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Pretende-se problematizar a relação do povo indígena Pataxó (sul da Bahia) com a política pública de Assistência Social (AS). Para tanto, a análise incidirá sobre o trabalho social dos Centros de Referência em Assistência Social (CRAS) das cidades de Prado e Porto Seguro, que abarcam territórios reconhecidos pelo Estado como “Terra Indígena” e outras áreas categorizadas pelos indígenas como de “retomada”. Os CRAS são unidades estatais descentralizadas formalmente responsáveis pela organização e oferta dos serviços socioassistenciais cujo objetivo é prevenir a ocorrência de situações de vulnerabilidades e riscos sociais em seus respectivos territórios de abrangência. Ocorre que as noções indígenas de território têm pouca (ou nula) incidência na efetivação desta política pública, comprometendo os direitos à autonomia e protagonismo dos chamados “usuários”, contrariando a Constituição Federal e a legislação infraconstitucional. A apresentação tem como base dados coletados durante trabalho de campo realizado, no ano de 2014, para o Governo Federal.

Orientador: Celso Eduardo Benedetti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O cancro cítrico, causado pelo fitopatógeno Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) constitui uma doença que afeta todos os cultivares comerciais de citros e é uma ameaça para a citricultura brasileira. A doença é caracterizada pela formação de pústulas, devido à hiperplasia e hipertrofia induzida pela bactéria. A patogenicidade de Xac é dependente do sistema secretório tipo III, que transloca proteínas efetoras pertencentes à família AvrBs3/PthA para dentro da célula hospedeira. Estudos recentes mostram que PthAs funcionam como fatores de transcrição no hospedeiro, transativando genes específicos da planta que irão beneficiar a bactéria ou desencadear uma resposta de defesa. Com o objetivo de entender melhor o mecanismo de ação de PthAs como ativadores da transcrição, nosso laboratório identificou, através da técnica de duplo-híbrido, várias proteínas de laranja (Citrus sinensis) que interagiram com diferentes PthAs. Entre elas, destacamos uma ciclofilina (CsCyp), que realiza isomerização de resíduos de prolina, uma proteína com domínio tioredoxina (CsTdx), relacionada com interação proteína-proteína e redução de pontes dissulfeto e uma cisteína protease (CsCP), envolvida na resposta de defesa da planta. Este trabalho teve como objetivo a caracterização estrutural e funcional de CsCyp. A resolução da estrutura de CsCyp mostrou que CsCyp pertence ao grupo de ciclofilinas divergentes que possuem um loop adicional (KSGKPLH), duas cisteínas invariáveis (C40 e C168) e um glutamato (E83) conservado. Este último interage com resíduos do loop, estabilizando-o. A função destes elementos era desconhecida até o momento e o trabalho visou elucidar sua atuação na regulação da atividade PPIase da proteína. Neste trabalho, verificamos que C40 e C168 formam uma ponte dissulfeto. Dados de modelagem e simulação suportaram a hipótese de que a formação da ponte dissulfeto induz mudanças conformacionais que quebram a interação do E83 com o loop divergente, levando ao fechamento do sítio ativo de CsCyp. O estudo descreveu, portanto um mecanismo de regulação redox, que controla a atividade PPIase da proteína. Adicionalmente, mostrou-se que CsTdx interage com CsCyp através dos resíduos conservados C40 e C168, sendo críticos para tal interação. Foi mostrado também que CsCyp interage com o domínio C-terminal (CTD) da RNA Polimerase II (RNA Pol II), especificamente com a repetição YSPSAP. Surpreendentemente, através da transformação de plantas com construções para silenciamento e superexpressão de CsCyp, verificamos que plantas de citros com níveis reduzidos de CsCyp apresentaram um aumento dos sintomas do cancro cítrico quando infiltradas com Xac, enquanto que plantas com níveis aumentados de CsCyp apresentaram sintomas reduzidos quando infiltradas com Xac, indicando que CsCyp tem papel importante no desenvolvimento dos sintomas do cancro cítrico. Este trabalho também mostra a expressão e purificação das proteínas CsTdx e CsCP e a comprovação de que CsCP interage com PthAs 2 e 3 através de ensaios de duplo-híbrido Abstract: Citrus canker, caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is a disease that affects most species of the genus Citrus and represents a threat to the Brazilian citrus industry. The disease is characterized by the formation of pustules due to hyperplasia and hypertrophy induced by the bacteria. Xac pathogenicity is dependent on a type III secretory system that translocates effector proteins which belongs to AvrBs3/PthA family inside the host cell. Recent studies showed that these proteins work as transcriptional factors that transactivate specific plant genes which will either benefit the bacteria or trigger defense response. To gain insights into PthA mechanism of action as transcription activators, our laboratory identified that PthA targeted the citrus protein complex comprising the thioredoxin CsTdx, ubiquitin-conjugating enzymes CsUev/Ubc13 and cyclophilin CsCyp. Also, we showed previously that the CsCyp binds the citrus thioredoxin CsTdx and the C-terminal domain of RNA Polymerase II (CTD), and that CsCyp complements the function of Cpr1 and Ess1, two yeast prolyl-isomerases that regulate transcription by the isomerization of proline residues of the regulatory C-terminal domain (CTD) of RNA polymerase II. In this work we solved the 3D structure of CsCyp in complex with its inhibitor cyclosporine A (CsA), showing that CsCyp is a divergent cyclophilin that carries the additional loop KSGKPLH, invariable cysteines C40 and C168, and conserved glutamate E83. Despite the suggested roles in ATP and metal binding, the function of these unique structural elements remains unknown. Here we show that the conserved cysteines form a disulfide bond that inactivates the enzyme, whereas E83, which belongs to the catalytic loop and is also critical for enzyme activity, is anchored to the divergent loop to maintain the active site open. In addition, we demonstrate that C40 and C168 are required for the interaction with CsTdx and that CsCyp binds the citrus CTD YSPSAP repeat. Our data support the model where formation of the C40- C168 disulfide bond induces a conformational change that disrupts the interaction of the divergent and catalytic loops, via E83, causing the active site to close. This suggests a new type of allosteric regulation in divergent cyclophilins, involving disulfide bond formation and a loop displacement mechanism. Moreover, we present evidence that PthA2 inhibits the peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (PPIase) activity of CsCyp in a similar fashion as CsA, and that silencing of CsCyp, as well as treatments with CsA, enhance canker lesions in Xac-infected leaves. Given that CsCyp appears to function as a negative regulator of cell growth and that Ess1 negatively regulates transcription elongation in yeast, we propose that PthAs activate host transcription by inhibiting the PPIase activity of CsCyp on the CTD Doutorado Genética de Microorganismos Doutora em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: O enovelamento incorreto de proteínas pode ocasionar diversas doenças e até mesmo o envelhecimento. Ele pode levar à perda de função das proteínas ou acarretar na formação de agregados proteicos amiloidogênicos, os quais estão envolvidos com diversas doenças. Para se proteger desses agregados, diversos organismos expressam chaperonas moleculares da família Hsp100 (ClpB em bactéria, Hsp104 em levedura e Hsp101 em plantas, por exemplo), que são capazes de desagregar outras proteínas levando à reativação das mesmas. Surpreendentemente, metazoários não possuem um gene para a família da Hsp100. Contudo, estudos recentes mostraram que a co-chaperona Hsp110 tem função desagregase. Dessa forma, o objetivo desta dissertação é caracterizar a HSPH1, uma co-chaperona Hsp110 humana, através da expressão, purificação e caracterização da sua relação estrutura e função. O gene hsph1 clonado no vetor pPROEX-Htb foi expresso na forma solúvel em Escherichia coli (E. coli) BL21(DE3) e a proteína recombinante foi purificada em duas etapas cromatográficas, afinidade e exclusão por tamanho. As análises de espectropolarimetria de dicroísmo circular (CD) determinaram que a HSPH1 foi expressa e purificada enovelada e estável, com estrutura secundária predominante do tipo hélice ?, conservada até 48 ºC e na presença de ureia 3 mol/L. Além disso, a análise da emissão de fluorescência indicou que pelo menos um dos resíduos de triptofano se encontra parcialmente localizado no interior da proteína enovelada. As propriedades hidrodinâmicas (massa molecular, coeficiente de difusão e raio de Stokes), obtidas através das técnicas de cromatografia de gel filtração analítica (GFA), cromatografia de exclusão por tamanho acoplada ao detector multiângulo (SEC-MALS) e espalhamento de luz dinâmica (DLS), mostraram que a HSPH1 se comportou como um monômero com conformação alongada. Finalmente, os experimentos funcionais mostraram que a proteína possui atividade chaperona seletiva, sendo capaz de proteger de maneira diferente proteínas-cliente contra a agregação. Os resultados obtidos têm potencial para acrescentar significativamente ao conhecimento sobre a homeostase proteica na célula, podendo gerar insumos que tenham aplicação médica e biotecnológica Abstract: The incorrect protein folding can cause many diseases and even aging. It can lead to loss of function or to the formation of protein amyloid aggregates, which are involved in several diseases. In order to protect from these aggregates, many organisms express the Hsp100 chaperone (ClpB in bacteria, Hsp104 in yeast and Hsp101 in plants), which is able to disaggregate other proteins leading to their reactivation. Surprisingly, metazoa does not have a gene for the Hsp100. Nevertheless, recent studies have suggested that Hsp110 co-chaperone have disaggregation function. Thus, the aim of this dissertation is to characterize HSPH1, a human Hsp110 co-chaperone, by expressing, purifying and performing structure and functional characterization. The hsph1 gene in pPROEX-Htb vector expressed a soluble protein into Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) and two chromatography steps were used to purify de protein (affinity chromatography followed by size exclusion chromatography). Circular dichroism (CD) and fluorescence emission spectroscopy assays showed that HSPH1 was expressed and purified as a folded and stable protein, with ? helical content of about 34% and it kept its secondary structure content up to about 48 °C and 3 mol/L of urea. Analysis of the emission fluorescence spectroscopy indicated that at least one of the tryptophan residues was partially buried in the native protein. Hydrodynamics properties (molecular mass, diffusion coefficient and Stokes radius) obtained from analytical gel filtration (AGF), size exclusion chromatography combined with multi-angle light (SEC-MALS) and dynamic light scattering (DLS) techniques results suggested that HSPH1 was an elongated monomer. Functional experiments showed that the protein has selective chaperone activity with different protection effects depend on the client-protein tested. The results have the potential to increase significantly the knowledge about protein homeostasis in the cell, which can generate inputs that have medical and biotechnological application Mestrado Química Orgânica Mestra em Química FAPESP 2016/04246-2 CNPQ