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The objective of this study was to compare the antimicrobial activity of macrophages and serum in laying hen (MM, CC, and CCc) and broiler chicken lineages (TT and LL). Macrophages were evaluated for phagocytic and antimicrobial activity. Microbicidal serum activity was evaluated by the resistance test for serum and the agar test. The results showed that phagocytic activity was higher in males of the MM strain, with 13% of macrophages presenting phagocytosis, while the other lineages studied, and even female MM, presented a rate of 6% of phagocytic cells. However, antimicrobial activity in macrophages from males of CCc lineage and females of TT lineage were higher, eliminating more than 30% of the Salmonella enterica inoculum, while in the other strains, the results were similar, with inoculum reduction below 30%. In the serum resistance assay, female laying lines presented higher antibacterial activity than female broiler lines. In the trials to evaluate the microbicide activity of the serum, females of both broiler and laying lineages presented higher performance when compared with males of the same lineage. Females of laying hen lines (MM and CC) present a greater antibacterium activity than males. These results can contribute to a better understanding of the immune response in broiler chicken and laying hen lineages, to aid development of lineages of birds more resistant to pathogens Made available in DSpace on 2021-11-25T14:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 final9220.pdf: 375423 bytes, checksum: 93f1118fa449bc634140423360940b25 (MD5) Previous issue date: 2021

Influenza A virus (IAV) causes an important respiratory disease in mammals and birds leading to concerns in animal production industry and public health. Usually, antibodies produced in mammals are employed in diagnostic tests. However, due to animal welfare concerns, technical advantages and the high cost of production, alternatives to the production of antibodies in mammals have been investigated. The aim of this study was to produce egg yolk immunoglobulin (IgY) in laying hens against a highly conserved protein (nucleoprotein- NP) of IAV and to evaluate the application of anti-NP IgY antibodies in virus detection by immunocytochemistry (ICC) and immunohistochemistry (IHC). Three laying hens of the White Leghorn line were inoculated seven times with a recombinant NP protein and their eggs collected seven days after the 3rd, 5th and 7th inoculations. Immunoglobulin Y antibodies were purified from egg yolk through precipitation with ammonium sulfate. The titers and specificity of the purified antibodies were determined by ELISA, western blotting, ICC and IHC. High levels of specific anti-NP antibodies were detected by ELISA after the 5th inoculation, reaching a peak after the 7th inoculation. The mean yield of total protein in yolk after the 7th inoculation was 13.5 mg/mL. The use of western blotting and ICC demonstrated that anti-NP IgY binds specifically to NP protein. Moreover, the use of anti-NP IgY antibody in ICC test revealed positive staining of MDCK cells infected with IAV of the three subtypes circulating in swine (H1N1, H1N2, and H3N2). However, no staining was observed in lung tissues through the IHC test. The data obtained showed that anti-NP IgY antibodies bound specifically to influenza virus NP protein, detecting the main virus subtypes circulating in swine, reinforcing their usefulness in the influenza diagnosis.

Advances in the fields of glycobiology and immunology have provided many insights into the role of carbohydrate-protein interactions in the immune system. Jacalin of Artocarpus integrifolia (JCA) and structural mannoprotein of Saccharomyces uvarum (MPS) are molecules with immunomodulatory properties. JCA is an IgA human lectin binding molecule that causes the mitogenic stimulation of immune cells, production of cytokines, chemotaxis, and activation of leukocytes. Studies on the immunomodulatory properties of JCA and MPS in mammals and fish suggest that they have an action on antibody production. The aim of this study was to investigate the possible action of JCA and MPS on the production of specific antibodies in laying hens. For this, laying hens were inoculated with an intra abdominal injection of sheep red blood cells (SRBC) with either JCA (0.075 µg, 0.75 µg, and 7.5 µg) or MPS (20 µg and 100 µg). Levels of anti-SRBC antibodies of the IgY, IgM, and IgA classes were evaluated by ELISA. Results showed that JCA and MPS have immunomodulatory effects on levels of anti-SRBC IgM, IgA, and IgY. An immunostimulatory effect of JCA was observed in primary immune response on anti-SRBC IgY, while an inhibitory effect of JCA and MPS was observed in secondary immune response on the production of IgM and IgA anti-SRBC. These results suggested that MPS and JCA have immunomodulatory effects on antibody production and could be used in future studies on humoral immune response in poultry. RESUMO: Avanços nos campos glicobiologia e imunologia forneceram muitas informações sobre o papel das interações da proteína-carboidrato na modulação do sistema imunológico. A jacalina extraída de Artocarpus integrifolia (JCA) e a manoproteína da parede celular de Saccharomyces uvarum (MPS) são moléculas com propriedades imunomoduladoras. JCA é uma lectina com afinidade pela IgA humana e tem ação mitogênica sobre células do sistema imunológico estimulando a produção de citocinas, a quimiotaxia e a ativação de leucócitos. Estudos sobre as propriedades imunomoduladoras de JCA e MPS em mamíferos e peixes sugerem que essas moléculas podem ter um efeito sobre a produção de anticorpos. O objetivo deste estudo foi investigar a ação da JCA e MPS sobre a produção de anticorpos específicos em galinhas poedeiras. Para isso, galinhas poedeiras foram inoculadas por via intra-abdominal com eritrócitos de carneiro (SRBC) em associação com o JCA (0,075 µg, 0,75 µg, e 7,5 µg) ou MPS (20 µg e 100 µg). Os níveis de anticorpos anti-SRBC das classes IgY, IgM, e IgA foram avaliados por ELISA. Os resultados mostraram que a JCA e a MPS têm um efeito imunomodulador sobre a produção IgY, IgM, ou IgA anti-SRBC. Um efeito imunoestimulador da JCA foi observado sobre a produção de anticorpos IgY na resposta imune primária, enquanto um efeito imuno inibitório da JCA e da MPS sobre a produção de IgM e IgA anti-SRBC na resposta imune secundária. Estes resultados sugerem que o MPS e JCA tem efeito modulador sobre a produção de anticorpos e podem ser utilizados em estudos futuros sobre a imunidade humoral em aves comerciais.

Os anticorpos são importantes ferramentas em testes de diagnóstico. A utilização de anticorpos IgY apresenta diversas vantagens em relação aos anticorpos de mamíferos e vários estudos mostram sua aplicação em técnicas de imunodiagnóstico. Assim, esse trabalho teve como objetivo produzir anticorpos IgY anti-nucleoproteína do vírus influenza A (IAV) e avaliar sua aplicação na detecção do vírus IAV por imunocitoquímica (ICQ) e imunohistoquímica (IHQ). Para tanto, galinhas poedeiras da linhagem White Leghorn foram inoculadas com 20 µg da nucleoproteína (NP) nos dias 1, 14, 28, 42, 84, 126 e 168 do experimento. Sete dias após a 3ª, 5ª e 7ª inoculação, os ovos foram coletados e os anticorpos IgY foram extraídos por precipitação com sulfato de amônio. Os títulos e a especificidade dos anticorpos purificados foram determinados por ELISA, western blotting, ICC e IHC. As galinhas poedeiras inoculadas com a proteína NP produziram altos níveis de anticorpos específicos anti-NP após a 7ª inoculação. Além disso, foi detectada uma coloração positiva em células MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) infectadas com IAV e incubadas com anticorpo IgY anti-NP. No entanto, em tecidos pulmonares de suínos infectados não foi observada nenhuma coloração através do teste IHC. Os dados obtidos mostraram que os anticorpos IgY anti-NP purificados das gemas de ovos se ligam especificamente ao IAV, com o reconhecimento dos principais subtipos de vírus circulantes em suínos (H1N1, H1N2 e H3N2), reforçando sua utilidade no diagnóstico de IAV. Antibodies are important tools in diagnostic tests. The use of IgY antibodies present several advantages over mammalian antibodies and studies show its application in immunodiagnostic techniques. Thus, this work aimed to produce anti-nucleoprotein IgY antibodies from the influenza A virus (IAV) and to evaluate its application in the detection of IAV virus by immunocytochemistry (ICQ) and immunohistochemistry (IHC). For the study, laying hens of the White Leghorn line were inoculated with 20 ?g of the nucleoprotein (NP) on days 1, 14, 28, 42, 84, 126 and 168 of the experiment. Seven days after the 3rd, 5th, and 7th inoculation the eggs were collected and the IgY antibodies were extracted by precipitation with ammonium sulfate. The titers and specificity of the purified antibodies were determined by ELISA, western blotting, ICC and IHC. Laying hens inoculated with NP protein produced high levels of anti-NP specific antibodies after the 7th inoculation. In addition, a positive staining in IAV-infected MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) cells incubated with anti-NP IgY antibody was detected. However, no staining was observed in lung tissues from infected swine through the IHC test. The data obtained showed that anti-NP IgY antibodies purified from eggs yolks bound specifically to IAV, with the recognition of the main virus subtypes circulating in swine (H1N1, H1N2, and H3N2), reinforcing their usefulness in the diagnosis of IAV.

O aumento da produção na avicultura tem sido favorecido pelo desenvolvimento de linhagens de aves mais produtivas. A maioria das características de produção depende de gasto energético que também é importante para o desenvolvimento da resposta imune. Assim a seleção para uma determinada característica pode influenciar a resposta imune das aves. Apesar da existência de diversas medidas de controle de doenças aviárias, existe o risco de surtos de doenças, trazendo prejuízos para a avicultura. Desse modo, o desenvolvimento de linhagens de aves mais resistentes a doenças é de grande importância. No Brasil, a EMBRAPA Suínos e Aves tem trabalhado no desenvolvimento de linhagens de galinhas poedeira e frangos de corte selecionadas para melhor produção, porém são poucos os estudos sobre o sistema imune destes animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a resposta imune de linhagens de galinhas desenvolvidas pela EMBRAPA Suínos e Aves. Foram utilizados 140 animais, 70 machos e 70 fêmeas, sendo 28 animais da linhagem MM, 28 animais da linhagem CC, 28 animais da linhagem CCc, 28 animais da linhagem TT e 28 da linhagem LLc. Para avaliação da imunidade inata, os animais receberam uma injeção intra-abdominal de Sephadex a 3%. Após dois dias, os animais foram pesados e os macrófagos abdominais foram coletados e processados para a avaliação da fagocitose, produção de óxido nítrico e atividade antimicrobiana. Além disso, após o abate dos animais, os baços foram retirados e os seus pesos relativos determinados. E ainda, a medida dos halos de inibição de crescimento bacteriano e teste de resistência sérica foram utilizados para avaliação da atividade antibacteriana do soro. A imunidade humoral foi avaliada pela produção de anticorpos naturais anti-hemácia de coelho e pela indução de anticorpos específicos anti-hemácia de carneiro utilizando a técnica de microhemaglutinação. Os resultados foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis, seguido do teste de Dunn. Para diferenças entre machos e fêmeas da mesma linhagem foi utilizado o teste de Mann-Whitney, valores de p< 0,05 foram considerados significativos. Para a análise da atividade antibacteriana do soro em ágar foi aplicado o teste de regressão logística. Os resultados mostram que a atividade fagocítica e antibacteriana de macrófagos são semelhantes nas linhagens estudadas, porém a produção de NO é maior em frangos de corte. O peso relativo do baço foi maior nas linhagens de postura, e entre elas a linhagem MM foi maior que a CCc. Quanto à atividade antibacteriana do soro em ágar não foi encontrado diferença significativa, mas no teste de resistência sérica galinhas poedeiras responderam melhor que frangos de corte. Entre os animais de postura, machos responderam melhor no início do teste de resistência sérica, porém ao final do experimento as fêmeas tiveram melhor resposta que os machos da mesma linhagem e em frangos de corte, os machos responderam melhor que as fêmeas. Os títulos de anticorpos específicos e naturais foram maiores nas galinhas poedeiras e entre essas, as aves da linhagem CC e CCc produzem mais anticorpos. Esses dados permitem concluir que a resposta imune é melhor em aves de postura, o que sugere que a seleção genética pode influenciar a imunidade em aves. A identificação de características genéticas favoráveis pode contribuir para o melhor entendimento da resposta imune em aves e com o desenvolvimento linhagens mais resistentes a patógenos. The increase in poultry production has been favored by the development of more productive lines of birds. Most of the production traits depends on the energy expenditure than is also important for the development of the immune response. Thus selection for a particular trait can influence the immune response in poultry. Despite the existence of various control measures of poultry diseases, there is the risk of disease outbreaks, causing losses to the poultry industry. Thus, the development of lines of birds more resistant to diseases is of great importance. In Brazil, the Embrapa Swine and Poultry has been working on developing lines of layer chickens and broilers selected for best production, but there are few studies about the immune system of these animals. The goal of this study was to compare the immune response of lines of chickens developed by Embrapa Swine and Poultry. Were used 140 animals, 70 males and 70 females, 28 MM line animals, 28 CC line animals, 28 CCc line animals, 28 TT line animals and 28 LLc line animals. For evaluation of innate immunity, the animals received an intra-abdominal injection of Sephadex to 3%. After two days, the animals were weighed and the abdominal macrophages were collected and processed for the evaluation of phagocytosis, production of nitric oxide and antimicrobial activity. Additionally, after the slaughter of animals, the spleens were removed and their relative weights determined. And yet, the measures of inhibition halo of inhibition of bacterial growth and serum resistance test were used to evaluate the antibacterial activity of the serum. Humoral immunity was evaluate by the production of natural anti- rabbit red blood cells antibodies and for the induction of specific anti-sheep red blood cells antibodies using the technique of microhemaglutinação. The results were submitted to the Kruskal - Wallis test followed by Dunn's test. For differences between males and females of the same line was used the Mann -Whitney test, p values < 0,05 were considered significant. For the analysis of the antibacterial activity of the serum agar was applied logistic regression test. The results show that the phagocytic activity of macrophages and antibacterial are similar in the lines studied, but NO production is higher in broilers. The relative weight of the spleen was higher in layers lines, and between them MM line was higher than the CCc. As for the antibacterial activity of the serum agar was not found significant difference, but in the serum resistance test layers chickens responded better than broilers. Among the layer animals, males responded better early in the serum resistance test, but at the end of the experiment the females had better response than males of the same line and in broiler, males responded better than females. The titers of natural and specific antibodies were higher in layers chickens and among these, the birds of the CC and CCc lines produce more antibodies. These data showed that the immune response is better in layers chickens, suggesting that genetic selection can influence immunity in birds. The identification of favorable genetic traits can contribute to a better understanding of the immune response in birds and developing lines more resistant to pathogens.