Search

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:50Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Joana_Hygino_da_Silva_Machado.pdf: 7213376 bytes, checksum: c0b0581186b64f725247515115202fe4 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Joana_Hygino_da_Silva_Machado.pdf: 7213376 bytes, checksum: c0b0581186b64f725247515115202fe4 (MD5) Previous issue date: 2013-08-19 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The number of HIV-1-infected young women has been increasing since the beginning of the AIDS epidemic, mainly in developing countries, where the frequency of pregnancy among them is also elevated. The development of strategies for vertical transmission avoidance has enhanced the number of uninfected neonates born from infected mothers. The objective of the present study was to evaluate, in vivo and in vitro, the cytokine profile of uninfected neonates born from pregnant women infected with HIV-1.The results demonstrated high levels of proinflammatory cytokines related to Th17 phenotype associated with low IL-10 production, in plasma as well as in culture supernatants of activated T cells obtained from umbilical cord blood of neonates born from mothers infected with HIV -1 with plasma viral load (PVL) detectable.Interestingly, a similar pro-inflammatory cytokine profile was observed in peripheral blood samples from their respective mothers.On the other hand, high levels of IL-10 associated to reduced production of inflammatory cytokines were measured in blood and in the supernatants of activated T cells culturesfrom women that controlled the PVL, as well as their neonates.Regarding the phenotypic profile of pregnant women infected of HIV-1, the main T lymphocyte subset involved in producing IL-10 was CD4+Foxp3-. Interestingly, the in vitro HIV-1 replication was lower in cell cultures from pregnant patients, and it was related to the inhibitory effects of IL-10 on the production of TNF-α. Finally, ART-in utero-exposed neonates showed to be born with lower weight, and it was inversely correlated with maternal peripheral TNF-α level. In conclusion, the results suggest that pregnant women that are able to control the PVL, and the increment in the production of IL-10 may favor maternal Tr-1 cell expansion, which could help to reduce the risk of vertical transmission of HIV-1 by reducing the rate of viral replication.However, other results also presented here, although preliminary, have revealed adverse effects of viral replication, as well as the use of ART by pregnant women infected with HIV-1 in the development of functional T cells from uninfected newborns.These data may help to explain why some of these children have elevated risk of clinical morbidity and mortality due to a baseline state of pathological hypersensitivity. O número de mulheres jovens infectadas pelo HIV-1 vem crescendo desde o início da epidemia da aids, principalmente nos países em desenvolvimento, onde a frequência de gravidez é elevada. O desenvolvimento de estratégias para evitar a transmissão vertical tem aumentado o número de recém-nascidos não infectados nascidos de gestantes portadora do vírus. O objetivo da presente tese foi avaliar, in vivo e in vitro, o perfil de citocinas de neonatos não infectados, porém nascidos de mulheres infectadas pelo HIV-1. Os resultados demonstraram elevados níveis de citocinas pró-inflamatórias relacionadas ao fenótipo Th17, associadas à baixa produção de IL-10, tanto nos plasmas quanto nos sobrenadantes das culturas de células T ativadas obtidas do sangue do cordão umbilical de neonatos nascidos de gestantes infectadas pelo HIV-1 com cargas virais plasmáticas(PVL) detectáveis. De modo interessante, um perfil similar pró-inflamatório foi observado em amostras de sangue periférico de suas respectivas mães. Por outro lado, níveis elevados de IL-10, associados à reduzida produção de citocinas inflamatórias, foram dosados no sangue e nos sobrenadantes das culturas de células T ativadas de gestantes que controlavam a PVL, assim como de seus neonatos. Com relação à caracterização fenotípica das células T maternas produtoras de IL-10, a análise por citometria de fluxo demonstrou que essa citocina é majoritariamente produzida por células T CD4+Foxp3-. Curiosamente, a replicação viral in vitro do HIV-1 foi inferior nas culturas das gestantes infectadas pelo HIV-1 e foi relacionada aos efeitos inibitórios da IL-10 sobre a produção de TNF-α. Por fim, os neonatos não infectados expostosin utero à terapia antirretroviral (ART) apresentaram um menor peso ao nascer, e este achado foi inversamente correlacionado com os níveis periféricos maternos de TNF-α. Em conclusão, nossos achados sugerem que gestantes que conseguem controlar a PVL, e o incremento na produção de IL-10 materna possam favorecer a expansão das células Tr-1, as quais podem auxiliar em reduzir o risco de transmissão vertical do HIV-1 por reduzir a taxa de replicação viral. Por outro lado, outros resultados também apresentados aqui, apesar de preliminares, revelaram efeitos adversos da replicação viral e da ART em gestantes infectadas pelo HIV-1 no desenvolvimento funcional das células T de neonatos não infectados. Esses dados podem ajudar a explicar por que algumas dessas crianças apresentam elevado risco à morbidade e mortalidade devido a um estado basal de hipersensibilidade patológica.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:16:24Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Joana_Hygino_da_Silva_Machado.pdf: 6262238 bytes, checksum: b46c2c5e77f11055813a9ac2a8450b60 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Joana_Hygino_da_Silva_Machado.pdf: 6262238 bytes, checksum: b46c2c5e77f11055813a9ac2a8450b60 (MD5) Previous issue date: 2009-08-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), caused by human immunodeficiency virus (HIV), is one the most destructive epidemic in the world, and the HIV-infection in young women has been increasing fast in the recent times. This fact has an important impact on vertical virus transmission. Although the great majority of the pediatric AIDS cases all over the world results from vertical transmission, approximately two thirds of the children exposed to the HIV during the fetal life are not infected by the virus. Many works suggest that during pregnancy, maternal infectious diseases could have complex consequences to the fetus development, and few works have explored the impact of HIV exposition on immunological responsiveness of uninfected children to different stimuli, particularly in the era of the anti-retroviral drugs. Therefore, this work aimed to evaluate immune events in HIV-1-exposed uninfected neonates born from pregnant women who controlled (G1) or not (G2) the plasma viral load, using unexposed neonates as control. Cord blood from each neonate was collected, plasma and mononuclear cells were separated and the lymphoproliferation and cytokine pattern were evaluated. The results demonstrated that the in vitro lymphoproliferation induced by polyclonal activators was higher in the G2 neonates. Nevertheless, no cell culture responded to poll synthetic HIV-1 envelope peptides. The cytokine dosage in the plasma and supernatants of polyclonally-activated cultures demonstrated that, while IL-4 and IL-10 were the dominant cytokines produced in G1 and control groups, the secretion of IFN-γ, IL-1, Il-6, IL-17 and TNF-α was significantly higher in G2 neonates. Systemic levels of IL-10 observed among the G1 neonates were higher in those born from mothers treated with viral transcriptase reverse inhibitors drugs. On the other hand, higher levels of inflammatory cytokines were observed among them born from pregnant women treated with highly active anti-retroviral therapy. In summary, our results indicate an altered immune responsiveness in neonates exposed in utero to HIV and support the role of maternal anti-viral treatment with less potent drugs to attenuate it. A síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), é uma das mais destrutivas epidemias do mundo, e a infecção pelo HIV em mulheres jovens vem aumentando rapidamente nos dias atuais. Esse fato tem um impacto importante na transmissão vertical do vírus. Apesar da grande maioria dos casos de aids pediátrica em todo mundo resultar da transmissão vertical, aproximadamente dois terços das crianças expostas ao HIV durante a vida fetal não são infectadas pelo vírus. Muitos trabalhos sugerem que durante a gestação doenças infecciosas maternas podem ter consequências complexas para o desenvolvimento do feto, e poucos trabalhos têm explorado o impacto da exposição ao HIV sobre a responsividade imunológica de crianças não infectadas a diferentes estímulos, particularmente na era das drogas antirretrovirais. Portanto, esse trabalho teve como objetivo avaliar eventos imunes em neonatos não-infectados expostos ao HIV-1 nascidos de gestantes que controlam (G1) ou não (G2) a carga viral plasmática, usando neonatos não expostos como controle. Para tanto, sangue do cordão umbilical de cada neonato foi coletado, plasma e células mononucleares foram separados e a linfoproliferação e o perfil de citocinas foram avaliados. Os resultados demonstraram que a linfoproliferação in vitro induzido por ativadores policlonais foi maior nos neonatos do G2. Entretanto, nenhuma cultura de célula respondeu a um conjunto de peptídeos sintéticos do envelope do HIV-1. A dosagem de citocinas no plasma e nos sobrenadantes das culturas ativadas policlonalmente demonstrou que, enquanto a IL-4 e IL-10 foram as citocinas dominantes produzidas nos grupos G1 e controle, a secreção de IFN-γ, IL-1, Il-6, IL-17 e TNF-α foi significativamente superior nos neonatos G2. Níveis sistêmicos de IL-10 observados dentre os neonatos G1 foram maiores naqueles nascidos de mães tratadas com drogas inibidoras da transcriptase reversa do vírus. Por outro lado, níveis superiores de citocinas inflamatórias foram observados dentre estes nascidos de gestantes tratadas com terapia antirretroviral de alta eficácia. Em resumo, nossos resultados indicam uma responsividade imune alterada em neonatos expostos in utero ao HIV-1 e reforça o papel do tratamento materno anti-viral com drogas menos potentes em atenuar tais distúrbios.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:15:32Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Aleida_Soraia_Oliveira_Dias.pdf: 2709098 bytes, checksum: 2be24ffec5d158ff02a42d6ac65a36e5 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Aleida_Soraia_Oliveira_Dias.pdf: 2709098 bytes, checksum: 2be24ffec5d158ff02a42d6ac65a36e5 (MD5) Previous issue date: 2018-09-04 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD) are rare autoimmune conditions from the central nervous system with a more unfavorable outcome than multiple sclerosis. Despite being considered a disease mediated by autoantibodies, different studies suggest the participation of CD4+ T cell subtypes and its severity has been associated with the influence of genetic and environmental factors, such as infections. A recent study published by our group demonstrated a high expansion of Th17 cells positives for TLR2, TLR4 and TLR9 in the peripheral blood of NMOSD patients. Therefore, the objective of this study was to evaluate the ability of different PAMPs in modulating the in vitro functional status of CD4+ T cells in those patients and its correlation with clinical parameters. For this, peripheral blood samples were collected from 15 NMOSD patients, in clinical remission, and CD4+ T cells were purified by negative selection using magnetic columns. The plasmatic analysis of cytokines and sCD14 were done by the ELISA technique. CD4+ T cells were maintained in the presence of medium alone or TLR2 (Pam3C), TLR4 (LPS), TLR5 (FLA) and TLR9 (ODN) agonists. Their ability to modulate the activation of these lymphocytes via TCR was assessed following addition of anti-CD3/anti-CD28. After 3 days, the proliferative response and cytokine production were determined by [3H] TdR uptake and ELISA, respectively. Our results demonstrated that both cell proliferation and IL-6, IL-17 and IL-21 production were higher in the supernatants of NMOSD-derived CD4+ T cell cultures in response to LPS, Pam3C and FLA, as compared with the control group. In addition, all these PAMPs amplified the TCR-dependent lymphocytes activation. A positive correlation was observed between the degree of neurological disability of the patients and the secretion of cytokines related to the Th17 profile in cell cultures maintained in the presence of Pam3C and LPS. Plasma sCD14 levels were higher in the patients, in purchased with the control group, and their levels were directly correlated to IL-6 and IL-1β cytokines, measured in vivo, and IL-6, IL-17 and IL-21 levels produced by CD4+ T cells in response to LPS. The same correlation was observed between sCD14 and IL-6 and IL-17 released byCD4+ T cells from patients in response to Pam3C. Although sCD14 levels were not associated with clinical parameters, the production of IL-6, IL-17 and IL-21 by CD4+ T cells in response to Pam3C and LPS, as well as IL-17 and IL-21 following addition of FLA, were positively correlated to the degree of neurological disability. The risk of new relapses was mainly detected in patients whose CD4+ T cell cultures responded to LPS releasing high levels of IL-6 and IL-17. In summary, our results suggest that TLR ligands and, especially, TLR2 and TLR4 agonits may exert adverse effects in the course of NMOSD. Although preliminary, these findings help to explain how infections and dysbiosis affect NMOSD severity. As doenças do espectro da neuromielite óptica (NMOSD) são condições autoimunes do sistema nervoso central raras e sem cura, com desfecho mais desfavorável que a esclerose múltipla. Apesar de ser considerada uma doença mediada por autoanticorpos, diferentes estudos sugerem a participação de subtipos de células T CD4+ e sua gravidade tem sido associada à influência de fatores genéticos e ambientais, tal como as infecções. Como um estudo recente publicado pelo nosso grupo demonstrou elevada expansão de células do tipo Th17 positivas para TLR2, TLR4 e TLR9 no sangue periférico dos pacientes com NMOSD, o objetivo do atual estudo foi avaliar a capacidade de diferentes PAMPs em modular in vitro o status funcional das células T CD4+ desses pacientes e sua correlação com parâmetros clínicos. Para tal, amostras de sangue periférico foram colhidos de 15 pacientes com NMOSD, em remissão clínica, e as células T CD4+ purificadas através da seleção negativa usando colunas magnéticas. A análise das citocinas e do sCD14 no plasma foi feita através da técnica ELISA. As células T CD4+ foram mantidas na presença apenas de meio ou dos agonistas de TLR 2 (Pam3C), TLR4 (LPS), TLR5 (FLA) e TLR9 (ODN). A sua capacidade em modular a ativação desses linfócitos via TCR foi avaliada através da adição de anti-CD3/anti-CD28. Após 3 dias, a resposta proliferativa e a produção de citocinas foram determinadas através da captura de [3H]TdR e ELISA, respectivamente. Nossos resultados demonstraram que a proliferação assim como a produção de IL-6, IL17 e IL-21 foram superiores nos sobrenadantes das culturas de células T CD4+ dos pacientes em resposta ao estímulo com LPS, Pam3C e FLA quando comparado ao grupo controle. Ademais, todos esses PAMPs amplificaram a ativação desses linfócitos via TCR. Uma correlação positiva foi observada entre o grau de incapacidade neurológica dos pacientes e a secreção de citocinas relacionadas ao perfil Th17 nas culturas mantidas na presença de Pam3C e LPS. Em comparação ao grupo controle, as concentrações plasmáticas de sCD14 foram maiores nos pacientes, e seus níveis foram diretamente correlacionados às citocinas IL-6 e IL-1β, dosados in vivo, e aos níveis de IL-6, IL-17 e IL-21 produzidos pelas células T CD4+ em resposta ao LPS. A mesma correlação foi observada entre sCD14 e a IL-6 e IL-17 liberados pelas células T CD4+ dos pacientes em resposta ao Pam3C. Apesar dos níveis de sCD14 não terem sido associados aos parâmetros clínicos, a produção de IL-6, IL-17 e IL-21 pelas células T CD4+ em resposta ao Pam3C e LPS, assim como, IL-17 e IL-21 seguindo à adição de FLA, foram positivamente correlacionados ao grau de incapacidade neurológica. O risco de novas recaídas foi principalmente detectado nos pacientes cujas culturas de células T CD4+ responderam ao LPS liberando elevados níveis de IL-6 e IL-17. Em resumo, os nossos resultados sugerem que a presença de ligantes de TLR, principalmente, de TLR2 e TLR4 possa exercer efeitos adversos no curso da NMOSD. Apesar de preliminares, esses achados ajudam a explicar como infecções e disbiose são consideradas fatores de risco para gravidade da NMOSD.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:30Z No. of bitstreams: 1 Fabio Christiane de Oliveira Felix Cachem Tese completa.pdf: 2599294 bytes, checksum: cdc214924856bae820d1cd395b8d7711 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabio Christiane de Oliveira Felix Cachem Tese completa.pdf: 2599294 bytes, checksum: cdc214924856bae820d1cd395b8d7711 (MD5) Previous issue date: 2018-05-24 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Chronic hepatitis C (CHC) is often associated with liver fibrosis, which can lead to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Many studies have suggested that immunological activity in response to HCV antigens is strongly related to liver fibrosis. The role of different IL-17 secreting CD4+ (Th17) and CD8+ (Tc17) T cells in CHCis not fully understood. In our study, elevated plasma levels of IL-1β, IL-6 and IL-17 were positively correlated with fibrosis and alanine transaminase (ALT) rates in patients with CHC. In addition, these cytokines, secreted by peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures in response to core antigen from virus, were also correlated to advanced liver injury. While the percentage of IL-17 producing Th17/Tc17 cells in association with IFN-γ or IL-21 was higher in patients with lower liver damage, accumulation of single IL-17-producing T lymphocytes was correlated with liver fibrosis. Interestingly, core protein favored the expansion of Th17/Tc17 cell subtypes related to disease progression, identified by production of IL-17 alone or IL-17 in association with IL-6. Further, although the percentage of Tregs FoxP3+CD25+CD4+) was higher in CHC patients with more advanced disease, the proportions of both TregsCD39+or Treg17 (IL-17+ IL-10 +) subsets were significantly lower in these individuals. Addition of HCV core protein to the PBMC cultures elevated the percentage of CD39-Tregs cells. In addition, the percentage of exhausted (PD-1+ CD28+) and senescent (CD28-CD57+) T cells were not only higher in patients with advanced hepatic fibrosis, but also their proportion were elevated by core antigen. Finally, we believe that the presence of a persistent and pro-fibrotic inflammatory state is facilitated by an elevated bacterial translocation, since, in the present study, plasma levels of sCD14 were not only higher in patients with worse prognosis, but their concentrations were directly correlated with the systemic levels of IL-1β, IL-6 and IL-17, as well as the percentage of Th17 / Tc17 cells negatives for IL-21 and IFN-γ. In summary, although preliminary, our results suggest that the expansion of different Th17 / Tc17 and Tregs cell subsets may influence the evolution of liver disease in patients with CHC, and reveals that the core antigen may exert adverse effects by amplifying the imbalance among these different subtypes of these T cells. In addition, inflammatory events favoring the expansion of different Th17/Tc17 cells implicated in hepatic fibrosis may be favored by greater intestinal microbial translocation. A hepatite C crônica (HCC) é frequentemente associada à fibrose hepática, o que pode levar a cirrose e ao carcinoma hepatocelular. Muitos estudos têm sugerido que a atividade imunológica em resposta aos antígenos do HCV está fortemente relacionada à fibrose hepática. O papel de diferentes células T CD4+ (Th17) e CD8+ (Tc17) secretoras da IL-17 na HCC não está completamente esclarecido. Em nosso estudo, níveis plasmáticos elevados de IL-1β, IL-6 e IL-17 foram positivamente correlacionados com a fibrose e também com as taxas de alanina transaminase (ALT) nos pacientes com HCC. Além disso, essas citocinas, secretadas por culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) em resposta ao antígeno core viral, também foram correlacionadas à lesão hepática avançada. Enquanto a percentagem de células Th17/Tc17 produtoras de IL-17 em associação com o IFN-γ ou com IL-21 foi maior nos pacientes com menor dano hepático, acúmulo desses linfócitos capazes de produzir apenas IL-17 foi correlacionada à fibrose do fígado. De forma interessante, a proteína core favoreceu a expansão de subtipos de células Th17/Tc17 relacionadas ao avanço da doença, identificadas pela produção apenas de IL-17 ou IL-17 em associação com IL-6. Ademais, apesar do percentual das células Tregs (CD4+FoxP3+CD25+) ter sido maior nos pacientes HCC mais avançada, as proporções tanto dos subtipos TregsCD39+ou Treg17 (IL-17+IL-10+) foram significativamente inferiores nesses indivíduos. A adição da proteína core do HCV às culturas de PBMC elevou a percentagem das células Tregs CD39-. Ademais, uma maior percentagem de células T exauridas (PD-1+CD28+) e senescentes (CD28- CD57+) não apenas foram maiores nos pacientes com fibrose hepática acentuada, como também a proporção desses linfócitos foram elevados após adição do antígeno core. Finalmente, acreditamos que a presença de um estado inflamatório persistente e pró-fibrótico é facilitado pela maior translocação bacteriana, desde que, nos presentes estudos, os níveis plasmáticos de sCD14 não apenas foram maiores nos pacientes com pior prognóstico, como também suas concentrações foram diretamente correlacionadas aos níveis sistêmicos de IL-1β, IL-6 e IL-17, assim como ao percentual de células Th17/Tc17 negativas para IL-21 e IFN-γ. Em resumo, apesar de preliminares, nossos resultados sugerem que a expansão de diferentes subtipos de células Th17/Tc17 e de Tregs pode influenciar a evolução da doença hepática nos pacientes com HCC, e revela que o antígeno core pode exercer efeitos adversos por amplificar o desequilíbrio entre esses diferentes subtipos de células T. Ademais, eventos inflamatórios que favorecem a expansão de subtipos de células Th17/Tc17 implicados na fibrose hepática podem ser favorecidos pela maior translocação microbiana intestinal.