds have been studied as effective agents in the control of inflammatory diseases, however, their prescription is limited due to adverse effects such as the increase in the incidence of uterine and breast cancer. Some steroids synthesized in the nervous system called "neurosteroids" have neuroprotective properties, which are of particular interest in the treatment of diseases such as dementia, ischemia, head trauma, epilepsy, Alzheimer's disease (AD), and Parkinson's disease (PD). Due to these protective effects at the brain level, research has focused on drugs that generate these protective effects of estrogens, but without increasing the incidence of uterine and breast cancer, among these drugs the Selective Estrogen Receptor Modulators (SERMs) and the Specific Tissue Estrogenic Activity Regulators (STEARs) have been highlighted. Among the latter, tibolone stands out, a drug that has extensive studies of its effects on health and is promising as a neuroprotective agent. Even though there is extensive research in neurodegeneration and considering that they are diseases that can activate different signaling pathways, making less reductionist studies necessary to understand these diseases. To date, there are not enough approaches that evaluate from a holistic perspective the changes at the level of functional proteome products that take place during lipotoxic damage by pal, which allow us to identify biomarkers and proteins or metabolic pathways as possible targets for therapies, or that analyze the response to compounds that potentially have a neuroprotective activity to identify proteins and their associated metabolic pathways, relevant in the neuroprotection process. Likewise, effective drugs or treatments for the neurodegenerative processes typical of these lesions are currently scarce, and the understanding of lipotoxic damage and the protective response of tibolone in different types of brain cells (neurons, oligodendrocytes, microglia, and astrocytes), making its study relevant as a possible neuroprotective agent against lipotoxic damage induced by pal. In general, there is a need to improve the quality of life of these patients, alleviate the costs associated with both the different health providers and the families that assume a large part of the 13 care and financial support. Considering this panorama that imposes a clear research problem, in this study an exhaustive proteomic analysis of the lipotoxic damage triggered by pal and the evaluation of the neuroprotective effect of the synthetic steroid tibolone, in a human astrocyte cell line, was carried out. The results indicate the differential expression of proteins not previously considered as the main causes of pal damage in human astrocytes. Also, 27 differentially expressed proteins with a high degree of connectivity were identified. From the development of the present study, it was found that pal altered the expression of proteins linked to protein synthesis and transport, viral response, and tibolone modulated the expression of some of these proteins at levels similar to those of the control, avoiding disruptions of autophagy and reduced the expression of proteins linked to pro-apoptotic signals, thus demonstrating that tibolone could reverse some of the protein-level alterations generated by pal in human astrocytes. Magíster en Ciencias Biológicas Maestría https://orcid.org/0000-0003-1531-3862 https://scholar.google.com/citations?user=cRxUANEAAAAJ&hl=es https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0001656241

[eng] Natural toxins include a multitude of toxic secondary metabolites produced by animals, bacteria, fungi algae, and plants that are generally not intended as environmental contaminants of concern for water quality. However, the presence of anthropogenic waste in the aquatic environment, both with the climate changes and the increase of temperatures, is creating favorable conditions for the development of undesired organisms able to produce natural toxins that sum with other well known anthropogenic pollutants such as pesticides. Among them, natural toxins produced by algae (cyanotoxins), fungi (mycotoxins), and plants (phytotoxins) are the most encountered in surface water environments. Some of them have various toxic effects on the human body. Carcinogenic, dermotoxic, and neurotoxic effects are generally associated with these compounds. Concern about the effects of cyanobacteria on human health has recently grown in many countries. Several human and livestock poisoning events, due to the contamination of water sources (especially lakes) attributed to toxic cyanobacterial bloom, resulted in a dramatic rise of interest in these toxins. Despite that, their presence in surface water was not evenly regulated, and only the highly toxic microcystin-LR was limited at 1 µg/L by the Drinking Water Directive (Consolidated text: Council Directive 98/83/EC of 3 November 1998 on the quality of water intended for human consumption) of the World Health Organization. Additionally, studies on their occurrence, chemical persistence, buoyancy, and the algal blooms onset prediction in the environment are still scarce. The environmental risk assessment is difficult and the degree of toxicity into surface water ecosystems is still poorly studied. Their fate in the environment can be described by distribution coefficients such as the octanol-water partitioning (Kow). Other data able to define other distribution and partition parameters are generally obtained using in-silico prediction tools. The identification and quantification are still difficult due to the availability of certified standards. Moreover, these compounds are found mixed with other groups of chemicals at low concentrations. Most of the published methods for their determination are specifically designed to identify a single compound or a group of toxins with similar characteristics, making stressful and time-consuming the process to identify other known-unknown compounds using non-targeted approaches. Since the dangerousness of natural toxins in surface water was recently reported by different authors, valuable data were produced and published to assess their presence and concentration in surface water environments. Several analytical techniques have been reported for their qualitative and quantitative analysis, among them MALDI- TOF/MS, LC-ESI/HRMS, LC-ESI-QqQ are the most used. However, due to the thousands of compounds and their extreme heterogeneity, suspect screening has taken a central role as screening purposes. Over the years, the suspect screening involved the use of in-silico approaches for the tentative identification of natural toxins, becoming one of the preferred methods for the suspect analysis of known-unknown compounds in surface water. It is of primary importance to develop and optimize new methods able to identify natural toxins in a various range of polarities, ranging from the most hydrophobic to the highest water affine. The screening approaches are generally focused on cyanotoxins with no implementations regarding plant toxins and mycotoxins which are very poorly studied in surface water. In this framework, this thesis has aimed to increase the knowledge about natural toxins in surface water. The first part of the study was focused on the recent advances in the detection of natural toxins retrieving a multitude of analytical approaches for their determination in surface and drinking water. Finally, two suspect screening approaches using suspect and target analysis with data- dependent (DDA) and data-independent acquisition (DIA) methods exploring the performances for the determination of multitargeted compounds have been proposed. The tentative compounds have been firstly filtered using a suspect list of 2784 compounds retrieved by different databases available in the literature. The validated methods were then applied to analyse surface water samples coming from different sites in Europe. The presence of natural toxins produced by both plants, fungi, and cyanobacteria is a reality in different water environments showing their presence at low levels also in unexpected zones with not favorable conditions for their production. Almost 80% of the natural toxins encountered were phytotoxins, while a small number of cyanotoxins and mycotoxins have been tentatively identified. The chemical diversity is generally driven by the botanical diversity and the anthropization of the area. Besides, the seasonality and the precipitations are crucial parameters to understand the presence of phytotoxins respect to the cyanotoxins which have been encountered also in unexpected seasons. However, the quantification was not possible for all natural toxins, since only 32 standards were available in our study. In conclusion, the work presented in this thesis, allowed to fill some of the gaps in the analysis of natural toxins presenting two approaches to increase the knowledge about the identification of natural toxins in surface waters. In the future, should be crucial to update the latest determination approaches with the newest quantification strategies to finally implement the suspect screening approaches and reach both determination and quantification of suspect compounds when standards are not available., [cat] La presència de residus antropogènics al medi aquàtic, tant amb els canvis climàtics com a l’augment de les temperatures, crea condicions favorables per al desenvolupament d’organismes no desitjats capaços de produir toxines naturals que es combinen amb els altres contaminants antropogènics coneguts. Les toxines naturals inclouen multitud de metabòlits secundaris tòxics produïts per animals, bacteris, algues fongs i plantes que no solen estar concebuts com a contaminants ambientals que preocupin la qualitat de l’aigua. Entre elles, les toxines naturals produïdes per algues (cianotoxines), fongs (micotoxines) i plantes (fitotoxines) són les més freqüents en entorns d’aigües superficials. Alguns d’ells expliquen diversos efectes tòxics contra el cos humà. Els efectes cancerígens, dermotòxics i neurotòxics s’associen generalment a aquests compostos. La preocupació pels efectes dels cianobacteris sobre la salut humana ha crescut en molts països en els darrers anys per diversos motius. Aquests inclouen casos d’intoxicacions atribuïdes a cianobacteris tòxics i la consciència de la contaminació de les fonts d’aigua (especialment els llacs) que es tradueix en un augment del creixement de la cianobacteria. Malgrat això, la seva presència a les aigües superficials no estava regulada ni limitada de manera uniforme, i només la microcistina-LR altament tòxica estava limitada a 1 µg / L per la Directiva sobre aigua potable (Text consolidat: Directiva 98/83 / CE del Consell, de 3 de novembre de 1998 sobre la qualitat de l’aigua destinada al consum humà) de l’Organització Mundial de la Salut. A més, els estudis sobre la seva aparició, persistència química, flotabilitat i predicció de l'aparició de les flors d'algues al medi ambient encara són escassos. L'avaluació del risc ambiental és difícil i el grau de toxicitat en els ecosistemes d'aigües superficials encara està poc estudiat. La identificació i quantificació són difícils a causa de la manca d’estàndards certificats disponibles i el seu destí a l’entorn es pot descriure mitjançant coeficients de distribució com el repartiment octanol-aigua (Kow). Altres dades capaces de definir altres paràmetres de distribució i partició s’obtenen generalment mitjançant eines de predicció in silico. A més, aquests compostos es troben barrejats amb altres grups de productes químics a baixes concentracions. La majoria dels mètodes publicats per a la seva determinació estan dissenyats específicament per identificar un sol compost o un grup de toxines amb característiques similars, cosa que fa que el procés d’identificació de diferents compostos sigui estressant i requereixi temps mitjançant enfocaments específics. Atès que s’ha determinat la perillositat de les toxines naturals a l’aigua superficial, es van produir i publicar dades valuoses per avaluar-ne la presència i la concentració. S'han informat de diverses tècniques analítiques per a la seva anàlisi quantitativa, entre les quals s'utilitzen MALDI-TOF/MS, LC-ESI/HRMS, LC-ESI-QqQ. No obstant això, a causa dels milers de compostos i de la seva extrema heterogeneïtat, el “suspect screening” ha tingut un paper central com a propòsit de idenficació de compostos desconeguts. Al llarg dels anys, el "suspect screening” va implicar l’ús de metòdiques “in-silico” per a la identificació provisional de toxines naturals, convertint-se en un dels mètodes preferits per a l’anàlisi sospitós de compostos desconeguts en aigües superficials. És de primera importància desenvolupar i optimitzar nous mètodes capaços d’identificar toxines naturals en diversos rangs de polaritats, des de les més hidròfobes fins a les més afines a l’aigua. Les proves es centren generalment en cianotoxines sense implementacions quant a toxines vegetals i les micotoxines que estan molt poc estudiades en aigües superficials. En aquest marc, aquesta tesi té com a objectiu augmentar el coneixement sobre les toxines naturals de les aigües superficials. La primera part de l’estudi es va centrar en els recents avenços en la detecció de toxines naturals que recuperen multitud d’enfocaments analítics per a la seva determinació en aigua superficial i potable. Finalment, s’han introduït dos enfocaments de detecció de sospitosos que utilitzen anàlisis de sospitosos i objectius amb mètodes d’adquisició dependents de dades (DDA) i d’adquisició independent de dades (DIA) que exploren el rendiment per a la determinació de compostos multidirectius. Els compostos provisionals s'han filtrat en primer lloc mitjançant una llista sospitosa de 2784 compostos recuperats per diferents bases de dades disponibles a la literatura. A continuació, es van aplicar els mètodes validats per analitzar mostres d’aigua superficial procedents de diferents llocs d’Europa. La presència de toxines naturals produïdes per les plantes, els fongs i els cianobacteris és una realitat en diferents ambients aquàtics que mostren la seva presència a nivells baixos també en zones inesperades amb condicions no favorables per a la seva producció. Gairebé el 80% de les toxines naturals trobades eren fitotoxines, mentre que només s’han identificat provisionalment poques cianotoxines i micotoxines. La diversitat química es basa generalment en la diversitat botànica i l'antropització de la zona. A més, l'estacionalitat i les precipitacions són paràmetres crucials per entendre la presència de fitotoxines respecte a les cianotoxines que s'han trobat també en estacions inesperades. No obstant això, la quantificació no va ser possible per a totes les toxines naturals, ja que només hi havia 32 estàndards disponibles al nostre estudi. En conclusió, el treball presentat en aquesta tesi va permetre omplir alguns dels buits de l’anàlisi de toxines naturals presentant dos enfocaments per augmentar el coneixement sobre la identificació de toxines naturals en aigües superficials. En el futur, hauria de ser crucial actualitzar el darrer enfocament de determinació amb mètodes de quantificació més nous implementant les metòdiques analítiques fent possible la caracterització i la quantificació amb el mateix mètode.

Memoria presentada para optar al título de Doctora por la Universidad de Barcelona.-- Tutor académico: Dr. Francisco Javier Santos Vicente., [EN] The assessment of pesticide occurrence in different environmental compartments has become a matter of outstanding importance since its effects on exposed organisms may be considered a warning on the potential risk these substances may pose to human health. In this context, and in the framework of this doctoral thesis, the presence and fate of 52 pesticides and transformation products were evaluated in surface water, groundwater, and sediments from four river basins, and the associated environmental risk was assessed. In addition, the performance of a fungi-based bioremediation technique for the removal of pesticides was evaluated. The methods developed are based on the use of advanced extraction techniques such as on-line solid-phase extraction, pressurized liquid extraction, and QuEChERS extraction, and analyte determination with liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. The use of an isotope-dilution approach ensured the reliability of the results and the satisfactory performance of the methodologies in terms of accuracy, precision, linearity, sensitivity and matrix effect. The most relevant pesticides detected in agricultural areas (Ebro River Delta, Ter River) were the herbicides widely used in rice cultivation bentazone, MCPA and propanil, while in urban and industrial areas like the lower Llobregat River basin, the most relevant pesticides were bromoxynil, diuron, linuron and terbutryn, used for both agricultural and non-agricultural purposes. In the sediments of the Llobregat River and the fish samples collected from the Adige River, most of the pesticides found are currently banned, which suggest their persistence in the environment. The assessment of the environmental risk highlighted the role of pesticides as relevant stressors in the aquatic environment. The degradation of selected pesticides by the fungus T. versicolor point at this organism as an efficient, green and economic alternative for pesticide removal during water treatment. Further pesticide pollution attenuation was attempted by contributing to the design of participatory multi-actor events to increase the awareness of farmers and stakeholders on the issue of environmental pollution by pesticides, involving them in the decision-making processes for the implementation of mitigation measures and best management practices aimed at reducing pesticide release into the environment., [ES] La evaluación de la presencia de plaguicidas en los diferentes compartimentos ambientales es de gran importancia ya que sus efectos en los organismos expuestos pueden considerarse una advertencia del riesgo potencial que estas sustancias pueden suponer para la salud humana. En este contexto, en el marco de esta tesis doctoral se ha estudiado la presencia y destino de 52 pesticidas y productos de transformación en aguas superficiales, subterráneas, sedimentos y biota de cuatro cuencas hidrográficas, y se ha evaluado el riesgo ambiental asociado. Además, se ha valorado la eficacia de una técnica de biorremediación basada en hongos para eliminar plaguicidas seleccionados. Los métodos desarrollados se basan en el uso de técnicas avanzadas de extracción como son la extracción en fase sólida (SPE) on line automatizada, la extracción mediante líquidos presurizados (PLE) seguida de purificación del extracto mediante SPE, y la extracción con QuEChERS para la preconcentración de los plaguicidas en agua, sedimento, y biota, respectivamente, y la determinación de los compuestos mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas en tándem. El uso de dilución isotópica para la cuantificación garantiza la fiabilidad de los resultados y el rendimiento satisfactorio de los métodos desarrollados en términos de exactitud, precisión, linealidad y efecto de la matriz. La sensibilidad de los métodos desarrollados posibilita la evaluación de los plaguicidas seleccionados a los niveles de los estándares de calidad ambiental marcados por la Comisión Europea en el ámbito de la política de aguas. Los plaguicidas más relevantes detectados en las áreas agrícolas investigadas fueron los herbicidas bentazona, MCPA y propanil, ampliamente utilizados en el cultivo del arroz en el delta del río Ebro. El río Ter, también afectado por actividades agrícolas intensivas, resultó contaminado en menor medida por bentazona y MCPA. En áreas urbanas e industriales como la cuenca baja del río Llobregat, los compuestos más ubicuos y abundantes fueron bromoxinilo, diurón, linurón y terbutrina, utilizados tanto con fines agrícolas como no agrícolas. En esta zona, muchos de los plaguicidas encontrados superaban el límite de 100 ng/L establecido por la Unión Europea para plaguicidas individuales en aguas destinadas al consumo humano. En los sedimentos del río Llobregat y las muestras de peces recogidas en el río Adige, los plaguicidas presentan propiedades físico-químicas que los hacen más propensos a acumularse en sedimentos o bioacumularse en la biota. La mayoría de los pesticidas detectados en estas matrices están actualmente prohibidos, lo cual sugiere su persistencia en el medio ambiente. Diclorvos e irgarol superaron las concentraciones máximas admisibles establecidas por la Comunidad Europea como normas de calidad ambiental para compuestos prioritarios en aguas superficiales, mientras que los límites máximos aceptables de detección (LODs) establecidos en la Lista de Observación europea fueron superados por acetamiprid, imidacloprid, tiacloprid y metiocarb. La evaluación del riesgo ambiental ha destacado el papel de los plaguicidas como estresores relevantes en el medio acuático. Además, la co-ocurrencia de plaguicidas resulta en un aumento del riesgo en los diversos compartimentos ambientales estudiados, lo que hace necesaria la adopción de medidas para atenuar la contaminación ambiental por plaguicidas. Con este propósito, se exploró la capacidad del hongo T. versicolor para degradar malatión, acetamiprid e imidacloprid. Los resultados apuntan a este organismo como una alternativa eficaz, ecológica y económica para la eliminación de pesticidas del agua. Por otro lado, se diseñaron eventos participativos con el fin de aumentar la conciencia de los agricultores y otras partes interesadas sobre el problema de la contaminación ambiental por plaguicidas, involucrándolos en los procesos de toma de decisiones para motivar la implementación de medidas de mitigación destinadas a reducir la liberación de plaguicidas al medio ambiente., This PhD thesis has been financially supported by the European Union through the research projects WaterProtect (Horizon 2020 - Research and Innovation Framework Programme, No. 727450), GLOBAQUA (Seventh Framework Programme (FP7), No. 265264), and SOLUTIONS (FP7, No. 603437), and by the Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO) through the BECAS project (Spanish State Research Agency and European Regional Development Fund (ERDF), CTM2016-75587-C2-2-R). The work conducted within this thesis has been also partially funded by the Government of Catalonia (2017 SGR 01404 and SGR 00014) and the Spanish Ministry of Science and Innovation (Project CEX2018-000794).

[spa] La industria vitivinícola genera una gran cantidad de subproductos. Entre ellos el subproducto más abundante son los sarmientos de vid originados durante la temporada de poda. Los sarmientos de vid poseen una mezcla compleja de compuestos fenólicos los que incluyen ácidos fenólicos, flavonoides, y estilbenos, que a su vez están asociados con una amplia gama de beneficios para la salud. El perfil fenólico de los sarmientos es altamente dependiente del tipo de cultivar, la zona geográfica de cultivo, y de las condiciones de almacenamiento posteriores a la poda. Los procesos y sistemas de extracción también influyen fuertemente en el perfil de los compuestos fenólicos. Aunque existen numerosos estudios de recuperación e identificación de compuestos fenólicos obtenidos desde sarmientos de vid, muy pocos de ellos se han centrado en el estudio del escalamiento de los procesos de extracción y en el efecto sobre el perfil fenólico. Por otro lado, los compuestos fenólicos son reconocidos por ser inestables y sensibles a altas temperaturas, la luz, el pH y las enzimas oxidativas y degradantes. Estas variables afectan al perfil fenólico tanto en los procesos de producción como en la estabilidad de los productos finales. Una opción viable a escala industrial que permite solucionar estos problemas es la encapsulación de estos compuestos en ciclodextrinas, que les proporcionan una matriz protectora y les ayuda a preservar sus actividades biológicas. Por todas estas razones, esta tesis tiene por objetivo estudiar los cambios en el perfil fenólico de un extracto de sarmientos durante su producción y encapsulación, mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas de alta resolución. La espectrometría de masas de alta resolución basada en LC-ESI-LTQ-Orbitrap-MS ha demostrado ser una poderosa herramienta de identificación y caracterización de compuestos fenólicos. El uso de este equipo nos permitió identificar nuevos compuestos en los extractos de sarmientos de vid producidos a escala de laboratorio. También fue útil para estudiar los cambios en el perfil fenólico durante la extracción a escala piloto y posterior encapsulación de estos compuestos en ciclodextrinas. Los resultados de esta tesis doctoral permitieron ampliar el conocimiento del perfil fenólico de los extractos de sarmientos de vid, analizar las diferencias de los extractos desde la extracción de laboratorio, a la extracción piloto hasta su posterior encapsulación en ciclodextrinas, permitiendo el desarrollo de un producto de alto valor agregado y con futuras aplicaciones en las industrias alimentaria y farmacéutica. [eng] The wine industry produces many by-products. The most common by-product is the grape canes (or vine shoots) that are produced during the pruning season. Grape canes contain a complex mixture of phenolic compounds, including phenolic acids, flavonoids, and stilbenes, which in turn have been linked to several health benefits. The phenolic profile of grape canes is highly dependent on the variety, the geographical area of cultivation, and the storage conditions after pruning. Extraction methods and systems also strongly influence the profile of phenolic compounds. Although there are numerous studies on the extraction and identification of phenolic compounds from grape canes, very few of them have focused on the study of the scaling-up of the extraction process and the effects on the phenolic profile. On the other hand, phenolic compounds are known to be unstable and sensitive to high temperature, light, pH, and oxidative and degradative enzymes. These variables affect the phenolic profile both in the production processes and in the stability of the final products. A viable way to address these issues on an industrial scale is to encapsulate these compounds in cyclodextrins, which allows them to obtain a protective matrix and retain their biological activities. For all these reasons, this PhD aims to study the changes in the phenolic profile of a grape cane extract during its production and encapsulation using liquid chromatography coupled with high-resolution mass spectrometry. High-resolution mass spectrometry-based on LC-ESI-LTQ-Orbitrap-MS has proven to be a powerful tool for the identification and characterization of phenolic compounds. The use of this equipment allowed us to identify new compounds in extracts of grape canes. It was also useful to study the changes in phenolic profile during pilot-scale extraction and subsequent encapsulation of these compounds in cyclodextrins. The results of this PhD allowed to increase the knowledge of the phenolic profile of extracts from grape canes, to analyze the differences of the extracts from laboratory extraction to pilot extraction and their encapsulation in cyclodextrins, leading to the development of a product with high added value and with future applications in the food and pharmaceutical industries.

[ES] La gran mayoría de cítricos comerciales conocidos se originaron a partir de cuatro especies ancestrales: el Pummelo (Citrus maxima Merr.), el mandarino (C. reticulata Blanco), la papeda denominada C. micrantha ‘‘Wester’’ y el Cidro (C. medica L.). El Cidro es el progenitor de los limones y las limas. Tiene una gran tradición en la medicina y la cocina China, donde es conocido y empleado desde hace miles de años, siendo el primer cítrico que llegó a Europa en el siglo IV a.C. Además de su valor estético (ya fue muy apreciado en los jardines florentinos de los Medici en el siglo XV) sus aceites esenciales son de elevada calidad sensorial, lo que les confiere amplias y crecientes posibilidades en sectores productivos relacionados con la cosmética y la gastronomía. Estos están constituidos por la fracción volátil y semivolátil de los productos del metabolismo secundario y se hallan en distintos órganos de la planta, particularmente en las glándulas de la superficie del epicarpio de los frutos. Pese a no ser un híbrido y haberse mantenido como especie pura, las distintas variedades de Cidro presentan fenotipos muy diferentes, que se reflejan especialmente en la morfología de los frutos. Esta variabilidad, asociada a factores genéticos, implica a su vez cambios en el metabolismo secundario, que dan lugar a una amplia quimiodiversidad. En este sentido, cabe destacar la presencia de monoterpenos oxigenados que, aun presentándose como compuestos minoritarios, proporcionan a los aceites esenciales las notas específicas de sus aromas. Dado el elevado interés práctico de dichos aceites en perfumería, gastronomía y como posible alternativa natural a ciertos aditivos alimentarios, es de notable interés el análisis de la composición del aceite esencial de distintas variedades de Cidro, algunas aún poco conocidas y estudiadas. Por otra parte, un factor potencial de variabilidad en dicha composición es el grado de maduración del fruto. Conocer su influencia puede contribuir a lograr una composición óptima desde el punto de vista sensorial. Este trabajo tiene como objetivo el estudio de la variabilidad química de los aceites esenciales de distintos cultivares de Cidro, considerando el grado de maduración del fruto. Para ello se ha desarrollado un proceso de extracción a escala de laboratorio que permita reproducir con la máxima fidelidad posible la composición de los aceites esenciales obtenidos industrialmente. Desde el punto de vista cualitativo, la identificación se llevó a cabo por cromatografía de gases y detección por espectroscopía de masas, mientras que para el análisis cuantitativo se utilizó un equipo similar de cromatografía de gases, con el mismo tipo de columna y parámetros de funcionamiento, con detección de ionización de llama. La cuantificación se realizó de modo riguroso, mediante calibración con estándar interno y cálculo de los factores de respuesta para cada uno de los componentes de los aceites esenciales., [EN] The vast majority of known commercial citrus fruits originated from four ancestral species: the Pummelo (Citrus maxima Merr.), the mandarin (C. reticulata Blanco), the papeda called C. micrantha ‘‘Wester’’ and the Citron (C. medica L.). The Citron is the ancestor of lemons and limes. It has a great tradition in Chinese medicine and cuisine, where it has been known and used for thousands of years, being the first citrus that arrived into Europe in the 4th century BC. In addition to its aesthetic value (already highly appreciated in the Florentine gardens of the Medici in the 15th century), its essential oils are of high sensory quality, which confers them wide and growing possibilities in productive sectors related to cosmetics and gastronomy. These are constituted by the volatile and semi-volatile fractions of the products in the secondary metabolism and are found in different organs of the plant, particularly in the glands located on the surface of the epicarp of the fruits. Despite not being a hybrid and having remained as a pure species, the different varieties of Citron show very different phenotypes, which are especially reflected in the morphology of the fruits. This variability, associated with genetic factors, implies at the same time changes in the secondary metabolism, which lead to a wide rise in chemo diversity. Accordingly, it is worth noting that the presence of oxygenated monoterpenes, even appearing themselves as minority compounds, provide the essential oils with specific notes of their aromas. Regarding the high practical interest of these oils in perfumery, gastronomy and as a possible natural alternative to certain food additives, it is of remarkable interest the analysis of the composition of the essential oil in different Citron varieties, some still little known and studied. Otherwise, a potential factor of variability in such composition is the ripeness degree of the fruit. Knowing its influence can contribute to achieve an optimal composition from the sensory point of view. This work aims to study the chemical variability of essential oils in different cultivars of Citron, taking in consideration the ripeness degree of the fruit. For this, it is intended to develop an extraction process on a laboratory scale that allows to reproduce the composition of industrially obtained essential oils as accurately as possible. From a qualitative point of view, the identification was carried out by gas chromatography and detection by mass spectroscopy, while for the quantitative analysis a similar gas chromatography equipment was used, with the same type of column and operating parameters, but with flame ionization detection. Quantification was rigorous, by internal standard calibration and calculation of the response factors for each of the essential oil components.

Tesis-CEINDO, Universidad San Pablo CEU, Programa en Ciencia y Tecnología de la Salud, leida el 6 de septiembre de 2021 La obesidad es la principal causa de la resistencia a la insulina y una de las principales amenazas para la salud mundial. En el hígado, la obesidad se manifiesta con el trastorno clínico de la Esteatohepatitis no alcohólica (EHNA).El propósito global de esta tesis es estudiar a través de la metabolómica una aproximación integral las alteraciones metabólicas asociadas a la obesidad inducida por la dieta en diferentes órganos de forma simultánea, a la que hemos denominado “Compartimentómica”; y estudiar la EHNA y su posible tratamiento. En esta tesis se han empleado una dieta alta en grasas (HFD) (para inducir la obesidad) y la dieta con déficit de metionina y colina (MCD) (para inducir la EHNA). En estudio 1 se exponen los resultados obtenidos en 8 tejidos diferentes en condiciones de obesidad. La verdadera novedad es la metodología empleada que nos permitió comprender mejor el impacto metabólico de la obesidad en un organismo. Dentro de este estudio, se utilizó el tejido adiposo blanco epididimal para estudiar y optimizar una metodología de extracción de Triglicéridos y oxilipinas. En el estudio 2 se estudia una de las principales complicaciones relacionadas con la obesidad (EHNA) y la progresión del hígado después de una Hepatectomía Parcial. Los resultados muestran el gran impacto metabólico de ambos, más notable por la Hepatectomía Parcial. The global purpose of this project is to study perform a comprehensive metabolomics approach to evaluating as much as possible the metabolic alterations associated with diet-induced obesity in different organs simultaneously. Also, to study one of the main complications of obesity: non-alcoholic steatohepatitis (NASH) and possible treatment. All the data obtained in the studies of this thesis, after exhaustive work, allowed us to increase the information of the metabolic impact of obesity and its complications and obtain the widest metabolite coverage being able to compare results between samples as well as between treatments. English

En las últimas décadas, la Química Analítica ha estudiado en profundidad el desarrollo de metodologías capaces de proporcionar resultados fiables de manera rápida para así responder a la creciente demanda informativa de la sociedad actual. En este contexto, la etapa de tratamiento de muestra se ha visto directamente afectada debido al tiempo que requiere y, además, por ser la principal fuente de error como consecuencia del alto grado de participación humana. La simplificación, miniaturización y automatización han sido las principales fuerzas impulsoras de la evolución del tratamiento de muestra en estos años. La aplicación de estas tres tendencias ha dado lugar a la aparición de las técnicas de microextracción. La reducción del consumo de reactivos, disolventes y energía, así como de los residuos generados, responden al compromiso social y medioambiental de la Química Verde y, al mismo tiempo, contribuyen al desarrollo de metodologías simples capaces de proporcionar resultados de calidad en un tiempo reducido. Esta simplificación engloba, asimismo, a los materiales sorbentes empleados en las técnicas de microextracción. En esta línea, los dispositivos analíticos basados en papel han despertado un gran interés debido a las múltiples ventajas de este material como fase sorbente, entre las que destacan su flexibilidad, porosidad y bajo coste. Asimismo, en los últimos años, la modificación del papel con distintos materiales ha sido una tendencia estable que ha derivado en la mejora de la versatilidad de este soporte. La modificación del papel con polímeros o nanomateriales ha hecho posible el desarrollo de soportes planos con una elevada área superficial capaces de interaccionar con una gran variedad de analitos. No obstante, los procedimientos llevados a cabo para la modificación del papel a menudo son complicados y requieren un control muy estricto de las condiciones experimentales. Por este motivo, es necesario buscar alternativas capaces de solventar estas dificultades. La simplificación de la etapa de tratamiento de muestra no supondría un gran avance si las técnicas instrumentales empleadas para la determinación de los analitos no estuviesen igualmente influenciadas por esta tendencia. En este sentido, los soportes basados en papel han sido también muy útiles debido a su fácil manipulación y acoplamiento con técnicas instrumentales, como las técnicas espectroscópicas (fluorimetría, Raman, etc.) o la espectrometría de masas en la modalidad de paper-spray. Teniendo en cuenta lo anteriormente expuesto, el objetivo principal de la Tesis Doctoral presentada en esta Memoria es el desarrollo de sistemas analíticos de respuesta rápida basados en el acoplamiento directo de soportes planos basados en papel con técnicas instrumentales, tales como la fluorimetría, la espectroscopia Raman y/o la espectrometría de masas. De este objetivo principal, surgen los siguientes objetivos específicos: • Síntesis de soportes planos basados en papel compatibles con espectrometría de masas en la modalidad de infusión directa. Este objetivo se afronta en los Bloques II y III con el desarrollo de dos soportes planos basados en papel. En primer lugar, se ha explotado la capacidad sorbente intrínseca del papel (Capítulo 2). En el segundo caso, se ha modificado papel de filtro con un polímero de impresión molecular para mejorar la selectividad en el aislamiento de los analitos (Capítulo 5). • Síntesis de soportes planos basados en papel compatibles con técnicas espectroscópicas. En el Capítulo 3 de la Memoria se describe el empleo de sorbentes con una alta selectividad en diversas técnicas instrumentales. Por otro lado, se ha desarrollado un sustrato basado en papel modificado con un polímero de impresión molecular y se ha propuesto su acoplamiento con fluorimetría (Capítulo 4). • Síntesis de soportes planos basados en papel duales compatibles tanto con técnicas espectroscópicas como con espectrometría de masas. Esta investigación se desarrolla en el Bloque IV de la Memoria, donde se describen las tendencias sobre las membranas modificadas con nanomateriales (Capítulo 6). Además, se llevó a cabo la modificación de un sustrato basado en papel con nanoflores de plata para la determinación de ketoprofeno en muestra de saliva mediante espectroscopia Raman amplificada en superficie y espectrometría de masas ambiental en la modalidad de paper-spray (Capítulo 7). Por otro lado, también se han desarrollado los siguientes objetivos transversales durante el transcurso de la Tesis Doctoral: • Caracterización de los soportes sintetizados mediante diversas técnicas instrumentales. • Aplicación de los procedimientos desarrollados en el análisis de alimentos y muestras biológicas. In the last decades, the development of methodologies able to provide rapid and reliable results has been deeply investigated in order to address the growing information demand of modern society. In this context, the sample preparation field is greatly concerning, since it is one of the most time-consuming steps and the main source of errors in the analytical procedure, due to the high level of human intervention. Simplification, automation and miniaturization have been the three main tendencies followed in the sample preparation field in the past years, leading to the rise of the microextraction techniques. Furthermore, the decrease of reagents, solvents and energy consumption agrees with the Green Chemistry principles and at the same time contributes to the development of methodologies capable of providing high-quality results in a shorter time. The simplification also involves the materials used in the microextraction techniques. Paper-based analytical devices have emerged as a very promising material due to the advantages of paper as a sorbent, e.g., flexibility, porosity or costeffectiveness. Likewise, the chemical modification of paper with different materials is a steady trend that has led to the increase of the versatility of this support. The modification of paper with polymers or nanomaterials has enabled the synthesis of flat supports with a high surface area able to interact with a wide variety of analytes. However, the procedures employed to carry out these modifications are usually tedious, and a strict control of the experimental conditions is mandatory. For this reason, it is of high importance searching for alternative methods that can overcome this drawback. The simplification of the sample preparation step must consider not only the materials used, but also the instrumental techniques employed for the determination of the analytes. In this sense, paper-based analytical devices have been really useful due to their easy handling and coupling to instrumental techniques, such as spectroscopic techniques or paper-spray mass spectrometry. Based on the foregoing, the foremost aim of this Doctoral Thesis is the development of rapid response analytical systems based on the coupling of paper-based flat supports and instrumental techniques, such as fluorimetry, Raman spectroscopy or mass spectrometry, together with substrates that can be simultaneously employed in different techniques. The specific objectives derived from this general objective are as follows: • Synthesis of paper-based flat supports compatible with direct infusion mass spectrometry. This research is detailed in Blocks II and III, where two paperbased flat supports are developed. On the one hand, the intrinsic sorbent capacity of non-modified cellulose was exploited in Chapter 2. On the other hand, the obtention of a molecularly imprinted paper is explained in Chapter 5 of this Doctoral Thesis. • Synthesis of paper-based flat supports compatible with spectroscopic techniques. The employment of selectivity enhanced sorbents with different instrumental techniques is described in Chapter 3 of this Doctoral Thesis. Furthermore, a molecularly imprinted paper-based analytical device was developed and combined with fluorimetry (Chapter 4). • Synthesis of dual paper-based flat supports compatible with both spectroscopic techniques and mass spectrometry. The results of this study are shown in Block IV, where the current trends about particle loaded membranes are firstly described (Chapter 6). On the other hand, the development of a silver nanoflower-coated paper for the determination of ketoprofen in saliva samples via Surface-enhanced Raman spectroscopy and ambient pressure mass spectrometry was carried out (Chapter 7). Additionally, the following specific objectives have been treated transversally throughout the entire Doctoral Thesis: • Characterization of the supports obtained employing various instrumental techniques. • Application of the developed procedures in the analysis of food products and biological samples.

Durante toda la historia de la humanidad, el dopaje ha formado parte de nuestra cultura. Antiguamente se utilizaba como un método de supervivencia, sin conocer los fundamentos científicos en que se basaba. En la actualidad se muestra como una herramienta que usan los deportistas frecuentemente para obtener beneficios en el rendimiento físico y, así, conseguir ganar. Ante la ascendente aparición de escándalos referentes a la práctica de dopaje (varios con desenlace fatal) a mediados del siglo XX, se comienza a realizar controles a los deportistas para evitar el consumo de sustancias potencialmente perjudiciales para la salud que hacen la competición injusta. Entre los primeros métodos de control utilizados surge la espectrometría de masas, una técnica analítica con la que se obtiene información acerca de la estructura de las moléculas, así como su masa molecular. Esta técnica, basada en la formación de iones, permite analizar muestras humanas e identificar compuestos xenobióticos prohibidos en el deporte. Su desarrollo y acoplamiento a técnicas de separación la hacen ideal para la identificación y/o determinación estructural de gran cantidad de moléculas en matrices complejas. Gracias a la espectrometría de masas y su poder de detección se consiguió desvelar gran cantidad de casos de fraude en el deporte, como el de Ben Johnson, a quien le fue retirada una medalla de oro olímpica cuando se detectó un esteroide sintético en su orina. Parecida fue la historia de Marion Jones, que se dopaba con un compuesto similar hasta entonces desconocido. Otros deportistas, mundialmente reconocidos, como el ciclista Alberto Contador y la tenista Maria Sharapova también dieron positivo en controles antidopaje realizados con esta técnica y fueron retirados de la competición durante un tiempo. Universidad de Sevilla. Grado en Farmacia

The low efficiency of wastewater treatment plants to achieve the complete removal of micropollutants, including pharmaceuticals, has motivated the development of alternative water technologies to improve their efficiency, sustainability, and operational costs. However, even when the complete elimination of these contaminants is attained, they can be transformed into new and unknown intermediates which might be even more persistent and toxic than their parent compounds. In this doctoral thesis, the development of advanced suspect screening methodologies has been applied for the identification of the transformation products generated along biological and physical and/or chemical treatments. Additionally, their potential environmental effects were evaluated using in silico methods and in vitro bioassays in treated effluents. Finally, their removal efficiency was investigated in combined water treatment technologies. This doctoral thesis demonstrates that multidisciplinary research is needed to properly evaluate the best water treatment technology to use La baja eficiencia de las plantas de tratamiento de aguas residuales para lograr la completa eliminación de microcontaminantes, incluidos los fármacos, ha motivado el desarrollo de tecnologías alternativas para mejorar su eficiencia, sostenibilidad y costos operativos. Sin embargo, incluso cuando la eliminación completa de estos contaminantes es alcanzada, éstos pueden transformarse en intermedios nuevos y desconocidos que podrían ser más persistentes y tóxicos que sus compuestos originales. En esta tesis doctoral, se han desarrollado metodologías analíticas avanzadas para la identificación de los productos de transformación generados a lo largo de tratamientos biológicos y físicos y/o químicos. Además, se han evaluado sus posibles efectos ambientales mediante métodos in silico y bioensayos in vitro en efluentes tratados. Por último, se ha investigado su eficiencia de eliminación en tecnologías de agua combinadas. Esta tesis doctoral demuestra que la investigación multidisciplinaria es necesaria para evaluar la mejor tecnología de tratamiento de agua a utilizar Programa de Doctorat en Ciència i Tecnologia de l'Aigua

La contaminación del agua plantea un problema importante, pero se dispone de información limitada sobre los efectos conjuntos de xenobióticos de diferentes grupos químicos para evaluar la respuesta biológica real. Procambarus clarkii (P. clarkii) ha demostrado ser un buen bioindicador para evaluar la calidad de los ecosistemas acuáticos. En este trabajo, se ha estudiado la bioacumulación de cadmio (Cd), arsénico (As) y diclofenaco (DCF) en diferentes tejidos durante 21 días después de la exposición a un “cóctel químico” de As, Cd y DCF, y hasta 28 días considerando un período de purificación. Además, se llevó a cabo un análisis metabolómico dirigido y no dirigido para profundizar en las alteraciones metabólicas provocadas así como en la metabolización del DCF., Water pollution poses an important problem, but limited information is available about the joined effects of xenobiotics of different chemical groups to evaluate the real biological response. Procambarus clarkii (P. clarkii) has been demonstrated to be a good bioindicator for assessing the quality of aquatic ecosystems. In this work, we studied the bioaccumulation of cadmium (Cd), arsenic (As) and diclofenac (DCF) in different tissues of P. clarkii during 21 days after the exposure to a “chemical cocktail” of As, Cd and DCF, and until 28 days considering a depuration period. In addition, a combined untargeted and targeted metabolomic analysis was carried out to delve the metabolic impairments caused as well as the metabolization of DCF. Our results indicate that As and Cd were mainly accumulated in the hepatopancreas followed by gills and finally abdominal muscle. As and Cd show a general trend to increase the concentration throughout the exposure experience, while a decrease in the concentration of these elements is observed after 7 days of the depuration process. This is also the case in the abdominal muscle for Cd, but not for As and DCF, which increased the concentration in this tissue in the depuration phase. The hepatopancreas showed the greatest number of metabolic pathways affected. Thus, we observed a crucial bioaccumulation of xenobiotics and impairments of metabolites in different tissues. This is the first study combining the exposure to metals and pharmaceutically active compounds in P. clarkii by untargeted metabolomics including the biotransformation of DCF., This work was supported by the coordinated projects PGC 2018- 096608-B-C21 and PGC 2018-096608-B-C22 from the Spanish Ministry of Science and innovation (MCIN). (Generacion ´ del Conocimiento. MCIN/AEI/10.13039/501100011033/FEDER “Una manera de hacer Europa”). Authors are grateful to FEDER (European Community) for financial support, Grant UNHU13-1E-1611. Rodríguez-Moro, G. thanks to Plan Andaluz de Investigacion, ´ Desarrollo e Innovacion ´ (PAIDI 2020) and Fondo Social Europeo for a postdoctoral grant (DOC_01115). Au thors are grateful to Servicio General de Investigacion ´ de Microanalisis, ´ CENTRO DE INVESTIGACION ´ TECNOLOG´IA E INNOVACION ´ (CITIUS). Universidad de Sevilla, for the use of some of the chromatographic equipment. Funding for open access charge: Universidad de Huelva / CBUA.

Los miembros del género Sarcocystis (Apicomplexa: Sarcocystidae) son parásitos protozoarios intracelulares que infectan una amplia gama de animales domésticos y salvajes, lo que resulta en pérdidas económicas en animales de producción en todo el mundo. Sarcocystis spp tiene ciclos de vida indirectos donde los caninos y felinos sirven como los principales hospedadores definitivos, mientras que una variedad de animales domésticos y salvajes sirven como huéspedes intermedios, incluidos los camélidos sudamericanos como las alpacas, las llamas y los guanacos. Debido a su fibra y carne de alta calidad, la cría de alpacas se está volviendo popular en muchas partes del mundo debido a su menor contenido de colesterol comparando con otras carnes rojas, por lo que tiene el potencial de ser un producto valioso para los mercados local e internacional, sin embargo, la carne de camélidos sudamericanos puede degradarse y /o incluso discriminarse debido a la presencia de sarcoquistes macroscópicos en los músculos esqueléticos, lo que genera importantes pérdidas económicas para los criadores. En esta investigación llevamos a cabo un análisis en profundidad sobre la expresión global de proteínas por electroforesis y espectrometría de masas; a través de un enfoque proteómico de Sarcocystis aucheniae en la sangre de Vicugna pacos (alpaca). Las proteínas provenientes del plasma sanguíneo procedente de alpacas , fueron purificadas en columnas del sistema HITrap (H&C USA.) El sistema cromatográfico usado es el de cromatografía convencional. Fueron colectadas fracciones de 1 mm por tubo, posteriormente se hizo una electroforesis en gel de poliacrilamida de doble dimensión, se analizaron los geles de electroforesis bidimensionales y se determinó la presencia de cinco spots de proteínas presentes en la alpaca enferma que no estaban en la que estaba aparentemente sana, se hizo la determinación de la masa total y el estudio de homología secuencial de los diferentes péptidos obtenidos por clivajes enzimáticos los que fueron analizados por espectrómetros acoplados a sistemas de cromatografía de alto desempeño y utilizados con fuentes de ionización tipo Maldi (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization) y nanoelectrospray (ESI). Posteriormente se hizo el estudio del alineamiento de los fragmentos peptídicos utilizando bancos de datos el NCBI-BLAST. Las secuencias obtenidas fueron denominadas como A 201, A 202, A 203, A 204 y A 205. A 201 se alineó con antígenos del micronema L2 cuyo nombre es Lectina SML2, acceso p81860 de 138 aminoácidos perteneciente al Sarcocystis muris. A 202, A 203, A 204 y A 205 se alinearon con una proteína correspondiente a un antígeno mayor del micronema, cuyo nombre es Lectina SML1, acceso Q08668 de 241 aminoácidos de S. muris. Además, los cinco fragmentos obtenidos se alinearon con otro antígeno del micronema Lectina SML3 acceso Q26539 de 241 aminoácidos y correspondiente a S. muris. En cuanto a las secuencias A 202, A 203, A 204 y A 205 corresponden a la proteína mayor del micronema cuyo acceso es AAB42049 de 164 aminoácidos perteneciente también a S. muris.

Trabajo de fin de Grado. Grado en Estadística. Curso académico 2020-2021., [ES]La proteómica es el estudio de los proteomas, donde se separan, identifican y caracterizan proteínas a gran escala. Se utilizaron técnicas de espectrometría de masas para obtener cuantificación de proteínas y max-quant para obtener sus intensidades en muestras de los estadios del linfocito b y de leucemia linfocítica crónica. A través de técnicas estadísticas, se pueden encontrar relaciones entre todos los tipos celulares y, a través de técnicas bioinformáticas, se pueden encontrar rutas de señalización de proteínas involucradas y su ubicación celular., [EN]Proteomics is the study of proteomes, where they separate, identify and characterize proteins on a large scale. Mass spectrum-metrics techniques were used to obtain protein and max-quant quantification to obtain their intensities in samples from the stages of lymphocyte b and chronic lymphocytic leukemia. Through statistical techniques, relations between all cell types can be contracted and, through bioinformatic techniques, pathways of protein signaling involved and their cell location can be found

[Resumen]: El alga parda Sargassum muticum es una especie invasora que puebla gran parte de las costas europeas. Esto la convierte en un problema medioambiental difícil de solucionar, sin embargo, su análisis bioquímico podría descubrirnos metabolitos secundarios comercializables que la convertirían en una fuente de ingresos y que ayudarían a su control en las costas en las que se la considera una especie invasora. En este trabajo, se ha recolectado el alga que fue extraída con un disolvente orgánico para dar un extracto. El fraccionamiento de dicho extracto permitió detectar la presencia de un meroditerpeno cuya estructura química se conoce parcialmente y que se ha estudiado previamente presentando propiedades fotoprotectoras. Se realizaron intentos de aislamiento con el fin de estudiar su estructura mediante técnicas de RMN. [Resumo]: O alga parda Sargassum muticum é unha especie invasora que poboa gran parte das costas europeas. Isto convértea nun problema ambiental difícil de solucionar, con todo, a súa análise bioquímico podería descubrirnos metabolitos secundarios comercializables que a converterían nunha fonte de ingresos e que axudarían ao seu control nas costas nas que lla considera unha especie invasora. Neste traballo, colleitouse o alga que foi extraída cun disolvente orgánico para dar un extracto. O fraccionamento do devandito extracto permitiu detectar a presenza dun meroditerpeno cuxa estrutura química coñécese parcialmente e que se estudou previamente presentando propiedades fotoprotectoras. Realizáronse intentos de illamento co fin de estudar a súa estrutura mediante técnicas de RMN. [Abstract]: The brown seaweed Sargassum muticum is an invasive species that inhabits a large part of the European coasts. This makes it a difficult environmental problem to solve, however, its biochemical analysis could reveal valuable secondary metabolites that would make it a source of income, and that would help to control its growth on the coasts where it is considered an invasive species. In this study, the collected alga was extracted with an organic solvent, and further fractionation and chromatographic purification made possible the detection of a meroditerpene whose chemical structure is partially known, and that has been previously studied showing photoprotective properties. Isolation attempts were made in order to study its structure by NMR techniques. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2020/2021

[eng] Table olives are an important source of phenolic compounds, whose beneficial health effects have been widely demonstrated. Therefore, the present thesis aims to assess the different phenolic compounds in Arbequina table olives and their determination in plasma of rats and healthy human volunteers after the consumption of this food. Firstly, the composition of Arbequina table olives was analysed by LC-ESI-MS/MS. In total, 16 phenolic compounds were determined (1.0 g/kg), being hydroxytyrosol, luteolin and verbascoside the most abundant ones (∼90%). Subsequently, a new method based on liquid-liquid extraction followed by LC-ESI-MS/MS analysis was developed. Since the validation gave suitable results for linearity, sensibility, accuracy, precision and recoveries, the method could be applied for pre-clinical studies. Hence, Sprague-Dawley rats were orally administered with table olives at 3.85 and 7.70 g/kg. Out of 16 polyphenols found in table olives, only 7 compounds were determined in rat plasma (p-coumaric acid, hydroxytyrosol, luteolin, luteolin-7-O-glucoside, salidroside, tyrosol, and verbascoside) from whose concentrations pharmacokinetic parameters were evaluated. Results indicated relatively fast absorption from 30 min up to 1 h for all the compounds. At both doses the highest AUC was achieved by p- coumaric acid, followed by hydroxytyrosol, and salidroside. Hydroxytyrosol underwent extensive metabolism, being two sulfates the most abundant (∼86%), followed by hydroxytyrosol (∼10%) and two glucuronides (∼4%). Half-life was ranging from 1 h for salidroside up to 5 hours for tyrosol. Then, the first part of clinical trial was performed with human volunteers that received 60 and 120 olives. The method validated in human plasma with satisfactory results allowed the determination of 6 compounds (vanillic acid, hydroxytyrosol, salidroside, luteolin, verbascoside, and hydroxytyrosol acetate) and subsequently the pharmacokinetics was evaluated. Tmax was ranging from 30 min up to 90 min. The highest AUC was reached by vanillic acid, followed by hydroxytyrosol acetate, and hydroxytyrosol. Hydroxytyrosol had similar extensive metabolism as in rats, when two sulfates were the most abundant (∼85%), followed by hydroxytyrosol (∼10%) and two glucuronides (∼5%). Half-life was ranging from 4 h for luteolin, salidroside and hydroxytyrosol acetate up to 7 hours for hydroxytyrosol and verbascoside. Finally, the second part of clinical trial when human volunteers daily ingested 60 olives for 30 days was performed. In total, 9 phenolic compounds were determined. No significant differences were observed within the plasmatic concentrations of vanillic acid, catechol, quercetin, salidroside, apigenin, whereas the plasmatic concentrations of p-coumaric acid, hydroxytyrosol (together with two sulfates), luteolin, and hydroxytyrosol acetate increased over time with repeated intake of Arbequina table olives. In conclusion, the present thesis expanded the knowledge about the pharmacokinetics of phenolic compounds contained in Arbequina table olives in rats and humans after their oral administration that might provide a basis for the future use of table olives as a functional food., [spa] Las aceitunas de mesa constituyen una fuente importante de compuestos fenólicos, cuyos efectos beneficiosos para la salud han sido ampliamente demostrados. Por tanto, la presente tesis tiene como objetivo evaluar los diferentes compuestos fenólicos presentes en la aceituna de mesa de la variedad Arbequina, así como su determinación en plasma de rata y de voluntarios humanos sanos tras el consumo de este alimento. En primer lugar, se analizó la composición de la aceituna de mesa Arbequina mediante LC-ESI-MS/MS. En total se determinaron 16 compuestos fenólicos (1,0 g/kg), siendo hidroxitirosol, luteolina y verbascósido los más abundantes (∼90%). A continuación, se desarrolló un nuevo método basado en extracción líquida y posterior análisis mediante LC-ESI-MS/MS. Dado que la validación arrojó resultados adecuados en cuanto a linealidad, sensibilidad, exactitud, precisión y recuperaciones, el método podría aplicarse a estudios preclínicos. Por consiguiente, se administró por vía oral aceitunas de mesa a razón de 3,85 y 7,70 g/kg a ratas Sprague-Dawley. De los 16 polifenoles hallados en las aceitunas de mesa, solo se determinaron 7 de ellos en plasma de rata (ácido p-cumárico, hidroxitirosol, luteolina, luteolina-7-O-glucósido, salidrosida, tirosol y verbascósido), a partir de cuyas concentraciones se evaluaron los parámetros farmacocinéticos. Los resultados indicaron una absorción relativamente rápida, desde 30 min hasta 1 h, para todos los compuestos. En ambas dosis, el AUC más alto se obtuvo para ácido p-cumárico, seguido de hidroxitirosol y salidrosida. El hidroxitirosol se metabolizó extensivamente, siendo dos sulfatos los más abundantes (∼86%), seguidos de hidroxitirosol (∼10%) y dos glucurónidos (∼4%). La vida media osciló entre 1 h para salidrosida y 5 horas para tirosol. Posteriormente, se realizó la primera parte del ensayo clínico con voluntarios humanos que recibieron 60 y 120 aceitunas. El método, validado en plasma humano con resultados satisfactorios, permitió la determinación de 6 compuestos (ácido vanílico, hidroxitirosol, salidrosida, luteolina, verbascósido y acetato de hidroxitirosol) y seguidamente se procedió a evaluar la farmacocinética. El Tmax osciló entre 30 min y 90 min. El AUC más alto lo alcanzó el ácido vanílico, seguido del acetato de hidroxitirosol y el hidroxitirosol. El hidroxitirosol tuvo un metabolismo extenso similar al de las ratas, donde dos sulfatos fueron los más abundantes (∼85%), seguidos de hidroxitirosol (10%) y dos glucurónidos (∼5%). La vida media fluctuó entre 4 h para luteolina, salidrosida y acetato de hidroxitirosol; hasta 7 horas para hidroxitirosol y verbascósido. Finalmente, se realizó la segunda parte del ensayo clínico donde voluntarios humanos ingirieron diariamente 60 aceitunas durante 30 días. En total, se determinaron 9 compuestos fenólicos. No se observaron diferencias significativas dentro de las concentraciones plasmáticas de ácido vanílico, catecol, quercetina, salidrosida y apigenina; mientras que las concentraciones plasmáticas de ácido p-cumárico, hidroxitirosol (junto con dos sulfatos), luteolina y acetato de hidroxitirosol sí aumentaron con el tiempo con la ingesta repetida de aceitunas de mesa Arbequina. Concluyendo, la presente tesis amplió el conocimiento sobre la farmacocinética de los compuestos fenólicos contenidos en la aceituna de mesa Arbequina en ratas y humanos tras su administración oral, lo que podría sentar las bases para el futuro uso de la aceituna de mesa como alimento funcional.

[ES] Los aceites esenciales constituyen la parte volátil y semi volátil de los productos del metabolismo secundario de muchas especies vegetales, pudiendo ser obtenidos a partir de diferentes órganos de la planta y mediante distintos métodos de extracción, como destilación por arrastre de vapor de agua (hidrodestilación) o mediante procesos mecánicos como la expresión o escarificación, característicos de los aceites obtenidos de las cortezas de cítricos. Su composición química es de gran interés, pues gracias a sus cualidades sensoriales y a su actividad biológica pueden utilizarse en el ámbito alimentario para diversas aplicaciones de gran utilidad, como aditivos conservantes o aromatizantes. La finalidad del trabajo ha sido comparar el rendimiento y el perfil cromatográfico de los aceites obtenidos tanto de las hojas como de la corteza de las diferentes variedades evaluadas, de indudable interés por sus cualidades sensoriales, concretamente: Citrus bergamia Risso and Poit. var. Mellarosa, Citrus macrophylla Wester y Citrus macroptera Montr. Se ha aplicado la técnica de hidrodestilación con equipo Clevenger, realizando el proceso por triplicado y recogiendo el aceite esencial obtenido mediante su extracción con diclorometano. El rendimiento de este proceso se evaluó gravimétricamente, por evaporación del extracto de diclorometano con el rotavapor. Para analizar cualitativamente las dieciocho muestras obtenidas se aplicó la cromatografía de gases mediante el detector de espectroscopía de masas, llevando a cabo la identificación mediante la aplicación del software Turbomass y AMDIS, asociado a la librería NIST 2.0. El análisis cuantitativo se realizó mediante el método de normalización de las áreas de los picos del cromatograma obtenido con el detector de ionización de llama (FID). Los resultados obtenidos muestran diferencias muy notables entre la composición y rendimiento de los aceites esenciales de las tres variedades estudiadas, así como entre el obtenido de la corteza y de las hojas., [EN] Essential oils constitute the volatile and semi-volatile part of the products of the secondary metabolism of many plant species. They can be obtained from different organs of the plant and through different extraction methods, for instance: distillation by water vapour entrainment (hydrodistillation) or distillation by mechanical processes such as expression or scarification, characteristic of oils. Their chemical composition has a great interest thanks to their sensory qualities and their biological activity. For that reason, they can be used in the food field for various very useful applications, such as preservative additives or flavourings. The purpose of this work has been to compare the yield and the chromatographic profile of the oils obtained from both the leaves and the peel of the different varieties evaluated, of undoubted interest due to their sensory qualities, specifically: Citrus bergamia Risso and Poit. var. Mellarosa, Citrus macrophylla Wester and Citrus macroptera Montr. It has been applied the hydrodistillation technique with Clevenger equipment, performing the process in triplicate and collecting the essential oil obtained by extracting it with dichloromethane. The yield of this process was evaluated gravimetrically, by evaporation of dichloromethane extract with rotavapor. To qualitatively analyse the eighteen samples obtained, gas chromatography was applied by means of the mass spectroscopy detector, carrying out the identification by applying the Turbomass and AMDIS software, associated with the NIST 2.0 library. The quantitative analysis was performed using the method of normalization of the peak areas of the chromatogram obtained with the flame ionization detector (FID). The results obtained show very notable differences between the composition and yield of the essential oils of the three varieties studied, as well as between that obtained from the peel and the leaves.

El presente trabajo fue investigar cómo una condición de estrés oxidativo puede afectar la estructura de la Albúmina de Suero Humano (HSA) y la identificación de modificaciones postraduccionales (MPTs) como potencial pronóstico biomarcador en una población de pacientes afectados por enfermedad hepática alcohólica (EHA). La metodología fue adaptada y modificada basándose en la separación mediante cromatografía líquida en fase inversa de albúmina de suero humano (HSA) de otras proteínas plasmáticas, seguida de la detección por espectrometría de masas para la identificación y cuantificación relativa de isoformas de HSA derivadas de varias modificaciones postraduccionales en pacientes sanos y con EHA. La purificación de proteínas fue mediante un enfoque cromatográfico, seguida de digestión tríptica y análisis de NanoHPLC-ESI-MS/MS, mostró que las nuevas MPTs son el producto de una oxidación marcada en residuos de cisteína y/o metionina, así como la glicosilación. La metodología optimizada se aplicó para un cribado preliminar de HSA derivadas del plasma de 10 pacientes alcohólicos con diagnóstico de cirrosis y de 10 voluntarios sanos. A partir de los datos obtenidos, se evidencia de inmediato un cambio drástico en la estructura de la HSA. En primer lugar, el porcentaje relativo de albúmina sérica nativa sin modificar se reduce drásticamente. Este efecto puede atribuirse a las condiciones de estrés oxidativo que conducen tanto a la formación de nuevos puentes disulfuro con residuos de cisteínas libres como a la oxidación de residuos de cisteína y metionina. Esta hipótesis está respaldada por el fuerte aumento de las isoformas cisteiniladas y oxidadas, que puede concluir en un potencial pronostico biomarcador. Italia. Alma Mater Studiorum Università di Bologna

Busca establecer la concentración de arsénico, cadmio, mercurio y plomo en piensos y huevos de codorniz procedentes de diferentes fuentes de producción, comercializados en los diversos mercados de la región Lima y consumidos por personas en edad vulnerable, niños y adultos mayores. Se realizó un muestreo completamente al azar de los piensos y huevos de codorniz comercializados en los diversos mercados, una cocción por tiempo y temperatura adecuados, su mineralización empleando la mezcla ácido clorhídrico: nítrico, HCl: HNO3, ambos concentrados, desmineralizados previamente, la mineralización húmeda a una temperatura inferior a 150°C, posterior dilución y aforo a 250 mL. Se envió la misma solución a dos centros de análisis acreditados como son el Centro de Control Analítico, CCA y Centro de Información, Control Toxicológico y Apoyo a la Gestión, CICOTOX del Centro de Producción Farmacéutica, CENPROFARMA de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, UNMSM y Servicios Analíticos Generales, SAG, empresa particular de servicio en el análisis de minerales. Paralelamente se aprovechó los resultados para verificar el contenido de oligoelementos y otros presentes en los huevos de codorniz. Los resultados mostraron concentraciones de arsénico, cadmio, mercurio y plomo en ppm que superan en la mayoría de casos los límites permitidos para alimentos de alta frecuencia de consumo; asimismo que el alimento balanceado aporta altas concentraciones de estos elementos. El huevo de codorniz aporta una buena cantidad de nutrientes iónicos que nuestro organismo necesita para su normalidad. También se encontró diferencia en los resultados mostrados para una misma muestra entre el análisis por Absorción Atómica, AA e Plasma Acoplado Inductivamente, ICP óptico, ambos resultados superan los límites permitidos según la reglamentación de la Unión Europea, UE. Se concluye que los centros de producción formales expenden huevos de codorniz con una mayor concentración de los metales pesados estudiados que los centros de producción informales; que es mejor consumir la clara o albúmina que las yemas y los piensos producidos por empresas formales presentan mayor concentración de metales pesados, pero que son la fuente de estos metales pesados para la codorniz y por tanto para su producto, el huevo de codorniz.

[eng] In this thesis is presented the development of different analytical methodologies for the analysis of marine biotoxins in seawater. The objectives were the development of the methods and the application to study the biotoxins in marine environments as well as to use it as early warning tools able to detect the presence of the biotoxins at low concentrations previous to an algal bloom development. The analytical development has been carried out evaluating the precision, accuracy, selectivity and sensibility of the methods. Due to the diverse physic-chemical properties between the different groups of toxins, three different methodologies have been created. First step of the methods consisted in a sample pre-treatment to eliminate the possible interferences in the sample that could difficult the instrumental analysis. For this reason, the biotoxins were extracted from seawater and concentrated to achieve better sensibility. Then, the seawater was filtered and the particulate and filtrate portions were separated, treated and analysed separately. The extraction of the biotoxins form the particulate was carried out with methanol and assisted with ultrasounds. For the filtrate portion solid phase extraction was employed at different conditions conditioned by the different groups of biotoxins. The analysis of the extracts was performed by high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometry through the ionization by electrospray. The chromatographic separation was carried out by hydrophilic interaction and reversed phase modes. The acquisition mode for the mass spectrometry was the combination of full scan at high resolution with tandem mass. After being validated, the three methodologies were applied to study the occurrence of the different biotoxins in the Mediterranean Sea. In the Catalan’s littoral, okadaic acid was found in concentrations ranging from 2 ng/L to 9.5 µg/L. Domoic acid was also present in the study of Ebro delta, reaching the highest concentration of 69.5 ng/L during summer. Also, the most hydrophilic marine toxins were studied in Mar Menor, Murcia, but any of the toxins was detected. Finally, one of the methods was used to validate an immunoassay capable to detect and quantify five pollutants in seawater, being one of them domoic acid., `spa] La tesis doctoral presenta el desarrollo de diversas metodologías analíticas para el análisis de biotoxinas marinas en agua de mar. Las técnicas utilizadas son la cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a la espectrometría de masas de alta resolución. El objetivo de estos métodos de análisis es su utilización en el estudio de las biotoxinas marinas en el medio marino, así como su aplicación para la temprana detección de estos compuestos cuando están a bajas concentraciones, con el fin de anticiparse a la posible formación de eventos de floraciones algares nocivas donde la concentración de las biotoxinas podría ser muy elevada y provocar impactos negativos en el ecosistema y en las actividades de maricultura. El desarrollo analítico se ha realizado evaluando la precisión, exactitud, selectividad y sensibilidad de los métodos. Dado que las propiedades físico-químicas de los diferentes grupos de biotoxinas son muy diversas, se han tenido de desarrollar tres metodologías diferentes. La primera etapa para todas consiste en un tratamiento de muestra ya que es esencial eliminar posibles interferencias en la muestra para su posterior análisis mediante las dichas técnicas instrumentales, por lo que las biotoxinas fueron extraídas del agua de mar y concentradas. Primeramente, se filtra el agua de mar y se separa la porción de materia en suspensión y la parte del filtrado para ser tratadas y analizadas por separado. La extracción de las biotoxinas de la porción de materia en suspensión se realiza con metanol y se asiste con ultrasonidos. La fracción del filtrado se somete a una extracción en fase sólida en diferentes condiciones dependiendo del grupo de toxinas. El análisis de los extractos, se realiza mediante cromatografía liquida de alta eficacia acoplada a espectrometría de masas de alta resolución mediante la ionización por electroespray. La separación de los compuestos más polares, se realizó mediante cromatografía líquida de interacción hidrofílica mientras que para los más apolares fue de tipo fase inversa. La adquisición utilizada en la espectrometría de masas fue mediante la combinación de un barrido completo en alta resolución y la fragmentación de los iones precursores, tipo tándem de masas, para cada una de las toxinas a resolución más baja. Una vez validadas, las tres metodologías se emplearon en el estudio de biotoxinas en el mar Mediterráneo, concretamente en el litoral catalán y murciano. Las biotoxinas más apolares se investigaron a lo largo de la costa catalana, mediante muestras recolectadas en playas públicas y puestos deportivos en diferentes localidades. El 88 % de esas muestras había una de las toxinas más frecuentemente hallada en el mar Mediterráneo, el ácido okadaico, el cual estaba en rangos de concentración de entre 2 ng/L y 9,5 µg/L. Por otro lado, el ácido domoico, se estudió en la zona de la desembocadura del rio Ebro, que consta de una zona de humedales y dos bahías donde se llevan a cabo actividades de maricultura. Su presencia destacó en las bahías especialmente en las muestras colectadas en verano, aunque la concentración más alta llegó a los 69,5 ng/L. Finalmente, las biotoxinas más polares se analizaron en aguas de la laguna salada del Mar Menor, en Murcia. Sin embargo, no se detectó la presencia de ninguna. Por otro lado, una de los métodos se utilizó para la validación de un inmunoensayo previamente desarrollado, capaz de detectar y cuantificar cinco grupos de contaminantes en agua de mar, siendo uno de ellos una biotoxina, el ácido domoico. Al immunoensayo se le añadió una etapa de tratamiento de muestra en que se pudieron concentrar los diferentes compuestos y conseguir así una detectabilidad a concentraciones muy bajas, del rango de los ng/L. Para concluir, se podría decir que los métodos desarrollados proporcionan mucha sensibilidad y selectividad en el análisis de biotoxinas marinas en agua de mar y que además, gracias a la alta resolución de las técnicas instrumentales, se podría estudiar la caracterización de compuestos nuevos.

[Resumen] El alga parda Sargassum muticum es una especie invasora que puebla gran parte de las costas europeas. Esto la convierte en un problema medioambiental difícil de solucionar, sin embargo, su análisis bioquímico podría descubrirnos metabolitos secundarios comercializables que la convertirían en una fuente de ingresos y que ayudarían a su control en las costas en las que se la considera una especie invasora. En este trabajo, se ha recolectado el alga que fue extraída con un disolvente orgánico para dar un extracto. El fraccionamiento de dicho extracto permitió detectar la presencia de un meroditerpeno cuya estructura química se conoce parcialmente y que se ha estudiado previamente presentando propiedades fotoprotectoras. Se realizaron intentos de aislamiento con el fin de estudiar su estructura mediante técnicas de RMN. [Resumo] O alga parda Sargassum muticum é unha especie invasora que poboa gran parte das costas europeas. Isto convértea nun problema ambiental difícil de solucionar, con todo, a súa análise bioquímico podería descubrirnos metabolitos secundarios comercializables que a converterían nunha fonte de ingresos e que axudarían ao seu control nas costas nas que lla considera unha especie invasora. Neste traballo, colleitouse o alga que foi extraída cun disolvente orgánico para dar un extracto. O fraccionamento do devandito extracto permitiu detectar a presenza dun meroditerpeno cuxa estrutura química coñécese parcialmente e que se estudou previamente presentando propiedades fotoprotectoras. Realizáronse intentos de illamento co fin de estudar a súa estrutura mediante técnicas de RMN. [Abstract] The brown seaweed Sargassum muticum is an invasive species that inhabits a large part of the European coasts. This makes it a difficult environmental problem to solve, however, its biochemical analysis could reveal valuable secondary metabolites that would make it a source of income, and that would help to control its growth on the coasts where it is considered an invasive species. In this study, the collected alga was extracted with an organic solvent, and further fractionation and chromatographic purification made possible the detection of a meroditerpene whose chemical structure is partially known, and that has been previously studied showing photoprotective properties. Isolation attempts were made in order to study its structure by NMR techniques. Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2020/2021

gráficas, ilustraciones, tablas Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), el cáncer de mama es el tipo de cáncer más incidente entre las mujeres. Para el 2020 se reportaron cerca de 2,3 millones de nuevos casos de cáncer de mama y 685.000 muertes en el mundo fueron causadas por esta enfermedad. En la búsqueda de nuevos agentes terapéuticos, se ha propuesto el uso de péptidos polivalentes derivados de la Lactoferricina Bovina (LfcinB), y se han encontrado tres péptidos con actividad citotóxica frente a líneas celulares derivadas del cáncer de mama: el palíndromo LfcinB (21-25)Pal: RWQWRWQWR; el dímero [26F]-LficnB (20-30): (RRWQWRFKKLG)2K-Ahx y el tetrámero LfcinB (20-25)4: ((RRWQWR)2K-Ahx-C)2. Para desarrollo de un medicamento, una etapa crucial en la fase cero de los estudios preclínicos es la caracterización fisicoquímica de la molécula que presenta actividad promisoria, esta fase involucra la implementación y validación de los métodos que serán utilizados para el análisis de la molécula. Esta investigación fue conducida dentro de este contexto, y se seleccionó el péptido tetramérico LfcinB (20-25)4 como molécula modelo. Específicamente: (i) se sintetizó un lote de 100 mg del péptido LfcinB (20-25)4, (ii) se desarrolló y optimizó un método de análisis de péptidos sintéticos por RP-HPLC, (iii) se caracterizó el péptido LfcinB (20-25)4 mediante RMN (1D-2D) y espectrometría de masas (ESI-Q, ESI-QTOF, MALDI-TOF). Adicionalmente, (iv) se analizó en el lote el contenido de agua por Karl Fischer, el contenido de TFA residual por HPLC-DAD y el contenido del péptido por RP- X HPLC-DAD, estas tres metodologías de cuantificación fueron validadas siguiendo los lineamientos de la USP capítulo . Las metodologías de análisis implementadas, desarrolladas y validadas en esta tesis contribuyen a la caracterización fisicoquímica de péptidos promisorios como agentes terapéuticos. (Texto tomado de la fuente) According to World Health Organization, breast cancer is the most common cancer type among women. In 2020, around 2,3 million of new cases of breast cancer were reported and 685.000 of deaths were caused by this disease. In the search of new therapeutic agents, polyvalent peptides derived from Bovine Lactoferricin (LfcinB) were proposed. Three peptides were found with cytotoxic activity against breast cancer cell lines: palindrome RWQWRWQWR; dimer (RRWQWRFKKLG)2K-Ahx and tetramer LfcinB (20-25)4: ((RRWQWR)2K-Ahx-C)2. One of the crucial steps on the zero-phase of preclinical studies, for development of a new drug, is the physicochemical characterization of the molecule with promissory activity. This phase involves implementation and validation of methods that shall be used for the analysis of the molecule. This research was conducted within this context, and the tetrameric peptide LfcinB (20-25)4 was selected as model molecule. Specifically: (i) a batch of 100 mg of peptide LfcinB (20- 25)4 was synthetized, (ii) a method for the analysis of peptides by RP-HPLC was developed and optimized, (iii) peptide LfcinB (20-25)4 was characterized by NMR (1D-2) and mass spectrometry (ESI-Q, ESI-QTOF, MALDI-TOF). In addition, (iv) water content by Karl Fischer, TFA content by HPLC-DAD and peptide content by RP-HPLC-DAD were analyzed in the batch of peptide; these three quantitation methodologies were validated according to USP guidelines in chapter . The analytical methodologies implemented, developed, and validated on this thesis contribute to physicochemical characterization of promissory peptides as therapeutic agents Maestría Magíster en Ciencias - Química Química Analítica

ilustraciones, fotografías, gráficas, tablas El monóxido de carbono es un gas que causa la muerte de cientos de personas en el mundo cada año. Para el diagnóstico y seguimiento de las intoxicaciones por la exposición a este agente, se usan métodos espectrofotométricos que cuantifican el porcentaje de saturación de carboxihemoglobina, identificándose limitaciones por interferentes tales como coágulos, lípidos y otros derivados de la hemoglobina. Durante los últimos veinte años, se han desarrollado metodologías analíticas cromatográficas para la determinación de la concentración de monóxido de carbono en muestras de sangre de casos forenses, observándose que estos resultados son más exactos y confiables que los obtenidos por la espectrofotometría ultravioleta-visible. Recientemente, se han adelantado investigaciones con el fin de establecer la concentración de monóxido de carbono total en sangre como nuevo biomarcador y con el objeto de contribuir a la comunidad científica en su construcción, se buscó durante el presente estudio, evaluar su relación con el porcentaje de saturación de carboxihemoglobina; para ello y con base en publicaciones, se desarrolló y validó un método cromatográfico, el cual se empleó en el análisis de cincuenta y dos muestras de sangre extraídas a treinta y nueve usuarios de ciclo rutas de Bogotá. A su vez, estás muestras también fueron analizadas por espectrofotometría visible. Los parámetros de desempeño del método para la “Determinación de la concentración de monóxido de carbono total” cumplen con los criterios de aceptación para la validación de metodologías bioanalíticas y al analizar los datos en la población objeto de estudio, no se encontró una relación lineal simple entre el porcentaje de saturación de carboxihemoglobina y la concentración de monóxido total. (Texto tomado de la fuente). Carbon monoxide is a gas that causes the death of hundreds of people in the world every year. For the diagnosis and monitoring of poisonings from exposure to this agent, spectrophotometric methods are used that quantify the percentage of carboxyhemoglobin saturation, identifying limitations by interferents such as clots, lipids and other derivatives of hemoglobin. During the last twenty years, chromatographic analytical methodologies have been developed for the determination of the concentration of carbon monoxide in blood in forensic cases, observing that these results are more accurate and reliable than those obtained by ultraviolet-visible spectrophotometry. Recently, research has been carried out in order to establish the concentration of total carbon monoxide in blood as a new biomarker and in order to contribute to the scientific community in its construction, it was sought during the present study to evaluate its relationship with the percentage of carboxyhemoglobin saturation; For this purpose and based on publications, a chromatographic method was developed and validated, which was used in the analysis of fifty-two blood samples taken from thirty-nine cycle users of Bogotá routes. In turn, these samples were also analyzed by visible spectrophotometry. The performance parameters of the method for the “Determination of the concentration of total carbon monoxide” meet the acceptance criteria for the validation of bioanalytical methodologies and when analyzing the data in the population under study, no simple linear relationship was found between the carboxyhemoglobin saturation percentage and the total monoxide concentration. Incluye anexos Maestría Magíster en Toxicología Toxicología del monóxido de carbono

En este trabajo se propone por primera vez un método electroforético basado en cromatografía capilar electrocinética micelar acoplada con espectrometría de masas en tándem (MEKC-MS/MS) para la determinación simultánea de 9 neonicotinoides (NNI) junto con el pesticida boscalid en muestras de polen y abejas. La separación se llevó a cabo empleando perfluorooctanoato amónico (50 mM, pH 9'0), que sirvió tanto de surfactante volátil como de tampón electroforético compatible con la detección por espectrometría de masas. Se llevó a cabo la preconcentración en línea de los analitos mediante un procedimiento conocido como "barrido" para mejorar la eficacia de la separación y la sensibilidad. Además, se desarrolló un Quechers miniaturizado como tratamiento de muestra. Ello implicó un menor consumo de disolvente orgánico y el empleo de Z-Sep+ como sorbente dispersante en la etapa de limpieza. La detección se realizó con un triple cuadrupolo en electroespray positivo y mediante monitorización de reacción multiple (MRM). Para conseguir una sensibilidad y precisión satisfactorias se optimizaron los principales parámetros que afectan a la detección como la composición del líquido adicional (etanol, agua, ácido fórmico: 50, 49'5, 0'5 v/v/v) y otras variables relacionadas con el electroespray. Se establecieron curvas de calibrado procedimentales en muestras de polen y abejas. Se consiguieron límites de cuantificación por debajo de 11'6 µg/kg y 12'5 µg/kg, respectivamente. La precisión expresada como desviación estándar relativa (RSD) fue inferior al 15'2 % y las recuperaciones fueron mayores al 70 % en ambos tipos de muestras. Se encontraron dos muestras positivas de polen que contenían imidacloprid y tiametoxam. Imidacloprid se encontró también en una muestra de abejas. Los resultados obtenidos resaltan la viabilidad del método propuesto que supone una alternativa útil, sensible, eficiente y respetuosa con el medioambiente para la determinación de NNI y boscalid en muestras de polen y abejas. In this work, it is proposed for the first time an electrophoretic approach based on micellar electrokinetic chromatography coupled with tandem mass spectrometry (MEKC-MS/MS) for the simultaneous determination of nine neonicotinoids (NNIs) together with the fungicide boscalid in pollen and honeybee samples. The separation was performed using ammonium perfluorooctanoate (50 mM, pH 9) as both volatile surfactant and electrophoretic buffer compatible with MS detection. A stacking strategy for accomplishing the on-line pre-concentration of the target compounds, known as sweeping, was carried out in order to improve separation efficiency and sensitivity. Furthermore, a scaled-down QuEChERS was developed as sample treatment, involving a lower organic solvent consumption and using Z-Sep+ as dispersive sorbent in the clean-up step. Regarding the detection mode, a triple quadrupole mass spectrometer was operating in positive ion electrospray mode (ESI+) under multiple reaction monitoring (MRM). The main parameters affecting MS/MS detection as well as the composition of the sheath-liquid (ethanol/ultrapure water/formic acid, 50:49.5:0.5 v/v/v) and other electrospray variables were optimized in order to achieve satisfactory sensitivity and repeatability. Procedural calibration curves were established in pollen and honeybee samples with LOQs below 11.6 µg/kg and 12.5 µg/kg, respectively. Precision, expressed as RSD, lower than 15.2% and recoveries higher than 70% were obtained in both samples. Two positive samples of pollen were found, containing imidacloprid and thiamethoxam. Imidacloprid was also found in a sample of honeybees. The obtained results highlight the applicability of the proposed method, being an environmentally friendly, efficient, sensitive and useful alternative for the determination of NNIs and boscalid in pollen and honeybee samples., Ministerio de Ciencia e Innovación y Agencia Estatal de Investigación (/10.13039/501100011033/ FEDER “Una manera de hacer Europa”): EQC2018-004453-P y RTI2018-097043-B-I00., Junta de Andalucía-Programa Operativo FEDER (B-AGR-202-UGR20), Red española de excelencia en tratamiento de muestra (RED2018-102522-T) financiada por MCIN/AEI /10.13039/501100011033., B.H. agradece el apoyo del proyecto EFSA-CDN (No. CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_019/0000841) confinanciado por ERDF y una ayuda Erasmus+., LCR le da las gracias a Francisco Gerardo C.M y Pasión R.S por su apoyo técnico durante la etapa de muestreo., Financiación para publicación en acceso abierto a cargo de Universidad de Granada/CBUA.

The aim of this study was to analyze the acidity, fatty acid (FA) composition and the triacylglycerol (TAGs) profile of human milk (HM) from three lactation phases (colostrum, transitional and mature) submitted to different treatments (raw milk, pasteurized, pasteurized in conjunction with lyophilization), in order to verify whether these processes applied to the samples can influence the characteristics of the analyzed components. To carry out the analyzes, the project was approved by the ethics committee and the HM was acquired at the Human Milk Bank (HMB) of the University Hospital of Maringá - HUM (Paraná, Brazil). The acidity analysis was performed using the titratable acidity method in Dornic degrees (ºD), the composition in FAs from Gas Chromatography with Flame Ionization Detector (GC-FID), and the TAGs profile by Mass Spectrometry with Electrospray Ionization source (ESI-MS). From the results obtained, it was possible to observe that the Dornic acidity and the composition in AGs did not undergo significant changes by the Tukey test (p

[spa] La presente tesis doctoral se centra en el desarrollo de nuevos métodos de análisis para la identificación y separación de glicopéptidos y glicanos utilizando técnicas microseparativas acopladas a la espectrometría de masas (cromatografía de líquidos capilar y electroforesis capilar, CapLC-MS y CE-MS). Aunque el análisis de los glicopéptidos es una estrategia habitualmente utilizada para la caracterización de productor farmacéuticos, continúa siendo difícil la detección de glicoformas poco abundantes que podrían ser esenciales para diferenciar proteínas endógenas de variantes recombinantes. De este modo, en esta tesis se han desarrollado dos métodos para la purificación selectiva de glicopéptidos, obtenidos de digestos de glicoproteínas, utilizando la eritropoetina humana recombinante (rhEPO) como glicoproteína modelo. Por otro lado, en muchas patologías se han descrito alteraciones en los glicanos de ciertas glicoproteínas en presencia de procesos inflamatorios importantes y muchos tipos de cáncer. Además, dado que ciertas estructuras de glicano así como tipos de enlace han estado relacionados con enfermedades específicas, la caracterización exhaustiva de los tipos de enlace de los isómeros de los glicanos ha suscitado gran interés biomédico en los últimos años. En este sentido, se han establecido en esta tesis doctoral diferentes metodologías para la caracterización de los isómeros de los glicanos de la alfa-1-glicoproteína ácida (hAGP), la cual ha generado interés biomédico dada la alteración de sus glicanos en ciertos procesos inflamatorios y cáncer. Primero, la digestión con diversas exoglicosidasas (sialidasa, fucosidasa y galactosidasa) en combinación con el análisis de los glicanos per cromatografía de líquidos capilar de interacción hidrofílica zwitteriónica acoplada a la espectrometría de masas (CapZIC-HILIC-MS) y la estrategia GRIL utilizando [12C6]/[13C6]- anilina, permitió asignar los enlaces de los ácidos siálicos, así como de las fucosas de los isómeros de los glicanos de la hAGP. Por otro lado, se desarrolló un método para asignar los isómeros de los glicanos per espectrometría de masas en tándem de alta resolución. La posibilidad de separar los isómeros antes de la detección, juntamente con la obtención de la masa exacta de los iones fragmentos, permitió el establecimiento de un método de caracterización de los glicanos fiable por CapZIC-HILIC-MS/MS. Además, la doctoranda realizó una estancia en la Freie Universität Berlin (Berlin, Alemania), bajo la supervisión del Dr. Kevin Pagel, para estudiar la separación de los isómeros de glicanos per espectrometría de movilidad iónica acoplada a la espectrometría de masas (IM-MS). Finalmente, el método por CapZIC-HILIC-MS en combinación con la estrategia GRIL utilizando [12C6]/[13C6]-anilina se aplicó en esta tesis para el análisis de muestras patológicas, con el fin de evaluar posibles alteraciones en los isómeros de los glicanos de dos glicoproteínas de fase aguda, l’hAGP y la transferrina de ratón (mTf), en presencia de ciertos procesos inflamatorios y cáncer. Además, se emplearon herramientas quimiométricas con el objetivo de identificar glicanos como candidatos biomarcadores de estas patologías., [eng] The present thesis is focused on the development of novel analytical methods for the identification and separation of glycopeptides and glycans by microseparative techniques coupled to mass spectrometry. Although the analysis of glycopeptides is a commonly used strategy for glycan characterization of biopharmaceuticals, the detection of low abundant glycopeptides that could be essential to differentiate endogenous and recombinant variants of certain proteins continues to be a challenge. In this thesis, methods to selectively enrich glycopeptides from glycoprotein digests were developed using recombinant human erythropoietin (rhEPO) as model glycoprotein. On the other hand, alterations in glycan structures have been described in presence of important inflammatory processes and many types of cancer. As certain glycan isomers or linkage-types have been related to specific pathologies, the in depth characterization of glycan isomer linkage-types has aroused great interest in last years. In this regard, different methodologies were established in this thesis to characterize human alpha-1-acid glycoprotein (hAGP) glycan isomers, whose glycosylation has been described to be altered in several diseases. Exoglycosidase digestions, tandem mass spectrometry (MS/MS) as well as ion-mobility mass spectrometry (IM-MS) were used with this purpose. Finally, the established method for glycan isomer separation in combination with the GRIL strategy with [12C6]/[13C6]aniline was used in this thesis to evaluate possible glycan isomer modifications in two acute-phase proteins, hAGP and mouse transferrin (mTf), caused by certain inflammatory diseases and cancer. Moreover, multivariate data tools, such as PCA and PLS-DA, were also employed in these studies to identify glycan-based biomarker candidates.

"En este trabajo se presenta un estudio de la teoría linealizada de la gravedad sin masa con n dimensiones extra, en analogía con el procedimiento empleado en el contexto de las teorías de Yang-Mills extradimensionales. Gravedad linealizada tiene parámetros de norma vectoriales, en contraposición con aquellos hallados en YM, los cuales son escalares."

Treball de Fi de Màster Universitari en Tècniques Cromatogràfiques Aplicades (Pla de 2013). Codi: SIY009. Curs 2019/2020 Se conoce como microbiota intestinal (MI) a la población de microorganismos que habitan en los intestinos humanos. Está formada por más de mil especies de bacterias, además de virus y hongos, que llevan a cabo funciones esenciales para el organismo. El desequilibrio en la composición de la MI se define como disbiosis intestinal y está relacionada con un gran número de patologías. Los ácidos orgánicos (AO) en orina pueden reflejar el estado de la MI y ayudar al diagnóstico de disbiosis. En el presente estudio, se proponen dos métodos para la determinación de AO en muestras de orina mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS). Uno de ellos basado en una extracción líquido-líquido de la orina seguido de una trimetilsilil-derivatización, En la otra metodología, la muestra de orina se evapora bajo corriente de gas nitrógeno, y posteriormente el residuo seco se derivatiza de forma análoga al anterior. Se han realizado diferentes pruebas de optimización con 5 compuestos AO seleccionados del perfil de disbiosis que se utilizan en el laboratorio clínico para evaluar cada método propuesto. Los resultados obtenidos hasta el momento no han permitido encontrar la mejor metodología, aunque el método de evaporación presenta la ventaja de ser más práctico para un laboratorio que realice análisis de rutina. La aplicación de la metodología a muestras reales de orina, ha permitido identificar 38 metabolitos de importancia clínica. Alternativamente, también se han realizado experiencias de AO en orina mediante una determinación basada en cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS). Sin embargo, el método no resultó satisfactorio para los 5 analitos seleccionados. El presente trabajo queda abierto, teniendo que realizar mayor número de pruebas para optimizar la metodología propuesta y lograr la determinación conjunta de todos los analitos “target”.

A pathogenic GGGCCC hexanucleotide expansion in the first intron/promoter region of the C9orf72 gene is the most common mutation associated with amyotrophic lateral sclerosis (ALS). The C9orf72 gene product forms a complex with SMCR8 (Smith-Magenis Syndrome Chromosome Region, Candidate 8) and WDR41 (WD Repeat domain 41) proteins. Recent studies have indicated roles for the complex in autophagy regulation, vesicle trafficking, and immune response in transgenic mice, however a direct connection with ALS etiology remains unclear. With the aim of increasing understanding of the multi-functional C9orf72-SMCR8-WDR41 complex, we determined by mass spectrometry analysis the proteins that directly associate with SMCR8. SMCR8 protein binds many components of the ubiquitin-proteasome system, and we demonstrate its poly-ubiquitination without obvious degradation. Evidence is also presented for localization of endogenous SMCR8 protein to cytoplasmic stress granules. However, in several cell lines we failed to reproduce previous observations that C9orf72 protein enters these granules. SMCR8 protein associates with many products of genes associated with various Mendelian neurological disorders in addition to ALS, implicating SMCR8-containing complexes in a range of neuropathologies. We reinforce previous observations that SMCR8 and C9orf72 protein levels are positively linked, and now show in vivo that SMCR8 protein levels are greatly reduced in brain tissues of C9orf72 gene expansion carrier individuals. While further study is required, these data suggest that SMCR8 protein level might prove a useful biomarker for the C9orf72 expansion in ALS., United States Department of Health & Human Services National Institutes of Health (NIH) - USA NIH National Institute of Neurological Disorders & Stroke (NINDS) 1R03NS087290-01, United States Department of Health & Human Services National Institutes of Health (NIH) - USA NIH Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health & Human Development (NICHD) R21HD083915-01A1, ALS Therapy Alliance 2013-F-067, European Research Council (ERC) ERC-STG-2012-309433, MINECO-FEDER SAF2017-89745-R, Wellcome Trust-University of Edinburgh Institutional Strategic Support Fund (ISFF2), United States Department of Health & Human Services National Institutes of Health (NIH) - USA NIH National Center for Advancing Translational Sciences (NCATS) UL1 TR003098

Fundamento y objetivos: el cáncer de pulmón (CP) es el que provoca mayor mortalidad, especialmente por su frecuente diagnóstico tardío, con menos posibilidades de curación. En el inicio del proceso carcinogénico, previo al diagnóstico clínico, los oligoelementos (metales o metaloides), desempeñan un papel importante al activar o inhibir las reacciones enzimáticas y las metaloproteínas. El objetivo de nuestro estudio es analizar la utilidad de diversos metales como biomarcadores (BM) precoces de CP, obtenidos en muestras de suero, orina, y lavado broncoalveolar (LBA) Material y métodos: hemos analizado las concentraciones totales, incluyendo fracciones de alto y bajo peso molecular, de 11 metales en muestras de suero, orina y LBA de pacientes CP, controles sanos (CS) y pacientes con patología respiratoria no cáncer (NCP) empleando una técnica de análisis basada en un plasma de acoplamiento inductivo-espectrometría de masas (ICP-QQQ-MS) Resultados: obtuvimos una clara discriminación entre los grupos en las tres muestras analizadas. Hemos obtenido metales sobreexpresados o reducidos en el CP que podrían utilizarse como BM. La concentración de vanadio (V) y cromo (Cr) en suero es claramente mayor en pacientes con CP. Hemos demostrado que varios metales (V, Cr y cobre), relacionados con procesos metabólicos alterados en CP como estrés oxidativo y homeostasis, y/o sus relaciones podrían ser buenos BM de CP. Conclusiones: diversos metales, y sus relaciones y correlaciones, en la población estudiada diferencian claramente a los pacientes con cáncer de pulmón de los CS y NCP y parecen ser buenos biomarcadores en el diagnóstico precoz del cáncer de pulmón., Background and objectives: Lung cancer (LC) has the highest mortality rate, especially due to its late diagnosis, with a lower chance of recovery. At the start of the carcinogenic process, before a clinical diagnosis, trace elements (metals or metalloids) play an important role by activating or inhibiting enzymatic reactions and metalloproteins. The objective of our study is to analyze the utility of different metals as early biomarkers (BM) for LC which are obtained in serum, urine and bronchoalveolar lavage (BAL) samples. Material and methods: We analyzed the total concentrations, including fractions of high and low molecular weight, of 11 metals in serum, urine and BAL samples from patients with LC, healthy controls (HC) and patients with non-cancerous respiratory pathology (NCP) using an analysis technique based on inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). Results: We obtained a clear discrimination between groups for the three samples analyzed. We obtained overexpressed or reduced metals in LC that could be used as BM. The concentration of vanadium (V) and chromium (Cr) in serum is clearly higher in patients with LC. We have shown that several metals (V, Cr and copper) related to the altered metabolic processes in LC such as oxidative stress and homeostasis and/ or their connections could be good BM for LC. Conclusions: in the population studied, several metals and their connections and correlations were clearly differentiated in the patients with lung cancer compared to the HC and NCP groups and they appear to be good biomarkers for the early diagnosis of lung cancer.

Background Approximately 50% of systemic lupus erythematosus (SLE) patients develop nephritis, which is among the most severe and frequent complications of the disease and a leading cause of morbidity and mortality. Despite intensive research, there are still no reliable lupus nephritis (LN) markers in clinical use that can assess renal damage and activity with a high sensitivity and specificity. To this end, the aim of this study was to identify new clinically relevant tissue-specific protein biomarkers and possible underlying molecular mechanisms associated with renal involvement in SLE, using mass spectrometry (MS)-based proteomics. Methods Kidneys were harvested from female triple congenic B6.NZMsle1/sle2/sle3 lupus mice model, and the respective sex- and age-matched C57BL/6 control mice at 12, 24 and 36 weeks of age, representing pre-symptomatic, established and end-stage LN, respectively. Proteins were extracted from kidneys, purified, reduced, alkylated and digested by trypsin. Purified peptides were separated by liquid chromatography and analysed by high-resolution MS. Data were processed by the Progenesis QIp software, and functional annotation analysis was performed using DAVID bioinformatics resources. Immunofluorescence and multiple reaction monitoring (MRM) MS methods were used to confirm prospective biomarkers in SLE mouse strains as well as human serum samples. Results Proteomic profiling of kidney tissues from SLE and control mice resulted in the identification of more than 3800 unique proteins. Pathway analysis revealed a number of dysregulated molecular pathways that may be mechanistically involved in renal pathology, including phagosome and proximal tubule bicarbonate reclamation pathways. Proteomic analysis supported by human transcriptomic data and pathway analysis revealed Coronin-1A, Ubiquitin-like protein ISG15, and Rho GDP-dissociation inhibitor 2, as potential LN biomarkers. These results were further validated in other SLE mouse strains using MRM-MS. Most importantly, experiments in humans showed that measurement of Coronin-1A in human sera using MRM-MS can segregate LN patients from SLE patients without nephritis with a high sensitivity (100%) and specificity (100%). Conclusions These preliminary findings suggest that serum Coronin-1A may serve as a promising non-invasive biomarker for LN and, upon validation in larger cohorts, may be employed in the future as a screening test for renal disease in SLE patients.

Resumen Introducción: Las enfermedades producidas por micobacterias son de gran importancia clínica y epidemiológica presentando el complejo Mycobacterium tuberculosis (MTBc) una morbi-mortalidad mayor que la producida por micobacterias no tuberculosas (MNTB). La identificación tradicional está basada en sus características fenotípicas mediante procesos laboriosos e incapaces en algunos casos de distinguir entre especies. Actualmente, la mayoría de las técnicas utilizadas se basan en métodos moleculares que tienen alta veracidad, pero son complejas y de alto costo. La espectrometría de masas con desorción/ionización láser asistida por una matriz asociada a tiempo de vuelo (MALDI-TOF MS) se basa en la comparación del espectro proteico producido con respecto al de una base de datos de referencia. Objetivo: Evaluar el rendimiento de MALDI-TOF MS en la identificación de micobacterias comparado con métodos moleculares: Material y Métodos: Se analizaron 28 aislados de nueve especies distintas mediante MALDI-TOF MS. Resultados: Se identificó correctamente 78,5% de las aislados (22/28), concordante en 100% (9/9) de MNTB de crecimiento rápido, 60% (9/15) en las MNTB de crecimiento lento y 100% (4/4) de MTBc. Todas las especies no identificadas (6/6) pertenecen al complejo M. avium/intracellulare. Conclusión: MALDI-TOD MS es una metodología rápida, fácil y de bajo costo, con adecuada veracidad respecto a los métodos moleculares.

[ES] El proyecto se basa en el descubrimiento del mejor método para extraer proteínas de productos cárnicos de origen vegetal y en la comprensión de la composición de estos productos gracias a un análisis proteómico y lipidómico y a la puesta a punto del método de extracción. El análisis de proteómico se realizó con 3 productos diferentes, una hamburguesa de carne de vacuno y dos hamburguesas de base vegetal: Impossible Burger de Impossible Foods y Beyond Burger de Beyond Meat. Cada muestra de las tres analizadas tiene 3 réplicas para tener suficientes datos para el análisis estadístico. El primer paso es poner a punto el método de análisis proteómico de productos cárnicos para hacer más eficiente la extracción de proteínas, se seleccionan 3 métodos diferentes para ser analizados. Los métodos seleccionados son: sonicación con un hervido previo de la muestra, homogeneización y por último homogeneización con mortero mediante la conversión en polvo de la muestra. Las muestras son procesadas siguiendo el protocolo de extracción de proteínas por precipitación de acetona, este protocolo es proporcionado por el laboratorio a partir del trabajo previo en proteómica. Después de la extracción de la proteína, las proteínas son digeridas con tripsina y finalmente las 27 muestras son analizadas por Shotgun proteomics en HPLC-MS, para posteriormente realizar el análisis bioinformático siguiendo los pasos del tutorial de laboratorio, utilizando Trans Proteomic Pipeline (TPP). Los datos finales son filtrados gracias a una escritura Python para analizar sólo las proteínas que se encuentran en la muestra con una presencia significativa. En el análisis lipidómico, primero se desarrolla un método para extraer los lípidos de este producto cárnico de origen vegetal. El cloroformo es el disolvente utilizado para permitir la extracción de lípidos. Los lípidos son esterificados para tener la estructura adecuada para el análisis lipídico en el GC-MS. Los datos finales se analizan con el software Chromeleon 7. 2 de Thermo Scientific. Los resultados muestran que no existe una diferencia significativa entre los 3 métodos analizados y los ingredientes descubiertos son principalmente proteínas de almacenamiento para simular la consistencia de una hamburguesa de carne de vacuno., [EN] The project is based on the discovery of the best method to extract proteins from plant-based meat products and the understanding of these product composition thanks to proteomics and lipidomic analysis and the tune-up of the extraction method. The proteomics analysis was performed with 3 different products, a normal beef burger, and two plant-based burgers: Impossible Burger from Impossible Foods and Beyond Burger from Beyond Meat. Each sample of the three analyzed has 3 replicates to have enough data for the statistical analysis. The first step is to tune-up of the method of proteomic analysis for meat products to do more efficient the protein extraction, 3 different methods are selected to be analyzed. The methods selected are sonication with a previous boiling of the sample, homogenizer and then homogenizer with grinder by previously convert into powder the sample. The samples are processed following the protocol of protein extraction by acetone precipitation, this protocol is provided by the lab from the previous work in proteomics. After the protein extraction, the proteins are digested with trypsin and finally, the 27 samples are analyzed in the HPLC-MS shotgun proteomics and then the bioinformatic analysis is performed following the steps of the lab tutorial, using Trans Proteomic Pipeline (TPP). The final data is filtrated thanks to a Python script to analyze only the proteins that are in the sample with a significant presence. In the lipidomic analysis, first, a method to extract the lipids from this plant-based meat product is developed. The chloroform is the solvent used to allow the lipid extraction. The lipids are esterified to have the proper structure for the lipidomics analysis in the GC-MS. The final data is analyzed with the software Chromeleon 7.2 from Thermo Scientific. The results show that there is no significant difference between the 3 methods analyzed and the ingredients discovered are mainly storage proteins to simulate the consistency of a beef burger.

[ES] Diseño CAD mediante CATIA V5 de la estructura del sensor así como de los distintos componentes seleccionados para el posterior testeo del funcionamiento del sensor. Análisis cuantitativo y cualitativo de los componentes seleccionados teniendo en cuenta diversos factores., [EN] The following Master Thesis is focused on the study and development of a dust sensor and the acomplishment of the different requirements but also regarding the limitations of the FACIS mission. The main limiting factor is the size of the sensor, which should not exceed the space left for its assembly in previous conceptual designs of the satellite. The size of the sensor was thought to be around 10 × 10 × 10cm3 . One of the challenges to face during the development of the sensor will be to find suitable components that can be produced with a good cost to performance ratio. As a second step, the structural design will be focused in a modular laboratory model to have the possibility of testing different components to validate the conceptual design. On the first hand, the study will be focused on the understanding of the operation of a dust sensor, adcquiring knowdlege based on other prototypes, so as to set the starting point of the project. Also it will be important to take into account issues such: the use of different materials, the interaction between them, the small available space inside the satellite... but also bearing in mind further limitations that cannot be forgoten, such as sensitivity, wiring or manufacture possibilities. Besides, the conceptual study developed by Dr. Srama will be taken into account. On the other hand, it is crucial to minimize the costs of the production while comparing different designs and deciding wheter to buy or to manufacture certain components given the quotation of different companies. One of the main goals of this Thesis is to achieve a solution to include all the required components by minimizing costs, but at the same time respecting the limitations. Therefore some studies are made to estimate important parameters such as the field of view of the sensor, the production of some components or the mass resolution optimization. With the combination of the CAD files and all these studies, it will be much easier to compute next design iterations, to do all the experimental analysis. Finally, future lines of investigation will be proposed to assure an accurate final design.

Introduction: Capparis species (Capparaceae), also called caper, grow naturally in various regions of the world. Caper is a plant with medicinal and aromatic properties. Flower buds, root bark, and fruits of the plant areused in folk medicine due to their analgesic, wound healing,cell regeneration, tonic, and diuretic effects. Objective: The aim of this research was to evaluate in vitro (anti-urease, antioxidant, anticholinesterase) and in vivo (anti-inflammatory) biological activities of caper (C. ovatavar.canescens). In addition, we aimed to identify its major phenolic compounds using high performance liquid chromatography with a photodiode array detector (HPLC-DAD) and confirmate them using quadrupole time-of-flight liquid chromatography with tandem mass spectrometry (Q-TOF-LC/MS). Also, we quantified the concentrations of several trace and major elements in plant samples using inductively coupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS). Methods: The antioxidant, anti-urease and anticholinesterase activities of different plant extracts were evaluated using DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indophenol and Ellman tests. The identification of phenolic compounds and trace element contents was performed using HPLC and Q-TOF-LC/MS and ICP-MS. Results: Soxhlet methanol extract exhibited the strongest anti-urease, antioxidant (ABTS/TEAC) and anticholinesterase activity. Soxhlet and maceration methanol extracts demonstrated significant anti-inflammatory effect in the altered edema size after the second hour of carrageenan injection. The active phenolic compounds in Soxhlet methanol extract were identified as rutin, quercetin-hexoside-hexoside, quercetin-3-O-hexoside and kaempferol-3-O-rutinoside. In addition, the average concentrations of vanadium, chromium, manganese, cobalt, copper, nickel, arsenic, selenium, zinc and lead were within the permissible limits defined by WHO for medicinal plants. However, it was found that the concentrations of cadmium and iron were higher than the maximum permissible limits. Conclusion: Our results suggest that although caper has a strong biological activity, it should be consumed carefully due to the excess amount of cadmium and iron elements it contains. Resumen Introducción: Las especies de Capparis (Capparaceae), también llamadas alcaparras, crecen naturalmente en varias regiones del mundo. La alcaparra es una planta con propiedades medicinales y aromáticas. Los botones florales, la corteza de la raíz y los frutos de la planta se usan en la medicina popular debido a sus efectos analgésicos, cicatrizantes, de regeneración celular, tónicos y diuréticos. Objetivo: El objetivo de esta investigación fue evaluar las actividades biológicas in vitro (anti-ureasa, antioxidante, anticolinesterasa) e in vivo (antiinflamatorio) de la alcaparra (C. ovata var. canescens). Además, nuestro objetivo fue identificar sus principales compuestos fenólicos mediante cromatografía líquida de alto rendimiento con un detector de matriz de fotodiodos (HPLC-DAD) y confirmarlos mediante cromatografía líquida con espectrometría de masas en tándem (Q-TOF-LC/MS). Además, cuantificamos las concentraciones de varios elementos traza y elementos mayores en muestras de la planta utilizando espectrometría de masas con plasma acoplado inductivamente (ICP-MS). Métodos: Se evaluaron las actividades antioxidantes, anti-ureasa y anticolinesterasa de diferentes extractos de la planta usando las pruebas DPPH, FRAP, ABTS/TEAC, Indofenol y Ellman. La identificación de los compuestos fenólicos y el contenido de los elementos traza se realizó mediante HPLC y Q-TOF-LC/MS e ICP-MS. Resultados: El extracto de metanol Soxhlet exhibió la mayor actividad anti-ureasa, antioxidante (ABTS/TEAC) y anticolinesterasa. Los extractos de metanol Soxhlet y por maceración demostraron un efecto antiinflamatorio significativo en el tamaño alterado del edema después de la segunda hora de la inyección de carragenano. Los compuestos fenólicos activos en el extracto de metanol Soxhlet se identificaron como rutina, quercetina-hexósido-hexósido, quercetina-3-O-hexósido y kaempferol-3-O-rutinósido. Además, las concentraciones promedio de vanadio, cromo, manganeso, cobalto, cobre, níquel, arsénico, selenio, zinc y plomo estaban dentro de los límites permisibles definidos por la OMS para las plantas medicinales. Sin embargo, se encontró que las concentraciones de cadmio y hierro fueron más altas que los límites máximos permitidos. Conclusión: Nuestros resultados sugieren que, aunque la alcaparra tiene una fuerte actividad biológica, debe consumirse con cuidado debido al exceso de cadmio y hierro que contiene.

Perú hoy en día es el segundo productor de cacao orgánico del mundo. Los granos de cacao peruano y productos derivados son muy cotizados a nivel mundial, sobretodo la variedad criollo, pues esta se encuentra catalogada como cacao fino y de aroma. Los biomarcadores más importantes asociados con sabor, aroma y textura del cacao son la teobromina, la cafeína y ácidos grasos diversos. En este trabajo, financiado por el CONCYTEC (FONDECYT-012-2013) y la PUCP (DGI-2013- 0075) se ha implementado curvas de calibración HPLC-DAD para cuantificar teobromina y cafeína en 15 muestras de cacao pertenecientes a las variedades criollo y trinitario provenientes de 7 departamentos del Perú. Se determinó la razón teobromina/cafeína y se la relacionó con origen siguiendo lo sugerido en la literatura. La metodología HPLC-DAD y LC-MS implementada permitió confirmar la presencia de compuestos comúnmente presentes en el cacao (ácido cinámico, ácido protocatéquico, aspartato de ácido cafeico, catequina, aspartato de ácido cumárico, procianidina B, deoxiclovamida, epicatequina, procianidina C, pentámero de catequina y clovamida). Además, en este trabajo se presenta un estudio de análisis de masas tándem-inyección directaelectrospray para la identificación de ácidos grasos en la manteca de cacao de las 15 muestras bajo estudio. Cabe resaltar que este tipo de estudio es el primero que se reporta en la literatura del cacao. Se confirma la presencia mediante masas tándem de los 10 ácidos grasos mayoritarios dentro de las 15 muestras. El perfil metabolómico basado en espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN) del extracto metanólico del cacao y de la manteca también se reporta. Se comprueba la presencia de varios de los compuestos arriba listados, así como también ácidos orgánicos y aminoácidos diversos. Se registra el porcentaje de grasas saturadas, insaturadas, mono-insaturadas, poliinsaturadas, así como también, el ácido linoleico (C18:2) y el ácido linolénico (C18:3), calculados todos en base al perfil de 1H-RMN del extracto apolar. Tesis

ilustraciones En este trabajo de tesis de doctorado, un conjunto de sistemas D0p y Dp m as sus complejos conjugados (c.c.), que son producidos inclusivamente en el experimento LHCb, son estudiados para realizar una investigaci on en espectroscop a de bariones encantados. Todo el an alisis que se presenta hace uso de la muestra de datos almacenada por el detector LHCb en los a~nos 2011 y 2012 que corresponden a una luminosidad integrada de 3.0 fb-1, proveniente de las colisiones pp a energía de s= 7 TeV. Los mesones D son seleccionados a trav es de los desintegraciones D0->K +pi and D+-> K++pi+pi+. Un conjunto de criterios de selecci ón es aplicado para obtener los candidatos a mesones D y protones, de acuerdo a la informaci on del sistema de trazas obtenida por las componentes del detector. Una vez este proceso es realizado, un delicado estudio de reducci ón de fondo es realizado maximizando una funci ón de la pureza y la signi ficancia de los eventos de señal para la selecci on de los candidatos a bariones encantados. Reconstruyendo el espectro de las masas invariantes M(D0p) + c.c.,M(D+p) + c.c.,M(D0 anti- p) + c.c. y M(D+anti- p) + c.c. para las muestras de datos un conjunto de picos es observado, donde un ajuste simult aneo extendido y de m axima verosimilitud es realizado para obtener los valores de los par ametros de masas y anchos de estos picos los cuales son asociados con posibles nuevas estructuras. Para la muestra de datos del canal D0p, una nueva estructura cerca al umbral es observada con un valor de masa de 2840 MeV/c2. Esta estructura es consistente con la señal de un estado bari ónico excitado Lambda_ c. Para la muestra D+p, una evidencia de una estructura con un valor de masa de 3060 MeV/c2 es obtenida, consistente con un estado excitado Sigma++_c . En conexi on con esta estructura, un indicio de su compañero de isospin en la muestra de datos D0p es encontrada. Mediciones de sus masas y sus anchos con sus incertidumbres estad sticas y sistem aticas son reportados. Adicionalmente, el espectro de masas M(D0 anti-p) + c.c. y M(D+ anti-p) + c.c. han sido estudiados, donde realizando un ajuste independiente de m áxima verosimilitud ninguna evidencia de alg un tipo de estructura fue encontrada. (Texto tomado de la fuente) In this Ph.D. Thesis work, a set of Dp and Dp¯ prompt systems and their charge conjugate (c.c.), inclusively produced from pp collisions at the LHCb experiment have been studied, to perform searches for singly excited charmed baryon spectroscopy. All analyses presented in this work use a data sample recorded by the LHCb detector in 2011 and 2012 years, corresponding to an integrated luminosity of 3.0 fb−1 of pp collision data at √ s = 7 TeV. The D mesons are selected through the decay modes D0 → K−π + and D+ → K−π +π +. A set of selection criteria is applied to obtain D meson and proton candidates, according to the track information provided by the components of the LHCb detector. Once this procedure is carried out, a delicate background rejection study is performed maximizing a puritysignificance signal function for the selection of the charmed baryons candidates. Reconstructing the invariant mass spectrum for M(D0p) + c.c., M(D+p) + c.c., M(D0p¯) + c.c. and M(D+p¯) + c.c. data samples a the set of peaks is observed, where a simultaneous extended binned maximum likelihood fit is performed in order to extract the masses and widths parameters values of these peaks which some of them are associated with possible new structures. For D0p data sample, a new structure near the threshold with a mass value of ∼ 2840 MeV/c2 is observed. This structure is consistent with the signal of a Λc excited baryon state. For the D+p sample, an evidence of a structure with a mass value ∼ 3060 MeV/c2 is found, consistent with a Σ++ c excited baryon state. Connected with this structure, a hint with its isospin partner on D0p data sample is found. Measurements of their masses and widths values with their statistical and systematic uncertainties are reported. Additionally, the mass spectrum M(D0p¯) + c.c. and M(D+p¯) + c.c. have been studied, whereby performing a single extended binned maximum likelihood fit no evidence of any kind of structure was found in these samples. (Texto tomado de la fuente) Doctorado Doctor en Ciencias - Física Física experimental de partículas

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Instituto de Investigaciones sobre los Recursos Naturales. Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Doctorado en Ciencias Biológicas Iron is essential in cell redox reactions and chlorophyll biosynthesis, its bioavailability is usually low in alkaline soils. Strategies for the acquisition of iron in plants are insufficient to alleviate the stress induced by the deficiency, evidencing the importance of rhizospheric microorganisms. Arthrobacter agilis UMCV2 is a rhizobacterium PGPR that induces iron acquisition mechanisms in plants. Results obtained in this study showed that the volatile compounds of the UMCV2 strain induce physiological and morphological changes in seedlings of Medicago truncatula, so it was interesting to study the type of metabolites that induced in response to bacterial compounds and iron deficiency. The GC-MS, DLI-ESI-MS and UPLC-ESI-MS platforms were used to determine effect of volatile compounds of A. agilis UMCV2 on modulation the metabolome of M. truncatula promoting the plant's tolerance to iron deficiency stress. The metabolite analyzes were performed on seedlings of M. truncatula grown in iron deficiency and deficiency and interacting with volatile compounds of A. agilis UMCV2 for 10 days, in a separate compartment system. This study provides evidence on the role of A. agilis UMCV2 in the modulation of compounds involved in tolerance to iron deficiency stress in M. truncatula, through changes in metabolism that favors the increase of metabolites involved in the defense response, iron mobilization and plant-microorganism communication. El hierro es esencial en procesos redox celulares y biosíntesis de clorofila, su biodisponibilidad es reducida en suelos alcalinos. Las estrategias para la adquisición de hierro en plantas son insuficientes para aliviar el estrés inducido por la deficiencia, evidenciado la importancia de los microorganismos rizosféricos. Arthrobacter agilis UMCV2 es una rizobacteria PGPR que induce mecanismos de adquisición de hierro en plantas. Resultados obtenidos en este estudio demostraron que los compuestos volátiles de la cepa UMCV2 inducen cambios fisiológicos y morfológicos en las plántulas de M. truncatula, por lo que resultó interesante estudiar el tipo de metabolitos que se inducen en respuesta a los compuestos bacterianos y al estrés por deficiencia de hierro. Se utilizaron las plataformas GC-MS, DLI-ESI-MS y UPLC-ESI-MS para determinar si los compuestos volátiles de Arthrobacter agilis UMCV2 modulan el metaboloma de Medicago truncatula promoviendo la tolerancia de la planta al estrés por deficiencia de hierro. Se realizaron análisis de metabolitos en plántulas de M. truncatula crecidas en suficiencia y deficiencia de hierro y en interacción con los compuestos volátiles de A. agilis UMCV2 durante 10 días, en un sistema de compartimentos separados. Este estudio provee evidencia sobre el papel de A. agilis UMCV2 en la modulación de compuestos involucrados en la tolerancia al estrés por deficiencia de hierro en plantas de M. truncatula, esto mediante la alteración del metabolismo que favorece el incremento de metabolitos involucrados en la respuesta de defensa, movilización de hierro y comunicación planta-microorganismo.

Fundamento y objetivos: el cáncer de pulmón (CP) es el que provoca mayor mortalidad, especialmente por su frecuente diagnóstico tardío, con menos posibilidades de curación. En el inicio del proceso carcinogénico, previo al diagnóstico clínico, los oligoelementos (metales o metaloides), desempeñan un papel importante al activar o inhibir las reacciones enzimáticas y las metaloproteínas. El objetivo de nuestro estudio es analizar la utilidad de diversos metales como biomarcadores (BM) precoces de CP, obtenidos en muestras de suero, orina, y lavado broncoalveolar (LBA) Material y métodos: hemos analizado las concentraciones totales, incluyendo fracciones de alto y bajo peso molecular, de 11 metales en muestras de suero, orina y LBA de pacientes CP, controles sanos (CS) y pacientes con patología respiratoria no cáncer (NCP) empleando una técnica de análisis basada en un plasma de acoplamiento inductivo-espectrometría de masas (ICP-QQQ-MS) Resultados: obtuvimos una clara discriminación entre los grupos en las tres muestras analizadas. Hemos obtenido metales sobreexpresados o reducidos en el CP que podrían utilizarse como BM. La concentración de vanadio (V) y cromo (Cr) en suero es claramente mayor en pacientes con CP. Hemos demostrado que varios metales (V, Cr y cobre), relacionados con procesos metabólicos alterados en CP como estrés oxidativo y homeostasis, y/o sus relaciones podrían ser buenos BM de CP. Conclusiones: diversos metales, y sus relaciones y correlaciones, en la población estudiada diferencian claramente a los pacientes con cáncer de pulmón de los CS y NCP y parecen ser buenos biomarcadores en el diagnóstico precoz del cáncer de pulmón. Background and objectives: Lung cancer (LC) has the highest mortality rate, especially due to its late diagnosis, with a lower chance of recovery. At the start of the carcinogenic process, before a clinical diagnosis, trace elements (metals or metalloids) play an important role by activating or inhibiting enzymatic reactions and metalloproteins. The objective of our study is to analyze the utility of different metals as early biomarkers (BM) for LC which are obtained in serum, urine and bronchoalveolar lavage (BAL) samples. Material and methods: We analyzed the total concentrations, including fractions of high and low molecular weight, of 11 metals in serum, urine and BAL samples from patients with LC, healthy controls (HC) and patients with non-cancerous respiratory pathology (NCP) using an analysis technique based on inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-QQQ-MS). Results: We obtained a clear discrimination between groups for the three samples analyzed. We obtained overexpressed or reduced metals in LC that could be used as BM. The concentration of vanadium (V) and chromium (Cr) in serum is clearly higher in patients with LC. We have shown that several metals (V, Cr and copper) related to the altered metabolic processes in LC such as oxidative stress and homeostasis and/ or their connections could be good BM for LC. Conclusions: in the population studied, several metals and their connections and correlations were clearly differentiated in the patients with lung cancer compared to the HC and NCP groups and they appear to be good biomarkers for the early diagnosis of lung cancer.

La contaminación química es actualmente un grave problema de salud pública. La producción de sustancias químicas aumenta a un ritmo vertiginoso, y aunque los países desarrollados (OECD) producen la mayoría de las mismas, el crecimiento en países como Brasil, India, Indonesia, China o Sudáfrica (BRIICS) se produce con mayor velocidad. Un porcentaje elevado de estas sustancias son potencialmente peligrosas para la salud, y el ser humano está expuesto a las mismas principalmente mediante ingestión, inhalación o por vía dérmica. Consecuentemente, es importante para la protección de la salud estudiar el grado de exposición de la población a las distintas sustancias químicas, ya sea mediante la monitorización ambiental, estudiando la presencia de contaminantes en los diferentes compartimentos ambientales (agua, alimentos, aire, suelo, etc…), o mediante la biomonitorización humana, determinando los niveles de biomarcadores de exposición en matrices biológicas (sangre, orina, leche materna, etc…). La biomonitorización humana nos proporciona datos sobre la exposición interna por lo que integra todas las vías de exposición. La presente tesis doctoral está centrada en el estudio de la biomoniotorización humana de contaminantes alimentarios mediante el desarrollo de metodologías analíticas basadas en cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas y la aplicación de las mismas en estudios poblacionales para conocer la exposición de la población y llevar a cabo la evaluación del riesgo. La tesis está conformada por seis capítulos, que se corresponden con los artículos científicos que la sustentan. En general, se pueden agrupar en artículos de desarrollo de metodología analítica (capítulos 1, 2 y 3) y en artículos de niveles poblacionales (exposición) y de evaluación del riesgo (capítulos 4, 5 y 6). Los capítulos 1 y 2 se centran en el análisis de muestras de orina para la determinación de plaguicidas mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas de alta resolución. El primero está más enfocado a la identificación de nuevos metabolitos en orina, mientras que el segundo se centra en la optimización de un método analítico de cuantificación. En el capítulo 3 se describe el desarrollo de una metodología analítica multiresiduo para la determinación de bisfenoles y parabenos en leche materna mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas con analizador de triple cuadrupolo. La metodología desarrollada se empleó posteriormente en los capítulos 4 y 5 para determinar los niveles poblacionales de bisfenoles y parabenos, respectivamente, en madres lactantes y llevar a cabo la evaluación del riesgo para sus hijos. Por último, en el capítulo 6 se determinan metabolitos de ftalatos en orina en madres lactantes y se lleva a cabo la correspondiente evaluación del riesgo. Con respecto a los resultados, en el capítulo 1 se llevó a cabo con éxito un análisis retrospectivo mediante diferentes enfoques: análisis de sospechosos, análisis de desconocidos y análisis multivariante en diferentes poblaciones. El estudio permitió la identificación y confirmación de seis metabolitos de plaguicidas mediante búsqueda de sospechosos, la identificación de un metabolito mediante búsqueda de desconocidos, así como la diferenciación mediante análisis de componentes principales de las diferentes poblaciones estudiadas. En el capítulo 2 se optimizaron los parametros espectroméricos de un método de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas de alta resolución tipo Orbitrap. Como resultado, el poder de resolución (25.000 FWHM), el tipo de fragmentación (CID 40 eV) y el tipo de calibración de masas (cafeína como calibrante interno para ESI positivo), demostraron mejorar las prestaciones del análisis en términos de sensibilidad y exactitud. En el capítulo 3, la utilización de la extracción mediante QuEChERS combinada con la determinación mediante espectrometría de masas en tándem y aplicando ionización en modo negativo, permitió el desarrollo de un método optimizado y validado para la determinación de tres bisfenoles y cuatro parabenos en leche materna con límites de cuantificación (LoQ) de entre 0,1 y 0,25 ng/mL. En los capítulos 4 y 5 el bisfenol A y los parabenos se detectaron en más del 60% de las muestras analizadas, mientras que los bisfenoles F y S presentaron frecuencias de detección reducidas (

Tesis (Magister en Química) -- Universidad de Cartagena. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Programa de Maestría en Química, 2020 Disponibilidad La espectrometría de movilidad iónica es una técnica instrumental utilizada como el método estándar para la detección de drogas ilegales, agentes químicos y explosivos en aeropuertos y aduanas. Esta técnica separa iones en fase gaseosa que se desplazan en un campo eléctrico de acuerdo con su relación tamaño/carga. En la región de deriva de un instrumento de IMS, los iones son acelerados por el campo eléctrico pero también son desacelerados por colisiones con el gas de deriva. Los iones de tamaño similar tienen movilidades similares y son difíciles de separar debido a que estas son una función de sus relaciones tamaño/carga. Una forma de mejorar la separación en esta técnica es la introducción de modificadores en el gas de deriva, los cuales interaccionan y forman aductos con los iones y cambian selectivamente sus movilidades. En este trabajo se llevó a cabo el estudio de las interacciones en fase gaseosa de iones con modificadores en IMS, haciendo uso de la teoría del funcional de densidad (DFT), incluida en los métodos ab initio de la química teórica-computacional, para calcular energías de interacción ion-modificador, la presencia de puentes intramoleculares, efectos inductivos, deslocalizaciones electrónicas, momentos dipolares de iones y modificadores y otros parámetros que inciden en la duración de la interacción ion-modificador y, por lo tanto, en los cambios de movilidad. Los cambios de movilidad al introducir modificadores en el gas de deriva se explicaron en función del número de sitios de interacción del modificador, el tamaño de iones y modificadores, y las energías de interacción ion-modificador. Nuestros estudios están dirigidos, en un futuro, a disminuir los falsos positivos en aduanas y aeropuertos cuando se usa IMS, y a predecir separaciones selectivas de iones basadas en la introducción de modificadores en el gas 6 de deriva, como también a que se tengan en cuenta las estructuras de los iones y las energías de interacción entre estos y los modificadores. La selección de modificadores para resolver picos superpuestos en IMS sigue siendo empírica. Nuestros resultados indican que la selección del modificador correcto para una separación dada puede guiarse por estudios computacionales y son un paso adelante en la búsqueda de modelos teóricos robustos para predecir cambios de movilidad tras la introducción de modificadores en el gas de deriva

[spa] En los últimos años, el consumo de productos naturales ha aumentado enormemente. Cada vez más, los consumidores prefieren una línea natural para la alimentación, medicinas, cosméticos y hasta perfumería, en lugar de consumir productos procesados o preparados sintéticamente. La obtención de productos naturales suele tener un coste más elevado que la de productos sintéticos o procesados, debido a múltiples factores como por ejemplo la necesidad de cumplir con ciertos parámetros de calidad. Por ello, cada vez es más fácil encontrar en el mercado productos naturales con diferentes logos o etiquetas que garantizan su composición natural, su elaboración y su procedencia. La regulación de los productos naturales varía a nivel mundial y además depende del tipo de producto comercializado. Sin embrago, el fraude en los productos naturales sigue siendo una práctica muy extendida que busca principalmente el beneficio económico, ya sea a través de un aumento en las ventas o mediante la reducción de los costes de producción. Esta práctica es muy difícil de combatir, debido principalmente a la globalización del comercio, la complejidad de las cadenas de suministro, las diferencias políticas regulatorias entre cada país y el hecho de que la responsabilidad legal principal se delega de forma predeterminada en los fabricantes. El fraude es un término colectivo que abarca la sustitución, la adición, la manipulación, la tergiversación de ingredientes o envases, o declaraciones falsas o engañosas sobre un producto para beneficio económico. Por tanto, el fraude de un producto natural abarca desde la adulteración del producto hasta un etiquetado incorrecto con la finalidad de obtener un beneficio económico a costa del consumidor. Sin embargo, se debe considerar que el fraude no solo tiene consecuencias económicas sino que también representa importantes problemas de salud cuando se agregan sustancias prohibidas (y puede que tóxicas). Por lo tanto, se requiere el desarrollo de nuevas metodologías analíticas para garantizar la integridad y autenticidad de los productos naturales, considerando también que su adulteración se ha vuelto cada vez más sofisticada, a menudo especialmente diseñada para evitar la detección mediante análisis de rutina. La cromatografía líquida es una de las técnicas de separación más eficaces para garantizar la integridad y autenticidad de los productos naturales. Normalmente se emplean dos enfoques principales: análisis dirigidos y no dirigidos. El análisis dirigido se basa en la determinación específica de un grupo dado de sustancias químicas seleccionadas como los compuestos polifenólicos. La concentración y distribución de estos compuestos obtenidos por LC acoplada a espectrometría de masas de baja resolución (LRMS) o espectrometría de masas de alta resolución (HRMS), pueden emplearse como descriptores químicos para lograr la autenticación de los productos naturales mediante métodos quimiométricos. Por el contrario, los enfoques no dirigidos (basados en la obtención del perfil metabolómico) se basan en las respuestas instrumentales LC-LRMS y LC-HRMS sin asumir ningún conocimiento previo de sus componentes. En este trabajo, se han desarrollado varias estrategias por LC-LRMS y LC-HRMS dirigidas y no dirigidas en combinación con métodos quimiométricos multivariados (análisis de componentes principales y análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales) para abordar la clasificación y autentificación de los varios productos naturales y alimentos. Las diferentes metodologías se aplicaron con éxito en muestras de arándanos rojos, arándano azul, uva, frambuesa y productos farmacéuticos a base de arándano rojo, para garantizar su composición en función de la fruta de origen, así como muestras de pimentón de la Vera, pimentón de Murcia y pimentón procedente de la República Checa con la finalidad de garantizar las denominaciones de origen (DOP) y sus diferentes variedades de sabor., [eng] In recent years, the consumption of natural products has increased enormously. Nowadays, consumers prefer a natural production line for food, medicine, cosmetics and even perfumery, instead of consuming processed or synthetically prepared products. Obtaining natural products usually has a higher cost than synthetic or processed ones, due to multiple factors such as the need to comply with certain quality parameters. For this reason, it is becoming easier to find natural products on the market with different logos or labels that guarantee their natural composition, their production and their origin. The regulation of natural products varies worldwide and also depends on the type of product marketed. However, fraud in natural products continues to be a very widespread practice that seeks primarily economic benefit, either through an increase in sales or by reducing production costs. This practice is very difficult to prevent, mainly due to the globalization of trade, the complexity of supply chains, the regulatory political differences between each country and the fact that the main legal responsibility is delegated by default to the manufacturers. Fraud is a collective term that encompasses the substitution, addition, manipulation, misrepresentation of ingredients or packaging, or false or misleading statements about a product for financial gain. Therefore, the fraud of a natural product ranges from the adulteration of the product to an incorrect labeling in order to obtain an economic benefit at the expense of the consumer. However, it must be considered that fraud not only has economic consequences but also represents significant health problems when prohibited (and maybe toxic) substances are added. Therefore, the development of new analytical methodologies is required to guarantee the integrity and authenticity of natural products, considering also that their adulteration has become increasingly sophisticated, often specially designed to avoid detection by routine analysis. Liquid chromatography is one of the most effective separation techniques to ensure the integrity and authenticity of natural products. Two main approaches are typically used: targeted and non-targeted analysis. Targeted analysis is based on the specific determination of a given group of selected chemicals such as polyphenolic compounds. The concentration and distribution of these compounds obtained by LC coupled to low- resolution mass spectrometry (LRMS) or high-resolution mass spectrometry (HRMS) can be used as chemical descriptors to achieve the authentication of natural products by chemometric methods. In contrast, non-targeted approaches (based on metabolomic fingerprinting) are based on the LC-LRMS and LC-HRMS instrumental responses without assuming any prior knowledge of their components. In this work, several targeted and non-targeted LC-LRMS and LC-HRMS strategies have been developed in combination with multivariate chemometric methods (principal component analysis and partial least squares regression-discriminant analysis) to address the classification and authentication of several natural products and food. The different methodologies were successfully applied with samples of cranberries, blueberries, grapes, raspberries and cranberry-based pharmaceutical products, to guarantee their composition depending on the fruit of origin, as well as samples of La Vera, Murcia and Czech Republic paprika in order to guarantee the designations of origin (PDO) and their different flavor varieties.

[spa] En la presente tesis doctoral se desarrollaron métodos analíticos para la determinación de fármacos de uso humanos en el tejido muscular de los peces, incluyendo la comparación y optimización de diferentes tipos de extracciones y purificaciones de los extractos. Para la detección y cuantificación, se utilizó la cromatografía líquida (LC) acoplada a la espectrometría de masas de alta resolución (HRMS) en un instrumento QToF, en modo Full MS y SWATH. Las validaciones de los métodos abarcaron hasta 47 fármacos en análisis específicos de 14 familias terapéuticas. Además, se realizó un análisis de compuestos sospechosos utilizando una lista con más de 500 fármacos, metabolitos, drogas de abuso y productos de transformación. Las dos metodologías analíticas validadas utilizaron la extracción de QuEChERS o la extracción por ultrasonidos. En la primera, a una extracción sólido-líquido le seguía la separación del disolvente orgánico de la fase acuosa mediante salting-out. La limpieza de los extractos tenía como objetivo eliminar el material lipídico, que puede constituir una fracción considerable del tejido de los peces. Los lípidos co-extraidos fueron eliminados con adsorbentes específicos de tipo dispersivo, como el EMR-lipid removal y el adsorbente Z- Sep. Se aprovechó el modo de adquisición SWATH del instrumento QToF-MS utilizado un modelo Sciex X500R, en el que la adquisicion de datos ultrarrápida alterna entre el modo MS para la detección de iones moleculares con hasta diez adquisiciones secuenciales de fragmentación de todos los iones, cada una de las cuales cubre una ventana de m/z 90-100 Da de amplitud. Las validaciones de los métodos generales incluyeron los parámetros de recuperación, precisión, efecto de la matriz, reproducibilidad, sensibilidad, robustez y linealidad. El primer método validado realizado con extracción QuEChERS, desarrollado para matrices de músculo de peces liofilizado, a 3 niveles diferentes de concentración hasta 500 ng/g peso seco (dw) de pescado, se aplicó a 16 muestras recogidas en dos ríos europeos. El análisis cuantitativo reveló la presencia de sotalol, carbamazepina, trimetoprima, ketoprofeno, acetaminofén, propranolol y venlafaxina en concentraciones hasta 80 ng/g de pescado (dw). A diferencia del primer método, la segunda metodología validada incluía también la detección de compuestos por análisis de sospechosos (suspect screening analysis). En este método, se examinaron muestras de pescado fresco (fw) para detectar la presencia de 47 fármacos en modo direccionado validados hasta 50 ng/g de pez (fw). Como complemento del método validado, se incluyeron más de 500 fármacos, drogas de abuso, metabolitos y TPs para el análisis de suspect screening. Los resultados positivos se confirmaron por medio de la base de datos de la biblioteca instrumental,(SCIEX All-In-One HR-MS/MS, biblioteca NIST 2017, y Chemspider), que compilan espectros en alta resolución. La aplicación de este método a 32 muestras de peces de 4 ríos europeos dió lugar a la detección de bezafibrato, cafeína, carbamazepina, claritromicina, diltiazem, furazolidona, ketoprofeno, sulfapiridina, trimetoprima y verapamilo en concentraciones hasta de 69 ng/g de pescado (fw). Mediante el análisis de suspect screening, se detectaron y confirmaron con éxito en las muestras analizadas benzoilecgonina, cocaína, nicotina y ofloxacina. Finalmente se estudió la acumulación organo-específica de los fármacos en peces de un rio en España. La detección y, cuando fue posible, la cuantificación, se dirigió a las agallas, bilis, cerebro, corazón, hígado, músculo, páncreas, piel, plasma y riñón de 12 muestras pertenecientes a cuatro especies comunes de la parte baja del río Llobregat, haciendo análisis direccionado específico y análisis de compuestos sospechosos. Adicionalmente, se monitorizó el agua del río en busca de los mismos compuestos. Mientras que en las muestras de agua se identificaron 53 sustancias por medio de un análisis direccionado y/o suspect screening, en uno o varios órganos de cada especie se detectaron hasta 34 compuestos. La evaluación semicuantitativa indicó la distribución preferencial de los fármacos, las drogas de abuso, los metabolitos y los TPs en el riñón, la piel, el hígado, el cerebro y el páncreas., [eng] In this doctoral thesis, analytical methods for the determination of pharmaceuticals for human use in fish muscle tissue were developed. For detection and quantification of pharmaceuticals, liquid chromatography (LC) coupled to high resolution mass spectrometry (HRMS) using a QTOF instrument in SWATH mode was used. The validated analytical methodologies used QuEChERS extraction or ultrasound extraction. Purification of the extracts was aimed to remove the lipid material, by EMR-lipid removal and Z-Sep+. The validated parameters included recovery, accuracy, matrix effect, reproducibility, sensitivity, robustness and linearity. The validated QuEChERS extraction method performed for freeze-dried fish muscle matrices, at 3 different levels of concentration, was applied to 16 samples collected from two European rivers. The quantitative analysis revealed the presence of seven pharmaceuticals in concentrations up to 80 ng/g dry weight of fish. In the second methodology, samples of fresh fish (fw) were examined for the presence of 47 drugs in targeted mode validated up to 50 ng/g fish (fw). As a complement, more than 500 pharmaceuticals, drugs of abuse, metabolites and transformation products were included for the suspected screening analysis. Positive results were confirmed through HRMS databases: SCIEX All-In-One HR-MS/MS, NIST 2017 library, Chemspider. The application of this method to 32 fish samples from 4 European rivers resulted in the detection of ten pharmaceuticals at concentrations up to 69 ng/g fish (fw). By suspect screening analysis, benzoylecgonine, cocaine, nicotine and ofloxacin were successfully detected and confirmed in the analyzed samples. Additionally, we performed a study of organ-specific accumulation of the pharmaceuticals in fish samples (and water) from the Llobregat River, Spain, using target and suspected screening analysis. The detection / quantification, was directed to tissues, organs and bio- fluids of fish. While 53 substances were identified in the water samples by targeted analysis and/or suspected screening, up to 34 compounds were detected in the organs of each specie. The semi-quantitative evaluation indicated the preferential distribution of pharmaceuticals, drugs of abuse, metabolites and transformation products in the kidney, skin, liver, brain and pancreas.

Fecha de lectura de Tesis Doctoral 31-1-2020 El LPA es un lípido bioactivo que está involucrado en la señalización intracelular a través de los seis receptores acoplados a proteínas G (LPA1-6). Entre estos receptores, LPA1 es un fuerte candidato para mediar los efectos centrales de LPA en la emoción y puede participar en la regulación de conductas emocionales normales. De hecho, los ratones que carecen del receptor LPA1 exhiben desregulación emocional y una aumentada vulnerabilidad a los efectos negativos del estrés (Pedraza et al., 2014; Castilla-Ortega et al., 2011). Por otro lado, la administración continuada de LPA induce diferentes efectos neurobiológicos y conductuales en animales de investigación. Con el objetivo de estudiar el efecto del estrés en el sistema de LPA hipocampal en esta tesis doctoral se ha puesto apunto la técnica MALDI-TOF para la determinación de las concentraciones de las diferentes especies de LPA en el hipocampo. Con ello, se han llegando a las siguientes conclusiones:1) En condiciones fisiológicas, la especie de LPA más abundante en el hipocampo de ratón es la 18:0, seguida de la 18:1, tanto en WT como en maLPA1-nulos. 2)La ausencia del receptor LPA1 no causa cambio en las concentraciones de LPA, aunque sí modificó ligeramente el perfil de LPA hipocampal.3) El estrés por inmovilización, fundamentalmente si no es aplicado junto a EPM, produjo cambios significativos en las concentraciones de LPA en hipocampo, en cambio el estrés inducido por EPM afectó las proporciones relativas de este sistema lipídico. 4) El efecto del estrés agudo fue mayor en los animales WT que en ausencia del receptor LPA1. 5)El estrés crónico aumentó la concentración de la especie LPA 18:0 sin alterar el resto de especies de LPA en el hipocampo. Y por último, 6) La administración continuada de LPA 18:1 provocó un aumento en los niveles relativos de la especie 18:1 en el hipocampo.