Search

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, na área científica de Clínica A dermatite atópica canina é uma síndrome multifatorial que, apesar de muito comum nos nossos cães, apresenta uma patogenia bastante complexa e com ainda muito por entender. Sabe-se que a disfunção da barreira cutânea apresenta um papel importante na patogenia desta afeção e que os lípidos do estrato córneo desempenham uma função crucial na manutenção da integridade da barreira. Deste modo, a análise lipidómica da pele tem ganho cada vez mais relevância e os recentes desenvolvimentos nas tecnologias analíticas baseadas na espectrometria de massa podem proporcionar uma investigação aprofundada dos lípidos cutâneos, fornecendo uma visão do seu papel e mecanismo de ação no desenvolvimento de dermatite atópica canina. Este estudo pretende avaliar a utilidade e praticidade desta técnica em contexto de clínica e de investigação, bem como as diferenças nos perfis lipídicos do estrato córneo da pele de cães saudáveis não atópicos e de cães atópicos e entre regiões corporais (espaço interdigital coxa e virilha). Foram incluídos neste estudo dezasseis cães da raça Labrador Retriever, oito sem histórico de doenças de pele e oito com diagnóstico de dermatite atópica canina. De cada cão foram colhidas três amostras, uma do espaço interdigital, uma da coxa e uma da virilha. As amostras de estrato córneo foram colhidas com recurso a fitas-cola D- Squame e a análise lipídica foi realizada com recurso a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa de alta resolução (LC-MS). Foi possível identificar positivamente 114 lípidos e distinguir 10 classes de lípidos, tendo sido o grupo das ceramidas o mais prevalente (66%) e o grupo dos diglicéridos o segundo mais abundante (31%) nas amostras do estrato córneo. Não se verificaram diferenças significativas na concentração de lípidos do estrato córneo entre cães atópicos e não atópicos. No entanto, verificaram-se diferenças na concentração de classes lipídicas entre locais de recolha da amostra. Este estudo piloto destaca o potencial da cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa como meio para melhor compreender o comportamento lipídico do estrato córneo na dermatite atópica canina e encoraja a investigação futura desta área. ABSTRACT - COMPARISON OF STRATUM CORNEUM LIPIDS IN LABRADOR RETRIEVER DOGS WITH AND WITHOUT ATOPIC DERMATITIS : LIPIDOMIC ANALYSIS - Canine atopic dermatitis is a multifactorial syndrome that, although very common in dogs, has a very complex pathogenesis with a lot yet to be understood. It is known that the skin barrier dysfunction plays an important role in the pathogenesis of this condition and that stratum corneum lipids play a crucial role in maintaining the integrity of the barrier. Thus, skin lipidomics analysis has gained increasing relevance and recent developments in mass spectrometry-based analytical technologies can provide an in-depth investigation of skin lipids, providing insight into their role and mechanism of action in development of canine atopic dermatitis. This study aimed to evaluate the practicality of this technique in clinical and research settings, as well as the differences in the lipid profiles of the stratum corneum of the skin of healthy non-atopic and atopic dogs and between body sites (paw, thigh and groin). Sixteen dogs of the Labrador Retriever breed were included in this study, eight with no history of skin diseases and eight with a diagnosis of canine atopic dermatitis. Three samples were collected from each dog, one from the paw, one from the thigh, and one from the groin. The stratum corneum samples were collected using D-Squame tape and lipid analysis was performed using liquid chromatography coupled to high performance mass spectrometry (LC-MS). It was possible to positively identify 114 lipids and distinguish 10 lipid classes, with the ceramide group being the most prevalent (66%) and the diglyceride group being the second most abundant (31%) in the stratum corneum samples. There were no significant differences in the concentration of stratum corneum lipids between atopic and non-atopic dogs. However, there were differences in the concentration of lipid classes between sample collection sites. This pilot study highlights the potential of liquid chromatography coupled with mass spectrometry to better understand stratum corneum lipid behavior in canine atopic dermatitis and encourages future research in this area. N/A

Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar A composição de ácidos gordos (AG) da carne bovina é um aspeto que os consumidores consideram importante, e a carne de ruminantes tem sido criticada por razões nutricionais devido à sua contribuição para a ingestão total de ácidos gordos saturados (AGS), os quais estão associados à incidência de doenças metabólicas. O objetivo deste trabalho consistiu na caracterização do perfil dos AG, em particular AG trans, na carne de raças bovinas portuguesas ou produzidas e comercializadas em Portugal. As amostras de carne bovina certificadas e não certificadas, analisadas no estudo foram adquiridas nas superfícies comercias de Lisboa, e os lípidos foram extraídos usando o diclorometano e metanol, de seguida foi feita a transesterificação combinada e os AG na forma de ésteres metílicos foram analisados por cromatografia gasosa com deteção por ionização de chama. A análise estatística foi efetuada utilizando o programa SAS 9.4, através do modelo misto onde a origem da carne foi único fator fixo. Através dos resultados obtidos de carnes de bovino certificadas e não certificadas da região de Lisboa verificou-se que tanto o teor lipídico como a composição em AG são variáveis entre origens, e entre carnes da mesma origem. Os AGS foram os principais AG encontrados na carne de bovino seguida dos ácidos gordos monoinsaturados (AGMI) de configuração cis, ácidos gordos polinsaturados (AGPI) ómega-6 e AG trans. Às carnes dos Açores tiveram um perfil em AG mais benéfico à saúde humana no perfil em AG trans e AGPI ómega-3, teve baixo teor em 18:1trans-10 que as carnes Indiferenciadas ou Carnalentejana. Estas diferenças são influenciadas por fatores intrínsecos e extrínsecos do animal. ABSTRACT - Evaluation of the trans fatty acid profile of beef on the Portuguese market - The fatty acid (FA) composition of beef is an aspect that consumers consider important, and ruminant meat has been criticised for nutritional reasons due to its contribution to the total intake of saturated fatty acids (SFA), which are associated with the incidence of metabolic diseases. The purpose of this work was to characterise the profile of FA, in particular trans fatty acids (TFA), in the meat of Portuguese beef breeds or produced and marketed in Portugal. The samples of certified and non-certified beef, analysed in the study were purchased from commercial surfaces in Lisbon, and the lipids were extracted using dichloromethane and methanol, then combined transesterification was carried out and the FA in the form of methyl esters were analysed by gas chromatography with flame ionisation detection. Statistical analysis was carried out using the SAS 9.4 program, through the mixed model where the origin of the meat was the only fixed factor. The results obtained from certified and non-certified beef from the Lisbon region showed that both the lipid content and the composition in FA are variable between origins, and between meats of the same origin. The main fatty acids found in beef were the SFA, followed by cis-configured monounsaturated fatty acids (MUFA), omega-6 polyunsaturated fatty acids (PUFA) and trans fatty acids (TFA). The Açores meats had a more beneficial profile for human health in terms of trans fatty acids (TFA) and omega-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA) but had a lower content of 18:1 trans-10 than the undifferentiated meats or meat from Carnalentejo. These differences are influenced by intrinsic and extrinsic factors of the animal. N/A

Dissertação de Mestrado em Segurança Alimentar O salpicão é um enchido curado tradicional português, que pertence a um vasto grupo de produtos cárneos. Para além de representarem parte da dieta mediterrânica, estes produtos são importantes para as economias rurais e para a preservação da herança. No entanto, em 2015, a IARC avaliou a carcinogenicidade do consumo de carne processada. Como resultado, a carne processada foi classificada como carcinogénica para humanos (Grupo 1), com base em evidência suficiente de que o consumo de carne processada causa cancro colorretal. As N-nitrosaminas inserem-se no grupo das substâncias responsáveis por este efeito carcinogénico. Desta forma, é importante saber se estes compostos estão presentes nos produtos cárneos, particularmente no salpicão. Mais ainda, é importante perceber se estão reunidas as condições para a sua formação, nomeadamente precursores e ambiente ácido. Por estes motivos, analisaram-se amostras de salpicão, de três unidades fabris distintas, quanto aos teores de nitratos, nitritos, aminas secundárias e N-nitrosaminas. Também o pH das amostras foi analisado. As análises químicas foram efetuadas nos seguintes pontos temporais: carne (T0), pré-enchimento (T1), meia cura (T2), produto final (T3), meio do prazo de validade (T4) e final do prazo de validade (T5). Os valores de pH variaram entre 5,6 e 5,8 na carne (T0) e mantiveram-se dentro da gama esperada para produtos fermentados. Não se detetaram nitratos (acima do Limite de Quantificação). Quanto à determinação de nitrito residual, apenas se detetaram (acima do Limite de Quantificação) nas amostras da unidade fabril C, mas sempre em teores muito inferiores ao permitido na legislação da EU (100 mg NaNO2/kg). Não se detetaram aminas secundárias nas amostras da unidade fabril B. Detetaram-se aminas secundárias em algumas amostras da unidade fabril A (T1 e T5) e da unidade fabril C (T0, T1 e T5), sendo que os valores médios mais elevados foram: 7,4 mg de Piperdina/kg, 11,0 mg de Di-n-propilamina/kg, 20,9 mg de Pirrolidina/kg, 22,6 mg de Morfolina/kg e 26,2 mg de Dimetilamina/kg. Não se detetaram nitrosaminas nas amostras analisadas. Apesar de existir uma válida preocupação em torno das N-nitrosaminas, estes compostos não foram detetados nos produtos em estudo, nem os seus precursores em concentrações suficientes, para a sua formação. É necessário continuar a estudar este assunto para que se consiga compreender a relação entre o consumo de diferentes tipos de carne processada e o verdadeiro risco para a saúde do Homem. ABSTRACT - Characterization of chemical hazards in traditional cured meat sausages: nitrosamines and precursors - “Salpicão” is a traditional Portuguese cured sausage, and it belongs to a wide group of meat products. These products not only represent part of the Mediterranean diet, but also have great value for the economy of rural areas and for the preservation of heritage. However, in 2015, IARC has evaluated the carcinogenicity associated to the consumption of processed meat. As a result, processed meat was classified as carcinogenic to humans (Group 1), based on sufficient evidence that the consumption of processed meat causes colorectal cancer. N-nitrosamines are among the responsible substances for the assessed carcinogenic effect. Therefore, there is a need to understand if these compounds are present in meat products, particularly in “salpicão”. Moreover, it is also important to know if the combination of precursors and acidic environment are gathered, to generate N-nitrosamines. For this purpose, samples of “salpicão”, from three distinct factories, were analysed for the quantification of nitrate, nitrite, secondary amines, and N-nitrosamines levels. The pH levels were also evaluated. The chemical analyses and pH evaluation were performed at the following time points: raw meat (T0), before stuffing (T1), middle of curing process (T2), finished product (T3), middle of shelf-life (T4), and end of shelf-life (T5). The pH values of all meat samples ranged between 5,6 and 5,8 and remained within the expected for fermented products. No residual nitrate levels were found to be above the Limit of Quantification. As for residual nitrite levels, those were only detected (above Limit of Quantification) in the samples from factory C, but always considerably under the legal EU limit (100 mg NaNO2/kg). No secondary amines were detected in the samples from factory B. Secondary amines were detected in few samples of the factory A (T1 and T5) and factory C (T0, T1 and T5), with the highest mean values of 7,4 mg of Piperdine/kg, 11,0 mg of Dipropylamine/kg, 20,9 mg of Pyrrolidine/kg, 22,6 mg of Morpholine/kg and 26,2 mg of Dimethylamine/kg. No nitrosamines were detected in the analysed samples. Although nitrosamines may be substances of great concern, they were not found in these meat products, nor their precursors, in sufficient concentrations. Further studies are required to fully understand the link between the consumption of different kinds of processed meat and the actual risk that they represent to human health. N/A

Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica/Produção Animal A carne de ruminantes é caracterizada por ser pobre em ácidos gordos polinsaturados (PUFA) e rica em ácidos gordos saturados (SFA), devido ao processo de bioidrogenação (BH) que ocorre no rúmen. É recomendado pelas organizações mundiais de saúde que a população diminua o seu consumo em SFA e aumente o teor em PUFA, sendo altamente recomendável o aumento de PUFA ómega 3 de cadeia longa (n-3 LC-PUFA), nomeadamente o ácido eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA). Uma das estratégias para alterar o perfil lipídico da carne é recorrendo à manipulação da alimentação animal com a inclusão de EPA e DHA, provenientes, essencialmente de fontes marinhas, como o óleo de peixe e microalgas. A hipótese colocada neste trabalho corresponde a averiguar se a introdução de microalgas, na forma de biomassa desidratada, na dieta de ruminantes, poderá proteger naturalmente os LC-PUFA dos microrganismos do rúmen melhorando, desta forma o perfil lipídico da carne. Assim sendo, foi realizado um ensaio no INIAV-Santarém, com a duração de três semanas; o qual contou com 28 borregos de raça Merino Branco (MB) distribuídos aleatoriamente por 4 dietas diferentes (Controlo (C) e dieta C suplementada com 1,2% de óleo extraído de Nannochloropsis spp (O); 9,2% de Nannochloropsis oceanica liofilizada (L); e 12,3% de N. oceanica spray dried (S)). Cada quantidade de microalgas foi adicionada para a dieta conter quantidades idênticas de EPA (3 g/kg de matéria seca). Neste ensaio testou-se a viabilidade da N. oceanica como uma via de proteção do EPA não só no rúmen, mas também no restante caminho até ao duodeno do animal, onde poderá ser absorvido e depositado nos seus tecidos sem afetar o desempenho produtivo dos animais. Os resultados obtidos demonstraram que a incorporação da biomassa da N. oceanica na dieta dos borregos aumentou os níveis de n-3 LC-PUFA, maioritariamente o EPA, na carne, não havendo diferenças significativas entre as dietas com os diferentes métodos de secagem. Estes resultados foram obtidos sem afetar tanto o desempenho produtivo dos borregos como as características qualitativas da carne. A biomassa de N. oceanica é, assim, uma potencial fonte protetora de EPA quando incorporada na alimentação de borregos. ABSTRACT - Ruminant meat is characterized by its low polyunsaturated fatty acid (PUFA) content and high saturated fatty acid (SFA) content, due to the biohydrogenation process (BH) which occurs in the rumen. It is recommended by world health organizations that population should decrease the consumption of SFA and increase the PUFA consumption, being highly recommended a significant increase in omega 3 long chain PUFA (n-3 LC-PUFA), mainly eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA). One of the best ways to modify the fatty acid profile in meat is through manipulation of animal feeding, through inclusion of EPA and DHA, which come mostly from fish oil and microalgae. It was hypothesized that the introduction of microalgae in dehydrated biomass form in the ruminant diet might naturally protect the LC-PUFA from rumen microorganisms, and thus improve the lipid profile of meat. Therefore, a three-week trial was performed in INIAV-Santarém, with 28 Merino Branco (MB) lambs, in which each seven were randomly subjected to 4 different diets (Control (C) and C supplemented with 1,2% of Nannochloropsis spp. oil extract (O); 9,2% of Nannochloropsis oceanica freeze-dried (L); and12,3% of N. oceanica spray dried (S)). Each portion of microalgae was added to contain equal amounts of EPA (3 g/kg dry matter) in diet. In this study, we tested the viability of N. oceanica as a natural source of rumen-protected EPA, not only in the rumen but also in the remaining pathway to the lamb’s duodenum to be absorbed and deposited in its tissues without compromise the animal performance and their productive characteristics. The incorporation of N. oceanica biomass increased the levels of n-3 LC-PUFA, mainly EPA, in lamb meat and there were no significant differences between diets with different drying methods. These results were obtained without affecting both lamb productive performance as well as meat qualitative characteristics. The N. oceanica biomass shows a strong potential to be used as natural dietary source of EPA to lambs. N/A

Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica/Produção Animal A inclusão de suplementos lipídicos, geralmente compostos por triacilgliceróis, na dieta de ruminantes permite aumentar o seu desempenho produtivo e alterar a composição lipídica dos seus produtos. Sabe-se que os triacilgliceróis ingeridos são extensivamente hidrolisados no rúmen (i.e., lipólise), mas pouco se conhece sobre o comportamento cinético da lipólise de diferentes tipos de triacilgliceróis. O objetivo geral deste trabalho consistiu na avaliação da lipólise de diferentes triacilgliceróis (TGL-16:0/16:0/16:0, TGL- 18:0/18:0/18:0, TGL-18:1/18:1/18:1, TGL-18:2/18:2/18:2 e TGL-18:3/18:3/18:3) através de estudos in vitro com inóculo ruminal durante 0, 0,5, 2, 4 e 6 horas de incubação. Especificamente pretendeu-se avaliar na lipólise o efeito do comprimento da cadeia e grau de insaturação dos AG no triacilglicerol. Adicionalmente analisaram-se os produtos provenientes da bioidrogenação e síntese microbiana. Através dos resultados obtidos constatou-se que o desaparecimento dos triacilgliceróis testados aumentou significativamente (P

Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica/Produção Animal O interesse em estudar a composição em ácidos gordos (AG) da carne de ruminantes advém da necessidade de descobrir diferentes vias para produzir carne mais saudável, isto é, com um teor de ácidos gordos polinsaturados (PUFA) mais elevado comparativamente ao teor de ácidos gordos saturados (SFA) e um balanço mais favorável entre os PUFA ómega-6 e ómega-3. O estudo realizado examinou os efeitos de diferentes fontes de PUFA de cadeia muito longa (LCPUFA) ómega-3 na composição de AG do músculo e da gordura subcutânea (GSC) de borregos. Assim, os principais objetivos deste estudo foram verificar de que forma a suplementação da dieta de borregos com lípidos de origem marinha (óleo de peixe e microalgas) afetou a composição de AG do músculo de borregos através da comparação do teor e tipo de AG das frações lipídicas do músculo (lípidos neutros e polares) e da GSC de borregos e se os AG provenientes das algas e do óleo de peixe se depositaram em quantidades significativas na carne ou na GSC. O ensaio foi realizado no INIAV-Santarém, em que foram utilizados 36 borregos Merino Branco, divididos em 3 grupos de 12 animais cada. O ensaio foi realizado durante 6 semanas, após uma semana de adaptação em que a dieta foi introduzida progressivamente. Os três grupos experimentais foram sujeitos a diferentes dietas: controlo, óleo de peixe e algas. Em geral, houve uma redução do 18:0 e uma acumulação de 18:1trans nos tecidos dos animas suplementados com lípidos de origem marinha comparativamente ao controlo, o que sugere a inibição do último passo da bioidrogenação ruminal. A suplementação das dietas com óleo de peixe e algas conduziram a um aumento de LCPUFA n-3 e CLAc9t11 na carne e na gordura dos borregos. No entanto, os níveis mais elevados de CLAc9t11 foram verificados no tratamento com óleo de peixe, o que sugere uma menor atividade da enzima Delta9-dessaturase no tratamento com algas relativamente ao do óleo de peixe. ABSTRACT - The interest in study the fatty acid composition of ruminant meat comes from the need to find different ways to produce meat with a higher content of polyunsaturated fatty acids (PUFA) compared to saturated fatty acids and a favorable balance between PUFA omega-6 and omega-3. This study examined the effects of different marine sources in the fatty acid composition of subcutaneous fat and muscle of lambs. Thus, the aims of this study was verify if the dietary supplementation of lipids from marine sources (fish oil and microalgae) had an effect on the fatty acid composition of lambs muscle and compare the content and type of fatty acids in lipid muscle fractions (neutral and polar lipids) and subcutaneous fat, and also understand if fatty acids from algae and fish oil were deposited in significant quantities in these tissues. The experiment was conducted at INIAV-Santarem, where 36 Merino Branco lambs were divided into 3 groups of 12 animals each. The experiment was conducted over 6 weeks after one week of adaptation to the diet. The three groups were subjected to different diets: control, fish oil and algae. Overall, there was a reduction of 18:0 and an accumulation of 18:1trans in the tissues of animals supplemented with marine lipids compared to control, suggesting an inhibition of the last biohydrogenation step. Supplementation of diets with fish oil and algae led to an increase of n-3 LCPUFA and CLAc9t11 in meat and subcutaneous fat of lambs. However, the highest levels of CLAc9t11 were observed with the fish oil treatment suggesting a reduced Delta9-dessaturase enzyme activity on animals fed algae compared to those fed fish oil.

Dissertação de Mestrado em Engenharia Zootécnica/Produção Animal Os ruminantes representam uma importante fração na dieta da população, através dos seus produtos comestíveis: a carne e o leite. Estes produtos contém ácidos gordos saturados e ácidos gordos trans, que são produzidos pela biohidrogenação que ocorre no rúmen. Interessa portanto estudar sistemas que possam contornar esta ocorrência, de forma a melhorar a qualidade da carne e do leite, melhorando a nutrição humana. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito da tecnologia de alta pressão, de acordo com diferentes níveis de pressão (P), tempo (T) e água (A), sobre a biohidrogenação dos ácidos gordos insaturados de uma semente oleaginosa, a soja, durante a digestão ruminal. Os resultados obtidos, através da simulação in vitro da digestão fermentativa com fluido ruminal e posterior análise de ácidos gordos por técnicas de cromatografia gasosa, são bastante promissores e sugerem que o tratamento das sementes sem adição de água e com pressões mais baixas, aumenta a proteção dos ácidos gordos polinsaturados da biohidrogenação, o que potenciará um aumento destes ácidos gordos nos produtos de ruminantes. Estes resultados provam o interesse em continuar a investigar este tema, avaliando o comportamento de outras sementes oleaginosas usadas em alimentação animal, para poder chegar a conclusões sustentadas. ABSTRACT - EFFECT OF SOYBEAN SEEDS PRESSURIZATION IN RUMINAL METABOLISM OF FATTY ACIDS - Ruminants represent an important piece in diet of the population, through its food products: meat and milk. These products contain saturated and trans-fatty acids, which are produced by biohydrogenation occurring in the rumen. In a way to improve quality of meat and milk, the study of these systems can change these occurrences, and therefore improving human nutrition. The aim of this work was to study the effect of high-pressure technology, in biohydrogenation of the unsaturated fatty acids of an oilseed, in this case soybean, during the ruminal digestion, according to different levels of pressure (P), time (H) and water (A). The obtained results, through in vitro simulation of fermentation digestion with ruminal fluid and posterior analysis of fatty acids, using gas chromatography techniques, are very promising and suggest that, the treatment of seeds without adding water and with low pressure, increases the protection of polyunsaturated fatty acids from biohydrogenation, which will enhance an increase of these fatty acids in ruminants products. These results prove the interest on continuing to study this theme, assessing the behavior of other oilseeds used in animal feed, to get to sustained conclusions.