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*Hintergrund und Ziele* Die Neuroradiologie ist ein sich schnell entwickelndes Fachgebiet, das stark von der engen Zusammenarbeit mit Physik, Medizintechnik und Informatik durch die Nutzbarmachung neuer Bildgebungstechniken profitiert. Eine stetig wachsende Anzahl neuer MRT-Kontraste (X-Kerne, CEST, Diffusionsparameter, um nur einige zu nennen) verspricht erweiterte Einblicke in pathophysiologische Prozesse und verfeinerte Lokalisation bekannter Pathologien. Dieses innovative Potential zu evaluieren und möglichst in den klinischen Alltag zu bringen, ist Aufgabe der translationalen Forschung. Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit zwei weiterführenden Methoden der klinischen MR Kopf-Bildgebung, die in den zwei Studien im Hauptteil dieser Arbeit behandelt werden: der symmetrische interhemisphärische Vergleich von Diffusionsdatensätzen zur Lateralisation von Hippocampussklerosen [1] und die Natrium-Bildgebung zur Bewertung von entzündlichen Läsionen bei Multipler Sklerose [2]. Diese beiden Anwendungen sind auf den ersten Blick sehr unterschiedlich, beruhen jedoch auf gemeinsamen fundamentalen Prinzipien und Abläufen bei der Analyse der Bilddaten: der Akquisition geeigneter MR Bilddaten, der Interaktion mit den befundenen ÄrztInnen, den morphometrischen Transformationen, mathematischen Operationen und der Statistik dreidimensionaler Bilddatensätze sowie der Verarbeitung der Bilder im DICOM- und anderen Standards. *Methoden (Patienten, Material und Untersuchungsmethoden)* Die symmetrische, traktbasierte, räumlich-statistische Auswertung (TBSS) von Diffusionstensor (DTI) - Parameterkarten erlaubt einen interhemisphärischen Gruppenvergleich, der unabhängig von individuellen bilateralen Unterschieden ist und daher sensitiv subtile, lokale Veränderungen anzeigen kann. Die Studie [1] verwendet ein genau abgegrenztes Patientenkollektiv, basierend auf gesicherten histologischen Befunden nach neuroradiologischer Verdachtsdiagnose, um zu evaluieren, ob mit DTI und symmetrischer TBSS eine verbesserte Detektion der Hippocampussklerose möglich ist. In Studie [2] wurden Natrium-MRT Messungen im Gehirn von Patienten mit Multipler Sklerose akquiriert und zu Bildern aus anderen MR-Messungen des Gehirns des gleichen Patienten transformiert, so dass einzelne entzündliche Läsionen bezüglich ihrer Kontrastmittelaffinität und anderer Eigenschaften generell und longitudinal charakterisierbar wurden. Zur Bewertung von MS-Läsionen wurde eine grafische Benutzeroberfläche in Matlab [3] erstellt, mit der eine effiziente Charakterisierung der einzelnen Läsionen möglich wurde. *Ergebnisse und Beobachtungen* Linksseitige und rechtsseitige Hippocampussklerosen können mit der symmetrischen TBSS eindeutig getrennt werden, jedoch gibt es Überschneidungen der Messwerte von Patienten und Normalpersonen. Somit ist die Detektion der Erkrankung nicht eindeutig möglich. Es konnte aber mit dieser Methode gezeigt werden, dass die strukturellen pathologischen Veränderungen bei der Hippocampussklerose über den bildmorphologisch veränderten Hippocampus hinaus bis in das nachweisbar sind. Die Natrium-Konzentration in den Läsionen ist gegenüber der normalen weißen Substanz erhöht, wobei die größte Akkumulation von Natrium in den kontrastmittelaffinen Läsionen zu finden ist. Im Verlauf normalisiert sich der Natriumgehalt der Läsionen teilweise, jedoch nicht vollständig. Durch die Analyse der intrazellulär gewichteten Natrium-IR Messungen wurde es in Studie [2] möglich, nachzuweisen, dass die Natrium-Erhöhung in der überwiegenden Mehrheit der Läsionen ihre Ursache in der Ansammlung von Flüssigkeit hat und nicht in der Erhöhung des intrazellulären Natriums. Jedoch konnte eine kurzzeitige Erhöhung des intrazellulären Natriums hyperakuter Läsionen in Einzelfällen gezeigt werden. Das intrazellulär gewichtete Natrium zum Zeitpunkt der ersten Messung korreliert mit der Entwicklung des Gesamtnatriums im Verlauf, womit die Natrium-IR zu einem potentiellen prognostischen Marker wird. *Schlussfolgerungen und Diskussion* In der vorliegenden Arbeit wird exemplarisch gezeigt, wie einerseits Synergien multiparametrischer Datensätze genutzt werden können und andererseits durch gezieltes Postprocessing die Sensitivität der MR-Bildgebung erhöht werden kann. Solche Ansätze sind auch für die konzertierte Nutzung weiterer Modalitäten, gegebenenfalls zukünftig auch mit Unterstützung durch Architekturen der künstlichen Intelligenz, vielversprechend und von Interesse, da sie sowohl gut auf andere Methoden übertragbar als auch auf größere Projekte skalierbar sind.

Ziel dieser Dissertation war es Resektate von Harnblasenkarzinomen mit der Frage zu analysieren, inwieweit sog. Tumorstammzellen nachzuweisen sind. Hierfür wurden Operationspräparate mechanisch/enzymatisch bearbeitet über eine magnetische Zellseparation für Tumorzellen angereichert und anschließend durchflusszytometrisch analysiert. Es wurde zudem ein funktioneller Assay durchgeführt, der die Aktivität der Aldehyddehydrogenase untersucht., The overall aim of my dissertation was the characterization of cancer stem cells in bladder carcinoma. For this purpose, bladder cancer specimens were mechanically/enzymatically processed and enriched for tumor cells by magnetic cell separation. Finally, a detailed analysis of the tumor cells was performed using flow cytometry. Moreover, the acitivity of aldehyde dehydrogenase was determined in a functional assay.

Das Multiple Myelom (MM) ist eine seltene, maligne Störung der Plasmazellen, welche trotz gehöriger Therapiefortschritte in den letzten Jahrzehnten nach wie vor als unheilbare Erkrankung betrachtet werden muss. Obwohl eine sehr große intra- und interindividuelle Heterogenität beim Multiplen Myelom beobachtet werden kann, gibt es verschiedene Mutationen, die mit höherer Frequenz in Myelompatientinnen und -patienten gefunden werden. Eines dieser häufiger betroffenen Proteine ist KRas mit Mutationen in etwa 20% der Fälle. Da die Ras-Proteine und somit auch ihre Isoform KRas zu Beginn der Ras/Raf/Mek/Erk-Signalkaskade stehen und dementsprechend einen großen Einfluss auf die Übermittlung von Wachstums- und Überlebenssignalen in Zellen besitzen, ist eine nähere funktionelle Analyse verschiedener KRas-Mutationen von großer Relevanz. Während für einige Mutationen von KRas bereits funktionelle Analysen existieren, wurden die häufig auftretende Exon 2-Mutation KRasp.G12A, sowie die beiden seltenen Exon 4-Mutationen KRasp.A146T und KRasp.A146V bisher in ihrer funktionellen Rolle im MM noch nicht näher charakterisiert. Um die funktionellen Aspekte dieser genannten Mutationen von KRas näher zu untersuchen, kamen im Rahmen meiner Versuchsreihe Sleeping Beauty Transposon System basierte Expressionsvektoren zur transienten und dauerhaften Proteinexpression in verschiedenen Myelomzelllinien zum Einsatz. Durch Transfektion dieser Plasmide in die KRas-Wildtyp tragenden Zellen mit nachfolgender Transposition in die genomische DNA konnte gezielt die Überexpression der verschiedenen Mutationen realisiert werden. So konnte durch die funktionelle Proteinauslese mittels der Anfertigung von Western Blots gezeigt werden, dass jede der drei getesteten Mutationen zu einer verstärkten Phosphorylierung und damit Aktivierung von KRas-nachgeschalteten Proteinen wie z.B. Erk führt. Zusätzlich wurde für die KRas-Mutationen auch ein aktivierender Effekt auf den PI3K/Akt-Signalweg anhand einer erhöhten Phosphorylierung des Proteins Akt nachgewiesen. Ebenso wie andere bereits besser charakterisierte KRas-Mutationen haben demnach auch die getesteten KRas-Mutationen KRasp.G12A, KRasp.A146T und KRasp.A146V einen positiven Einfluss auf die intrazellulären Überlebenssignale und könnten daher eine elementare Rolle in der Entwicklung des Multiplen Myeloms bei Patientinnen und Patienten spielen. Es gilt daher, die drei in dieser Arbeit untersuchten KRas-Mutationen, zukünftig in die Wirkstoffsuche KRas-spezifischer Therapeutika miteinzubeziehen., Multiple Myeloma (MM) is a rare, malignant disorder of plasma cells, which despite the progress in therapy over the last decades, must still be considered an incurable disease. Although a very large intra- and interindividual heterogeneity can be observed in multiple myeloma, there are various mutations that are found at higher frequencies in myeloma patients. One of these more common proteins affected by mutations in myeloma patients is KRas, with mutations in about 20% of cases. Since the Ras proteins and thus also their KRas isoform are at the beginning of the Ras/Raf/Mek/Erk signaling cascade and therefore have a major influence on the transmission of survival signals in cells, a closer functional analysis of various KRas mutations is of great relevance. While functional analyses already exist for some KRas mutations, the frequently occurring exon 2 mutation KRasp.G12A and the two rare exon 4 mutations KRasp.A146T and KRasp.A146V have not yet been characterized in their functional role in MM. To further investigate the functional aspects of these KRas mutations, I used protein expression vectors based on the Sleeping Beauty Transposon System for transient and sustained protein expression in different myeloma cell lines. By transfection of these plasmids into KRas wild-type cells the overexpression of the different mutations could be realized. By functional protein readout using Western blots it could be shown that each of the three tested mutations leads to increased phosphorylation and thus activation of KRas downstream proteins such as Erk. In addition, an activating effect on the PI3K/Akt signaling pathway could be demonstrated for the KRas mutations by showing an increased phosphorylation of the Akt protein. As with other KRas mutations that have already been better characterized, the KRas mutations KRasp.G12A, KRasp.A146T and KRasp.A146V have a positive influence on intracellular survival signals and could therefore play a fundamental role in the development of multiple myeloma in patients. It is therefore important to include the three KRas mutations investigated in this work in the drug discovery process for KRas-specific therapeutics in the future.

Head and Neck squamous cell carcinoma (HNSCC) are a group of frequent and often incurable cancers of the epithelial tissue with high relapse and mortality rates. The major risk factor for developing HNSCC is the abuse of tobacco or alcohol. However, an infection of high-risk human papillomavirus (HPV) can also lead to the development of HNSCC. So, depending on their cause, two forms of these tumors can be distinguished: HPV-negative tumors and HPV-positive tumors. This differentiation is of particular clinical importance as patients with HPV-associated tumors respond significantly better to anticancer treatments. It is assumed that this difference is due to a better response of HPV-infected tumor cells to radiotherapy (RT) and presumably due to an increased immunogenicity. However, the molecular mechanisms underlying this difference have yet to be revealed and little is known about the mechanism of increased radiosensitivity of HPV-positive HNSCC as well as about the microenvironment of HPV-positive compared to HPV-negative HNSCC following RT. It has already been demonstrated that RT induces, besides direct effects such as local tumor control, an anti-tumor immune response. This effect is generated by modifications inside the cell and the cell surface, in the tumor microenvironment and by the systemic release of messenger and danger signals. In this project, the aim was therefore to investigate the impact of the HPV-status of HNSCC on RT-induced reactive oxygen species (ROS) and released danger signals and consecutively on the immunogenic potential of the tumor cells. The results confirm an increased radiosensitivity of the HPV-positive HNSCC lines not only concerning clonogenicity but also in cell death induction. In addition, the increased proportion of necrotic cells after hypofractionated radiation in HPV-positive HNSCC indicates an increased immunogenicity of these cells. Necrosis is known to be the more immunogenic form of cell death and it can be expected that the released cytokines and danger signals will contribute to an increased immunogenicity of HPV-positive HNSCC. However, the danger signals HSP70 and HMGB1were not found to be the relevant molecules that induce the higher immunogenicity of HPV-positive HNSCC. Contrary to the expectations, the generation of radiation-induced ROS was found to be increased in HPV-negative cell lines. An influence of radiation-induced ROS on the redox status of HMGB1 could not be proven in the used in vitro model system. Future experiments should focus additionally on the extracellular level to consider influences on the activation of immune cells also on a functional level. Epitheliale Kopf-Hals-Tumore (engl. Head and Neck Squamous Cell Carcinoma = HNSCC) stellen eine der häufigsten Krebsformen weltweit dar. Eine Diagnose geht trotz kontinuierlich optimierter Behandlungsansätze weiterhin mit einer hohen Rückfallrate und Mortalität einher. Die bedeutendsten Risikofaktoren für die Entstehung von HNSCC sind schädlicher Konsum von Tabak sowie Alkohol. Jedoch kann auch eine Infektion mit einem Hochrisiko-Typ des Humanen Papillomavirus (HPV) zur Entwicklung dieser Tumore führen. Im Gegensatz zu HPV-negativen Tumoren, haben HPV-positive eine wesentlich bessere Prognose im Zuge einer Radiochemotherapie. Es wird vermutet, dass ein erhöhtes Ansprechen der HPV-infizierten Tumorzellen auf die Strahlentherapie und vermutlich auch eine erhöhte Immunogenität dieser für den Unterschied ursächlich ist. Jedoch sind die genauen zugrundeliegenden molekularen Mechanismen in weiten Teilen noch unbekannt. Auch im Hinblick auf die Umstände, welche zu der erhöhten Strahlensensitivität der HPV-positiven HNSCC führen, besteht Aufklärungsbedarf. Unterschiedliche Konstellationen und Veränderungen im Tumormikromilieu zwischen HPV-positiven und HPV-negativen HNSCC nach einer Radiotherapie (RT) könnten hierbei eine entscheidende Rolle spielen. Es wurde bereits gezeigt, dass durch Radiotherapie nicht nur direkte Effekte wie eine lokale Tumorkontrolle erreicht werden, sondern ebenfalls eine antitumorale Immunreaktion induziert wird. Hierbei spielen die miteinander vernetzten Veränderungen in der Zelle, im Tumormikromilieu sowie die systemische Freisetzung von Botenstoffen eine wichtige Rolle. In diesem Projekt wurde deshalb im Kontext einer Bestrahlung der Einfluss des HPV-Status von HNSCC in immunrelevanten Bereichen untersucht. Zunächst war hierbei von Interesse, welche Zelltodesformen nach einer hypofraktionierten oder einzelnen hohen Bestrahlung vorherrschen und ob sich bereits Unterschiede bezüglich eines immunogenen Zelltodes zeigen. Weiterhin wurden durch Radiotherapie induzierte Sauerstoffradikale (ROS) sowie der Einfluss von RT und ROS auf die Freisetzung und Beeinflussung von immunogen Gefahrensignalen analysiert, wodurch sich möglicherweise Rückschlüsse auf das immunogene Potential der Tumorzellen ergeben. Die Ergebnisse bestätigen eine erhöhte Strahlensensitivität der HPV-positiven Kopf-Hals-Tumorzelllinien nicht nur in Bezug auf die Klonalität, sondern auch in der Zelltodesinduktion. Zudem weist der nach hypofraktionierter Bestrahlung erhöhte Anteil nekrotischer Zellen bei HPV-positiven HNSCC auf eine erhöhte Immunogenität dieser Zellen hin. Nekrose stellt eine immunogenere Form des Zelltodes dar und es ist zu erwarten, dass die hierbei freigesetzten Zytokine und Gefahrensignale einen Beitrag zur erhöhten Immunogenität der HPV-positiven HNSCC darstellen. Die untersuchten Gefahrensignale HSP70 und HMGB1 zeigten sich jedoch nicht als die relevanten Moleküle für eine erhöhte Immunogenität von HPV-positiven HNSCC. Die Generierung bestrahlungsinduzierter ROS zeigte sich entgegen den Erwartungen erhöht in HPV-negativen Zelllinien. Ein Einfluss bestrahlungsinduzierter ROS auf den Redoxstatus von HMGB1 konnte in den verwendeten in vitro Modellsystemen nicht nachgewiesen werden. In zukünftigen Experimenten sollte zusätzlich ein Fokus auf die extrazelluläre Ebene gerichtet werden, um Einflüsse auf die Aktivierung von Immunzellen auch funktionell zu untersuchen.

Pediatric Buried Bumper Syndrome: Diagnostic Validity of Transabdominal Ultrasound and Artificial Intelligence 1.1.1 Objectives Buried bumper syndrome (BBS) is a severe complication of percutaneous endoscopic gastrostomy (PEG) resulting from overgrowth of gastric mucosa and penetration of the inner holding plate into the gastric wall. The aim of this study was to evaluate the diagnostic value of transabdominal ultrasound (US) in comparison to an artificial intelligence (AI) model for the diagnosis of BBS in children. 1.1.2 Design and Methods In this monocentric retrospective study, pediatric US data concerning BBS from a ten-year period (2009-2019) were analyzed. US findings were compared to a clinical multiparameter-based AI model and reference standard endoscopy. Clinical risk factors for the occurrence of pediatric BBS were determined. 1.1.3 Observations and Results In n=121 independent examinations of n=82 patients, the placement of the inner holding plate of the PEG was assessed by US. In n=18 cases BBS was confirmed. Recall and precision rates were 100 % for US and 88 % for the AI-based assessment. Risk factors for the occurrence of BBS were mobilization problems of the PEG (rs=0.66, p

Rheumatoid arthritis (RA) is a common autoimmune disease that primarily affects the synovium of diarthrodial joints causing chronic inflammation and joint destruction. Draining lymph nodes show reactive hyperplasia already anterior to clinical symptoms. Fibroblastic reticular cells (FRCs) build the microarchitecture within the draining lymph node and play an important structural and immunomodulatory role during the pathogenesis of RA. With this work, we shed light on the function of FRCs within the popliteal lymph node (pLN) which contributes to the transition from a sole disbalance within the immune system during the preclinical phase of RA to the onset of this autoimmune disease. We used C57BL/6 CCL19-Cre x iDTR mice, in which diphtheria toxin injection depletes FRCs and observed the RA time-course in a collagen-induced arthritis (CIA) model by measuring paw redness and swelling for three weeks. Mice lacking FRCs in the pLNs are less likely to develop RA and symptoms are less severe. Via isolation of FRCs from the pLNs and flow cytometry we determined that FRC proliferation in CIA occurs before onset of RA whereas FRC activation is increased at later time points. An FRC/T cell co-culture provided evidence of the immunomodulatory function of FRCs. An analysis of the produced cytokines displayed increased interferon-γ (IFN- γ) levels in FRCs of mice with RA. Thus, FRCs play an important role in RA outbreak and regulation. We propose that they are necessary for the spreading of the inflammation from its origin in the lymph node to the joints. Once clinical symptoms appear, FRCs contribute to the maintenance of the inflammatory process by producing the proinflammatory cytokine IFN-γ. In the future, FRC could become a valuable target in preventing disease onset.

The so-called 'mycobiome' has progressively acquired interest and increased the complexity of our understanding of the human gut microbiota. Several questions are arising concerning the role of fungi (and in particular of Candida albicans), the so-called 'mycobiome', that has been neglected for a long time and only recently gained interest within the scientific community. There is no consensus on mycobiome normobiosis because of its instability and variability. This review aims to raise awareness about this interesting topic and provide a framework to guide physicians faced with such questions.

Eine Störung der neurokardiogenen Interaktion ist eine häufige Komplikation des akuten ischämischen Schlaganfalls und ist mit einem schlechteren Patientenoutcome assoziiert. Das Ziel dieser Arbeit war es, Zusammenhänge zwischen der Schlaganfall-assoziierten Verminderung der Herzpumpfunktion und der Infarktlokalisation zu finden. Wir verwendeten dafür das Voxel-based lesion symptom mapping. Reduction in cardiac pump function is a common complication of acute ischemic stroke and is associated with worse patient outcome. The aim of this work was to find associations between stroke-associated reduction in cardiac pump function and infarct location. This was performed using advanced imaging techniques and voxel-based analysis.

In den letzten Jahren gewann das Konzept der Paranodopathien als eigene Krankheitsentität der inflammatorischen Polyneuropathien zunehmend an Bedeutung. Die Forschung konzentrierte sich dabei überwiegend auf die chronisch inflammatorische Polyradikuloneuropathie (CIDP). In dieser Arbeit werden (para-)nodale Antikörper gegen Neurofascin-155, panNeurofascin, Contactin-1 und Caspr-1 in einer großen Kohorte von Patienten mit Guillain-Barré-Syndrom (GBS) und CIDP nachgewiesen. Patienten mit Anti-panNeurofascin-Antikörpern zeigten besonders schwere Verlaufsformen. Patienten mit anderen (para-)nodalen Antikörpern zeigten je nach IgG-Subklasse der Antikörper spezifische klinische Merkmale und ein unterschiedliches Ansprechen auf die Therapie. Die Arbeit zeigt, dass die Bestimmung (para-)nodaler Antikörper bei Patienten mit GBS und CIDP im klinischen Alltag zur Einordung der Prognose und Therapieplanung sinnvoll sein kann., In the last years the concept of paranodopathy as an own disease entity has gained more relevance. So far, most studies focused on chronic inflammatory polyneuropathy (CIDP). In this study, autoantibodies against neurofascin-155, pan-neurofascin, contactin-1, and capsr-1 in a cohort of Guillain-Barré-syndrome (GBS) and CIDP were detected. All patients with anti-pan-neurofascin-antibodies suffered from a very severe course of disease. Patients with other (para-)nodal autoantibodies showed common clinical features and therapeutic response depending on the autoantibody and their IgG-subclasses. This study shows that (para-)nodal autoantibodies should be determined in GBS and CIDP to estimate clinical course and therapeutic response.

Background: COVID-19 and some anti-SARS-CoV-2 vaccines trigger a humoral autoimmune response against a broad range of endogenous components, which may affect recipients' prognosis in predisposed individuals. Autoantibodies directed against apolipoprotein A-1 (AAA1 IgG) the major protein fraction of High Density Lipoprotein have been shown to be raised in COVID-19 and in rheumatoid arthritis (RA) patients and other populations where they have been associated with poorer outcomes. We wanted to assess the impact of anti-SARS-CoV-2 mRNA-based vaccination on AAA1 autoimmune biomarkers in RA patients.Methods: 20 healthy controls and 77 RA mRNA-based vaccinated patients were collected at baseline, 3 weeks after the first vaccination, 2 and 8 weeks after the second vaccination. AAA1 and SARS-CoV-2 serologies were measured by immunoassays. Systemic and local symptoms occurring during the vaccination protocol were recorded.Results: mRNA-based vaccination induced a significant increase in median AAA1 IgG levels in both healthy controls and RA patients overtime. However, in both populations, these medians trend did not translate into significant increase in AAA1 IgG seropositivity rates despite evolving from 5 to 10% in healthy controls, and from 9 to 12.9% in RA patients. No associations were retrieved between AAA1 IgG and symptoms of any kind during the vaccination protocol.Conclusions: mRNA-based vaccination seems to induce a light AAA1 IgG response in immunocompetent individuals within 2 months after the last injection. Although we did not observe any warning signs, the formal demonstration of the harmlessness of such biological warrants further studies.

Oxalate crystal-induced renal inflammation is associated with progressive kidney failure due to activation of the NLRP3/CASP-1 inflammasome. It has been suggested previously that purinergic P2X7 receptor signaling is critical for crystal-induced inflammasome activation and renal injury. Therefore, we investigated the role of the P2X7 receptor in response to crystal-induced cytokine release, inflammation, and kidney failure using in vitro and in vivo models. Results were published in Scientific Reports. This thesis is an additional placement in the current scientific context with background information on kidney disease, hyperoxaluria and the P2X7 receptor.

Wilms tumor (WT) is the most common renal tumor in childhood. Among others, MYCN copy number gain and MYCN P44L and MAX R60Q mutations have been identified in WT. The proto-oncogene MYCN encodes a transcription factor that requires dimerization with MAX to activate transcription of numerous target genes. MYCN gain has been associated with adverse prognosis. The MYCN P44L and MAX R60Q mutations, located in either the transactivating or basic helix-loop-helix domain, respectively, are predicted to be damaging by different pathogenicity prediction tools. These mutations have been reported in several other cancers and remain to be functionally characterized. In order to further describe these events in WT, we screened both mutations in a large cohort of unselected WT patients, to check for an association of the mutation status with certain histological or clinical features. MYCN P44L and MAX R60Q revealed frequencies of 3 % and 0.9 % and also were significantly associated to higher risk of relapse and metastasis, respectively. Furthermore, to get a better understanding of the MAX mutational landscape in WT, over 100 WT cases were analyzed by Sanger sequencing to identify other eventual MAX alterations in its coding sequence. R60Q remained the only MAX CDS alteration described in WT to date. To analyze the potential functional consequences of these mutations, we used a doxycycline-inducible system to overexpress each mutant in HEK293 cells. This biochemical characterization identified a reduced transcriptional activation potential for MAX R60Q, while the MYCN P44L mutation did not change activation potential or protein stability. The protein interactome of N-MYC-P44L was likewise not altered as shown by mass spectrometric analyses of purified N-MYC complexes. However, we could identify a number of novel N-MYC partner proteins, several of these known for their oncogenic potential. Their correlated expression in WT samples suggested a role in WT oncogenesis and they expand the range of potential biomarkers for WT stratification and targeting, especially for high-risk WT., Der Wilms Tumor (WT) ist der im Kindesalter am häufigsten auftretende Nierentumor. Neben anderen genetischen Veränderungen, wurden MYCN-Kopienzahlgewinn und der MYCN P44L- und MAX R60Q-Mutationen in WT identifiziert. Das Proto-Onkogen MYCN kodiert einen Transkriptionsfaktor, der eine Dimerisierung mit MAX erfordert, um die Transkription zahlreicher Zielgene zu aktivieren. Der MYCN-Gewinn wurde mit einer negativen Prognose assoziiert. Die MYCN P44L- und MAX R60Q-Mutationen, die sich entweder in der transaktivierenden oder in der basischen Helix-Loop-Helix-Domäne befinden, wurden durch verschiedene pathogene Vorhersage-Werkzeuge als schädigend prognostiziert. Über diese Mutationen wird bei mehreren anderen Krebsformen berichtet, doch sie wurden noch nicht umfassend biochemisch charakterisiert. Um diese Vorgänge in WT weitergehend zu charakterisieren, untersuchten wir beide Mutationen in einer großen Gruppe zufällig ausgewählter WT-Patienten mit dem Ziel, einen Zusammenhang zwischen dem Mutationsstatus und gewissen histologischen und klinischen Eigenschaften zu überprüfen. MYCN P44L und MAX R60Q ergaben eine Frequenz von 3 % bzw. 0,9 % in WT und wurden jeweils mit einem signifikant höheren Rückfall- und Metastasierungsrisiko assoziiert. Um ein besseres Verständnis der MAX-Mutationsszenarien in WT zu erlangen, wurden darüber hinaus mehr als einhundert WT-Fälle durch Sanger-Sequenzierung analysiert, mit dem Ziel, andere mögliche Veränderungen in der MAX-Kodierungssequenz zu identifizieren. R60Q blieb dabei die einzige bis heute beschriebene Veränderung der MAX-Kodierungssequenz in WT. Um die potentiellen funktionalen Folgen dieser Mutationen zu untersuchen, nutzten wir ein Doxycyclin-induziertes System, um eine Überexprimierung jedes Mutanten in HEK293-Zellen zu erzielen. Diese biochemische Charakterisierung identifizierte ein reduziertes Transkriptionsaktivierungspotential für MAX R60Q, während die MYCN P44L-Mutation das Aktivierungspotential oder die Proteinstabilität nicht veränderte. Das N-MYC Interaktom wurde während der Massenspektrometrie-Analyse von gereinigten N-MYC-Komplexen ebenfalls nicht verändert. Jedoch konnten wir eine Anzahl von neuartigen N-MYC Partnerproteinen bestimmen, von denen einige für ihr onkogenes Potenzial bekannt sind. Deren korrelierte Expression in WT-Proben deuteten auf eine Rolle bei der WT Onkogenese hin und erweitern die Auswahl potentieller Biomarker für die Stratifizierung von WTs und Gentargeting, insbesondere bei Hochrisiko-WTs.

1 Zusammenfassung (Teil-)Ergebnisse der vorliegenden Arbeit wurden veröffentlicht in: Semmler M, Kniesburges S, Pelka F, Ensthaler M, Wendler O, Schützenberger A. Influence of Reduced Saliva Production on Phonation in Patients With Ectodermal Dysplasia. J Voice 2021. doi: 10.1016/j.jvoice.2021.06.016. 1.1 Hintergrund und Ziele Die Symptome der Erkrankung der ektodermalen Dysplasie lassen sich auf eine hereditäre Fehlbildung bei der Entwicklung des äußeren Keimblatts, des Ektoderms, zurückführen [1]. Während der embryonalen Entwicklung werden aus dem Ektoderm unter anderem Haut- und Hautanhangsgebilde sowie die Zähne gebildet. Dies führt dazu, dass bei der ektodermalen Dysplasie Beeinträchtigungen der Schweißdrüsenfunktion sowie Haar-, Nagel- und Zahnanomalien festgestellt werden [2]. Das Fehlen oder die verminderte Anzahl von Sekret absondernden Drüsen in der Schleimhaut der Nase, der Mundhöhle, des Rachens, des Larynx und der übrigen Atemwege wird weiterhin beschrieben [3, 4]. Darüber hinaus kommt es, laut Studien, durch die verminderte Speichelproduktion zu Kau- und Schluckbeschwerden [3, 5]. Da die häufigste Form der ektodermalen Dysplasie X-chromosomal-rezessiv vererbt wird, weisen männliche Betroffene in der Regel stärkere Symptome der Erkrankung auf als weibliche Betroffene [6, 7]. Die von ektodermaler Dysplasie Betroffenen, Kinder wie Erwachsene, schildern den subjektiven Eindruck einer rauen und heiseren Stimme. Bislang ist der Zusammenhang zwischen Stimmauffälligkeiten bei Menschen mit ektodermaler Dysplasie und der durch die Erkrankung möglicherweise reduzierten Speichelproduktion nach aktuellem Wissensstand nur unzureichend untersucht worden. Das Ziel dieser Dissertation ist es, mit Hilfe objektiver Methoden zu überprüfen, ob es eine Korrelation zwischen der individuellen Speichelproduktion und den möglichen Stimmauffälligkeiten gibt. 1.2 Material und Methode Für die im Rahmen dieser Arbeit durchgeführte Studie wurde sowohl eine Experimental- als auch eine Kontrollgruppe getestet. In der Experimentalgruppe befinden sich insgesamt 42 Versuchsteilnehmer mit einer diagnostizierten Form von ektodermaler Dysplasie im Alter von 9 bis 65 Jahren. Das Kontrollkollektiv umfasst 47 stimmgesunde Versuchsteilnehmer im Alter von 19 bis 63 Jahren. Die im Rahmen dieser Dissertation durchgeführte Studie orientiert sich bezüglich der Wahl der Methoden am international anerkannten Stimmdiagnostik-Protokoll der European Laryngological Society (ELS-Protokoll) [8]. Mithilfe der computergestützten Stimmanalyse mittels des Programms „lingWAVES“ und mithilfe der Stimmanalyse-Software „Glottis Analysis Tools“ der Abteilung für Phoniatrie und Pädaudiologie der Hals-Nasen-Ohren- Klinik des Universitätsklinikums Erlangen, Kopf- und Halschirurgie (Direktor: Prof. Dr. med. Dr. h.c. H. Iro) wurden anhand von Stimmaufnahmen und Stimmfeldmessungen diverse objektive akustische Parameter erfasst. Drei Logopädinnen der Abteilung für Phoniatrie und Pädaudiologie der Hals-Nasen-Ohren-Klinik, Kopf- und Halschirurgie des Universitätsklinikum Erlangen haben unabhängig voneinander die Stimmklänge aller Versuchsteilnehmer beim Vorlesen des standardisierten Lesetexts „Nordwind und Sonne“ anhand der „RBH“-Skala mit den perzeptiven Parametern Heiserkeit, Behauchtheit und Rauigkeit bewertet. Der individuelle Leidensdruck der Betroffenen wurde mithilfe des standardisierten Voice Handicap Index (VHI)-Fragebogens dokumentiert. Zusätzlich zu den Methoden des ELS-Protokolls wurde eine Speichelflussmessung über einen Zeitraum von fünf Minuten mit einer vorherigen Stimulation durch das Kauen eines geschmacklosen Paraffin-Kaugummis vorgenommen. 1.3 Ergebnisse und Beobachtungen Die Experimentalgruppe der von ektodermalen Dysplasie Betroffenen weist einen signifikant geringeren Speichelfluss als die stimmgesunde Kontrollgruppe auf. Daraufhin wurde eine Einteilung aller Versuchsteilnehmer in verschiedene Speichelcluster anhand des Rohgewichts des Speichels vorgenommen, um einen Zusammenhang zwischen der Stimmqualität und der Speichelmenge zu überprüfen. Die Ergebnisse der Clusterzentrenanalyse zeigen, dass es keinen signifikanten Unterschied zwischen den Speichelclustern bezüglich der relevanten Parameter der Stimmqualität gibt. Da männliche Betroffene aufgrund des Erbgangs, wie eingangs genannt, in der Regel stärkere Symptome zeigen als weibliche Betroffene [6, 7], ist es besonders wichtig, den Vergleich zwischen von ektodermaler Dysplasie betroffenen Männern und stimmgesunden Männern zu ziehen. Bezüglich des subjektiven Parameters des VHI-Fragebogens und des objektiven Parameters CPP-I sowie des perzeptiven Parameters Behauchtheit zeigen sich hier signifikante Unterschiede. Der Parameter der Behauchtheit und die Messgröße CPP-I gelten dabei als Marker für die Stimmqualität. Die von ektodermaler Dysplasie betroffenen Männer haben ein signifikant geringeres Rohgewicht des Speichels als die stimmgesunden Männer. Die Gruppe der von ektodermaler Dysplasie betroffenen Männer wurde anhand des Rohgewichts des Speichels in verschiedene Speichelcluster eingeteilt, um den Effekt der Speichelmenge auf die Stimmqualität zu überprüfen. Die Ergebnisse der Clusterzentrenanalyse verdeutlichen, dass es keinen Zusammenhang zwischen der Stimmqualität und der Speichelmenge gibt. 1.4 Schlussfolgerungen Die Ergebnisse zeigen, dass nicht allein die Speichelmenge für die Stimmauffälligkeiten der Personen mit der Diagnose ektodermaler Dysplasie verantwortlich sein kann. In zukünftigen Studien sollte beispielsweise mithilfe einer qualitativen Untersuchung des Speichels überprüft werden, ob ein Zusammenhang zwischen pathologischen Werten der Speichelelektrolyte, beziehungsweise zwischen der Konsistenz des Speichels, und manifesten Stimmauffälligkeiten besteht. Des Weiteren soll versucht werden, die Probanden anzuhalten, ein bis zwei Stunden vor der Erfassung der Speichelmenge das Rauchen sowie das Essen und Trinken zu unterbinden, sodass man zukünftig einen Effekt des Rauchens, beziehungsweise des Essens und Trinkens, auf die Produktion des Speichels ausschließen kann. Weiterhin sollte in zukünftigen Studien, die sich den Stimmauffälligkeiten bei von ektodermaler Dysplasie Betroffenen widmen, sowohl der Speichel als auch der Mukus auf den Stimmlippen untersucht werden. Bei der ektodermalen Dysplasie handelt es sich um eine seltene Erkrankung [9], sodass das getestete Kollektiv verhältnismäßig klein ist, was statistisch valide Aussagen erschwert. 2 Abstract 2.1 Background and Aims The symptoms of ectodermal dysplasia can be explained by a hereditary dysfunction of the ectoderm [1]. For example, the skin and its skin appendage as well as the teeth derive from the ectoderm during the embryonic development. This is leading to a dysfunction of the perspiratory glands and to anomalies of hair, nails and teeth [2]. Furthermore, ectodermal dysplasia is characterised by a reduced number of glands in the mucosa of the nasal cavity, the oral cavity, the pharynx, the larynx and the remaining respiratory tract [3, 4]. Moreover, according to studies, disorders concerning chewing and swallowing are caused by the decreased production of saliva [3, 5]. As the most frequent form of ectodermal dysplasia is a X-linked recessive inheritance, males are more strongly affected by the disease than women [6, 7]. People suffering from ectodermal dysplasia have the subjective impression of a hoarse voice. As far as we know, the connection between the production of saliva and the voice of people has not been the object of any study so far. The aim of this dissertation is to examine whether there is a correlation between the production of saliva and the voice abnormalities that might be the case. 2.2 Material and Methods The experimental group tested for the aims of this study comprises 42 test persons aged between 9 and 65 years, whereas the control group includes 47 healthy subjects aged between 19 and 63. The methods utilised in the present study are selected based on the internationally acknowledged voice diagnostics protocol of the European Laryngological Society (ELS-protocol) [8]. By means of the computer programme for voice analysis „lingWAVES“ and the software „Glottis Analysis Tools“ of the Division of Phoniatrics and Pedaudiology at the Department of Otorhinolaryngology, Head & Neck Surgery (head: Prof. Dr. med. Dr. h.c. H. Iro), objective acoustic parameters are collected. Three speech therapists of the Division of Phoniatrics and Pedaudiology individually performed perceptual ratings of the voice samples using the „RBH“- scale with the perceptive parameters hoarseness, breathiness and throatiness. The individual psychological strain is measured with the aid of the standardised Voice Handicap Index (VHI)- questionnaire. In addition to the methods suggested by the ELS-protocol, salivation is quantified over a period of five minutes. Previous to the measurement of salivation, the test persons are asked to chew a neutral paraffin pellet without flavour in order to stimulate salivation. 2.3 Results and Observations The test group of people suffering from ectodermal dysplasia shows a significantly lower salivation than the control group that consists of people with healthy voices. Therefore, all study participants are divided into different clusters on the basis of the amount of saliva in order to check whether there is a correlation between the quality of the voice and the amount of saliva that is produced by a subject. The results show that no significant difference between the clusters can be found when it comes to the relevant parameters. As the most frequent form of ectodermal dysplasia is a X-linked recessive inheritance and as males are more strongly affected by the disease than women [6, 7], it is important to compare the group of males with healthy voices and the group of males affected by ectodermal dysplasia. It is noticeable that there are significant differences between the two groups when referring to the subjective parameter of the VHI-questionnaire, the objective parameter CPP-I and the perceptive parameter of breathiness. The perceptive parameter of breathiness and CPP-I are known as markers for the quality of the voice. There is a significant difference between the males suffering from ectodermal dysplasia and the males with healthy voices concerning the gross weight of their saliva. Therefore, the group consisting of males with ectodermal dysplasia is divided into different clusters on the basis of the amount of saliva to check the effect of the amount of saliva on the quality of the voice. The results illustrate once more that no correlation between the quality of the voice and the amount of saliva can be found. 2.4 Conclusions The results of this study show that the amount of saliva cannot be responsible solitarily for the voice abnormalities occurring to people suffering from ectodermal dysplasia. Further studies should perform a qualitative examination of the saliva to check a possible correlation between pathological values concerning the electrolytes of the saliva, respectively the consistency of the saliva, and voice abnormalities. Moreover, the test persons should be prevented from smoking, eating and drinking up to two hours before the testing begins in order to be able to exclude an effect of smoking, eating and/or drinking on the production of saliva. Furthermore, in future studies concerning the voice abnormalities that affect people with the diagnosis of ectodermal dysplasia, not only the saliva but also the mucus found on the vocal chords should be investigated. As ectodermal dysplasia is known to be a rare disease [9], the number of subjects tested is relatively small, which is inhibiting statistically valid conclusions.

Contains fulltext : 248798.pdf (Publisher’s version ) (Open Access) Allogeneic hematopoietic cell transplantation (allo-HCT) remains a treatment option for patients with chronic myeloid leukemia (CML) who fail to respond to tyrosine kinase inhibitors (TKIs). While imatinib seems to have no adverse impact on outcomes after transplant, little is known on the effects of prior use of second-generation TKI (2GTKI). We present the results of a prospective non-interventional study performed by the EBMT on 383 consecutive CML patients previously treated with dasatinib or nilotinib undergoing allo-HCT from 2009 to 2013. The median age was 45 years (18-68). Disease status at transplant was CP1 in 139 patients (38%), AP or >CP1 in 163 (45%), and BC in 59 (16%). The choice of 2GTKI was: 40% dasatinib, 17% nilotinib, and 43% a sequential treatment of dasatinib and nilotinib with or without bosutinib/ponatinib. With a median follow-up of 37 months (1-77), 8% of patients developed either primary or secondary graft failure, 34% acute and 60% chronic GvHD. There were no differences in post-transplant complications between the three different 2GTKI subgroups. Non-relapse mortality was 18% and 24% at 12 months and at 5 years, respectively. Relapse incidence was 36%, overall survival 56% and relapse-free survival 40% at 5 years. No differences in post-transplant outcomes were found between the three different 2GTKI subgroups. This prospective study demonstrates the feasibility of allo-HCT in patients previously treated with 2GTKI with a post-transplant complications rate comparable to that of TKI-naive or imatinib-treated patients.

Hintergrund und Ziele Unter Tinnitus, einem Phantomgeräusch ohne externe Schallquelle, leiden laut einer systema-tischen Studienanalyse 3 % bis 30,9 % der gesamten Bevölkerung. Trotz des hohen Leidens-drucks der Betroffenen gibt es noch keine Heilung und der genaue Pathomechanismus ist bis heute unbekannt. Da zur Erforschung invasive neurophysiologische Verfahren angewendet werden, können nur Tiermodelle genutzt werden. Um verlässliche Aussagen über das Beste-hen eines Tinnitus bei einem Tier zu treffen, werden verschiedene Verhaltenstests angewen-det. Diese lassen sich grob in die Gruppe der bereits gut validierten, auf Konditionierung beru-henden Lernparadigmen und in die teilweise angezweifelte, nicht validierte und auf einem Re-flex beruhende akustische Schreckreaktionsmethode unterteilen. Ein Vergleich der akusti-schen Schreckreaktionsmethode mit einem Lernparadigma wurde bereits mehrmals durchge-führt und eine Gleichwertigkeit der Methoden festgestellt, allerdings wurden in den Lernpara-digmen akustische Stimuli verwendet, die sich sehr stark von denen der akustischen Schreck-reaktionsmethode unterscheiden. In dieser Arbeit wurde ein Lernparadigma in der Shuttlebox mit maximaler Ähnlichkeit zu dem Paradigma der akustischen Schreckreaktionsmethode ent-wickelt und mit dieser kreuzvalidiert, um die Zweifel an der Methode der akustischen Schreck-reaktion zu beseitigen. Methoden Zu diesem Zweck wurden insgesamt 30 Wüstenrennmäuse mit dem Lernparadigma in der Shuttlebox trainiert, bis sie zwischen einem durchgehenden Ton und einem Ton mit Lücken von 50 ms auf drei verschiedenen Frequenzen (2, 4 und 8 kHz) diskriminieren konnten. Nach einem milden, Tinnitus induzierenden Lärmtrauma wurden die Ergebnisse der Tiere aus der Messung der Präpulsinhibition bei akustischen Schreckreaktionen mit den Ergebnissen des Tests in der Shuttlebox verglichen und gegeneinander aufgetragen. Ergebnisse und Beobachtungen Die Tiere lernten das auf Konditionierung beruhende Lernparadigma größtenteils schnell und zuverlässig innerhalb von maximal 16 Tagen. Die Kreuzvalidierung zeigte eine leichte positive Korrelation zwischen den Ergebnissen des validierten Lernparadigmas und der nicht validier-ten akustischen Schreckreaktionsmethode bei den Tieren mit Tinnitus. Allerdings wiesen nur 5 der 14 im Versuch eingeschlossenen Tiere Anzeichen eines Tinnitus auf. Schlussfolgerung und Diskussion Die Ergebnisse der Kreuzvalidierung deuten darauf hin, dass die Methoden als gleichwertig zu betrachten sind und unterstützen somit die Validität der Methode der akustischen Schreckre-aktion. Allerdings müssen die Ergebnisse unter den Gesichtspunkten der geringen Anzahl an Tinnitus-Tieren sowie eventuellen Störgrößen diskutiert werden. Background and objectives According to a systematic review, 3 % to 30.9 % of the general population is affected by tinni-tus, the perception of a phantom sound in the absence of an external stimulus. Despite the relevant psychological strain experienced by affected patients, there is still no established treatment available, and the underlying pathophysiology of tinnitus remains mostly unknown. For invasive neurophysiological methods, only animal models can serve. Several different behavioural tests are used for the reliable detection of tinnitus in animals. They can be subdi-vided in models based on acknowledged conditioning paradigms and the not yet validated method based on the acoustic startle reflex. Other researchers made a comparison between the two groups of methods before, and the methods were in excellent agreement. However, the acoustic stimuli in the applied conditioning paradigm were somewhat different from the acoustic startle paradigm. To further increase the acceptance of the acoustic startle paradigm, a new behavioural paradigm in the shuttlebox with stimulus-configuration similar to the acous-tic startle paradigm was established and used to cross-validate the two methods. Design and methods A total of 30 gerbils were trained in the shuttlebox to discriminate between a continuous noise and silent gaps of 50 ms embedded in continuous noise of three different frequencies (2, 4 and 8 kHz). After a mild, tinnitus inducing noise trauma, the effects of possible changes in the pre-pulse inhibition of the acoustic startle reflex were measured and compared with the perfor-mance of the animals tested in the shuttlebox. Observations and results The animals learned the behavioural paradigm in the shuttlebox showing consistent training results within a maximum of 16 days. The cross-validation indicated a slight positive correla-tion between the two methods among animals experiencing tinnitus. However, only 5 of 14 animals included in the experiment showed behavioural signs of a tinnitus percept. Conclusions The results of the cross-validation indicate that these two methods for the assessment of tinni-tus can be regarded as equal and therefore strengthen the validity of the method based on the acoustic startle reflex. However, the results presented here have to be discussed under con-sideration of the small number of animals with tinnitus included in this study and the occur-rence of potential confounders.

Hintergrund und Ziele Neben den motorischen Symptomen sind nicht-motorische Symptome (NMS) des idiopathischen Parkinson-Syndroms (IPS) in den letzten Jahren zunehmend in den Fokus gerückt (Pont-Sunyer et al., 2015, Pfeiffer, 2016). Anhedonie, die Unfähigkeit Freude und Lust zu empfinden, ist ein häufiges NMS (46%) bei IPS Patienten (Lemke et al., 2005), welches auch unabhängig von einer Depression (Isella et al., 2003, Spalletta et al., 2013) auftreten kann. Wir konnten im Rahmen einer “proof-of-principle“ Studie zeigen, dass Patienten mit IPS ihnen präsentierte Gerüche weniger un-/angenehm beurteilten und somit eine Reduktion des affektiven Beurteilungsspektrums vorlag, selbst nachdem für Hyposmie kontrolliert wurde. Zudem zeigte sich eine Korrelation mit der durch validierte Fragebögen erfassten Anhedonie, jedoch nicht mit einer Depression (Mrochen et al., 2016). Da die unabhängige Erfassung von Anhedonie und Depression unter Berücksichtigung der Vorgaben des DSM-V (American-Psychiatric-Association, 2013) durch Überlappung mit somatischen Symptomen des IPS möglicherweise verfälscht wird, könnte eine akkurate, fragebögenunabhängige Erfassung der Anhedonie bei IPS Patienten einen Beitrag zu einer zielgerichteten Diagnostik und Therapie der NMS leisten. In dieser Studie soll, zusätzlich zur Evaluation olfaktorischer Stimuli, die affektive Wahrnehmung von akustischen und visuellen Reizen beim IPS untersucht werden. 3 Folgende Hypothesen werden überprüft: 1. Hypothese: Beim IPS liegt eine multisensorische Störung der affektiven Wahrnehmung vor. 2. Hypothese: Die affektive Evaluation sensorischer Stimuli korreliert mit psychometrischen Fragebögen der Anhedonie. 3. Hypothese: Ein eingeschränktes affektives Beurteilungsvermögen kann beim IPS unabhängig von depressiven Symptomen auftreten. Methoden Die Diagnose eines IPS erfolgte anhand der Leitlinie der Deutschen Gesellschaft für Neurologie (DGN) (DGN, 2016) in Anlehnung an die Kriterien der „UK Parkinson's Disease Society Brain Bank“ (Hughes et al., 1992) und der Movement Disorder Society (MDS) (Postuma et al., 2015). Alle Patienten wurden mit dem Teil III der Unified Parkinson´s Disease Rating Scale (UPDRS-III) (Goetz et al., 2008, Martinez-Martin et al., 2013) und der Hoehn und Yahr (H&Y)-Skala (Hoehn and Yahr, 1967, Goetz et al., 2004) bezüglich motorischer Symptome und Erkrankungsstadium beurteilt. Kontrollen wurden eingeschlossen, wenn kein Anhalt für Symptome eines prodromalen IPS bestand (Berg et al., 2015). Es erfolgte die Bestimmung von Hörschwelle, Nah- und Fernvisus. Der kognitive Status wurde durch das Montreal Cognitive Assessment (MoCA) (Nasreddine et al., 2005) erfasst. Mittels 16-er Sniffin Sticks® Identifikationstest (Sniffin ID) (Sniffin ID Test ©, Burghart Messtechnik, Deutschland) wurde eine Einordnung in hyposmisch bzw. normosmisch vorgenommen (Hummel et al., 2007). Beck Depression Inventory (BDI) (Aaron T. Beck 1988), Snaith-Hamilton-Pleasure-Scale D (SHAPS-D) (Franz et al., 1998), Temporal Experience of Pleasure Scale (TEPS) (Gard et al., 2006) und Starkstein Apathie Skala (SAS) (Starkstein et al., 1992b) wurden zur Erfassung depressiver Symptome (BDI), der Anhedonie (SHAPS und TEPS) und Apathie (SAS) herangezogen. Zur Erfassung der subjektiven affektiven Wahrnehmung wurden drei verschiedene Testserien mit jeweils 22 Stimuli durchlaufen. Die Bewertung bezüglich affektiver Valenz, d.h. Kategorisierung eines Stimulus als positiv bzw. negativ, erfolgte separat für jeden Reiz auf einer 9-stufigen Skala (-4 ≙ „äußerst unangenehm“ bis +4 ≙ „äußerst angenehm“). Wichtig war zudem das „Arousal“, welches es erlaubt, Stimuli bezüglich deren Ausmaß emotionaler Erregung in einem Spektrum von „entspannt“ bis „aufgeregt“ einzuordnen. Dies wurde bei visuellen und akustischen Stimuli auf einer 11- stufigen Skala (0 ≙ „ruhig/entspannt“ bis 10 ≙ „aufgeregt“) bewertet. Bei den Gerüchen wurde analog eine Einstufung der Geruchsintensität vorgenommen (0 ≙ „sehr schwach“ bis 10 ≙ „sehr stark“). Ergebnisse Nach Berücksichtigung der Ein- und Ausschlusskriterien gingen 62 Probanden (30 Patienten und 32 Kontrollen) in die aktuelle Arbeit ein. Demographische Parameter, wie Alter und Geschlecht zeigten keine Unterschiede zwischen den Gruppen. Hörschwelle, Nah- und Fernvisus, kognitive Funktion (MoCA) und Anhedonie (TEPS [CON/ANT]; SHAPS) und Apathie (SAS) unterschieden sich ebenfalls 4 nicht. IPS-Patienten zeigten erwartungsgemäß ein höheres Maß an depressiven Symptomen, sowie eine Hyposmie. 6 von 22 Bildern, 8 von 22 Tönen und 18 von 22 Gerüchen wurden bezüglich ihrer affektiven Valenz signifikant unterschiedlich bewertet. Insbesondere Stimuli am negativen und positiven Ende des abgebildeten affektiven Spektrums wurden signifikant weniger ausgeprägt bewertet. Als Folge ergaben sich signifikante Unterschiede für die absolute affektive Valenz der jeweiligen Sinnesmodalität. Die Resultate der anhedoniespezifischen Fragebögen (TEPS CON, TEPS ANT und SHAPS) korrelierten ausschließlich mit den absoluten Werten der visuellen affektiven Evaluation, während zwischen BDI und absoluten affektiven Werten keinerlei Korrelation vorlag. Schlussfolgerung Die erste Hypothese, dass bei IPS-Patienten ein multisensorisches Defizit bei der affektiven Wahrnehmung sensorischer Stimuli vorliegt, konnte angenommen werden. Die zweite Hypothese konnte nur für das visuelle System angenommen werden, die Ergebnisse der psychometrischen Fragebögen SHAPS und TEPS korrelierten lediglich mit dem absoluten visuellen Punktwert. Eine Korrelation mit der Evaluation olfaktorischer Stimuli (Mrochen et al., 2016) konnte nicht repliziert werden. Die affektive Bewertung akustischer Stimuli erreichte kein Signifikanzniveau, wenngleich mit größerer Gruppenstärke, insbesondere für TEPS und TEPS CON, signifikante Korrelationen zu vermuten sind. Mögliche Ursachen könnten die kleine Studienpopulation und die geringere Prävalenz einer durch SHAPS und TEPS erfassten Anhedonie im untersuchten Studienkollektiv sein. Eine unterschiedliche Bewertung der Stimuli war nicht durch eine höhere Prävalenz an depressiven Symptomen unter den der IPS-Patienten begründet. So bestanden weiterhin signifikante Unterschiede in der affektiven Evaluation nachdem für die Resultate des BDI kontrolliert wurde, so dass die dritte Hypothese angenommen werden konnte. Zukünftige Studien sollten überprüfen, ob 1) der Beginn einer dopaminergen Therapie, bspw. bei de novo IPS-Patienten, die affektive Wahrnehmung verändert, 2) die affektive Wahrnehmung mit motorischen Fluktuationen korreliert, 3) die eingeschränkte affektive Wahrnehmung in einer größeren Kohorte mit einer höheren Anzahl apathischer / anhedoner Patienten signifikant mit diesen Symptomen korreliert, 4) die in der aktuellen Studie untersuchten Probanden im Verlauf eine Apathie / Anhedonie entwickeln, welche mit den Resultaten in dieser Studie übereinstimmt und 5) funktionelle Bildgebung nutzen, um dysfunktionale neuroanatomische Korrelate der defizitären affektiven sensorischen Wahrnehmung zu identifizieren. Introduction: Currently, the diagnosis of Parkinson´s Disease (PD) is based on the presentation of the characteristic motor-symptoms, bradykinesia, rigidity, and tremor. Regarding the urgent need for an earlier diagnosis of PD, there has been a growing interest in non-motor symptoms (NMS), as some emerge several years before the onset of motor-symptoms. Furthermore, NMS have a considerable impact on quality of life that likely surpasses the influence attributable to motor-symptoms. Anhedonia, described as the inability to experience joy and lust, has a prevalence of up to 46% among PD patients. It is often associated with depression and apathy, but also occurs as a self-contained neuropsychiatric symptom. The diagnosis of anhedonia according to the DSM-V and validated questionnaires, like the Beck Depression Inventory (BDI) and Snaith-Hamilton-Pleasure Scale (SHAPS), pose problems in PD due to an overlap of motor-symptoms in PD with the somatic symptoms assessed by questionnaires for anhedonia and depression. Thus, diagnosis of anhedonia and depression without capturing somatic symptoms may deliver a more refined picture of neuropsychiatric deficits in PD. Previously, we compared the (an-)hedonic evaluation of odors between PD patients and healthy controls which revealed a significantly reduced affective olfactory perception in PD, even after controlling for hyposmia. This correlated to anhedonia as assessed by the SHAPS, but not to depressive symptoms assessed by the BDI. Building upon the previous study, the current work focused on the affective perception of different sensory modalities, their intercorrelation, and correlation to psychometric questionnaires for anhedonia, apathy, and depression in PD. Methods: PD patients were rated according the Unified Parkinson´s Disease Rating Scale III (UPDRS� III) and Hoehn and Yahr (H&Y) stage. SHAPS and Temporal Experience of Pleasure Scale (TEPS) were used for the assessment of anhedonia. Apathy and depression were examined by the Starkstein Apathy Scale (SAS) and BDI, while the Montreal Cognitive Assessment (MoCA) was conducted to assess cognitive impairment. Participants passed visual acuity, hearing threshold, and olfactory identification tests (Sniffin ID). Affective perception was assessed by three tests each compromising 22 pictures, sounds, and odors. Each stimulus was rated on a 9-point scale concerning its affective valence (from -4 to +4) and on an 11-point scale (0 to 10) regarding the level of arousal and odor intensity, respectively. Results: 30 PD patients with a mean H&Y stage of 2,3 and 32 healthy controls were included, demonstrating no differences in demographic parameters like age or gender. TEPS, SHAPS, SAS, MoCA, visual acuity, and hearing threshold were not altered between groups. As expected, participants differed in BDI and Sniffin ID scores, with a higher prevalence of depression and hyposmia among PD patients. Significant differences in affective evaluation of stimuli were observed in 6 out of 22 pictures, 8 out of 22 sounds and 18 out of 22 odors. Absolute affective scores differed significantly in all three sensory modalities in PD patients generally presenting lower absolute scores than controls and increasing levels of significance from visual to acoustic and especially olfactory stimuli. SHAPS and 2 TEPS scores showed significant correlations exclusively with absolute affective scores of visual items. BDI scores did not correlate with the absolute affective scores. Conclusions: This study identified reduced judgement of un-/pleasantness in three sensory modalities, suggesting a multisensory deficit in the affective perception of sensory stimuli in PD. The most significant differences were observed in the affective evaluation of odors, followed by acoustic und visual stimuli. These differences in affective evaluation were still observed after controlling for depression, confirming previous results of an impaired affective judgement among PD patients irrespective of concurrent depression. A singular correlation between visual hedonic perception and questionnaire-based assessment of anhedonia was observed. This may be explained by the low prevalence of anhedonia in the study population. While the hypothesis of a multisensory deficit in the affective perception of sensory stimuli in PD was met, a clear association to a neuropsychiatric symptom remains elusive. In addition, it still remains unknown which neural circuitries are involved. Thus, it is up to future studies to validate, whether the current results are able to improve the differential diagnosis of NMS and to determine a potential common functional deficit in the affective processing of sensory stimuli using functional imaging approaches.

Pendant les dernières 20 années, la transplantation allo-génique de cellules souches hématopoïétiques a connu un certain essor. Il y a en effet de plus en plus de donneurs potentiels, notamment grâce au développement de nouvelles procédures comme la transplantation de cellules souches haplo-identique proposée à Genève depuis 2013. Néanmoins, le soutien transfusionnel nécessaire à la réalisation de ces transplantations peut être un défi pour le centre de transfusion référent. Nous avons étudié différents facteurs afin d’évaluer leur impact sur l’incidence d’allo-anticorps anti-érythrocytaire en post-transplantation. Nous avons mis en évidence deux facteurs associés à la formation d’anticorps. L’incompatibilité ABO mineure et un donneur de CSH non apparenté HLA-incompatible seraient des facteurs associés au développement d’allo-anticorps anti-érythrocytaire.

Hintergrund: Es gibt Hinweise darauf, dass ein adäquates "anaboles hormonel- les Milieu" für die Mechanosensitivität/-transduktion/-reaktion des Knochengewe- bes von wesentlicher Bedeutung ist. Zielsetzung: Es sollte festgestellt werden, ob die Kombination einer Hormonthe- rapie (HT) mit körperlichem Training die isolierte Wirkung der HT auf die Kno- chenmineraldichte (BMD) der Lendenwirbelsäule (LWS) und des proximalen Femurs (FN) erhöht. Methoden: In einer umfassenden Literaturrecherche bis zum 28.04.2021 wurden Studien aus sechs Datenbanken eingeschlossen. Analog dem PRISMA-State- ment wurden kontrollierte Studien mit einer Dauer von mehr als sechs Monaten und drei Studienarmen eingeschlossen: (a) Hormontherapie (HT), (b) körperli- ches Training (E) und (c) die Kombination aus Hormontherapie und körperlichem Training (HT+E). Studien mit Medikamenten oder Krankheiten, welche auf die Knochenmineraldichte oder den Knochenstoffwechsel einen relevanten Einfluss haben, wurden ausgeschlossen. Die vorliegende Analyse wurde als Metaanalyse mit zufälligen Effekten durchgeführt. Ergebnismaße waren standardisierte Mittel- wertdifferenzen (SMD) für BMD-Änderungen an den LWS und FN. Ergebnisse: Unsere Suche ergab sechs geeignete Studien (n=585). Obwohl die Effekte der kombinierten Interventionsgruppen (HT+E) auf die Knochenmineral- dichte an LWS (SMD: 0,19, 95%-CI: -0,15 bis 0,53) und des FN (0,18, 95%-Cl: - 0,09 bis 0,44) im Vergleich zur isolierten HT-Gruppe ausgeprägter war, konnten keine signifikanten Unterschiede zwischen beiden Gruppen nachgewiesen wer- den. Wir beobachteten eine geringe (I2: 29%) oder mäßige (I2: 49%) Heterogeni- tät zwischen den Studien für FN oder LWS. Das Trichterdiagramm zeigte eine leichte (LWS) bis moderate (FN) Publikationsverzerrung. 1 2 Schlussfolgerung: Wir konnten keinen signifikanten Effekt von HT+E im Ver- gleich zu HT allein feststellen. Wir führen dieses Ergebnis zu einem großen Teil auf die unterschiedliche HT-Supplementierung und den hormonellen Status zu- rück. In Anbetracht der Tatsache, dass synergistische/additive Effekte zwischen HT und mechanischer Stimulation nur bei Hormoninsuffizienz zu erwarten sind, sollten weitere klinische Studien die endogene Östrogenproduktion im Ausgangs- zustand, aber auch die HT-Dosierung sorgfältiger berücksichtigen.

Die rheumatoide Arthritis (RA) ist die häufigste systemische Autoimmunkrankheit weltweit. Diese ist durch eine chronische Gelenkentzündung charakterisiert, welche zu einem pathologischen Knochenabbau führt, der zumindest teilweise auf die unverhältnismäßig starke Generierung und Aktivierung von knochenresorbierenden Osteoklasten zurückzuführen ist. Eine bisher zulassungsüberschreitende Therapie der RA ist die intravenöse Immunglobulin (IVIg)-Therapie, deren antientzündlicher Effekt bereits für ein murines Modell der entzündlichen Arthritis, das KRN-Serum Transfer Modell, nachgewiesen wurde. Vorarbeiten der Arbeitsgruppe von Professor Nimmerjahn konnten darüber hinaus die Bedeutung der Glykosylierung des Immunglobulin G (IgG) für diesen Effekt zeigen. Weitere Vordaten legen zudem nahe, dass IVIg auch eine knochenschützende Wirkung ausübt. Wie IVIg diesen Effekt vermittelt, blieb bisher jedoch unklar. Einerseits wurde der Effekt der verschiedenen IVIg-Glykovarianten auf die murine und humane Osteoklastogenese in vitro untersucht. Die in der Zellkultur differenzierten und mit den unterschiedlich glykosylierten Immunglobulinen behandelten Zellen wurden mittels mikrosko-pischer Analyse, eines fluoreszenzbasierendem Aktivitätsassays, Durchflusszytometrie und quantitativer real-time PCR untersucht. Andererseits wurde der in vivo Effekt von IVIg im KRN-Serum Transfer Mausmodell analysiert. Dazu wurden sowohl ein Scoring der klinischen Manifestationen der entzündlichen Arthritis vorgenommen als auch durchflusszytometrische Untersuchungen verschiedener Immunzellen des Blutes, des Knochenmarks, der Milz und der Gelenkspülungen sowie histologische Analysen relevanter Strukturen durchgeführt. In der vorliegenden Arbeit wurde gezeigt, dass IVIg die in vitro Osteoklastogenese hemmt, wobei dieser Effekt unabhängig von der Glykosylierung war. Unter Verwendung des KRN-Serum Transfer Modells konnte darüber hinaus in vivo gezeigt werden, dass IVIg unter entzündlichen Umständen scheinbar sowohl den Knochen als auch den Knorpel schützt. Wiederum wurde dazu keine Abhängigkeit von einer bestimmten Glykosylierung festgestellt. Während diese Wirkung unabhängig vom Rezeptor SignR1 zu sein scheint, weisen die vorliegenden Ergebnisse darauf hin, dass der inhibitorische FcγRIIB unerlässlich für den osteoklasteninhibierenden Effekt von IVIg ist. Die erzielten Ergebnisse konnten zum einen die hemmende Wirkung von IgG auf die Osteoklastogenese zeigen, zum anderen die Notwendigkeit des inhibitorischen Rezeptors FcγIIB für diesen Effekt herausstellen. Im immunkomplexabhängigen Modell der entzündlichen Arthritis scheint IVIg sowohl eine antiinflammatorische Wirkung als auch einen knochen- und knorpelschützenden Effekt hervorzurufen. Die Therapie mit IVIg könnte daher für Patienten mit rheumatoider Arthritis eine effektive und zugleich gut verträgliche immunmodulatorische Behandlungsoption darstellen.

Das Nebennierenkarzinom ist ein sehr selten auftretender Tumor. Mitotane ist derzeit das einzige zugelassene Medikament zur adjuvanten und palliativen Behandlung von betroffenen Patienten. Eine häufig beobachtete Nebenwirkung ist die Veränderung des Schilddrüsenstoffwechsels. Mithilfe des Nebennierenkarzinomregisters ENSAT konnten in die vorliegende Arbeit 129 Patienten eingeschlossen und deren Patientendaten retrospektiv ausgewertet werden. Somit konnte insbesondere die Frage des veränderten Schilddrüsenstoffwechsels in den Patientengruppen ohne Schilddrüsenmedikation und mit Medikation untersucht und ein möglicher Einfluss der Einnahme von Levothyroxin beantwortet werden. Bei der Auswertung der Patientendaten zeigte sich, dass eine isolierte fT4-Erniedrigung in beiden Patientengruppen sehr häufig auftritt (Gruppe ohne Schilddrüsen-Medikamente 60 %; Gruppe mit Schilddrüsenmedikamenten 57 %). Bei Auswertung der fT4-Werte war auffällig, dass Patienten mit einer erniedrigten fT4-Stoffwechsellage unter Mitotanetherapie, schon vor Therapiebeginn signifikant niedrigere Ausgangswerte aufwiesen (Patientengruppe mit Schilddrüsenmedikation 18,3 pmol/l vs. 15,65 pmol/l; Patientengruppe ohne Schilddrüsenmedikation 17,3 pmol/l vs. 14,75 pmol/l). Unter Mitotanetherapie konnte sowohl in den Gruppen mit erniedrigter fT4-Stoffwechsellage, als auch ohne isoliert erniedrigtes fT4 ein Absinken des fT4-Wertes beobachtet werden. Jedoch kam es nicht in jedem Fall zu einer Änderung des Schilddrüsenstoffwechsels mit der Stoffwechsellage „erniedrigtes fT4“. TSH und fT3 zeigten keine signifikante Veränderung in beiden Patientenkollektiven unter Mitotanetherapie. Da der Mitotanespiegel nur mit geringer, bzw. keiner Effektstärke mit dem fT4-Wert korrelierte, kann mithilfe der Höhe der Mitotaneplasmakonzentration keine definitive Vorhersage zur Entwicklung des fT4-Wertes gemacht werden. Mithilfe eines In-vitro-Experimentes konnte widerlegt werden, dass isoliert erniedrigtes fT4 aufgrund eines messtechnischen Fehlers im Labor entsteht. Eine durchgeführte, kontrollierte Levothyroxin-Gabe bei Patienten mit erniedrigter fT4-Stoffwechsellage zeigte, dass bei regelmäßiger Kontrolle der Schilddrüsenparameter und individueller Levothyroxin-Dosisanpassung eine Normalisierung des Schilddrüsenfunktionsstoffwechsels in 71 % erreicht werden konnte. Ein allgemeiner Behandlungsstandard konnte nicht erkannt werden, da der Bedarf an Levothyroxin sehr unterschiedlich war. Eine Anfangsdosis von 50 µg scheint empfehlenswert und sollte anschließend abhängig von den Laborwerten in den Verlaufskontrollen angepasst werden. Nach wie vor ist der Pathomechanismus, welcher zur isolierten fT4-Erniedrigung führt, nicht vollständig geklärt. Am wahrscheinlichsten erscheint eine Induktion von TBG durch Mitotane. Insgesamt zeigt diese Arbeit erstmals in einer großen Kohorte, wenn auch mit eingeschränkter Aussagekraft aufgrund der retrospektiven Erhebung, die Häufigkeit und Art und Weise der Veränderungen von Schilddrüsenfunktionstests unter einer Mitotanetherapie und ermöglicht so bei behandelnden Ärzten eine genauere Einschätzung der Relevanz dieser Nebenwirkung., Adrenal carcinoma is a very rare tumor. Mitotane is currently the only approved drug for the adjuvant and palliative treatment of affected patients. A frequently observed side effect is the change in thyroid metabolism. With the help of the adrenal cancer registry ENSAT, 129 patients were included in the present work and their patient data retrospectively evaluated. Thus, in particular, the question of altered thyroid metabolism in the patient groups without thyroid medication and with medication could be investigated and a possible influence of taking levothyroxine answered. The analysis of the patient data showed that isolated fT4 lowering occurs very frequently in both patient groups (group without thyroid drugs 60%; group with thyroid medication 57%). When evaluating the fT4 values, it was striking that patients with a decreased fT4 metabolic status under mitotane therapy had significantly lower baseline values even before the start of therapy (patient group with thyroid medication 18.3 pmol/l vs. 15.65 pmol/l; patient group without thyroid medication 17.3 pmol/l vs. 14.75 pmol/l). However, there was not always a change in thyroid metabolism with the metabolic state "decreased fT4". TSH and fT3 showed no significant change in either patient population on mitotane therapy. Since the mitotane level correlated with the fT4 value only with little or no effect size, no definitive prediction of the development of the fT4 value can be made using the level of the mitotane plasma concentration. With the help of an in vitro experiment, it was possible to refute that isolated decreased fT4 occurs due to a metrological error in the laboratory. Controlled levothyroxine administration in patients with decreased fT4 metabolism showed that with regular monitoring of thyroid parameters and individual levothyroxine dose adjustment, normalization of thyroid function metabolism could be achieved in 71%. A general standard of care could not be identified because the need for levothyroxine varied widely. An initial dose of 50 μg seems recommended and should then be adjusted depending on the laboratory values in the follow-ups. The pathomechanism leading to isolated fT4 degradation is still not fully understood. Most likely, an induction of TBG by mitotane appears. Overall, this work shows for the first time in a large cohort, albeit with limited significance due to the retrospective survey, the frequency and manner of changes in thyroid function tests under mitotane therapy and thus enables treating physicians to assess the relevance of this side effect.

Das Ziel des Projekts ist, den Zustand der Haut von Neurodermitis-Patienten bei verschiedenen Bedingungen und Belastungszuständen erfassen zu können. Dazu wurde ein Prototyp gefertigt, in den ein Mikrosensor zur Bestimmung der Umgebungsfeuchtigkeit, ein Controller mit Bluetooth zur Datenübertragung, sowie ein Lithium-Akku zur Energieversorgung verbaut wurden. The aim of the project is to be able to record the condition of the skin of neurodermatitis patients under different conditions and stress states. For this purpose, a prototype was manufactured in which a microsensor for determining the ambient humidity, a controller with Bluetooth for data transmission, and a lithium battery for power supply were integrated.

Hintergrund und Ziele: Zur verbesserten Diagnostik des Prostatakarzinoms wird die MRT-Sonographie-fusionierte Stanzbiopsie eingesetzt. MicroRNAs können als aussagekräftige Biomarker für die Diagnostik, Prognose und das Therapieansprechen beim Prostatakarzinom genutzt werden. Ziel dieser Studie ist es zu bewerten, ob die Einbeziehung der Expression ausgewählter microRNAs - zusätzlich zu den klinisch-pathologischen Parametern - einen Gewinn für die Prostatakarzinomdiagnostik bringt. Material und Methoden: In dieser Studie wurden 66 Patienten mit Verdacht auf das Vorliegen eines Prostatakarzinoms untersucht. Eine MRT-Sonographie-fusionierte Prostatastanzbiopsie sowie eine Blutentnahme wurden durchgeführt. Zusätzlich wurden die Ergebnisse des multiparametrischen MRTs sowie der PSA-Wert erfasst. Die Blutproben wurden mittels quantitativer Real-Time-PCR untersucht und die Expression ausgewählter miRNAs gemessen. Anschliessend wurden die ermittelten Daten zur Expression der miRNAs mit den Ergebnissen der Prostatastanzbiopsie und den MRT-Ergebnissen korreliert. Besonderes Augenmerk wurde hierbei darauf gelegt, ob die ausgewählten miRNAs im Blut von Patienten mit Prostatakrebs im Vergleich zu Nicht-Tumor- Patienten vermehrt oder vermindert exprimiert werden. Ergebnisse: Von den untersuchten miRNAs zeigte sich bei miR-486 eine statistisch signifikante (p = 0,046) Überexpression im Serum von Patienten mit einem Prostatakarzinom. Für die miRNA let-7c zeigte sich eine nicht signifikante (p = 0,059) Minderexpression bei Patienten mit vorliegendem Prostatakarzinom. Bei miR-375 fiel eine Überexpression bei Patienten mit aggressivem Prostatakarzinom (Gleason-Grade 8/9 ) auf, auch wenn insgesamt keine signifikante Überexpression bei Karzinompatienten detektiert werden konnte (p = 0,53). Bei den übrigen miRNAs fielen keine relevanten Unterschiede in der Expression zwischen Gesunden und Karzinompatienten auf. Die Analyse der MRT-Sonographie-fusionierten Prostatastanzbiopsie zeigte eine höhere Tumorfindungsrate bei den gezielten Stanzbiopsien gegenüber den ungezielten Biopsien (36% vs 14,3%). Zusätzlich zeigte sich bei den durch die gezielten Biopsien detektierten Karzinomen ein höherer Anteil von signifikanten Karzinomen (Gleason-Score 7a und höher) als bei den ungezielten Biopsien (70,9% vs 61,9%). Die Diagnose eine Prostatakarzinoms war im Basismodell (Einbeziehung der klinischen Daten, des PSA-Werts und der MRT-Ergebnisse) mit einer Sensitivität von 0,75 und einer Spezifität von 0,62 möglich. Unter Zuhilfenahme der miRNA-Expressionsprofile konnte die Vorhersagegenauigkeit bezüglich des Vorliegens eines Prostatakarzinoms auf eine Sensitivität von 0,79 und eine Spezifität von 0,66 verbessert werden. Schlussfolgerung: Aufgrund seiner signifikanten Überexpression bei Patienten mit Prostatakarzinom kann miR-486 einen potenziellen weiteren Baustein in der Diagnostik des Prostatakarzinoms darstellen. Weitere Untersuchungen mit einem größeren Patientenkollektiv sowie ein Studiendesign mit randomisierter Kontrollgruppe sind nötig, um die Vorteile dieser Methoden besser darstellen zu können. Objective: The MRI ultrasound fusion-guided biopsy was developed for improvement of diagnostics of prostate cancer. MicroRNAs can be applied as convincing biomarkersvfor diagnostics, prognosis and therapy response in prostate cancer. The aim of this study was to assess, if the inclusion of special microRNA expression levels – in addition to clinico-pathological parameters – could provide a benefit in prostate cancer diagnostics. Material and Methods: In this study, 66 patients with suspicion of prostate cancer were examined. MRI/ultrasound fusion-guided biopsies were performed and blood samples were collected. Additionally results of multiparametic MRI and PSA scores were gathered. Next, the blood samples were analysed for specific miRNA expression levels using quantitative realtime PCR. Data of miRNA expression, biopsy and MRI results was correlated for statistical evaluation. Special focus was given on the expression levels of the chosen miRNAs in patients with prostate cancer. Results: Among the investigated miRNAs, miR-486 showed statistically significant overexpression in serum of patients with prostate cancer (p=0.046). MicroRNA let-7c showed a nonsignificant reduced expression in patients with prostate cancer (p=0.059). Although, there was no significant overexpression for miR-375 overall observable, overexpression in patients with aggressive prostate cancer (Gleason Grade 8 and 9) stood out. No relevant differences in terms of expression in healthy patients and prostate carcinoma patients could be detected for the remaining micoRNAs. Analysis of MRI/ultrasound fusion-guided biopsy showed significant higher hit rates compared to untargeted biopsies (36% versus 14.3%). The percentage of significant carcinoma (Gleason 7a and higher) turned out to be higher for targeted biopsies in comparism to untargeted biopsied (70.9% versus 61.9%). The expression profile of microRNAs improved predicition accuracy of prostate cancer. Prediction of the diagnostic outcome at including clinical data, PSA score und MRI (basis model) results in a sensitivity of 0.75 and a specificy of 0.62. With additional consideration of microRNA expression profiles (miRNA-supplemented basis model), sensitivity and specificy would improve to 0.79 and 0.66, respectively. Conclusion: The mRNA-486 can be a potential tumor marker and a helpful component in diagnostics of prostate cancer. Further investigation, especially with higher numbers of patients and standardized conditions are necessary to further investigation of this method.

Zellstress in Form von lytischer Herpes-simplex-Virustyp-1-Infektion, Hitze und Salzstress führt dazu, dass die RNA-Polymerase II über das 3'-Ende von manchen Genen hinaus transkribiert. Dies geht bei Herpes-simplex-Virustyp-1-Infektion teilweise mit offenem Chromatin nach dem 3'-Ende einher. In dieser Arbeit wurden verschiedene Methoden getestet, um diese Effekte genomweit zu eruieren. Dabei wurden die Peak-Caller ATAC-seq-Pipeline, F-Seq, Hotspots und MACS2 getestet sowie mit der Hilfsgröße „downstream Open Chromatin Regions“ gearbeitet. Weiterhin wurde das R-Skript „Pipeline for ATAC-seq and 4sU-seq plotting“ entwickelt, mit dem sich die Dynamik der oben beschriebenen Effekte zeigen lässt: Die Offenheit des Chromatins ist bei Herpesinfektion zusätzlich zur Erhöhung nach dem 3'-Ende generell erhöht. Die Transkription der RNA-Polymerase II über das 3'-Ende hingegen nimmt nach 75k Basenpaaren rapide ab. Die Ergebnisse des R-Skripts im Bezug auf Salz und Hitzestress decken sich mit vorbeschriebener Literatur, in der gezeigt wurde, dass eine Erhöhung der Offenheit des Chromatins nach dem 3'-Ende nicht stattfindet., Cell stress in the form of lytic herpes simplex virus type 1 infection, heat, and salt stress causes RNA polymerase II to transcribe beyond the 3' end of some genes. This is sometimes associated with open chromatin beyond the 3' end in herpes simplex virus type 1 infection. In this work, several methods were tested to elicit these effects genome-wide. The peak caller ATAC-seq-Pipeline, F-Seq, hotspots, and MACS2 were tested, and the auxiliary variable "downstream open chromatin regions" was used. Furthermore, the R script "Pipeline for ATAC-seq and 4sU-seq plotting" was developed to show the dynamics of the effects described above: Chromatin openness is generally increased in herpes infection in addition to being increased after the 3' end. In contrast, RNA polymerase II transcription across the 3' end decreases rapidly after 75k base pairs. The results of the R-script in relation to salt and heat stress are consistent with pre-described literature showing that an increase in chromatin openness after the 3' end does not occur.

In the past decade, substantial advances have been made in understanding the biology of tumour-associated macrophages (TAMs), and their clinical relevance is emerging. A particular aspect that is becoming increasingly clear is that the interaction of TAMs with cancer cells and stromal cells in the tumour microenvironment enables and sustains most of the hallmarks of cancer. Therefore, manipulation of TAMs could enable improved disease control in a substantial fraction of patients across a large number of cancer types. In this Review, we examine the diversity of TAMs in various cancer indications and how this heterogeneity is being revisited with the advent of single-cell technologies, and then explore the current knowledge on the functional roles of different TAM states and the prognostic and predictive value of TAM-related signatures. We also review agents targeting TAMs that are currently being or will soon be tested in clinical trials, and how manipulations of TAMs can improve existing anticancer treatments. Finally, we discuss how TAM-targeting approaches could be further integrated into routine clinical practice, considering a precision oncology approach and viewing TAMs as a dynamic population that can evolve under treatment pressure.

Hintergrund und Ziele Die akute Graft-versus-Host-Disease (aGvHD) ist eine ernstzunehmende Erkrankung mit hoher Morbidität und Mortalität, welche nach Stammzelltransplantation (SZT) auftreten kann. Die aktuell benötigten starken immunsuppressiven Therapieansätze der aGvHD greifen aber auch den Graft-versus-Leukaemia (GvL) Effekt an, welcher das Rückgrat der eigentlich zur Therapie durchgeführten Stammzelltransplantation ist. Ein neuer vielversprechender Therapieansatz bei chronisch entzündlichen Darmerkrankungen visiert die transendotheliale Migration (TEM) von Immunzellen an. Zusätzlich wurde gezeigt, dass mit Vedolizumab die aGvHD behandelt werden könnte, indem es die Migration von Monozyten in lymphatisches Gewebe des Darms verhindert. Basierend auf diesen Beobachtungen und der ausschlaggebenden Rolle von Monozyten bei der GvHD haben wir spezifisch die TEM von Monozyten nach SZT in die Leber ins Auge gefasst, einem Organ, welches mit einem schlechten Ausgang im Falle einer GvHD assoziiert ist. Methoden (Patienten, Material und Untersuchungsmethoden) Um die Rolle der TEM bei aGvHD der Leber zu untersuchen, wurde ein spezielles Transmigrationsassy, das sogenannte Flow Assays, genutzt. Für die Flow Assays wurden Microcapillary slides mit Human sinosoidal endothelial cells (HSEC) ausgestattet. Mit dem Flow Assay können die in vivo Prozesse genauer dargestellt werden als mit den klassischen statischen Assays. Bemerkenswerterweise kann in diesem Assay der ganze Prozess der TEM visualisiert werden (Adhäsion an die apikale Seite des Endothels, die tatsächliche Transmigration und die abgeschlossene TEM auf der basolateralen Seite). Hierfür wurden CD14+ Monozyten über MACS-Isolation aus Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) von 10 unterschiedlichen Stammzelltransplantierten und zusätzlich gesunden Individuen gewonnen. In einem weiteren Schritt wurden Monozyten mit Donorlymphozyten kokultiviert, in einigen Experimenten auch mit „transwell“-Einsätzen, um direkten Zell-Zell-Kontakt zu vermeiden. Des Weiteren wurden hämatopoetischen Stammzellen (HSC) mit Monozyten-Differenzierungsmedium kultiviert und in ihrer transendothelialen Migration untersucht. Die Zellen wurden aufgrund ihrer emittierenden Fluoreszenz und ihrem Streulicht mit durchflusszytometrischen Analysen charakterisiert. Ergebnisse und Beobachtungen Zunächst verglichen wir Monozyten von aGvHD-Patienten mit Monozyten von gesunden Individuen, welche im Fall einer aGVHD eine erhöhte TEM zeigten. Zusätzlich analysierten wir, ob diese Beobachtung spezifisch für Monozyten bei aGvHD ist. Hierfür wurden Monozyten von Stammzellempfängern mit oder ohne klinische Anzeichen für eine aGvHD mit einer monozytären Zelllinie (THP-1) verglichen. Es zeigte sich, dass Monozyten von Stammzellempfängern unabhängig von einer aGvHD ein ausgeprägteres Potenzial zeigten, über das hepatische Endothel zu wandern als THP-1. Dennoch schienen Monozyten von Stammzellempfängern mit aGvHD stärker an die HSECs zu adhärieren als Monozyten von Stammzellempfängern ohne aGvHD. Basierend auf diesen Befunden spekulierten wir, ob eine Interaktion mit Spenderlymphozyten (DLI) die Ursache für die erhöhte TEM von Monozyten bei Stammzellempfängern sein könnte. Um diese Hypothese zu testen, untersuchten wir die TEM von Monozyten gesunder Personen nach Kokultur mit DLIs. Dabei beobachteten wir, dass mit DLI kokultivierte Monozyten eine erhöhte TEM über HSECs zeigten. Dies scheint spezifisch für DLIs zu sein, da es zu keiner verstärkten Transmigration kam, wenn Monozyten mit CD3+-Zellen kokultiviert wurden, die von nicht verwandten Spendern gewonnen wurden. Erwähnenswert ist, dass diese erhöhte TEM der Monozyten durch DLIs kontaktabhängig war. Darüber hinaus haben wir gezeigt, dass Monozyten, die in vitro aus hämatopoetischen Spenderstammzellen differenziert wurden, im Vergleich zu THP-1 ein erhöhtes Transmigrationspotenzial aufwiesen. Schlussfolgerung und Diskussion In dieser Doktorarbeit zeigten wir, dass Monozyten nach Mobilisierung mit G-CSF und allogener Stammzelltransplantation ein erhöhtes Potenzial besitzen, in die Leber zu transmigrieren. Obwohl Monozyten von aGvHD-Patienten eine erhöhte Adhärenz an HSECs zeigten, galt dies nicht für die abgeschlossene TEM im Vergleich zu Monozyten von Stammzellempfängern ohne aGvHD. Interessanterweise konnte in unseren flow-assays eine erhöhte TEM in das hepatische Kompartiment gezeigt werden, wenn Monozyten von gesunden Individuen, die keiner G-CSF-Mobilisierung unterzogen wurden, mit DLIs, die alle Arten von Lymphozyten (B-Zellen, T-Zellen usw.) enthielten, kokultiviert wurden. Zusammenfassend zeigte diese Doktorarbeit, dass die Interaktion von Monozyten mit Lymphozyten des Spenders nach allogener SZT eine Rolle bei der aGVHD spielen könnte.

Background: Atrial flutter (AFL) is a common supraventricular arrhythmia, that can both massively impair quality of life due to severe symptoms and significantly increase the risk of thromboembolic events. Radiofrequency ablation of the cavotricuspid isthmus (CTI) in the right atrium is a well-established, efficient and curative treatment of typical AFL. Due to the inter-individually different anatomy, some procedures may be challenging and hence reduce the otherwise high procedural success and may lead to increased fluoroscopy times. Therefore, optimizing procedural strategies to improve ablation success is necessary. Minielectrode (ME) catheter technology may facilitate voltage-guided ablation by high-resolution electroanatomic mapping (HR-EAM) and precisely targeted energy application. Objective and methods: To evaluate the performance of ME technology for zero-fluoroscopy substrate-guided CTI ablation, 82 patients underwent near zero-fluoroscopy substrate-guided CTI ablation using an 8-mm tip catheter with 3 MEs in its tip. To make the images comparable and reproducible, the isthmus was divided into three longitudinal and five transverse segments, resulting in a grid system with 15 sections. Voltages were measured, plotted, and compared with both bipolar and ME. Procedural data were compared with a historical control group of 92 patients who had comparable demographic characteristics and were treated by linear ablation technique. Ablation success was considered to be persistent bidirectional conduction block across the CTI. Results: Using the substate-guided ablation strategy, ablation duration (336 ± 228 vs. 649 ± 409 s, p < 0.001), energy delivered (14.2 ± 10.6 vs. 28.6 ± 19.6 kJ, p < 0.001), and procedure duration (60.8 ± 33.8 min vs. 76.3 ± 40.9 min, p = 0.008) were significantly reduced compared to the linear technique. At the same time, ablation success remained at a high level (97.6% vs. 94.6%, p = 0.449). In addition, more precise electroanatomic mapping limited ablation to only 22.7% of the isthmus region. ME technology identified an average of 2.03 ± 0.88 conductive structures with a diameter of 5.35 ± 1.98 mm. A higher number of ME-detected bundles and a larger channel diameter correlated with increased ablation requirements. A total of 97.6% of the voltage-guided and 88.0% of the linear ablations could be performed without X-rays. In the remaining procedures, fluoroscopy duration was minimal at 0.1 ± 1.2 and 0.3 ± 1.2 min, respectively (p = 0.018). Conclusion: Substrate-guided ablation of CTI using ME and HR-EAM technology is safe, feasible, and was superior to the linear strategy in procedural parameters when compared with a historical control group. Improved identification of conduction pathways correlates with immediate ablation efficacy. The electroanatomic subdivision of the CTI into 15 segments was feasible and may improve the understanding and comparability of anatomic variants and ablation results. In addition, it has been demonstrated that in the vast majority of cases, regardless of the ablation strategy, zero-fluoroscopy procedure can be safely performed. Hintergrund und Ziele: Vorhofflattern (VHFL) ist eine häufige supraventrikuläre tachykarde Herzrhythmusstörung, die sowohl durch schwerwiegende Symptomatik die Lebensqualität massiv beeinträchtigen als auch das Risiko für thromboembolische Infarkte deutlich erhöhen kann. Die Radiofrequenzablation des cavotrikuspidalen Isthmus (CTI) im rechten Vorhof ist eine effiziente Therapieoption bei typischem VHFL. Aufgrund der teils komplexen Anatomie stellen einzelne Prozeduren große Herausforderungen dar, was den ansonst guten Therapieerfolg schmälert und unter Umständen zu längeren Durchleuchtungszeiten führt. Daher ist eine Optimierung des aktuellen Ablationsverfahrens nötig. Dazu wurde neben der bisher üblichen linearen Strategie ein potentialorientiertes Verfahren entwickelt, welches auf die spezifische Ablation von individuell variablen, trabekulär verlaufenden Leitungsbahnen innerhalb des CTI abzielt. Mithilfe von einem auf dieses Verfahren optimierten Ablationskatheter, der an der Katheterspitze drei Mini-Elektroden (ME) enthält, ist eine präzisere Signalableitung und somit höher auflösende Darstellung der Isthmusregion als bei konventionellen Kathetern zu erwarten. Die Visualisierung der abgeleiteten Potentiale sowie die Darstellung des Katheters kann mittels dreidimensionaler elektroanatomischer Mapping-Systeme (3D-EAMS) erfolgen und damit die Verwendung von Röntgendurchleutung reduzieren bis eliminieren. Diese Studie soll periprozedurale Daten von Patienten mit CTI Ablation bei typischem VHFL untersuchen. Dabei soll der Einsatz der ME-Technologie bei potentialorientierter Ablation mit dem konventionellen Verfahren verglichen werden, um eine mögliche Optimierung der Ablationstherapie zu evaluieren. Außerdem soll dabei die Evidenz für die sichere Verwendung eines 3D-EAMS und die Durchführung der gesamten Prozedur ohne Röntgenstrahlung untermauert werden. Die hochauflösende Darstellung des CTI mittels ME soll mit jener durch konventionelle bipolare Elektroden verglichen werden, wobei analysiert werden soll, ob sich durch die detailliertere Abbildung Vorteile im Ablationsprozess ergeben. Methoden: Um die potentialorientierte Ablationsstrategie in Kombination mit hochauflösenden 3D-EAMS mit der konventionellen linearen Technik bezüglich Effektivität, Sicherheit und Röntgenexposition zu vergleichen, wurden 82 konsekutiv eingeschlossene Patienten in einer monozentrischen Studie mittels neuartigem ungekühlten Ablationskatheter, welcher an seiner Spitze drei ME besitzt (IntellaTip MiFiTM XP 8-mm, Boston Scientific), nach den Prinzipien der potentialorientierten Methode behandelt. Dabei wurden hochauflösende Abbildungen des CTI mithilfe eines 3D-EAMS (EnSite PrecisionTM Cardiac Mapping System, Abbott) sowohl mit den konventionellen, bipolaren Elektroden als auch mit den ME angefertigt. Um die Abbildungen vergleichbar und reproduzierbar zu machen, wurde der Isthmus in drei longitudinale sowie fünf transversale Segmente unterteilt, woraus ein Rastersystem mit 15 Sektionen resultierte. Prozedurale Daten wurden einer historischen Kontrollgruppe von 92 Patienten, welche vergleichbare demographische Charakteristika aufwiesen und mittels linearer Ablationstechnik behandelt wurden, gegenübergestellt. Als Ablationserfolg wurde ein persistierender bidirektionaler Leitungsblock über den CTI gewertet. Ergebnisse und Beobachtungen: Unter Verwendung der potentialorientierten Ablationsstrategie konnten im Vergleich zur linearen Technik die Ablationsdauer (336 ± 228 vs. 649 ± 409 s, p < 0,001), die abgegebene Energie (14,2 ± 10,6 vs. 28,6 ± 19,6 kJ, p < 0,001) sowie die Dauer des gesamten Eingriffs (60,8 ± 33,8 min vs. 76,3 ± 40,9 min, p = 0,008) deutlich reduziert werden. Dabei blieb der Ablationserfolg auf hohem Niveau (97,6% vs. 94,6%, p = 0,449). Zudem konnte durch präzisere elektroanatomische Aufzeichnung die Ablation auf nur 22,7% der Isthmusregion begrenzt werden. Durch die ME-Technologie wurden durchschnittlich 2,03 ± 0,88 leitende Strukturen mit einem Durchmesser von 5,35 ± 1,98 mm identifiziert. Je mehr dieser Strukturen durch die ME detektiert wurden und je breiter deren Durchmesser war, desto aufwändiger gestaltete sich die Ablation bezüglich Dauer und notwendiger Energieabgaben. 97,6% der potentialorientierten sowie 88,0% der linearen Ablationen konnten ohne Röntgenstrahlung durchgeführt werden. In den übrigen Eingriffen war die Durchleuchtungsdauer mit 0,1 ± 1,2 bzw. 0,3 ± 1,2 min (p = 0,018) minimal. Schlussfolgerung: Die potentialorientierte Ablation des CTI mithilfe von ME und hochauflösender 3D-Mapping-Technologie ist sicher, praktikabel und war im Vergleich mit einer historischen Kontrollgruppe der linearen Strategie in prozeduralen Parametern überlegen. Die verbesserte Identifikation von Leitungsbahnen kann zu einer effizienteren Ablationsbehandlung führen. Die Unterteilung des Isthmus in 15 Sektionen ist zweckmäßig und kann das Verständnis sowie die Vergleichbarkeit von anatomischen Varianten innerhalb der Isthmusregion verbessern. Zudem konnte nachgewiesen werden, dass in der überwiegenden Mehrzahl der Fälle, ungeachtet der Ablationsstrategie, die Prozeduren mithilfe von moderner 3D-EAMS strahlungsfrei und gleichzeitig sicher durchgeführt werden können. Des Weiteren bildet diese Studie die Basis für eine aktuell laufende, prospektive, randomisiert-kontrollierte Studie, in welcher die Ergebnisse bestätigt und somit die Effizienz für eine grundlegende Änderung der Ablationsstrategie geschaffen werden soll.

Fabry Disease (FD) is a genetic lysosomal storage disorder based on mutations in the gene encoding α-Galactosidase A (α-GalA) leading to accumulation of globotriaosylceramide (Gb3). Missense mutations induce an amino acid exchange (AAE) in the α-GalA. Pain is a predominant symptom in FD and the pathophysiology is unclear. Skin punch biopsies were obtained from 40 adult FD patients and ten healthy controls and dermal fibroblast cultures were generated for cell culture experiments to investigate Gb3 load, gene and protein expression patterns and ion channel activity. The 3D-structure of α-GalA was downloaded into Pymol Graphics System and the AAE was depicted and located in order to investigate the correlation between the AAE location type in the α-GalA and the clinical FD phenotype. FD dermal fibroblasts showed high Gb3 load depending on treatment interval and expressed Kca1.1 channels. Activity was reduced in FD cells at baseline, but increased over-proportionately upon Gb3-cleavage by enzyme replacement therapy. Gene and protein expression of Kca1.1 was increased in FD cells. FD dermal fibroblasts showed higher gene expression of Notch1 and several cytokines. Further, it was shown that three different AAE location types can be differentiated: mutations in the active site (‘active site’), those buried in the core of α-GalA (‘buried’) and those at another location, mostly on the protein surface (‘other’). FD patients carrying active site or buried mutations showed a severe clinical phenotype with multi-organ manifestation and early disease onset. Patients with other mutations were less severely affected with oligo-organ manifestation sparing the nervous system and later disease onset. These results show that dermal fibroblasts may be involved in FD-associated pain and that stratification of FD patients carrying missense mutations by AAE location type may be an advantageous parameter that can help in the management of FD patients., M. Fabry ist eine genetisch bedingte lysosomale Speichererkrankung aufgrund von Mutationen im Gen der α-Galaktosidase A (α-GalA) mit Ablagerung von Globotriaosylceramid (Gb3). Missense-Mutationen führen zum Austausch einer Aminosäure (ASA) in der α-GalA. Schmerz ist ein häufiges Symptom, dessen Pathophysiologie unklar ist. Bei 40 Patient*innen mit M. Fabry sowie zehn Kontrollprobanden wurde eine Hautstanzbiopsie durchgeführt und zur Kultivierung von dermalen Fibroblasten verwendet, um den Gb3-Gehalt, Gen- und Proteinexpressionsmuster und Ionenkanalaktivität zu untersuchen. Zudem wurde die 3D-Struktur der α-GalA in Pymol Graphics System geladen und der Ort des ASA dargestellt, um den Zusammenhang zwischen dem ASA in der α-GalA und dem klinischen Phänotypen zu untersuchen. Es zeigte sich, dass Fabry-Fibroblasten erhöhte Gb3-Ablagerungen beinhalten, abhängig von der Zeit zwischen Enzymersatztherapie (ERT) und Biospieentnahme, sowie Kca1.1 Kanäle, deren Funktion in Patientenzellen unter Normalbedingungen reduziert war, der jedoch eine überproportionale Aktivitätszunahme nach Gb3-Abbau mittels ERT zeigte. Die Gen- und Proteinexpression des Kanals war in Fabry-Zellen erhöht. Fabry-Zellen wiesen eine erhöhte Genexpression von Notch1 sowie mehrerer Zytokine auf. Zudem zeigte sich, dass es drei verschiedene ASA Gruppen gab: Mutationen im aktiven Zentrum („active site“), in der Tiefe des Enzyms („buried“) und an anderen Orten, meist an der Oberfläche („other“). Patient*innen mit active site- oder buried-Mutationen zeigten einen schweren Phänotypen mit Multi-Organbeteiligung und frühem Krankheitsbeginn. Patient*innen mit other-Mutationen zeigten eine Beteiligung von wenigen Organen ohne Nervensystem und späteren Krankheitsbeginn. Es zeigt sich, dass dermale Fibroblasten zu Schmerz bei M. Fabry beitragen können und die Einteilung von Patient*innen mit M. Fabry-Missense Mutationen anhand des Ortes des ASA ein lohnender Parameter bei der Betreuung der Patient*innen sein kann.

Die maligne Transformation von Zellen ist oftmals durch die Reaktivierung von Signalkaskaden charakterisiert, die während der frühen Embryogenese eine tragende Rolle in der Entwicklung spielen. Hierbei beobachtet man vor allem häufig, dass Transkriptionsfaktoren, die hohe Proliferationsraten begünstigen, fehlreguliert vorliegen. Melanozyten, die pigmentbildenden Zellen der Haut, führen bei einer Entartung zur Entstehung des malignen Melanoms. Die embryonalen Vorläuferzellen von Melanozyten, Melanoblasten, entstammen der Neuralleiste und teilen sich mit Schwann-Zellen, hochspezialisierten neuralen Zellen des peripheren Nervensystems, den gleichen embryonalen Zellvorläufer. Für dessen frühembryonale Entwicklung und Differenzierung sind verschiedene Transkriptionsfaktoren essenziell, die häufig neben spezialisierter Signalgebung zur Festlegung des jeweiligen Zellschicksals auch stammzellähnliche Funktionen begünstigen. Zu einem dieser Transkriptionsfaktoren gehört EGR2 (Early growth response 2). In der vorliegenden Arbeit wurde gezeigt, dass EGR2 sowohl in Melanomzelllinien als auch in einer Reihe verschiedener Gewebeproben des malignen Melanoms im Vergleich zu normalen epidermalen Melanozyten (NHEM) und Normalhautproben signifikant überexprimiert vorliegt. Es wurde weiter gezeigt, dass diese erhöhte Expression für die hohen Proliferationsraten der Melanomzelllinien mitverantwortlich ist. Ein siRNA-vermittelter knock down von EGR2 in Melanomzellen führte zu einer signifikant verringerten Proliferations- und Koloniebildungsjedoch nicht zu erhöhter Apoptoserate der Zellen. Durch Zielgenanalysen konnte weiter bewiesen werden, dass im malignen Melanom DGAT2 (Diacylglycerol-O-Acyltransferase 2) als ein direktes Zielgen von EGR2 fungiert. Das DGAT2-Enzym ist eines der beiden Isozyme, die die finale Biosynthese von Triglyceriden aus Diglyceriden und Acyl-Coenzym A katalysieren. Konsequenterweise konnte nachgewiesen werden, dass auch in Melanomzelllinien vermehrt Triglyceride gebildet werden. Es wurde weiter gezeigt, dass diese Triglyceridakkumulation Ursache für die hohen Proliferations- und Koloniebildungsraten ist, indem in funktionellen Assays der Triglyceridgehalt der Zellen moduliert wurde. In einem weiteren Schritt konnte bewiesen werden, dass ein hoher Triglyceridgehalt in Melanomzellen dazu führt, dass die tumorprotektive Wirkung von PML (promyelocytic leukemia) verloren geht und dass dadurch tumorigene Zellzykluseffektoren wie Cyclin D1 und AKT vermehrt exprimiert werden. Dies führt letztlich dazu, dass Zellzyklus-Kontrollpunkte umgangen werden und Melanomzellen vermehrt aus der G1-Phase des Zellzyklus in die S-Phase eintreten. Da in Situationen hohen Triglyceridgehalts vermehrt Lipid-Tröpfchen im Nukleus der Melanomzellen auftreten, konnte mittels Immunfluoreszenzanalysen und konfokalen 2-Photon- Mikroskopieaufnahmen bewiesen werden, dass PML triglycerid-abhängig abgebaut wird. Zur Überprüfung der Hypothese, dass die E3-Ubiquitin-Ligase E6AP auf der Oberfläche der nukleären Lipid-Tröpfchen akkumuliert und dadurch den proteasomalen Abbau von PML durch eine Kolokalisation mit dem nuklären PML-Protein initiiert, wurden Ubiquitinierungs- und Immunfluoreszenzassays durchgeführt. Diese Experimente zeigten, dass E6AP das PMLProtein triglycerid-abhängig ubiquitiniert. Weiterhin konnte bewiesen werden, dass das PML-Protein in E6AP-knock down Melanomzellen akkumuliert und dass dieser Effekt von Lipid-Tröpfchen abhängig ist. In dieser Doktorarbeit konnte eine neue Signalkaskade aufgedeckt werden, die entscheidend bei der Entstehung und der Progression des malignen Melanoms beteiligt ist und die verschiedene Komponenten umfasst, die therapeutische Angriffspunkte darstellen könnten.

The effect of levothyroxine (LT4) therapy for subclinical hypothyroidism (SHypo) on appendicular bone geometry and volumetric density has so far not been studied. In a nested study within the randomized, placebocontrolled Thyroid Hormone Replacement for Subclinical Hypothyroidism (TRUST) trial, we assessed the effect of LT4 therapy on bone geometry as measured by peripheral quantitative computed tomography (pQCT). In the TRUST trial, community-dwelling adults aged >= 65 years with SHypo were randomized to LT4 with dose titration vs. placebo with mock titration. We analyzed data from participants enrolled at the TRUST site in Bern, Switzerland who had bone pQCT measured at baseline and at 1 to 2 years follow-up. The primary outcomes were the annual percentage changes of radius and tibia epi- and diaphysis bone geometry (total and cortical crosssectional area (CSA) and cortical thickness), and of volumetric bone mineral density (bone mineral content (BMC) and total, trabecular and cortical volumetric bone mineral density (vBMD)). We performed linear regression of the annual percentage changes adjusted for sex, LT4 dose at randomization and muscle crosssectional area. The 98 included participants had a mean age of 73.9 (+/- SD 5.4) years, 45.9% were women, and 12% had osteoporosis. They were randomized to placebo (n = 48) or LT4 (n = 50). Annual changes in BMC and vBMD were similar between placebo and LT4-treated groups, without significant difference in bone geometry or volumetric bone mineral density changes, neither at the diaphysis, nor at the epiphysis. For example, in the placebo group, epiphyseal BMC (radius) decreased by a mean 0.2% per year, with a similar decrease of 0.5% per year in the LT4 group (between-group difference in %Delta BMC 0.3, 95% CI -0.70 to 1.21, p = 0.91). Compared to placebo, LT4 therapy for an average 14 months had no significant effect on bone mass, bone geometry and volumetric density in older adults with subclinical hypothyroidism. Trial registration: The trial was registered on ClinicalTrials.gov numbers NCT01660126 (TRUST Thyroid trial) and NCT02491008 (Skeletal outcomes).

Objective To estimate the extent of and the reasons for ineligibility in randomized controlled trials (RCTs) of SSc patients included in the EUSTAR database, and to determine the association between patient’s features and generalizability of study results. Methods We searched Clinicaltrials.gov for all records on interventional SSc-RCTs registered from January 2013 to January 2018. Two reviewers selected studies, and information on the main trial features were retrieved. Data from 8046 patients having a visit in the EUSTAR database since 2013 were used to check patient’s eligibility. The proportion of potentially eligible patients per trial, and the risk factors for ineligibility were analysed. Complete-, worst- and best-case analyses were performed. Results Of the 37 RCTs included, 43% were conducted in Europe, 35% were industry-funded, and 87% investigated pharmacological treatments. Ninety-one percent of 8046 patients included could have participated in at least one RCT. In complete-case analysis, the median [range] proportion of eligible patients having the main organ complication targeted by each study was 60% [10–100] in the overall sample of trials, ranging from 50% [32–79] for trials on skin fibrosis to 90% [34–77] for those targeting RP. Among the criteria checked, treatment- and safety-related but not demographic were the main barriers to patient’s recruitment. Older age, absence of RP, and lower mRSS were independently associated with the failure to fulfill criteria for any of the included studies. Conclusions Patient’s representativeness in SSc-RCTs is highly variable and is driven more by treatment- and safety-related rather than demographic criteria.

Im Rahmen dieser pro- und retrospektiven Auswertung wurde die kongenitale Hüftdysplasie in der U2 untersucht. Insgesamt bezog sich das Patientenkollektiv auf 2883 Patienten (retrospektiv). Aus diesem Patientenkollektiv wurden die Sorgeberechtigten von 57 Graf IIa-Kindern mit einem Fragebogen befragt (prospektiv). Es wurden zwei Fragestellungen formuliert. 1. Die kongenitale Hüftdysplasie in der U2: Stellt die Graf IIa-Hüfte eine Therapieindikation dar oder ist das bis dato abwartende Prozedere zu bevorzugen? 2. Wie viele der pathologischen behandlungsbedürftigen Hüftgelenke (Graf IIc / D / IIIa / IV) wurden durch die U2 diagnostiziert? Anhand der in dieser Arbeit erhobenen Daten stellt die Graf IIa-Hüfte keine Therapieindikation in der U2 dar. Insgesamt erfüllten 51 der 57 Patienten (89.5 %) die Kriterien einer regelrechten Hüftreifung. Im Übrigen wurde bei sechs Patienten (10.5 %) eine Intervention durchgeführt. Bei Kindern mit einer Anomalie wurde in 50 % der Fälle eine Therapie begonnen (p= 0.026). Mögliche Einflussfaktoren wie die Beckenendlage (p= 0.999), der Gemini (p= 0.999) und die Dysplasie (p= 0.026) waren bezüglich einer Intervention nicht signifikant. Ebenfalls wurde eine ablehnende Signifikanz hinsichtlich einer ausschließlich rechtsseitigen (p= 0.351) bzw. linksseitigen (p= 0.689) reifungsverzögerten IIa-Hüften gezeigt. Unter Berücksichtigung der Geschlechterverteilung zeigte sich bei Patienten mit einer regelrechten Hüftreifung (p= 0.611) bzw. Intervention (p= 0.611) keine Signifikanz. Im retrospektiven Teil erfüllten zwei (0.07 %) der 2883 Patienten die Kriterien einer pathologischen behandlungsbedürftigen Hüfte. Aufgrund der erbrachten Ergebnisse dieser Arbeit lässt sich zusammenfassen, dass „Breit-Wickeln“ ein vielversprechendes Konzept zur Versorgung von reifungsverzögerten Graf IIa-Hüften nach der U2 ist. Bestimmte Risikofaktoren zeigten - womöglich aufgrund der geringen Fallzahl - keinen Einfluss hinsichtlich einer Intervention. Graf IIa-Hüften mit einer Anomalie sollten jedoch nach der ersten Ultraschalluntersuchung engmaschig weiter kontrolliert und gegebenenfalls behandelt werden.

Hintergrund und Ziele: Psychogene nichtepileptische Anfälle (PNEA) können epileptischen Anfällen semiologisch sehr ähnlich sein. Jedoch finden sich dabei keine elektrophysiologischen Veränderungen der kortikalen Aktivität. Stattdessen liegen häufig psychische Faktoren zugrunde. Insbesondere zum langfristigen Outcome gibt es bisher wenige Daten. Ziele dieser Analyse waren die Untersuchung der Krankheitsaktivität, Lebensqualität sowie ökonomischen und sozialen Situation der Patienten im Langzeitverlauf und das Finden von prognostischen Faktoren. Methoden: Zwischen Juni 2016 und Februar 2017 wurden alle Patienten kontaktiert, bei denen im Zeitraum von März 2000 bis April 2016 im Rahmen einer Video-EEG-Untersuchung am Epilepsiezentrum Erlangen PNEA diagnostiziert wurden. Die Datenerhebung erfolgte anhand eines strukturierten Fragebogens. Ergänzend wurden weitere klinische Daten, vor allem bezüglich Nebendiagnosen, durch Einsicht von Arztbriefen erhoben. Die primäre Outcome-Variable war Episodenfreiheit. Patienten wurden als episodenfrei definiert, wenn bei ihnen in den 12 Monaten vor dem Interview keine PNEA-Episoden aufgetreten waren. Mögliche Prädiktoren und sekundäre Outcome-Variablen wurden mit Episodenfreiheit korreliert. Weiterhin wurde eine multivariate binär-logistische Regressionsanalyse durchgeführt, in welche sämtliche relevante Parameter eingeschlossen wurden, die in der univariaten Analyse zumindest einen Trend (p

CD137 und CD137L stellen ein Rezeptor-Liganden-Paar dar, welches auf vielen Immunzellen exprimiert wird und eine wichtige Rolle im Rahmen der Immunstimulation spielt. CD137L fungiert jedoch nicht nur als Ligand sondern auch als Rezeptor und vermittelt als ein solcher Signale in die ihn exprimierende Zelle. Neben seinem Vorkommen auf Immunzellen wird CD137L auch von einigen Tumorzellen exprimiert, unter anderem auch auf denen des Kolonkarzinoms. In dieser Tumorentität korreliert eine hohe CD137L-Expression mit dem Auftreten von Fernmetastasen und einer insgesamt schlechteren Prognose. Die genaue Rolle von CD137L im Kolonkarzinom ist bislang kaum erforscht. Im Rahmen dieser Arbeit wurden daher die Auswirkungen einer CD137L-Aktivierung auf die Proliferation sowie die Proteinexpression und -sekretion von Kolonkarzinomzellen untersucht. Die Ergebnisse deuten erstmals darauf hin, dass die CD137L-Stimulation in vitro die Proliferation der entarteten Zellen reduziert und die Expression bzw. Sekretion der Proteine Vimentin, TLR7, VEGF und PDGF steigert. Hieraus wird geschlossen, dass eine Stimulation des von den Kolonkarzinomzellen exprimierten CD137L dazu führt, dass sich der Phänotyp der Tumorzellen von einem epithelialen in Richtung eines mesenchymalen Zelltyps verändert. Darüber hinaus werden vermehrt Proteine exprimiert und sezerniert, welche über unterschiedliche Signalwege an der Invasion und Migration der entarteten Zellen beteiligt sind. Folglich lässt sich annehmen, dass CD137L eine entscheidende Rolle im Metastasierungsprozess von humanen Kolonkarzinomzellen spielt. Sollte sich dies in weiterführenden Untersuchungen bestätigen, könnte eine pharmazeutische Beeinflussung der beteiligten Signalwege möglicherweise die Prognose von an Kolonkarzinomen erkrankten Patient:innen deutlich verbessern., CD137 and CD137L represent a receptor/ligand-pair expressed on a variety of immune cells which exerts an important immunostimulatory effect. Besides its function as a ligand to CD137, CD137L also acts as a receptor itself, thereby transmitting signals into the cell via reverse signaling. Apart from being expressed on immune cells CD137L is also found on many tumor cells, including colon carcinoma cells. In this tumor entity the expression is positively correlated with distant metastases and poor prognosis, nevertheless little is known about the function of CD137L in the progression of colon cancer. The aim of this study was to investigate the effects of CD137L-mediated reverse signaling on protein expression and secretion in human colon cancer cells in vitro. The results indicate for the first time that a stimulation of the cells via CD137L induces a decreased proliferation and an increased expression or secretion of the proteins vimentin, TLR7, VEGF and PDGF. Reverse signaling via CD137L proposedly leads to a transition of the cancer cells from an epithelial to a mesenchymal phenotype. In addition, the increasingly expressed and secreted proteins presumably activate signaling pathways which are involved in the invasion and migration of the tumor cells. Hence it is suggested, that CD137L plays a crucial role in the process of metastasis of human colon cancer cells. Should this be confirmed by further studies, impairing this pathway could represent a promising new therapeutic approach which could improve the prognosis of patients suffering from colon cancer.

Zusammenfassung Hintergrund und Ziele Die Bisphosphonat-assoziierte Kiefernekrose tritt mit steigender Prävalenz spontan oder als Nebenwirkung nach chirurgischen Eingriffen bei Patienten unter Bisphosphonattherapie auf. Klinisch imponiert sie als freiliegende, entzündlich veränderte, ossäre Läsion der Kieferknochen, welche keine Tendenz zur Selbstheilung zeigt. Paradoxerweise treten diese Läsionen ausschließlich in dem von der kranialen Neuralleiste abstammenden Kieferknochen auf, im extrakranialen Skelett zeigen sich keine derartigen Nekrosen. Das Gap Junction Protein Connexin 43 lässt sich in beiden Knochenarten nachweisen. Eine essentielle Notwendigkeit von Connexin 43 an dem durch Aminobisphosphonaten vermittelten anti-apoptotischen Effekt sowie zur Bildung interzellulärer Kommunikation wurde beschrieben. Daher soll ein möglicher Expressionsunterschied dieses Proteins zwischen Tibia- und Kieferknochen unter Aminobisphosphonateinfluss untersucht werden. Methoden Es wurden Gewebeproben von Wistar-Ratten zur Untersuchung des Expressionsverhaltens von Connexin 43 herangezogen. Neben einer unbehandelten Kontrollgruppe (Gruppe 1) wurden die Tiere mit einem Aminobisphosphonat behandelt (Gruppe 2). Um den Einfluss eines operativen Eingriffs zu simulieren, erfolgte bei Tieren in zwei weiteren Gruppen eine Zahnextraktion sowie die Erzeugung eines ossären Defekts am Tibiaknochen. Hierbei erfolgte der Eingriff einerseits ohne den Einfluss von Aminobisphosphonat (Gruppe 3), andererseits unter Aminobisphosphonat-Medikation (Gruppe 4). Die Entnahme der Proben erfolgte nach 12 und 16 Wochen zur jeweiligen Evaluierung des Expressionsverhaltens mittels immunhistochemischer Färbemethode und anschließender statistischer Auswertung anhand des Labeling Index. Ergebnisse Es zeigt sich eine Aminobisphosphonat-unabhängige, signifikant (p=0.01) höhere Expression von Connexin 43 innerhalb des Kiefers im Vergleich zur Tibia. Unter dem Einfluss von Aminobisphosphonat lässt sich in der 16. Woche eine signifikant (p

Interferon-stimulated gene products (ISGs) play a crucial role in early infection control, thus elucidating their mechanism of action could uncover future therapeutic targets. This work investigated selected ISGs for their possible role during human cytomegalovirus (HCMV) infection, a β-herpesvirus associated with high morbidity in immunosuppressed individuals and congenitally infected newborns. To this end, a flow cytometry assay was established to monitor infection following two complementary approaches: (1) the generation of stable cell lines overexpressing the selected ISGs, and (2) the creation of knockout (KO) cell lines in primary human fibroblasts (HFF-1) by Cas9 genome editing. This identified the zinc finger antiviral protein ZAP as a highly interesting candidate of study during early HCMV infection due to its strong modulatory effect. ZAP antagonizes several RNA viruses by binding to CG-rich RNA sequences and mediating their degradation by the exosome machinery, while its role during DNA virus infection was not well understood. To determine the effect of ZAP on the course of HCMV infection, a global temporal analysis comparing the transcriptome and proteome in wildtype versus ZAP KO cells was performed. This demonstrated that the presence of ZAP resulted in reduced viral transcript and protein levels, as well as decelerated the progression of HCMV infection. Reconstitution assays showed that both major isoforms of ZAP, short (ZAP-S) and long (ZAP-L), negatively affect HCMV replication. In addition, metabolic RNA labeling combined with high-throughput sequencing (SLAM-seq) revealed that most of the late gene expression changes derived from the general attenuation of HCMV. Remarkably, at early stages of infection, ZAP destabilized a distinct subset of viral transcripts, with those expressed from the poorly-characterized UL4-UL5 HCMV locus being the most significantly affected. Enhanced crosslinking and immunoprecipitation in combination with RNA sequencing analysis (eCLIP-seq) identified these viral transcripts as direct targets of ZAP, indicating that ZAP mediates their degradation by direct interaction. Nevertheless, preliminary results comparing infection between WT virus and different mutants suggest that the delay observed in the presence of ZAP could be exerted by means other than ZAP-specific binding and destabilization of UL4 and UL5. Regarding the target specificity of ZAP, this work shows its ability to bind not only to CG, but also to other cytosine-rich RNA sequences. Moreover, infection with mutant isoforms of ZAP with impaired CG-binding capacity of its second zinc finger (ZnF2) demonstrated the non-essential role of ZnF2 in controlling HCMV infection. In summary, this work illustrates the complex relationship between ISGs and viruses and provides evidence of an important antiviral role for ZAP during early host defense against the DNA virus HCMV. It also expands the knowledge about the binding specificity of ZAP, reveals direct viral and cellular targets of ZAP during early HCMV infection, and explores their impact during infection. Lastly, this study provides new insights into the effect of ZAP on the α-herpesviruses herpes simplex virus type 1 and type 2, as well as varicella-zoster virus, paving the way for future research work., Interferon-stimulierte Genprodukte (ISGs) spielen eine entscheidende Rolle bei der frühen Infektionskontrolle, so dass die Aufklärung ihrer Wirkungsmechanismen zukünftige therapeutische Ziele aufdecken könnte. In dieser Arbeit wurden ausgewählte ISGs auf ihre Rolle während einer Infektion mit dem humanen Cytomegalovirus (HCMV) untersucht, einem β-Herpesvirus, das mit einer hohen Morbidität bei immunsupprimierten Personen und kongenital infizierten Neugeborenen in Verbindung steht. Zu diesem Zweck wurde eine durchflusszytometrische Analyse zur Quantifizierung der Infektion auf der Basis von zwei komplementären Ansätzen etabliert: (1) stabile Zelllinien, die die ausgewählten ISGs überexprimieren, und (2) Cas9-editierte Knockout (KO)-Zelllinien. Dabei wurde das Zinkfinger-Antivirale-Protein (ZAP) als interessanter Kandidat identifiziert, der aufgrund seiner starken modulatorischen Wirkung während der frühen Phase der HCMV-Infektion weiter untersucht wurde. ZAP inhibiert eine Reihe von RNA-Viren, indem es an CG-reiche RNA-Sequenzen bindet und deren Abbau durch die Exosomenmaschinerie vermittelt, während seine Rolle bei der Infektion mit DNA-Viren nicht gut verstanden war. Um die Auswirkung von ZAP auf den Verlauf der HCMV-Infektion zu bestimmen wurde eine globale zeitliche Analyse durchgeführt, bei der das Transkriptom und Proteom in Wildtyp- und ZAP-KO-Zellen verglichen wurden. Dabei zeigte sich, dass ZAP zu einer Verringerung der viralen Transkript- und Proteinmengen führte und das Fortschreiten der HCMV-Infektion verlangsamte. Rekonstitutionsversuche zeigten, dass beide Haupt-Isoformen von ZAP, die kurze (ZAP-S) und die lange (ZAP-L) Isoform, die HCMV-Replikation negativ beeinflussen. Darüber hinaus ergab die metabolische RNA-Markierung in Kombination mit Hochdurchsatz-Sequenzierung (SLAM-seq), dass die meisten der späten Genexpressionsänderungen auf die allgemeine Abschwächung der HCMV Infektion zurückzuführen sind. Bemerkenswerterweise destabilisierte ZAP in den frühen Stadien der Infektion eine bestimmte Untergruppe von viralen Transkripten, wobei diejenigen, die vom nur wenig charakterisierten HCMV-Locus UL4-UL5 exprimiert werden, am stärksten betroffen waren. Mittels „verstärkte Quervernetzung und Immunpräzipitation in Kombination mit RNA-Sequenzierungsanalysen“ (eCLIP-seq) wurden diese viralen Transkripte als direkte Interaktionspartner von ZAP identifiziert, was darauf hindeutet, dass ZAP ihren Abbau durch direkte Interaktion vermittelt. Vorläufige Ergebnisse eines Vergleichs der Infektion zwischen WT HCMV und verschiedenen HCMV Mutanten deuten jedoch darauf hin, dass die in Gegenwart von ZAP beobachtete Verlangsamung der Infektion durch andere Mittel als die ZAP-spezifische Bindung und Destabilisierung von UL4 und UL5 bewirkt werden könnte. Was die Zielspezifität von ZAP betrifft so zeigt diese Arbeit, dass es nicht nur an CG, sondern auch an andere cytosinreiche RNA-Sequenzen binden kann. Darüber hinaus hat die Infektion mit mutierten Isoformen von ZAP, bei denen die CG-Bindungskapazität des zweiten Zinkfingers (ZnF2) beeinträchtigt ist, gezeigt, dass ZnF2 keine essentielle Rolle für die antivirale Funktion von ZAP bei der HCMV-Infektion spielt. Zusammenfassend veranschaulicht diese Arbeit die komplexe Beziehung zwischen ISGs und Viren und liefert Beweise für eine wichtige antivirale Rolle von ZAP während der frühen Immunabwehr gegen das DNA-Virus HCMV. Sie liefert ebenfalls neue Erkenntnisse über die Bindungsspezifität von ZAP, zeigt direkte virale und zelluläre Ziele von ZAP während der frühen HCMV-Infektion auf und untersucht deren Auswirkungen während der Infektion. Schließlich liefert diese Studie neue Erkenntnisse über die Wirkung von ZAP auf die α-Herpesviren Herpes simplex Typ 1 und Typ 2 sowie das Varizella zoster Virus, und ebnet damit den Weg für künftige Forschungsarbeiten.

172 Patienten, welche von 06/17 bis 01/18 am Uniklinikum Würzburg entsprechend der Ross-Prozedur operiert wurden, wurden nachuntersucht (Follow Up: 6,2 ± 4,5 Jahre). Ziel war es den Einfluss der Operationstechniken - Subkoronar (SK)- und Wurzelersatztechnik (WE) zu untersuchen sowie den Einfluss der Spenderklappen - Homograft (HG) und Matrixprothese (M). Die Überlebensrate betrug in der SK- und WE-Gruppe jew. 98,1 %. Die Reoperationsrate lag bei 6,8 % (SK) und 3,9 % (WE). Bezüglich der postop. Hämodynamik wurden Normwerte ermittelt (SK und WE). NYHA Stadium I lag bei 74,1 % (SK) und 95,5 % (WE) vor. Bzgl. Überlebensrate (HG: 98,1 %; M: 95,4 %) sowie Reop.rationsrate (HG: 0 %; M: 33 %), postop. hämodyn. Werten und postop. klinischem Verlauf (NYHA Stadium I: 80 % der HG Gruppe, 50 % der M-Gruppe) schnitt die M-Gruppe schlechter ab., There was a follow up of 172 patients which were operated according to the ross-procedure from 06/17 to 01/18. The aim of the study was to analyze the impact of the surgical techniques - subcoronar (SC)- and the root replacement (RR) technique - and the impact of the donor flaps - homograft (hg) and matrixprothesis (m). The survival rate was 98,1 % (SC and RR). The reoperation rate was 6,8 % (SC) and 3,9 % (RR) and there were normal values for the postop. hemodynamics. 74,1 % (SC) and 95,5 % (RR) were in NYHA Class I. With reference to the survival rate (hg: 98,1 %; m: 95,4 %) as well as to the postop. hemodynamics and NYHA Class (hg: 80 %, m: 50 % Class I) the results for m-group were worse.

Hintergrund und Ziele Beim Short-Rib-Thoraxic-Dysplasie-Syndrom (SRTD), welches das Ellis van Creveld- und des Jeune -Syndrom miteinschließt, handelt es sich um Erkrankungen aus dem Formenkreis der ziliären Skelettdysplasien. Diese können den Organismus auf unterschiedliche Art beeinträchtigen: z.B. können sie mit Polydaktylie und anderen Skelettfehlbildungen, Lungenhypoplasie und Fehlbildungen der Augen oder der inneren Organe einhergehen. Diese, überwiegend als autosomal-rezessiv geltenden Erkrankungen sind genetisch heterogen, da sie durch Mutationen in einer Vielzahl an Ziliengenen hervorgerufen werden können. Darüber hinaus gibt es zunehmend Hinweise, dass viele Ziliopathien - unter anderem auch das SRTD - nicht ausschließlich einem streng monogenen, rezessiven Erbgang folgen. Gestützt wir diese Annahme durch eine zunehmende Anzahl an Fallbeschreibungen, bei denen digen-diallele sowie triallele Erbgänge nachgewiesen wurden bzw. als wahrscheinlich angenommen werden. Um die genetischen Ursachen des SRTD-Syndroms weiter zu erforschen, sollten in dieser Arbeit neue Kandidatengene identifiziert und weitere Hinweise auf komplexe genetische Ursachen durch Nachweis von Mutationen in verschiedenen Genen beim selben Patienten gesammelt werden. Methoden Die Exom-Sequenzierung von insgesamt 8 Patienten mit Verdacht auf eine Erkrankung aus dem Formenkreis der ziliären Skelettdysplasien erfolgte im Zuge dieser Arbeit mittels Next Generation Sequencing (NGS). Soweit ausreichend genetisches Material der Angehörigen vorhanden war, wurde auch hier eine Exom-Sequenzierung durchgeführt, um die Vererbung von Varianten besser nachvollziehen zu können. Die hierdurch identifizierten Varianten in ziliären Kandidatengenen wurden anschließend unter Berücksichtigung der Konservierung und möglicher funktioneller Auswirkungen analysiert. Anschließend wurden die als pathogen und likely pathogen eingestuften Varianten, sowie die Varianten mit unbekannter Signifikanz (VUS) mittels Sanger-Sequenzierung bestätigt. Nur die bestätigten, nicht bereits in gesunden Populationen gelisteten Varianten sowie eine weitere Variante in DYNC2H1 (c.10163C>T) wurden weiterverfolgt. Die Variante in DYNC2H1 ist in Mutationsdatenbanken bereits als mit dem Jeune-Syndrom assoziiert beschrieben und wird in ClinVar als pathogen/likely pathogen bei zwei Patienten mit Jeune-Syndrom bzw. SRTD Typ III eingestuft. Nach einer eingehenden Charakterisierung der als relevant eingestuften Kandidatengene erfolgte soweit möglich eine Phänotyp-Genotyp-Korrelation. Ergebnisse und Beobachtungen Insgesamt konnten hierdurch 11 Varianten in 10 Kandidaten-Genen identifiziert werden, die eine (Mit-)Ursache für die Erkrankung der Patienten darzustellen bzw. einen modulierenden Einfluss auf den jeweiligen Phänotyp zu nehmen scheinen. Fünf der so ermittelten Kandidatengene wurden bisher noch nicht explizit mit einer ziliären Skelettdysplasie in Verbindung gebracht, hierbei handelt es sich um die Gene SPATA6, EXOC3, PCM1,KIF3B und EXOC6B. Schlussfolgerung und Diskussion Im Rahmen der Genotyp-Phänotyp-Korrelation kann bei 4 der 8 Patienten im Rahmen der gewonnenen Erkenntnisse die Hypothese aufgestellt werden, dass ihrer Erkrankung möglicherweise keine rein monogen-rezessive Ursache zu Grunde liegt. Zur weiteren Validierung sind zusätzliche Untersuchungen auf Transkriptebene und Proteinebene sowie Funktionsmodelle nötig. Background Short-Rib-Thoracic-Dysplasia (SRTD), which also includes Ellis van Creveld and Jeune syndrome belongs to the group of skeletal ciliopathies. It can affect the organism in multiple ways - causing polydactyly and other abnormalities of the bones, lung hypoplasia and ocular or visceral anomalies. However, these mainly as autosomal recessive classified disorders are caused by mutations in many ciliary genes. In addition, there is more and more evidence for ciliopathies - including the SRTD - not to follow a strictly monogenic recessive inheritance only. This assumption is supported by a growing number of reported cases with proven or probable digenic-diallelic or triallelic inheritance. In order to further investigate the genetic causes of SRTDs, the aim of this study was the identification of new candidate genes as well as confirming the complex genetic causes caused by mutations in different genes in the same patient. Methods I used the technology of Next Generation Sequencing (Exome sequencing) for 8 patients which were clinically evaluated as skeletal ciliopathy. If sufficient genetical material of their relatives was provided their Exome was performed as well in order to further investigate the mode of inheritance. The identified variants were analysed considering conservation and possible functional consequences. After that variants categorized as pathogen, likely pathogen or variants of unknown significance (VUS) were confirmed via Sanger sequencing. Only confirmed variants not to be found in the general population and one additional variant in DYNC2H1 (c.10163C>T) were taken into further consideration. The DYNC2H1 variant was already described in human gene databases to be associated with Jeune syndrome and is classified as pathogen/likely pathogen in two patients with Jeune syndrome and SRTD III according to ClinVar. After in-depth characterization of the potentially relevant candidate genes a genotype-phenotype correlation was performed, if possible. Results In total 11 variants in 10 candidate genes could be identified which can be hypothesized to be disease-related or modulate the severity of the phenotype. Five of those candidate genes have never been directly associated with ciliary dysplasia before. These five candidate genes are: SPATA6, EXOC3, PCM1, KIF3B und EXOC6B. Conclusions Taking in consideration all findings, the skeletal dysplasia of 4 out of the 8 patients may not have a strictly monogenic cause. For further verification additional examinations at transcript and protein level as well as functional models are needed.

Coenzyme A (CoA) is an essential molecule acting in metabolism, post-translational modification, and regulation of gene expression. While all organisms synthesize CoA, many, including humans, are unable to produce its precursor, pantothenate. Intriguingly, like most plants, fungi and bacteria, parasites of the coccidian subgroup of Apicomplexa, including the human pathogen Toxoplasma gondii, possess all the enzymes required for de novo synthesis of pantothenate. Here, the importance of CoA and pantothenate biosynthesis for the acute and chronic stages of T. gondii infection is dissected through genetic, biochemical and metabolomic approaches, revealing that CoA synthesis is essential for T. gondii tachyzoites, due to the parasite’s inability to salvage CoA or intermediates of the pathway. In contrast, pantothenate synthesis is only partially active in T. gondii tachyzoites, making the parasite reliant on its uptake. However, pantothenate synthesis is crucial for the establishment of chronic infection, offering a promising target for intervention against the persistent stage of T. gondii., Coenzyme A (CoA) is an essential metabolite found in all organisms and its synthesis involves five conserved enzymatic steps and uses pantothenate (Pan) as a precursor. Here, Lunghi et al. examine the Pan synthesis pathway in Toxoplasma gondii and find that Pan is crucial for the establishment of chronic but not acute infection.

Atypical femoral fractures (AFFs) occurring during the course of osteoporosis treatment usually lead to discontinuation of anti-resorptive (AR) drugs. However, the risk of fracture after an AFF is unknown. We conducted a follow-up study of patients with AFF matched 1:3 for age and gender with patients with a peripheral major osteoporotic fracture (pMOF), in the setting of a fracture liaison service, to investigate the incidence of subsequent low-trauma fractures. Fifty-five patients with AFF (95% women, age [mean ± standard deviation] 75 ± 10 years, 89% exposed to AR drugs), followed for 6.2 ± 3.7 years, were compared to 165 matched controls with a pMOF (hip 85%) followed for 4.3 ± 2.6 years. During the follow-up, 38% of patients in the AFF group and 16% in the pMOF group received AR therapies. Continuation of AR drugs after an AFF was associated with contralateral AFF in 27% of subjects. The risks of new low-trauma, major osteoporotic and imminent (within 2 years) fractures, were similar between the two groups: incidence rate ratio (95% confidence interval [CI]) of subsequent fracture following AFF relative to pMOF, 1.30 (95% CI, 0.82-2.04), 1.28 (95% CI, 0.74-2.15), and 1.11 (95% CI, 0.54-2.15), respectively. Moreover, the risk of sustaining multiple fractures per participant was significantly increased among patients with AFF compared to pMOF (hazard ratio 1.48 [95% CI, 1.00-2.19]; p = 0.049). When taking mortality into account, the risk of subsequent fractures tended to be higher in the AFF group (sub-hazard ratio 1.42 [95% CI, 0.95-2.12]). In conclusion, patients who sustained an AFF are at high risk of subsequent fragility fractures, at least equal or even greater to the risk observed after a pMOF. However, continuation of AR drugs increases the risk of contralateral AFF. Therefore, optimal modalities for secondary fracture prevention after AFF require further evaluation. © 2021 The Authors. Journal of Bone and Mineral Research published by Wiley Periodicals LLC on behalf of American Society for Bone and Mineral Research (ASBMR).

Prevalence of osteoporosis is more than 50% in older adults, yet current clinical methods for diagnosis that rely on areal bone mineral density (aBMD) fail to detect most individuals who have a fragility fracture. Bone fragility can manifest in different forms, and a "one-size-fits-all" approach to diagnosis and management of osteoporosis may not be suitable. High-resolution peripheral quantitative computed tomography (HR-pQCT) provides additive information by capturing information about volumetric density and microarchitecture, but interpretation is challenging because of the complex interactions between the numerous properties measured. In this study, we propose that there are common combinations of bone properties, referred to as phenotypes, that are predisposed to different levels of fracture risk. Using HR-pQCT data from a multinational cohort (n = 5873, 71% female) between 40 and 96 years of age, we employed fuzzy c-means clustering, an unsupervised machine-learning method, to identify phenotypes of bone microarchitecture. Three clusters were identified, and using partial correlation analysis of HR-pQCT parameters, we characterized the clusters as low density, low volume, and healthy bone phenotypes. Most males were associated with the healthy bone phenotype, whereas females were more often associated with the low volume or low density bone phenotypes. Each phenotype had a significantly different cumulative hazard of major osteoporotic fracture (MOF) and of any incident osteoporotic fracture (p 0.05). After adjustment for covariates (cohort, sex, and age), the low density followed by the low volume phenotype had the highest association with MOF (hazard ratio = 2.96 and 2.35, respectively), and significant associations were maintained when additionally adjusted for femoral neck aBMD (hazard ratio = 1.69 and 1.90, respectively). Further, within each phenotype, different imaging biomarkers of fracture were identified. These findings suggest that osteoporotic fracture risk is associated with bone phenotypes that capture key features of bone deterioration that are not distinguishable by aBMD. © 2021 American Society for Bone and Mineral Research (ASBMR).

The use of mass spectrometry methods with triple quadrupole instruments is well established for quantification. However, the preparation of calibration curves can be time-consuming and prone to analytical errors. In this study, an innovative internal calibration (IC) approach using a one-standard calibration with a stable isotope-labeled (SIL) standard version of the endogenous compound was developed. To ensure optimal quantitative performance, the following parameters were evaluated: the stability of the analyte-to-SIL response factor (RF), the chemical and isotopic purities of the SIL, and the instrumental reproducibility. Using six clinically important endogenous steroids and their respective SIL standards, we demonstrated that RFs obtained on different LC-MS platforms were consistent. The quantitative performance of the proposed approach was determined using quality control samples prepared in depleted serum, and showed both satisfactory precision (1.3%-12.4%) and trueness (77.5%-107.0%, with only 3 values outside ±30%). The developed method was then applied to human serum samples, and the results were similar to those obtained with the conventional quantification approach based on external calibration: the Passing-Bablok regression showed a proportional bias of 6.8% and a mean difference of -5.9% between the two methodologies. Finally, we showed that the naturally occurring isotopes of the SIL can be used to provide additional calibration points and increase the accuracy for analytes with low concentrations.

Purpose The COVID-19 pandemic and the extended lockdown are associated with numerous changes in behavior and lifestyles. The objective was to assess the impact of the first lockdown on LBP course among chronic LBP patients. Methods Descriptive and analytical, cross-sectional, multicenter study, conducted by questionnaire from mid-May to end of June 2020 among patients treated for chronic LBP in 6 French and 1 Swiss center. Collected data concerned changes in LBP intensity during lockdown, lockdown experience, physical activity (PA) practice and sedentary lifestyle prior and during lockdown, recourse to care, consumption of psychoactive substances for LBP, and professional activity and its conditions during lockdown. Results 360 participants (58.6% women, 52.1 ± 13.4 years) were included of which 65% were active (63% keep on working of which 54% teleworked). LBP got worse in 41.1%, mean VAS went from 49.5 ± 21.6 before to 53.5 ± 22.4 during lockdown (p

Transmission of malaria-causing parasites to mosquitoes relies on the production of gametocyte stages and their development into gametes. These stages display various microtubule cytoskeletons and the architecture of the corresponding microtubule organisation centres (MTOC) remains elusive. Combining ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) with bulk proteome labelling, we first reconstructed in 3D the subpellicular microtubule network which confers cell rigidity to Plasmodium falciparum gametocytes. Upon activation, as the microgametocyte undergoes three rounds of endomitosis, it also assembles axonemes to form eight flagellated microgametes. U-ExM combined with Pan-ExM further revealed the molecular architecture of the bipartite MTOC coordinating mitosis with axoneme formation. This MTOC spans the nuclear membrane linking cytoplasmic basal bodies to intranuclear bodies by proteinaceous filaments. In P. berghei, the eight basal bodies are concomitantly de novo assembled in a SAS6- and SAS4-dependent manner from a deuterosome-like structure, where centrin, γ-tubulin, SAS4 and SAS6 form distinct subdomains. Basal bodies display a fusion of the proximal and central cores where centrin and SAS6 are surrounded by a SAS4-toroid in the lumen of the microtubule wall. Sequential nucleation of axonemes and mitotic spindles is associated with a dynamic movement of γ-tubulin from the basal bodies to the intranuclear bodies. This dynamic architecture relies on two non-canonical regulators, the calcium-dependent protein kinase 4 and the serine/arginine-protein kinase 1. Altogether, these results provide insights into the molecular organisation of a bipartite MTOC that may reflect a functional transition of a basal body to coordinate axoneme assembly with mitosis., Author summary Malaria parasites rely on multiple phases of proliferation to build large populations from a small number of founding members, both in the human and the mosquito hosts. Malaria transmission relies on the production of gametes that follows ingestion by a mosquito. In particular, the Plasmodium microgametocyte rapidly forms eight flagellated microgametes through an unusual coupling of mitosis and axoneme formation via a single microtubule organization centre (MTOC). Due to evolutionarily divergence of Plasmodium parasites from well-studied organisms and their relatively small size, little is known about the molecular organisation and the dynamics of this dual MTOC. In this study, we have implemented expansion microscopy (ExM) techniques to image microtubule structures in Plasmodium gametocytes. ExM consists in physically expanding the cell while keeping its cellular structures intact to allow nanoscale imaging of fluorescently labelled structures with conventional microscopes. This reveals the highly dynamic molecular organisation of this bipartite MTOC regulated by two non-canonical kinase regulators as well as the requirement of conserved MTOC components to coordinate mitosis and axoneme assembly. Altogether our results allow to better understand how malaria-causing parasites replicate to form large populations and how they form flagella to colonise the mosquito.

Deutsche Version des Publikationstitels: Cerebrospinale Flüssigkeit von Patienten mit Alzheimererkrankung enthält erhöhte Anteile synaptophysintragender Mikrovesikel Einleitung Bei der Alzheimer Erkrankung ist die Symptomschwere verbunden mit einer Abnahme der Synapsendichte sowie der Ausbreitung pathologisch phosphorylierten Tau-Proteins im Gehirn. Die etablierten Liquor-Biomarker, Amyloid-β, Tau und phosphoryliertes Tau, spiegeln zwar pathognomische Merkmale der Alzheimer Erkrankung wider, können aber nicht das Fortschreiten der Krankheit abbilden. Besonders für Studien zu krankheitsmodifizierenden Medikamenten wären solche Marker aber von besonderem Interesse. Mikrovesikel werden vermehrt von Zellen unter Stress produziert und bieten Einblick in einen Teil des Metabolismus der Ursprungszelle. Deshalb wurde in dieser Studie untersucht, ob Mikrovesikel neuronalen Ursprungs in Liquor als Biomarker dienen könnten. Material und Methoden Mittels Durchflusszytometrie untersuchten wir Mikrovesikel im Liquor von 19 Patienten mit Alzheimer Erkrankung und 15 Kontrollen auf die Expression von Tau-, phospho-Tau-Thr181-, phospho-Tau-Ser202Thr205-, Synaptophysin- und Synaptosomal-Associated Protein von 25kDa- (SNAP-25). Ergebnisse Der Anteil der synaptophysintragenden Mikrovesikel im Liquor war bei Patienten mit Alzheimer Erkrankung signifikant höher als in der Kontrollgruppe. Die Expression von Tau, phospho-Tau-Thr181, phospho-Tau-Ser202Thr205, und SNAP-25 auf Mikrovesikeln unterschied sich zwischen den Gruppen nicht. Durch Bestimmung des Anteils der synaptophysintragenden Mikrovesikel konnten Patienten mit einer Alzheimer Erkrankung von den Kontrollen unterschieden werden (AUC = 0,81). Diskussion Der Synapsenverlust bei der Alzheimer Erkrankung könnte durch Synaptophysin-tragende Mikrovesikel im Liquor widergespiegelt werden. Weitere Studien sind notwendig, um die Möglichkeit zu prüfen, ob dies als Aktivitätsmarker für die Alzheimererkrankung genutzt werden könnte. Introduction: In Alzheimer's disease, the severity of symptoms is linked to a loss of synaptic density and the spread of pathologically hyperphosphorylated tau. The established cerebrospinal fluid markers Aβ, tau and phospho-tau reflect the histopathological hallmarks of Alzheimer's disease but do not indicate disease progression. Such markers are of special interest, especially for trials of disease modifying drugs. Microvesicles are produced by stressed cells and reflect part of the metabolism of their cells of origin. Therefore, we investigated microvesicles of neuronal origin in cerebrospinal fluid. Materials and methods: We used flow cytometry to analyze microvesicles carrying tau, phospho-tau-Thr181, phospho-tau-Ser202Thr205, synaptophysin, and SNAP-25 in the cerebrospinal fluid of 19 patients with Alzheimer's disease and 15 non-inflammatory neurological disease controls. Results: The percentages of synaptophysin-bearing microvesicles were significantly higher in the cerebrospinal fluid of patients with Alzheimer's disease than in the CSF of non-inflammatory neurological disease controls. Tau, phospho-tau-Thr181, phospho-tau-Ser202Thr205, and SNAP-25 did not differ between the groups. The percentages of synaptophysin-bearing vesicles distinguished patients with Alzheimer's disease from the controls (AUC = 0.81). Conclusion: The loss of synapses in Alzheimer's disease may be reflected by synaptophysin-bearing microvesicles in the cerebrospinal fluid. Future studies are needed to investigate the possibility of using these MVs as a marker to determine the activity of Alzheimer's disease.

LI-RADS is a worldwide established algorithm for diagnosing liver lesions in patients at high risk for hepatocellular carcinoma (HCC). The guidelines explicitly point out that the algorithm can also be used in patients with an extrahepatic primary tumor. Therefore in this study the accuracy of LI-RADS is investigated in patients with a diagnosed liver lesion and an extrahepatic primary tumor. In a three-stage selection process, 33 study participants were selected for the retrospective study from a collective of 9247 patients who received a liver MRI at the University Hospital Erlangen between September 1, 2008 and August 31, 2018. Two experienced radiologists evaluated the MRIs of these patients in 2 rounds each with LI-RADS. The intra- and interreader reliability of the categories and characteristics of LI-RADS and the distribution of the histological findings among the categories were evaluated. The liver lesions in the patients were 20 HCCs, 6 CCCs and 3 benign lesions. 4 were metastases from extrahepatic tumors located on the skin (melanoma), in the stomach, the breast and in the esophagus. The sensitivity for LR-5, LR-TIV and LR-M was 63,75%, for LR-4, LR-5, LR-TIV und LR-M 90,0% and for LR-3, LR-4, LR-5, LR-TIV und LR-M 100%. The positive predictive value for LR-5 was 95,56%. The interreader reliability for the categories of LI-RADS resulted in α = 0.83. The intrareader reliability for APHE was κ = 0.51 (R1), κ = 0.59 (R2), for washout κ = 0.76 (R1), κ = 0.70 (R2) and for enriching capsule (κ = 0.81 (R1), κ = 0.75 (R2). The study showed good results for the accuracy of LI-RADS in patients with a liver lesion and an extrahepatic primary tumor. With the algorithm, metastases of extrahepatic tumors can be distinguished from HCCs with a high degree of certainty. LI-RADS ist weltweit ein etablierter Algorithmus zur Befundung von Leberläsionen bei Hochrisikopatienten für ein hepatozelluläres Karzinom (HCC). In den Richtlinien wird explizit darauf hingewiesen, dass der Algorithmus auch bei Patienten mit einem extrahepatischen Primärtumor angewendet werden kann. In dieser Studie wurde daher die Genauigkeit von LI-RADS bei Patienten mit diagnostizierter Leberläsion und extrahepatischem Primärtumor untersucht. In einem dreistufigen Selektionsprozess wurden für die retrospektive Studie 33 Studienteilnehmer aus einem Kollektiv von 9247 Patienten ausgewählt, die im Zeitraum vom 01.09.2008 bis 31.08.2018 am Universitätsklinikum Erlangen ein Leber-MRT erhalten haben. Zwei erfahrene Radiologen werteten die MRTs dieser Patienten in je 2 Durchgängen mit LI-RADS aus. Es wurden die Intra- und Interreader-Reliabilität der Kategorien und Merkmale von LI-RADS sowie die Verteilung der histologischen Befunde auf die Kategorien evaluiert. Bei den Leberläsionen der Patienten handelte es sich um 20 HCCs, 6 CCCs und 3 benigne Läsionen. 4 waren Metastasen extrahepatischer Tumore, die an der Haut (Melanom), im Magen, der Mamma und im Ösophagus lokalisiert waren. Die Sensitivität für LR-5, LR-TIV und LR-M betrug 63,75%, für LR-4, LR-5, LR-TIV und LR-M 90,0% für LR-3, LR-4, LR-5, LR-TIV und LR-M 100,0%. Der positiv prädiktive Wert für die Kategorie LR-5 ergab 95,56% Die Interreader-Reliabilität für die Kategorien von LI-RADS ergab α = 0,83. Die Intrareader-Reliabilität für APHE war κ = 0,51 (R1), κ = 0,59 (R2), für washout κ = 0,76 (R1), κ = 0,70 (R2) und für anreichernde Kapsel κ = 0,81 (R1), κ = 0,75 (R2). Die Studie zeigte gute Ergebnisse für die Genauigkeit von LI-RADS bei Patienten mit einer Leberläsion und einem extrahepatischen Primärtumor. Mit dem Algorithmus können Metastasen extrahepatischer Tumore mit einer hohen Sicherheit von HCCs unterschieden werden.

Zusammenfassung Hintergrund und Ziele der Studie: Die Elektrokrampftherapie (EKT) wird bereits seit Jahrzehnten erfolgreich bei der Behandlung therapieresistenter Depressionen an-gewandt. Eine häufig beschriebene Nebenwirkung der EKT sind kognitive Defizite (1-3). Ein Hauptanliegen unserer Studie war es, die subjektiv empfundenen Auswirkungen der EKT auf die Kognition in Schwere und zeitlicher Ausprägung zu objektivieren, zwischen Männern und Frauen zu vergleichen und mögliche Unterschiede zwischen den jeweiligen Alterskategorien aufzudecken. Auch der Einfluss der Krampfdauer, der Impedanz und der Stimulationsstärke auf die Schwere der kognitiven Defizite sollten untersucht werden. Zudem wollten wir mögliche Zusammenhänge zwischen dem Aus-maß kurzfristiger kognitiver Defizite nach der EKT-Behandlung und der antidepressi-ven Wirkung des Verfahrens untersuchen. Wir nutzten in unserer Studie ein im klini-schen Alltag bisher noch wenig verwendetes hand-held device, um Erkenntnisse über dessen Vor- und Nachteile bei der Datenerhebung zu gewinnen. Wir erhofften uns dadurch eine exakte, von Einflüssen des Untersuchers nahezu freie Datenhebung. Wir entwickelten eigens für unsere Studie den digital ascending number tapping test (DANTT), sowie eine digitale Version des Beck´s Depression Inventory II (BDI II). Ziel war es, zwei sensitive, leicht anwendbare Tests für die Datenerhebung bei erwach-senen, depressiven Patienten zu entwerfen. Methoden: Da sich die schnelle und routinierte Datenerhebung kognitiver Defizite bisher als schwierig erweist, entwickelten wir für die Studie zwei innovative Tests, welche die digitale Datenerhebung mittels hand-held device ermöglichten: Den digital ascending number tapping test (DANTT), eine Abwandlung des Trail Making Test, sowie eine digitalisierte Version des Beck´s Depression Inventory II. Wir verglichen die Ergebnisse des DANTT vor und nach EKT-Behandlung von insgesamt 20 Patienten im Alter zwischen 36 und 76 Jahren. Der Test wurde in zweistündigen Intervallen ins-gesamt drei Mal pro Tag wiederholt, sodass wir die auftretenden kognitiven Defizite im Tagesverlauf erheben konnten. Das Prozedere wiederholten wir an den zwei darauf-folgenden EKT-Behandlungstagen in gleicher Weise. Zusätzlich verglichen wir die BDI II-Scores der Probanden vor EKT mit den im Verlauf der Studie erhobenen. Wir dokumentierten Alter, Geschlecht und Medikation unserer Probanden sowie die jewei-ligen Parameter (Stimula-tionsstärke, Impedanz, Platzierung der Elektroden) der jewei-ligen EKT. Die Ergebnisse wurden statistisch auf Signifikanz geprüft. Ergebnisse: Entgegen unserer anfänglichen Vermutung konnte, unter Anwendung des DANTT, bereits 2 Stunden nach EKT-Behandlung keine signifikante Änderung der kognitiven Leistung unserer Patienten mehr erfasst werden. In unserer Studie konnte weder ein signifikanter Einfluss der Krampfdauer noch der Impedanz oder der Stimula-tionsstärke auf die Testergebnisse nachgewiesen werden. In den Testresultaten ergaben sich zwischen den Geschlechtern und auch zwischen den Alterskategorien unserer Pro-banden keine signifikanten Unterschiede. Ein Zusammenhang zwischen der Schwere der kognitiven Defizite nach EKT und ihrem therapeutischen Effekt bestätigte sich nicht. Die Verwendung eines hand-held device zur Datenerhebung erwies sich als prä-zise, patientenfreundlich und im klinischen Alltag sehr gut praktikabel. Schlussfolgerung: Die Ergebnisse unserer Studie decken sich nicht mit denen voran-gegangener Untersuchungen (4, 5). Unsere Studie legt, wie einige andere kleine Stu-dien, nahe, dass die Auswirkung der EKT auf die Neurokognition geringer sein könnte, als bisher angenommen (6). Möglich wäre auch, dass bestimmte Domänen der Kogni-tion weniger anfällig für die Einflüsse einer EKT sind als andere. Unsere Ergebnisse unterstreichen daher die Wichtigkeit einer eingehenden und differenzierten Patienten-aufklärung bezüglich der Häufigkeit und Art der kognitiven Defizite nach EKT. Wei-terführende Studien sollten vor allem Patientengruppen mit einem erhöhten Risiko für neurokognitive Defizite nach EKT-Behandlungen (zum Beispiel Patienten mit Schizo-phrenien) einschließen. Da das Testspektrum unserer Studie begrenzt war, empfehlen sich randomisierte, kontrollierte Studien mit einem erweiterten beziehungsweise ab-gewandelten Spektrum, um verschiedene Domänen der Kognition zu untersuchen. In unserer Studie erwies sich das hand-held device als einfache und sehr gut praktikab-le Methode der Datenerhebung. Es ist zu prüfen, welche medizinischen Tests ebenfalls erfolgreich digitalisiert werden können, um hand-held devices weiter im klinischen Alltag zu etablieren.

Wilms tumor (WT) or nephroblastoma is the most common kidney tumor in childhood. Several genetic alterations have been identified in WT over the past years. However, a clear-cut underlying genetic defect has remained elusive. Growing evidence suggests that miRNA processing genes play a major role in the formation of pediatric tumors, including WT. We and others have identified the microprocessor genes DROSHA and DGCR8 as key players in Wilms tumorigenesis. Exome sequence analysis of a cohort of blastemal-type WTs revealed the recurrent hotspot mutations DROSHA E1147K and DGCR8 E518K mapping to regions important for catalyic activity and RNA-binding. These alterations were expected to affect processing of miRNA precursors, ultimately leading to altered miRNA expression. Indeed, mutated tumor samples were characterized by distinct miRNA patterns. Notably, these mutations have been observed almost exclusively in WT, suggesting that they play a specific role in WT formation. The aim of the present work was to first examine the mutation frequency of DROSHA E1147K and DGCR8 E518K in a larger cohort of WTs, and to further characterize these microprocessor gene mutations as potential oncogenic drivers for WT formation. Screening of additional 700 WT samples by allele-specific PCR revealed a high frequency of DROSHA E1147K and DGCR8 E518K mutations, with the highest incidence found in tumors of high-risk histology. DROSHA E1147K was heterozygously expressed in all cases, which strongly implies a dominant negative effect. In contrast, DGCR8 E518K exclusively exhibited homozygous expression, suggestive for the mutation to act recessive. To functionally assess the mutations of the microprocessor complex in vitro, I generated stable HEK293T cell lines with inducible overexpression of DROSHA E1147K, and stable mouse embryonic stem cell (mESC) lines with inducible overexpression of DGCR8 E518K. To mimic the homozygous expression observed in WT, DGCR8 mESC lines were generated on a DGCR8 knockout background. Inducible overexpression of wild-type or mutant DROSHA in HEK293T cells showed that DROSHA E1147K leads to a global downregulation of miRNA expression. It has previously been shown that the knockout of DGCR8 in mESCs also results in a significant downregulation of canonical miRNAs. Inducible overexpression of wild type DGCR8 rescued this processing defect. DGCR8 E518K on the other hand, only led to a partial rescue. Differentially expressed miRNAs comprised members of the ESC cell cycle (ESCC) and let-7 miRNA families whose antagonism is known to play a pivotal role in the regulation of stem cell properties. Along with altered miRNA expression, DGCR8-E518K mESCs exhibited alterations in target gene expression potentially affecting various biological processes. We could observe decreased proliferation rates, most likely due to reduced cell viability. DGCR8-E518K seemed to be able to overcome the block of G1-S transition and to rescue the cell cycle defect in DGCR8-KO mESCs, albeit not to the full extent like DGCR8-wild-type. Moreover, DGCR8-E518K appeared to be unable to completely block epithelial-to-mesenchymal transition (EMT). Embryoid bodies (EBs) with the E518K mutation, however, were still able to silence the self-renewal program rescuing the differentiation defect in DGCR8-KO mESCs. Taken together, I could show that DROSHA E1147K and DGCR8 E518K are frequent events in WT with the highest incidence in high-risk tumor entities. Either mutation led to altered miRNA expression in vitro confirming our previous findings in tumor samples. While the DROSHA E1147K mutation resulted in a global downregulation of canonical miRNAs, DGCR8 E518K was able to retain significant activity of the microprocessor complex, suggesting that partial reduction of activity or altered specificity may be critical in Wilms tumorigenesis. Despite the significant differences found in the miRNA and mRNA profiles of DGCR8 E518K and DGCR8-wild-type mESCs, functional analysis showed that DGCR8 E518K could mostly restore important cellular functions in the knockout and only slightly differed from the wild-type situation. Further studies in a rather physiological environment, such as in a WT blastemal model system, may additionally help to better assess the subtle differences between DGCR8 E518K and DGCR8 wild-type observed in our mESC lines. Together with our findings, these model systems may thus contribute to better understand the role of these microprocessor mutations in the formation of WT., Der Wilms Tumor (WT), auch Nephroblastom genannt, ist der häufigste Nierentumor im Kindesalter. In den letzten Jahren wurden bereits mehrere genetische Veränderungen in Wilms Tumoren festgestellt. Bisher konnte jedoch keine eindeutige genetische Ursache gefunden werden. Immer mehr Erkenntnisse deuten darauf hin, dass miRNA Prozessierungsgene eine wichtige Rolle bei der Entstehung von pädiatrischen Tumoren, einschließlich von WT, spielen. Uns ist es gelungen die Mikroprozessor-Gene DROSHA und DGCR8 als entscheidende Faktoren in der WT-Entstehung zu identifizieren. Mit Hilfe der Exom-Sequenzierung einer Kohorte blastemreicher Wilms Tumoren konnten die wiederkehrenden Hotspot-Mutationen DROSHA E1147K and DGCR8 E518K gefunden werden. Diese Mutationen betreffen Regionen, die für die katalytische Aktivität und die Bindung von RNA wichtig sind. Diese Veränderungen beeinflussen vermutlich die Prozessierung von Vorläufer-miRNAs und führen letztendlich zu einer veränderten miRNA Expression. In der Tat waren mutierte Tumorproben durch auffällige Expressionsmuster gekennzeichnet. Bemerkenswerterweise wurden diese Mutationen fast ausschließlich in WT beobachtet, was darauf hindeutet, dass sie eine spezifische Rolle bei der Entstehung von WT spielen. Ziel der vorliegenden Arbeit war es, zunächst die Mutationshäufigkeit von DROSHA E1147K und DGCR8 E518K in einer größeren Kohorte von Wilms Tumoren zu untersuchen und anschließend diese Mikroprozessor-Genmutationen als mögliche onkogene Treiber für die WT-Entstehung näher zu charakterisieren. Das Screening von zusätzlichen 700 WT-Proben mittels allelspezifischer PCR ergab eine hohe Häufigkeit von DROSHA E1147K und DGCR8 E518K Mutationen. Dabei traten sie vermehrt bei Tumoren mit einer Hochrisikohistologie auf. Die DROSHA E1147K Mutation wurde in allen Fällen heterozygot exprimiert, was einen dominant-negativen Effekt impliziert. Im Gegensatz dazu zeigte die DGCR8 E518K Mutation ausschließlich eine homozygote Expression, was darauf hindeutet, dass die Mutation rezessiv wirkt. Um die Mutationen des Mikroprozessorkomplexes in vitro funktionell zu untersuchen, generierte ich stabile HEK293T-Zelllinien mit induzierbarer Überexpression von DROSHA E1147K, und stabile embryonale Mausstammzelllinien mit induzierbarer Überexpression von DGCR8 E518K. Um die in WT beobachtete homozygote Expression nachzustellen, wurden für die Erzeugung der DGCR8-Zelllinien Mausstammzellen mit einem DGCR8-Knockout verwendet. Die induzierbare Überexpression von Wildtyp oder mutiertem DROSHA in HEK293T-Zellen zeigte, dass DROSHA E1147K zu einer globalen Herunterregulierung der miRNA-Expression führt. Es wurde zuvor gezeigt, dass der Knockout von DGCR8 in Mausstammzellen ebenfalls zu einer signifikanten Herunterregulierung kanonischer miRNAs führt. Die induzierbare Überexpression von Wildtyp DGCR8 konnte diesen Prozessierungsdefekt aufheben. DGCR8 E518K führte dagegen nur zu einer partiellen Behebung des Prozessierungsdefekts. Differenziell exprimierte miRNAs umfassten hierbei Mitglieder aus der stammzellspezifischen ESCC-Familie und der let-7-miRNA-Familie, deren Antagonismus bekanntermaßen eine bedeutende Rolle bei der Regulation von Stammzelleigenschaften spielt. Zusammen mit einer veränderten miRNA-Expression zeigten DGCR8-E518K-Zellen Veränderungen in der Zielgenexpression, welche möglicherweise verschiedene biologische Prozesse beeinflussen können. Wir konnten verringerte Proliferationsraten beobachten, höchstwahrscheinlich aufgrund einer verringerten Lebensfähigkeit der Zellen. DGCR8-E518K schien in der Lage zu sein, den Block des G1-S Übergangs zu überwinden und den Zellzyklusdefekt in DGCR8-KO-Zellen zu beheben, wenn auch nicht in vollem Umfang wie Wildtyp DGCR8. Darüber hinaus schien DGCR8-E518K nicht in der Lage zu sein, die epithelial-mesenchymale Transition (EMT) vollständig blockieren zu können. Embryoid-Körper (EBs) mit der E518K Mutation konnten das Selbsterneuerungsprogramm jedoch noch unterdrücken und somit den Differenzierungsdefekt in DGCR8-KO-Zellen beheben. Zusammenfassend konnte ich zeigen, dass DROSHA E1147K und DGCR8 E518K häufige Mutationen in WT sind und dabei am häufigsten in Hochrisiko-Tumoren vorkommen. Jede dieser Mutationen führte in vitro zu einer veränderten miRNA-Expression, was unsere vorherigen Befunde in Tumorproben bestätigte. Während die DROSHA E1147K Mutation zu einer globalen Herunterregulierung kanonischer miRNAs führte, konnte die DGCR8 E518K Mutation die Aktivität des Mikroprozessorkomplexes größtenteils wiederherstellen, was darauf hindeutet, dass eine teilweise Verringerung der Aktivität oder eine veränderte Spezifität bei der WT-Entstehung kritisch sein könnte. Trotz der signifikanten Unterschiede in den miRNA- und mRNA-Profilen von DGCR8-E518K- und DGCR8 Wildtyp-Zellen, ergab die Funktionsanalyse, dass DGCR8 E518K viele wichtige Zellfunktionen im Knockout wiederherstellen konnte und sich nur geringfügig von der Wildtyp-Situation unterschied. Weitere Studien unter physiologischeren Bedingungen, wie beispielsweise in einem WT-Blastem-Modellsystem, könnten zusätzlich helfen, die in unseren Mausstammzelllinien beobachteten feinen Unterschiede zwischen DGCR8 E518K und DGCR8 Wildtyp besser bewerten zu können. Zusammen mit unseren Erkenntnissen könnten diese Modellsysteme somit dazu beitragen, die Rolle dieser Mikroprozessormutationen bei der WT-Entstehung besser zu verstehen.

Mesalazine is often used as first-line therapy for ulcerative colitis. Several reports have pointed to systemic adverse reactions associated with this drug. Most have evoked a drug-induced hypersensitivity syndrome, while some have described lupus syndromes but with limited clinical and varied biological features. A 75-year-old man presented with fever, dyspnoea, chest pain, polyarthralgia, and myalgia, following mesalazine introduction. Clinical symptoms and low-titre positive antihistone antibodies disappeared after mesalazine withdrawal without recourse to steroids. Pericardial effusion and 8F-fluorodeoxyglucose uptake on positron emission tomography/CT scan, and glomerular haematuria and proteinuria also disappeared. Cytokine-lymphocyte transformation tests showed a strong sensitisation pattern with interleukin-5 production. This case advances our knowledge of the mechanism of mesalazine-induced adverse effects, namely via drug-induced hypersensitivity with lupus manifestations, which we are the first to report.