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Malalties neoplàstiques hematològiques; Perfil genètic; Precisió Enfermedades neoplásticas hematológicas; Perfil genético; Precisión Hematological neoplastic diseases; Genetic profile; Accuracy La patologia hematooncològica s’ha dividit en tres grups: limfoide, mieloide i leucèmia aguda limfoblàstica. S’ha definit la llista de gens adequada per a cada patologia i tots ells han estat seleccionats atenent a: La seva utilitat diagnòstica i de diagnòstic diferencial amb altres entitats i que, per tant, permetin a l’equip diagnòstic (hematòlegs, patòlegs o biòlegs) realitzar un diagnòstic ben fet. La seva utilitat pronòstica i predictiva, sempre que això comporti un canvi d’actitud terapèutica. Per exemple, indicació de trasplantament de progenitors o altres teràpies cel·lulars, canvi en el seguiment i canvi en el tipus de tractament. La seva utilitat terapèutica per a la indicació de l’ús de fàrmacs diana.

Promising results have been shown with the combination of ponatinib and chemotherapy in adults with Philadelphia chromosome–positive acute lymphoblastic leukemia (Ph+ ALL). The PONALFIL (Ponatinib With Chemotherapy for Young Adults Ph Positive Acute Lymphoblastic Leukemia) trial combined ponatinib (30 mg/d) with standard induction and consolidation chemotherapy followed by allogeneic hematopoietic stem cell transplant (alloHSCT) in newly diagnosed Ph+ ALL patients aged 18 to 60 years. Ponatinib was only given pre-emptively after alloHSCT. Primary end points were hematologic and molecular response before alloHSCT and event-free survival (EFS), including molecular relapse as event. Thirty patients (median age, 49 years; range, 19-59 years) entered the trial. All exhibited hematologic response, and alloHSCT was performed in 26 patients (20 in complete molecular response and 6 in major molecular response). Only 1 patient died (of graft-versus-host disease), and 5 patients exhibited molecular relapse after alloHSCT. No tyrosine kinase inhibitor was given after HSCT in 18 of 26 patients. Twenty-nine patients are alive (median follow-up, 2.1 years; range, 0.2-4.0 years), with 3-year EFS and overall survival (OS) of 70% (95% confidence interval, 51-89) and 96% (95% confidence interval, 89-100), respectively. Comparison of the PONALFIL and the ALLPh08 (Chemotherapy and Imatinib in Young Adults With Acute Lymphoblastic Leukemia Ph [BCR-ABL] Positive; same schedule, using imatinib as the tyrosine kinase inhibitor) trials by propensity score showed significant improvement in OS for patients in PONALFIL (3-year OS, 96% vs 53%; P = .002). The most frequent grade 3 to 4 adverse events were hematologic (42%), infectious (17%), and hepatic (22%), with only one vascular occlusive event. The combination of chemotherapy with ponatinib followed by alloHSCT is well tolerated, with encouraging EFS in adults with newly diagnosed Ph+ ALL. Cross-trial comparison suggests improvement vs imatinib (clinicaltrials.gov identifier #NCT02776605)., This project was supported in part by the ISCIII (PI14/01971 and PI19/01828), cofunded by ERDF/ESF, “A way to make Europe”/ “Investing in your future,” CERCA/Generalitat de Catalunya SGR 2017 288 (GRC)/“La Caixa.” This project has received funding from the Innovative Medicines Initiative 2 Joint Undertaking under grant agreement no. 116026. This Joint Undertaking receives support from the European Union’s Horizon 2020 research and innovation and the European Federation of Pharmaceutical Industries and Associations.

This research was supported by grants from resident award Contractes Clínic de Recerca Emili Letang-Josep Font 2021, granted by Hospital Clínic de Barcelona; and it was funded by Instituto de Salud Carlos III (ISCIII) through the project "FIS PI19/01476" and co-funded by the European Union. Despite emerging molecular information on chronic myelomonocytic leukemia (CMML), patient outcome remains unsatisfactory and little is known about the transformation to acute myeloid leukemia (AML). In a single-center cohort of 219 CMML patients, we explored the potential correlation between clinical features, gene mutations, and treatment regimens with overall survival (OS) and clonal evolution into AML. The most commonly detected mutations were TET2, SRSF2, ASXL1, and RUNX1. Median OS was 34 months and varied according to age, cytogenetic risk, FAB, CPSS and CPSS-Mol categories, and number of gene mutations. Hypomethylating agents were administered to 37 patients, 18 of whom responded. Allogeneic stem cell transplantation (alloSCT) was performed in 22 patients. Two-year OS after alloSCT was 60.6%. Six patients received targeted therapy with IDH or FLT3 inhibitors, three of whom attained a long-lasting response. AML transformation occurred in 53 patients and the analysis of paired samples showed changes in gene mutation status. Our real-world data emphasize that the outcome of CMML patients is still unsatisfactory and alloSCT remains the only potentially curative treatment. However, targeted therapies show promise in patients with specific gene mutations. Complete molecular characterization can help to improve risk stratification, understand transformation, and personalize therapy

Prognostic impact; Mutation; Acute myeloid leukemia Impacte pronòstic; Mutació; Leucèmia mieloide aguda Impacto pronóstico; Mutación; Leucemia mieloide aguda The negative prognostic impact of internal tandem duplication of FLT3 (FLT3-ITD) in patients with acute myeloid leukemia with mutated NPM1 (AML-NPM1) is restricted to those with a higher FLT3-ITD allelic ratio (FLT3high; ≥0.5) and considered negligible in those with a wild-type (FLT3WT)/low ITD ratio (FLT3low). Because the comutation of DNMT3A (DNMT3Amut) has been suggested to negatively influence prognosis in AML-NPM1, we analyzed the impact of DNMT3Amut in FLT3-ITD subsets (absent, low, and high ratios). A total of 164 patients diagnosed with AML-NPM1 included in 2 consecutive CETLAM protocols and with DNMT3A and FLT3 status available were studied. Overall, DNMT3Amut status did not have a prognostic impact, with comparable overall survival (P = .2). Prognostic stratification established by FLT3-ITD (FLT3WT = FLT3low > FLT3high) was independent of DNMT3Amut status. Measurable residual disease (MRD) based on NPM1 quantitative polymerase chain reaction was available for 94 patients. DNMT3Amut was associated with a higher number of mutated NPM1 transcripts after induction (P = .012) and first consolidation (C1; P < .001). All DNMT3Amut patients were MRD+ after C1 (P < .001) and exhibited significant MRD persistence after C2 and C3 (MRD+ vs MRD−; P = .027 and P = .001, respectively). Finally, DNMT3Amut patients exhibited a trend toward greater risk of molecular relapse (P = .054). In conclusion, DNMT3Amut did not modify the overall prognosis exerted by FLT3-ITD in AML-NPM1 despite delayed MRD clearance, possibly because of MRD-driven preemptive intervention. This work was supported in part by the Biomedical Research Institute (IIB Sant-Pau) and the José Carreras Leukemia Research Institute as well as grants from the Catalan Government (PERIS SLT002/16/0043 and AGAUR 2017 SGR 139) and the Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Economía y Competitividad, Spain (PI17/01246, PI20/01621 and CM20/00061).

Altres ajuts: This work was funded by the Fundación Mutua Madrileña (RMR), CaixaImpulse CI16-00003 (RMR), the Josep Carreras International Leukaemia Foundation (RMR), l'Obra Social 'La Caixa'-Fundació Bancària 'La Caixa' (RMR), and CERCA Programme/Generalitat de Catalunya (IJC). Despite the success of immunotherapy in several haematological neoplasms, the effectiveness in acute myeloid leukaemia (AML) is still controversial, partially due to the lack of knowledge regarding immune-related processes in this disease and similar neoplasias. In this study, we analysed the role and expression of histamine receptor 1 (HRH1) in haematological malignancies. Although the histamine receptor type 1 was widely expressed in healthy and malignant haematopoiesis, especially along the myeloid lineage, HRH1 lacked a relevant role in survival/proliferation and chemoresistance of AML cells, as analysed by HRH1 knockdown (KD) and pharmacological modulation. However, HRH1-mediated signalling was critical for the activation of the differentiation process induced by several agents including all-trans retinoic acid, establishing a role for HRH1 in myeloid differentiation. Pharmacological activation of Erk was able to partially restore differentiation capacity in HRH1 KD AML cells, suggesting that HRH1 signalling acts upstream MAPK-Erk pathway. As an indirect consequence of our results, treatment-related histamine release is not expected to confer a proliferative advantage in leukaemic cells.

Altres ajuts: We thank CERCA/Generalitat de Catalunya and Fundació Josep Carreras-Obra Social la Caixa for their institutional support. PM acknowledges financial support from theSpanish Cancer Research Association (AECC-Semilla19), the Fundación Uno entre Cienmil, the Obra Social La Caixa (LCF/PR/HR19/52160011), the Leo Messi Foundation, the Banco Santander Foundation and the "Heroes hasta la médula" initiative. BACKGROUND: Acute myeloid leukemia (AML) is a hematopoietic malignancy which is biologically, phenotypically and genetically very heterogeneous. Outcome of patients with AML remains dismal, highlighting the need for improved, less toxic therapies. Chimeric antigen receptor T-cell (CART) immunotherapies for patients with refractory or relapse (R/R) AML are challenging because of the absence of a universal pan-AML target antigen and the shared expression of target antigens with normal hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs), which may lead to life-threating on-target/off-tumor cytotoxicity. CD33-redirected and CD123-redirected CARTs for AML are in advanced preclinical and clinical development, and they exhibit robust antileukemic activity. However, preclinical and clinical controversy exists on whether such CARTs are myeloablative. METHODS: We set out to comparatively characterize in vitro and in vivo the efficacy and safety of 41BB-based and CD28-based CARCD123. We analyzed 97 diagnostic and relapse AML primary samples to investigate whether CD123 is a suitable immunotherapeutic target, and we used several xenograft models and in vitro assays to assess the myeloablative potential of our second-generation CD123 CARTs. RESULTS: Here, we show that CD123 represents a bona fide target for AML and show that both 41BB-based and CD28-based CD123 CARTs are very efficient in eliminating both AML cell lines and primary cells in vitro and in vivo. However, both 41BB-based and CD28-based CD123 CARTs ablate normal human hematopoiesis and prevent the establishment of de novo hematopoietic reconstitution by targeting both immature and myeloid HSPCs. CONCLUSIONS: This study calls for caution when clinically implementing CD123 CARTs, encouraging its preferential use as a bridge to allo-HSCT in patients with R/R AML.

© The Author(s)., Recurrent deletions of the CDKN2A/ARF/CDKN2B genes encoded at chromosome 9p21 have been described in both pediatric and adult acute lymphoblastic leukemia (ALL), but their prognostic value remains controversial, with limited data on adult T-ALL. Here, we investigated the presence of homozygous and heterozygous deletions of the CDKN2A/ARF and CDKN2B genes in 64 adult T-ALL patients enrolled in two consecutive trials from the Spanish PETHEMA group. Alterations in CDKN2A/ARF/CDKN2B were detected in 35/64 patients (55%). Most of them consisted of 9p21 losses involving homozygous deletions of the CDKNA/ARF gene (26/64), as confirmed by single nucleotide polymorphism (SNP) arrays and interphase fluorescence in situ hybridization (iFISH). Deletions involving the CDKN2A/ARF/CDKN2B locus correlated with a higher frequency of cortical T cell phenotype and a better clearance of minimal residual disease (MRD) after induction therapy. Moreover, the combination of an altered copy-number-value (CNV) involving the CDKN2A/ARF/CDKN2B gene locus and undetectable MRD (≤ 0.01%) values allowed the identification of a subset of T-ALL with better overall survival in the absence of hematopoietic stem cell transplantation., This project was supported by the Asociación Española Contra el Cáncer, AECC (project ref.: GC16173697BIGA), by CERCA Program/Generalitat de Catalunya, the Catalan Government: 2014-SGR225 (GRE), Obra Social “La Caixa” and by Celgene Spain. E. Genescà is the recipient of agrant from the Spanish Health Ministry (ISCIII, CA12/00468) and an unrestricted grant from Gilead.A. Gonzalez-Perez is supported by a Ramon y Cajal fellowship (RYC-2013-14554) of the Educational Ministry (Madrid, Spain). This work was also partially supported by FEDER funds from the ISCIII (PT13/0010/0026, CIBERONC (CB16/12/00284 and CB16/12/00400), Madrid, Spain).

Long non-coding RNAs (lncRNAs) are deregulated in several tumors, although their role in acute myeloid leukemia (AML) is mostly unknown. We have examined the expression of the lncRNA HOX antisense intergenic RNA myeloid 1 (HOTAIRM1) in 241 AML patients. We have correlated HOTAIRM1 expression with a miRNA expression profile. We have also analyzed the prognostic value of HOTAIRM1 expression in 215 intermediate-risk AML (IR-AML) patients. The lowest expression level was observed in acute promyelocytic leukemia (P < 0.001) and the highest in t(6; 9) AML (P = 0.005). In 215 IR-AML patients, high HOTAIRM1 expression was independently associated with shorter overall survival OR: 2.04; P = 0.001), shorter leukemia-free survival (OR: 2.56; P < 0.001) and a higher cumulative incidence of relapse (OR: 1.67; P = 0.046). Moreover, HOTAIRM1 maintained its independent prognostic value within the favorable molecular subgroup (OR: 3.43; P = 0.009). Interestingly, HOTAIRM1 was overexpressed in NPM1-mutated AML (P < 0.001) and within this group retained its prognostic value (OR: 2.21; P = 0.01). Moreover, HOTAIRM1 expression was associated with a specific 33- microRNA signature that included miR-196b (P < 0.001). miR-196b is located in the HOX genomic region and has previously been reported to have an independent prognostic value in AML. miR-196b and HOTAIRM1 in combination as a prognostic factor can classify patients as high-, intermediate-, or low-risk (5-year OS: 24% vs 42% vs 70%; P = 0.004). Determination of HOTAIRM1 level at diagnosis provided relevant prognostic information in IR-AML and allowed refinement of risk stratification based on common molecular markers. The prognostic information provided by HOTAIRM1 was strengthened when combined with miR-196b expression. Furthermore, HOTAIRM1 correlated with a 33-miRNA signature., Marina Diaz-Beya is supported by ISCII (Rio Hortega CM13/00205). This research was in part supported by Fundacion Espanola de Hematologia Hemoterapia (beca de investigacion MDB). This research is also supported by grants from Fondo de Investigaciones Sanitarias/Instituto de Salud Carlos III PI13/00999 (IP: Dr. Jordi Esteve), RETICS RD12/0036/0010 (JE; MDB) and SDCSD from School of Medicine, University of Barcelona, AECC-Catalunya 2013 (AN) (sponsored by Mat Holding). Anna Cordeiro is an APIF fellow of the University of Barcelona

[spa] ANTECEDENTES DEL TEMA: La leucemia mieloide aguda de riesgo citogenético intermedio (LMA-RI) constituye un grupo heterogéneo desde el punto de vista biológico y pronóstico. La elección del tratamiento post-remisión, basada en una estrategia terapéutica adaptada al riesgo, es por tanto particularmente difícil en esta categoría. HIPÓTESIS: El perfil de expresión génica (PEG) puede identificar nuevos genes con valor pronóstico en pacientes con LMA de riesgo intermedio y contribuir a una elección más racional del tratamiento post-remisión en estos enfermos. OBJETIVOS: 1) Analizar el PEG al diagnóstico de una serie de pacientes con LMA de riesgo citogenético intermedio, en primera remisión completa y sometidos a trasplante autólogo de progenitores hematopoyéticos (auto-TPH); 2) Comparar el PEG según la evolución de los pacientes (recaída vs remisión completa duradera); 3) Validación del conjunto de genes predictivos de la evolución en una población independiente de pacientes de características análogas; 4) Análisis multivariado del valor predictivo del PEG obtenido junto a otras variables clínico-biológicas con valor pronóstico conocido. MÉTODOS: Análisis del PEG en 40 pacientes de LMA sometidos a autotrasplante mediante microarrays HU133A 2.0 plus (Affymetrix), con lectura y normalización de la señal mediante la metodología RMA del paquete Affy (Bioconductor Project). Análisis de los datos mediante el software TM4 Microarrays Software Suite y Limma. En un subgrupo adicional de 49 enfermos se analizó el nivel de expresión, mediante RT-PCR cuantitativa a tiempo real, del conjunto de genes predictivos seleccionado en el análisis previo. Además para la validación de nuestros hallazgos pronósticos, utilizamos datos de una cohorte independiente de 79 pacientes con LMA de cariotipo normal incluidos en el repositorio público del Leukemia Gene Atlas. RESULTADOS: En el estudio supervisado de los datos de expresión de los 40 pacientes tratados con autoTPH se identificaron 75 genes diferencialmente expresados según el pronóstico, con mayor expresión de genes HOX (HOXA4, HOXB2, etc) en el grupo favorable. Mientras que los pacientes que presentaban una recaída temprana mostraron sobreexpresión de determinados genes implicados en la proliferación y apoptosis. Para la validación de los resultados obtenidos se estudió una serie adicional de 49 pacientes. Esta segunda parte del análisis permitió la identificación de 4 genes (BAALC, ALDH2, TP53INP1 y GPR44) asociados con la supervivencia global (SG). Dado el valor pronóstico independiente mostrado por estos cuatro genes, diseñamos un score con los niveles de expresión de dichos genes, capaz de segregar grupos de pacientes con pronósticos marcadamente diferenciados. Cabe destacar que este score mostró un fuerte impacto pronóstico (HR=5.846, IC 95%: 2,157-15,841), independientemente de otras mutaciones con importante valor pronóstico en LMA En una etapa posterior, se confirmó el valor pronóstico de nuestro score en una serie de 79 pacientes con LMA-CN completamente independiente, cuyos datos se obtuvieron de una base de datos de expresión génica pública (http://www.leukemiagene-atlas.org/LGAtlas) (p, [eng] In intermediate-risk cytogenetic acute myeloid leukemia (IRC-AML) patients, novel biomarkers to guide post-remission therapy are needed. We analyzed with high-density arrays 40 IRC-AML patients who received a non-allogeneic hematopoietic stem-cell transplantation-based post-remission therapy, and identified a signature that correlated with early relapse. Subsequently, we analyzed by RT-PCR 187 selected genes in 49 additional IRC-AML patients. BAALC, MN1, SPARC and HOPX overexpression correlated to refractoriness. BAALC or ALDH2 overexpression correlated to shorter overall survival (OS) (5-year OS: 33±8.6% vs. 73.7±10.1%, p=0.006; 32±9.3% vs. 66.4±9.7%, p=0.016), whereas GPR44 or TP53INP1 overexpression correlated to longer survival (5-year OS: 66.7±10.3% vs. 35.4±9.1%, p=0.04; 58.3±8.2% vs. 23.1±11.7%, p=0.029). A risk-score combining these 4 genes expression distinguished low-risk and high-risk patients (5-year OS: 79±9% vs. 30±8%, respectively; p=0.001) in our cohort and in an independent set of patients from a public repository. Our 4-gene signature may add prognostic information and guide post-remission treatment in IRC-AML patients.

[spa] Estudios previos han demostrado que los miRNAs juegan un papel muy importante en infinidad de procesos celulares, y son imprescindibles para la correcta homeostasis celular. Su desregulación ha sido ampliamente descrita en cáncer. En este sentido algunos estudios han demostrado que la expresión de miRNAs puede definir entidades de forma más precisa que el estudio de expresión mediante microarrays de miles de RNAs. A partir de este fundamento en esta tesis llevamos a cabo la caracterización del perfil de expresión de miRNA en una amplia cohorte de pacientes con LMA diagnosticados y tratados en nuestro centro y en otros centros del grupo cooperativo CETLAM, correspondientes a una amplia diversidad de variedades citogenéticas y moleculares, con un doble objetivo: una mejor caracterización de los mecanismos biológicos subyacentes de algunas variedades biológicas, menos conocidas, y, por otra parte, el análisis del posible valor pronóstico del nivel de expresión de algunos miRNAs expresados en la enfermedad. Así, y como resultado de los estudios de esta tesis, obtuvimos la firma de miRNA distintiva de la LMA t(8;16). Por otra parte, en un segundo estudio, pudimos identificar algunos miRNA cuyo nivel de expresión proporcionaba información pronóstica adicional a las mutaciones de los genes más habitualmente analizados en la categoría de pacientes con riesgo citogenético intermedio. La leucemia mieloide aguda (LMA) con t(8;16)(p11;p13) (LMA t(8;16)) tiene un perfil clínico- biológico característico, pero su patrón de expresión de microRNAs es desconocido. En el presente trabajo hemos analizado 670 miRNAs maduros en 7 pacientes con LMA con t(8;16) y en 113 pacientes con otros subtipos de LMA, así como en tres controles CD34+ de donante sano. El análisis jerárquico de grupos (“Hierarchical cluster analysis”) demostró que todos los pacientes con LMA t(8;16) se agruparon en un grupo (“cluster”) independiente. Asimismo, el análisis supervisado reveló una firma distintiva de 94 miRNAs, la mayoría de los cuales estaban infraexpresados, entre los que se encontraban el miR-21 y el cluster miR-17-92. Con el objetivo de entender porqué miR-21 y el cluster miR-17-92 se encontraban infraexpresados en este subgrupo en comparación con el resto de grupos de LMA, se estudió la expresión de sus factores de transcripción STAT3 y c-Myc respectivamente. El análisis de expresión del RNAm de dos conocidos factores de transcripción de estos miRNAs (STAT3 y c-Myc) mostró una infraexpresión significativa de STAT3 (P=0.04). Por otra parte, el análisis bioinformático mostró que 29 de los miRNAs que estaban infraexpresados podrían estar regulados por metilación. Con el fin de comprobar si estos miRNAs podían estar regulados por metilación, tratamos una muestra de células primarias de LMA t(8;16) con 5-aza-2'-deoxycytidina (5-AZA-dC) y Tricostatin A (TSA) y encontramos que 27 miRNAs se reexpresaron después de dicho tratamiento. Sin embargo, no se encontraron diferencias en el estado de metilación entre las LMA con t(8;16) y los otros subtipos ni en metilación global, ni en metilación de promotores de miRNAs. Finalmente, se correlacionó la expresión de RNAm (de la que disponíamos de un estudio previo: Camós, Esteve et al; Cancer Res 2006) con la expresión de miRNAs para identificar posibles dianas reguladas por los miRNAs de la firma. La correlación entre la expresion de mRNA y la de miRNAs identificó RET como una potencial diana de tres de los miRNAs característicos de esta entidad. Mediante ensayo de Renilla-Luciferas y citometría de flujo tras la transfección con pre-miRNAs se confirmó que RET estaba regulado por los miRNAs de la firma miR-218, miR-128, miR-27b, miR-15a y miR-195. En conclusión, la LMA t(8;16) presenta una firma característica de miRNAs que está regulada parcialmente mediante mecanismos epigenéticos y que tienen como diana el protooncogén RET. La LMA es una enfermedad heterogénea cuyo tratamiento óptimo varía de acuerdo a los factores de riesgo citogenéticos y los marcadores moleculares. Varios estudios han demostrado la importancia pronóstica de los miRNAs en LMA. En este trabajo analizamos en una serie de 238 pacientes con LMA de riesgo citogenético intermedio (LMA-RI) que provienen de 16 instituciones que forman parte del grupo cooperativo CETLAM, la asociación entre la expresión de algunos miRNAs y el pronóstico clínico. En primer mediante el estudio de expresión de 670 miRNAs en un subgrupo de 85 pacientes de LMA-RI que provenían de una sola institución identificamos 10 miRNAs con valor pronóstico. Posteriormente validamos estos 10 miRNAs mediante ensayos individuales en toda la cohorte (n=288) confirmando el impacto pronóstico de 4 miRNAs. Niveles altos de miR-196b y miR-644 se asociaron de manera independiente con una supervivencia acortada y niveles bajos de miR-135a y miR-409-3p se asociaron con un mayor riesgo de recaída. De manera interesante miR-135a y miR-409-3p mantuvieron su valor pronóstico independiente dentro del subgrupo molecular de mal pronóstico (NPM1 no mutado y CEBPA no mutado y/o FLT3-ITD), y miR-644 mantuvo su valor pronóstico en el subgrupo molecular favorable. En conclusión, en el presente trabajo se han identificado 4 miRNAs con valor pronóstico en LMA-RI, y que además añaden información pronóstica adicional a los marcadores moleculares., [eng] MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding RNAs (22–24 nucleotides in length) that have an important regulatory role in most biological processes, including development, regulation of cell proliferation and apoptosis, and stem cell self-renewal and differentiation. Moreover, their expression is altered in cancer, where they can function as both oncogenes and tumor suppressor genes. Several studies have shown the importance of microRNA (miRNA) deregulation in AML. Distinctive miRNA profiles have been identified correponding to specific cytogenetic subtypes. From the prognostic standpoint, some studies have identified several miRNAs associated with clinical outcome. Given the relevant regulatory role of miRNAs in hematopoiesis and their deregulated expression in hematological malignancies including AML, we have analyzed miRNAs expression in AML patients and we have performed two main studies. First, we have described a specific miRNA profile of t(8;16) AML subype and second the prognostic value of miRNAs in a large cohort of patients with IR-AML treated within the Spanish cooperative group CETLAM. Acute myeloid leukemia (AML) with t(8;16)(p11;p13) (t(8;16) AML) has unique clinico-biological characteristics, but its microRNA pattern is unknown. We analyzed 670 microRNAs in seven patients with t(8;16) AML and 113 with other AML subtypes. Hierarchical cluster analysis showed that all t(8;16) AML patients grouped in an independent cluster. Supervised analysis revealed a distinctive signature of 94-microRNAs, most of which were downregulated, including miR-21 and cluster miR-17-92. The mRNA expression analysis of two known transcription factors of these microRNAs (STAT3 and c-Myc, respectively) showed significant downregulation of STAT3 (P=0.04). A bioinformatic analysis showed that 29 of the downregulated microRNAs might be regulated by methylation; we treated a t(8;16) AML sample with 5-aza-2'-deoxycytidine (5-AZA-dC) and trichostatin A and found that 27 microRNAs were re-expressed after treatment. However, there was no difference in methylation status between t(8;16) and other AML subtypes, either overall or in the microRNA promoter. Cross-correlation of mRNA and microRNA expression identified RET as a potential target of several microRNAs. A Renilla-luciferase assay and flow cytometry after transfection with pre-microRNAs confirmed that RET is regulated by miR-218, miR-128, miR-27b, miR-15a and miR-195. In conclusion, t(8;16) AML harbors a specific microRNA signature that is partially epigenetically regulated and targets RET proto-oncogene. Acute myeloid leukemia (AML) is a heterogeneous disease, and optimal treatment varies according to cytogenetic risk factors and molecular markers. Several studies have demonstrated the prognostic importance of microRNAs (miRNAs) in AML. Here we report a potential association between miRNA expression and clinical outcome in 238 intermediate-risk cytogenetic AML (IR-AML) patients from 16 institutions in the CETLAM cooperative group. We first profiled 670 miRNAs in a subset of 85 IR-AML patients from a single institution and identified 10 outcome-related miRNAs. We then validated these 10 miRNAs by individual assays in the total cohort and confirmed the prognostic impact of 4 miRNAs. High levels of miR-196b and miR-644 were independently associated with shorter overall survival, and low levels of miR-135a and miR-409-3p with a higher risk of relapse. Interestingly, miR-135a and miR-409-3p maintained their independent prognostic value within the unfavorable molecular subcategory (wild-type NPM1 and CEBPA and/or FLT3-ITD), and miR-644 retained its value within the favorable molecular subcategory. miR-409-3p, miR-135a, miR-196b and mir-644 arose as prognostic markers for IR-AML, both overall and within specific molecular subgroups.

INTRODUCCIÓN. La leucemia mieloide aguda (LMA) es una enfermedad heterogénea desde el punto de vista clínico y biológico. En los últimos años se vienen reconociendo diversas alteraciones moleculares que definen entidades específicas. En este contexto, la LMA con translocación t(8;16)(p11;p13) y reordenamiento MYST3 (MOZ)/CREBBP (CBP) es una variedad infrecuente mal caracterizada desde el punto de vista biológico. HIPÓTESIS Y OBJETIVOS. La proteína quimérica MYST3-CREBBP, resultante de la translocación t(8;16)(p11;p13), podría conferir a este subtipo de LMA una individualidad biológica propia, con rasgos diferenciados respecto al resto de leucemias. Para confirmar esta hipótesis general los objetivos de la presente tesis doctoral fueron: 1) diseñar una técnica de PCR para el diagnóstico rápido y específico del reordenamiento MYST3-CREBBP; 2) caracterizar el punto de ruptura de los genes implicados en la translocación en una serie de pacientes y 3) estudiar el perfil de expresión génica de las LMA con reordenamiento MYST3-CREBBP y compararlo con el de otros subtipos bien definidos de LMA.PACIENTES Y MÉTODOS. Se estudió una serie de pacientes con LMA y reordenamiento MYST3-CREBBP (n=7) y se compararon sus características biológicas con otros casos de LMA. Para ello se diseñó una técnica de PCR nueva para la detección del reordenamiento MYST3-CREBBP, mientras que los puntos de ruptura de los genes implicados en la translocación se estudiaron mediante secuenciación directa. El estudio del perfil de expresión génica de la LMA con reordenamiento MYST3-CREBBP se abordó utilizando microarrays de oligonucleótidos (Affymetrix HU133A). La diferencia entre la expresión génica entre diferentes subtipos de leucemia se analizó con diversas técnicas estadísticas (ANOVA, t-test), utilizando diferentes programas informáticos. Los resultados de este análisis se validaron en una serie independiente de pacientes estudiados mediante RT-PCR cuantitativa utilizando arrays de baja densidad. RESULTADOS. Los pacientes afectos de LMA con reordenamiento MYST3-CREBBP presentaron un inmunofenotipo característico (CD34-, HLA-DR-, CD117-, CD56+, expresión de marcadores mielomonocíticos). Por otro lado, el análisis molecular reveló que el tránscrito tipo I del gen quimérico MYST3-CREBBP es el más común en estos pacientes. Por otra parte, el análisis sobre el perfil de expresión génica mostró una firma característica para las LMA con reordenamiento MYST3-CREBBP, consistente en la sobreexpresión de determinados genes HOX (HOXA9, HOXA10), de los oncogenes RET y PRL y la infraexpresión de genes como CCND2, STAT5 y WT1. Por otro lado, se observó una similitud en la expresión de algunos genes entre las leucemias MYST3-CREBBP y las LMA con reordenamiento de MLL, lo que sugiere un mecanismo de leucemogénesis parcialmente compartido por los dos tipos de leucemia.CONCLUSIONES. La técnica de RT-PCR implementada es útil para la detección rápida del reordenamiento MYST3-CREBBP. El denominado tránscrito tipo I del gen quimérico MYST3-CREBBP es el más común en la LMA con t(8;16). La LMA con reordenamiento MYST3-CREBBP posee un perfil de expresión característico, con sobreexpresión de diversos oncogenes como RET y PRL y la presencia de un patrón específico de expresión de los genes homeobox.