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Orientador: Edson Antunes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A disfunção erétil é definida como a incapacidade de alcançar ou manter ereção peniana adequada para a satisfação sexual, e ocorre em graus variáveis prejudicando a qualidade de vida do homem. A disfunção erétil está associada a fatores de risco como doenças cardiovasculares, hipertensão arterial, diabetes mellitus, hipercolesterolemia, envelhecimento, tabagismo e sedentarismo. O óxido nítrico (NO) é o principal mediador do relaxamento do músculo liso peniano. Evidências clínicas e experimentais indicam que a redução da disponibilidade de NO ou da reatividade ao NO endógeno leva à disfunção endotelial. Trabalhos recentes mostram que parte dos benefícios da atividade física regular no sistema cardiovascular é intensificar a produção de NO e/ou expressão da NOS pelas células endoteliais. Dessa forma, usando o modelo de inibição crônica da síntese de NO em ratos pelo L-NAME, investigamos os efeitos do treinamento físico regular na função erétil de ratos. Na primeira etapa, estudamos a influência do treinamento físico na função erétil de ratos saudáveis normotensos. Na segunda etapa, estudamos a influência do pré-condicionamento físico na função erétil de ratos submetidos a bloqueio crônico de NO. Na terceira etapa, avaliamos a eficácia terapêutica da atividade física regular na função erétil de ratos submetidos a bloqueio crônico de NO. Além das respostas funcionais (medidas de relaxamento de corpo cavernoso isolado e de pressão intracavernosa in vivo), realizamos a dosagem plasmática de nitrito/nitrato (NOx). A atividade plasmática da superóxido dismutase (SOD), a expressão protéica da NO síntase neuronal (nNOS), da nitrotirosina (3-NT) e da SOD, assim como a expressão gênica da gp91phox foram analisadas no corpo cavernoso. Em ratos sedentários, nossos resultados mostraram que o exercício físico por 8 semanas ampliou a resposta relaxante mediada pelo NO (NaNO2 acidificado), nitroprussiato de sódio (SNP) e estimulação elétrica (EFS), sem alterar a resposta contrátil em resposta à fenilefrina (PE) e endotelina-1 (ET-1). Nos ratos com deficiência crônica de NO, o pré-condicionamento preveniu o aumento da pressão arterial e amplificou o relaxamento do corpo cavernoso induzido pelo SNP, ACh e EFS; porém, não alterou a resposta relaxante ao BAY 41-2272 e sildenafil. Além disso, o pré-condicionamento normalizou a pressão intracavernosa e os níveis plasmáticos de NOx. Ao avaliarmos o efeito do treinamento físico após instalação do bloqueio crônico de NO (eficácia terapêutica), notamos que a atividade física atenuou a hipertensão arterial, potencializou o relaxamento induzido pelo SNP e reverteu a redução do relaxamento em resposta à ACh e EFS. Além disso, normalizou a pressão intracavernosa e atenuou os níveis de NOx. A expressão protéica da nNOS e da PnNOS não foi alterada pela atividade física; porém, o aumento da nitração protéica (3-NT) foi previnida pelo treinamento físico nos animais hipertensos. A expressão protéica da SOD não foi alterada pelo treinamento; entretanto, a atividade física regular atenuou a redução da atividade plasmática da SOD. Os níveis de expressão gênica da subunidade catalítica da NADPH oxidase, a gp91phox, foram reduzidos pela atividade física regular nos ratos deficientes crônicos de NO, e restaurados pelo pós-condicionamento. Portanto, concluimos que o treinamento físico (pré ou pós-condicionamento), é uma estratégia nãofarmacológica eficiente capaz de reduzir o estresse oxidativo, aumentando a biodisponibilidade de NO, que resulta na melhora da disfunção erétil Abstract: Erectile dysfunction is defined as the consistent or recurrent inability of a man to attain and/or maintain a penile erection sufficient for sexual activity, and can occur in different levels leading to an impairment of men¿s quality of life. Risk factors such as cardiovascular diseases, arterial hypertension, diabetes mellitus, hypercholesterolemia, aging, smoking and life sedentary increase the prevalence of erectile dysfunction. Nitric oxide (NO) is the main mediator of relaxation of penile smooth muscle. Clinical and experimental evidences suggest that decreased NO biodisponibility or NO reactivity contribute to erectile dysfunction. Recent studies have shown that part of beneficial effects of regular physical activity in the cardiovascular system is due to an increase in NO production and/or NOS expression by endothelial cells. Therefore, the aim of this work was to study the influence of run training on the erectile function from rats under chronic NO blockade by long-term treatment with L-NAME. First, we investigated the influence of physical training in the erectile function of healthy, normotense rats. Second, we studied the influence of prior physical conditioning in the erectile function of chronic NO-defficient rats. Third, we evaluated the therapeutic efficacy of regular physical activity (pós-conditioning) in the erectile function in chronic NO-defficient rats. To achieve this, we evaluated the functional responses (measurements of cavernosal relaxation in vitro and intracavernosal pressure in vivo) and the plasma levels of nitrite/nitrate (NOx) and plasmatic superoxide dismutase (SOD) activity, protein expression of neuronal NOS (nNOS), nitrotyrosin (3-NT) and SOD, and gene expression of gp91phox in the corpus cavernosum. In healthy normotenses rats, physical training by 8 weeks improved the relaxant responses mediated by NO (added as acidified sodium nitrite solution; NaNO2), sodium nitricprusside (SNP) and electrical field stimulation (EFS), without affecting the contractile responses induced by phenilephrine (PE) and endothelin (ET-1). In NO-defficient rats, the prior physical conditioning attenuated the increased arterial pressure, and potentiated the relaxations of corpus cavernosum induced by SNP, ACh and EFS. However, no changes were found for BAY 41-2271 and sildenafil. In NO-defficient animals, the physical activity normalized the intracavernosal pressure and plasma NOx levels. The post-conditioning (therapeutic efficacy) also attenuated the L-NAME induced arterial hypertension, potentiated the SNP-induced relaxations and reverted the reductions of relaxing responses to ACh and EFS. Furthermore, post-conditioning nomalized the intracavernosal pressure and attenuated the plasma NOx levels. Protein expression of nNOS and PnNOS were not affected by post physical activity. However, the increase of protein nitration (3-NT) was reversed by postconditioning in the NO-defficient animals. The protein expression of SOD was not modified by exercise. Nevertheless, the physical activity attenuated the reduction of SOD plasma activity. The gp91phox expression was decreased in NO-defficient rats, and restored by physical training. In conclusion, we conclude that physical training (pre or post-conditioning) is an efficient nos-pharmcological approach able to reduce the oxidative stress, increasing the NO bioavailability that results in an improvement of erectile dysfunction Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A angiotensina II pode contribuir com o distúrbio do metabolismo renal de sódio presente em ratos espontaneamente hipertensos. Inicialmente, o estudo atentou à possibilidade de envolvimento da expressão do supressor de sinalização de citocinas (SOCS-3) (técnica de Western blotting) em hipotálamo de SHR durante o desenvolvimento hipertensivo (método indireto para medida de pressão arterial). Segundo, pós-estimulação aguda i.c.v com angiotensina II, avaliou a dipsogênese, o ritmo de filtração glomerular (técnica de clearance de creatinina), o manuseio tubular renal de sódio (técnica de clearance de lítio) e potássio em SHR e WKy. Os resultados obtidos confirmaram a estimulação central do receptor de angiotensina II e os seus efeitos dipsogênico e natriurético. A administração i.c.v de angiotensina II diminuiu o clearance de creatinina e, reciprocamente, aumentou a excreção tubular renal de sódio e de potássio nas duas linhagens, porém acentuadamente em WKy. Por outro lado, se comparada à diferença da expressão de JACK-2/SOCS-3 idade-dependente, a alteração da resposta funcional renal pós-estímulo intracerebroventricular com angiotensina II sugere uma disfunção das vias neurais existentes em animais SHR. As evidências supracitadas acrescentam à idéia existente na literatura que, a angiotensina II atuando no sistema nervoso central é um instrumento para regulação da homeostase do fluido corporal. Possivelmente, a resposta neural inapropriada resulte na inabilidade do manuseio hidrossalino e, conseqüentemente, colabore com o desenvolvimento da hipertensão arterial em SHR. Palavras-chave: Hipertensão arterial, SNC, angiotensina II; SOCS-3; SHR; função renal; natriurese; clearance de lítio Abstract: There is a surprising lack of experimental data on the renal sodium handle mechanisms induced by i.c.v injection of AngII in hypertensive animals. Thus, we hypothesized that a presumable blunted response to centrally injected AngII may contribute to sodium metabolism disturbances observed in SHR. The study was performed after acute i.c.v AngII administration on tubular sodium handling, evaluated by lithium clearance, in conscious, unrestrained rats and their sham-operated appropriate WKy controls. The present series of experiments were also designed to investigate the possible involvement of SOCS-3 expression in AngII-induced control of water ingestion in SHR hypothalamus. Our results confirm earlier reports on the potent natriuretic effects of central AngII receptor stimulation. The i.c.v application of AngII significantly decreased CCr and reciprocally promotes increased absolute and fractional excretion rates of sodium and potassium in both WKy and SHR animals. The magnitude of the renal response to AngII was significantly greater in WKy rats than in SHR. The enhancement of renal function following the centrally applied AngII in WKy rats as compared with SHR associated with age-related difference in JACK-2/SOCS-3 expression suggest that a dysfunction in the angiotensin neural pathways exists in SHR. Our findings lend further support to the idea that AngII in CNS is an instrumental in the regulation of body fluid homeostasis. Speculatively, it seems interesting to suggest that perhaps one of the CNS inappropriate AngII pathway response defects may result in inability of renal tubules to handle the hydrosaline balance, consequently may contributing with development of arterial hypertension in genetically hypertensive rats from Kyoto. Keywords: Arterial hypertension; central nervous system; angiotensin II; SOCS-3, SHR, kidney function; natriuresis; lithium clearance Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A inibição crônica da síntese de óxido nítrico, através do tratamento com L-NAME, promove aumento da resistência vascular e hipertensão. O exercício físico regular tem sido empregado como tratamento não farmacológico na hipertensão. No entanto, diferentes resultados têm sido encontrados. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi analisar a influência do exercício físico por natação realizado previamente e/ou simultaneamente ao tratamento com L-NAME na pressão arterial sistólica, no tamanho dos cardiomiócitos ventriculares, no percentual de tecido conjuntivo cardíaco e nas respostas cronotrópicas de átrios direitos isolados de ratos. Nossos resultados mostram que a atividade física realizada previamente ao tratamento com L-NAME atenua o aumento da pressão arterial nesses animais. Entretanto, quando o treinamento físico foi simultâneo ao tratamento com L-NAME, ele não modificou o aumento da pressão arterial promovida pela inibição da síntese de óxido nítrico. O treinamento físico por natação prévio ou simultâneo ao tratamento com L-NAME não modificou a potência ao isoproterenol, enquanto que a potência ao carbacol foi diminuída nos animais treinados. A porcentagem de tecido conjuntivo nos átrios direitos dos animais treinados ou treinados e tratados com L-NAME foi aumentada e esse aumento foi independente da associação com a administração de L-NAME. O tamanho dos cardiomiócitos não foi alterado nos animais treinados. Concluindo, o exercício físico prévio ao desenvolvimento da hipertensão induzida pela inibição da síntese de óxido nítrico atenua a elevação dos valores de pressão arterial. No entanto, quando a hipertensão está em desenvolvimento ou já estabelecida, a atividade física não melhora o quadro hipertensivo Abstract: Chronic nitric oxide inhibition by L-NAME treatment leads to hypertension. Regular exercise has been used as a nonpharmacological approach to prevent or to treat hypertension. The aim of this study was to investigate the effect of physical preconditioning and or physical activity simultaneously to LNAME treatment by swim training on the blood pressure, cardiomyocyte size, amount of connective tissue in the heart and chronotropic responses from right atria in L-NAME-treated rats. Our study shows that physical preconditioning by swim training attenuates the increase in blood pressure in L-NAME treated rats. However, physical activity simultaneously to L-NAME treatment does not attenuate the rise of blood pressure induced by long-term treatment with L-NAME The potency of isoproterenol was not altered in alI studied groups while the potency of carbachol was significantly lower in trained groups. Swim training by itself increased the amount of connective tissues in right atria and ventric1es and it was not modified by L-NAME treatment. No changes were observed in cardiomyocytes size in trained groups. It is concluded that preconditioning physical can prevent or attenuate the hypertension induced by L-NAME treatment, but it can not improve the blood pressure values when hypertension is establishing or is already established Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Objetivos: Estudos epidemiológicos mostrando que o aumento do consumo de tomate ou seus derivados reduz o risco de doenças crônicas como câncer de próstata e doenças cardiovasculares. Esses efeitos benéficos do tomate geralmente são atribuídos ao licopeno, um carotenóide acíclico e com propriedade antioxidante. Este trabalho se propõe analisar o possível efeito protetor do pré-tratamento com licopeno em condições experimentais de hipertensão arterial e propõe ainda avaliar os efeitos do tratamento agudo e crônico com esse carotenóide em modelos de inflamação aguda local e sistêmica. Desta forma, pretende-se contribuir na avaliação da eficácia do consumo regular de alimentos ricos em licopeno na terapêutica e profilaxia associadas aos modelos experimentais deste trabalho. 1º. Avaliar o efeito do pré-tratamento com licopeno nas alterações cardiovasculares funcionais induzidas pela inibição crônica da síntese de óxido nítrico em ratos Wistar; 2º. Avaliar o tratamento com licopeno em modelos de inflamação aguda local (representado pelo modelo de edema da pata) e sistêmica (isquemia e reperfusão hepática e lesão térmica). Métodos: Na primeira etapa desse estudo foi realizado tratamento com licopeno nas doses de 5, 10, 50 ou 100 mg de licopeno/kg/dia por gavagem associados ou não com L-NAME (45 mg/Kg/dia) por gavagem, por 28 dias. Os parâmetros analisados foram peso corporal, pressão arterial média (PAM), débito cardíaco (DC) e resistência vascular periférica total (RVPT). Na segunda etapa, no modelo de edema da pata, foram empregados dois tipos de tratamento com licopeno: tratamento agudo (1 - 50 mg de licopeno/Kg administradas por via intraperitonial, 15 minutos antes da injeção de carragenina para indução de edema de pata) e tratamento crônico (25 ou 50 mg de licopeno/kg/dia, por gavagem, por 14 dias antes da injeção de carragenina). Nos modelos de Isquemia e reperfusão (I/R) hepática e lesão térmica (LT), foi realizado o pré-tratamento dos animais com licopeno 25 mg/Kg/dia por 14 dias e, posteriormente, submetidos a I/R ou à LT. Para o protocolo de I/R foram analisados os testes plasmáticos de alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e da gama-glutamil transferase (?GT). Já para lesão térmica foram analisadas as concentrações plasmáticas de ALT, AST, creatinina, uréia e amilase. Resultados: Os resultados obtidos na primeira etapa desse estudo mostraram que o licopeno, nas diferentes doses associadas à administração de L-NAME causou aumento significativo da PAM, RVPT e redução no DC. Os resultados obtidos na segunda etapa desse estudo nos mostraram que o licopeno, tanto no tratamento agudo quanto no tratamento crônico, inibiu significativamente a formação de edema na pata. O tratamento crônico por 14 dias de licopeno também reduziu a lesão hepática provocada pelos dois modelos de inflamação aguda sistêmica, entretanto, não reduziu o grau de lesão em outros tecidos. Conclusão: O tratamento crônico com licopeno, nas doses usadas, não preveniu as alterações cardiovasculares encontradas no modelo de inibição crônica da síntese de óxido nítrico por L-NAME. Tanto o tratamento agudo quanto o crônico de licopeno exibiram efeito antiinflamatório local, o tratamento crônico limitou o grau de lesão hepática em dois modelos de inflamação sistêmica Abstract: Objectives: There is epidemiological data supporting the association between an increased consumption of tomatoes or its products and a reduced risk for developing chronic diseases such as prostate cancer and cardiovascular disease. These beneficial effects are generally attributed to the antioxidant properties of lycopene, an acyclic carotenoid with 11 linearly arranged conjugated double bonds. Hence, we evaluated the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in a hypertension model induced by chronic treatment with L-NAME and we also evaluated the anti-inflammatory effect of lycopene in experimental acute inflammation model. Methods: To evaluate the influence of lycopene in the prevention of haemodynamics alterations found in an endothelial dysfunction model induced by chronic treatment with L-NAME, lycopene was administered by gavage and the dosages were 5, 10, 50 or 100 mg of the lycopene/Kg/day, during 28 day. The analyzed parameters were body weight, tail-cuff blood pressure (TCP), mean arterial pressure (MAP), cardiac output (CO) and total peripheral vascular resistance (TPVR). To evaluate the effects of lycopene in local inflammation, a carrageenan induced paw edema model, lycopene was administered as an acute treatment (1, 10, 25 or 50 mg of the lycopene/Kg, intraperitonial (i.p.), 15 minutes before the carrageenan injection) and as a chronic treatment (25 or 50 mg of the lycopene/kg/day, gavage, during 14 days before the carrageenan injection. The evaluation of the liver ischemia-reperfusion and burn injury model, lycopene was administered chronically (25mg/Kg) during 14 days. Injury was assessed by measurement of the. In this model, lycopene was administered daily at two doses (25mg/kg and 50mg/kg) in the 14 days that preceded the experiments. After I/R process, it was measured serum levels of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase and gamma-glutamyl transferase. After burn injury experiment, it was measured aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, creatinine, urea and amilase. Results: The results obtained in the part of in this study showed that the chronic administration of L-NAME and chronic treatment with lycopene plus L-NAME induced to the significant increase of MAP, TPVR and reduction in CO. The second part, results showed that lycopene significantly inhibited rat paw edema formation at two doses (25 and 50 mg/Kg) in both acute and repeated administration. Repeated administration of lycopene also reduced liver injury induced by ischemia-reperfusion and by burn injury. Conclusion: The chronic treatment with lycopene did not prevent the functional cardiovascular alterations found in the model of chronic inhibition of the synthesis of nitric oxide by L-NAME. However, lycopene exhibits local anti-inflammatory activity in the carrageenan-induced paw edema model and attenuates liver injury induced by ischemia reperfusion and burn injury Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Jr Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Fumar é um dos maiores fatores de risco para doenças coronarianas arteriais e causa disfunção endotelial. Além dos presumíveis efeitos autonômicos dependentes da nicotina, vários estudos têm demonstrado que fumar diminui a disponibilidade de óxido nítrico (NO) em artérias e veias. Nicotina está entre os diversos compostos contidos no cigarro que poderia ser responsável por esta resposta prejudicial do endotélio. Estudamos 9 não fumantes sadios e 12 fumantes sadios, eves/moderados, através da técnica da complacência da veia dorsal da mão. Curvas de dose resposta à bradicinina (BK) e nitroprussiato de sódio (NPS) foram construídas para testar o relaxamento dependente e independente do endotélio antes e durante o uso de adesivo de nicotina (21 mg). Pressão arterial média (PAM) foi medida, batimento a batimento, durante as 4 horas do estudo. Amostras de sangue foram coletadas para quantificar o tromboxano B2 (TXB2). . Co-administração de nicotina transdérmica reduziu a responsividade vascular à BK em veias de não fumantes (Emáx=88.0::!::17.9% e 54.3:t14.9%, respectivamente antes e após o adesivo de nicotina; p

Orientador: Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Esta tese descreve os efeitos do veneno da aranha Phoneutria nigriventer sobre a pressão arterial média (PAM) e em corações isolados de ratos. Para avaliação dos parâmetros in vivo, o método utilizado consistiu basicamente de monitorização da PAM de ratos anestesiados através de transdutor de pressão. Os parâmetros in vitro foram avaliados em função da pressão desenvolvida no ventrículo esquerdo (PDVE), freqüência cardíaca (medidos através de um balão inserido na cavidade ventricular) e fluxo coronariano (coleta do efluente coronariano) em intervalos de tempo préestabelecidos. A administração endovenosa do veneno de Phoneutria nigriventer (0,1 mg/kg) produziu hipotensão rápida e reversível. Na dose de 0.3 mg/kg, o veneno evocou alterações bifásicas caracterizadas por hipotensão transitória seguida por hipertensão prolongada e discreto aumento da freqüência cardíaca. Tais alterações foram acompanhadas por fasciculações generalizadas, diurese, defecação, sialorréia, cianose e dispnéia. Doses de veneno mais elevadas (0.6 mg/kg) produziram alterações mais intensas, dessincronizadas e determinou a morte de 75 % (n=20) dos animais. O tratamento prévio dos animais com atropina, propranolol ou fenoxibenzamina não aboliu as alterações induzidas pelo veneno in vivo, excluindo o possível envolvimento do sistema nervoso autônomo nessa resposta. Posteriormente, investigamos o envolvimento de componentes como cininas, PAF, neurocininas e NO na resposta hipotensora induzida pelo veneno in vivo. O tratamento prévio dos animais com Hoe 140 (antagonista de receptores 82), WE8 2086 (antagonista de PAF), SR 140333 (antagonista de receptores NK1) ou L-NAME (inibidor da síntese de óxido nítrico) não alterou de modo significativo a hipotensão induzida pelo veneno sugerindo que tais mediadores não estão envolvidos nessa resposta hipotensora. A ausência de efeito da indometacina sobre a resposta bifásica induzida pelo veneno sugere que a hipotensão e hipertensão não são decorrentes da formação de PGb e TXA2, respectivamente. Finalmente, a queda na PAM induzida pelo veneno foi parcialmente inibida pelo bloqueador dos canais de potássio dependentes de ATP (glibenclamida) indicando que a hipotensão induzida pelo veneno é mediada, pelo menos em parte, da ativação de canais de potássio. A resposta hipertensora induzida pelo veneno não foi alterada nos animais tratados com antagonista de receptores AT1 de angiotensina II (Losartan) ou com antagonista de receptores de endotelina do tipo ETA(FR 139317) indicando que o veneno não estimula o sistema renina angiotensina e nem promove a liberação de ET-1 no organismo. Contudo, esse aumento de PAM induzido pelo veneno de Phoneutria nigriventer foi marcadamente reduzido de modo dose-dependente com antagonistas de canais de Ca2+ do tipo L (verapamil, diltiazem e nifedipina) sugerindo que essa hipertensão arterial é dependente da ativação de canais de cálcio do tipo L. A administração inta-aórtica do veneno (50 µg) em corações isolados produziu inotropismo positivo (aumento da PDVE) acompanhado por discreto cronotropismo positivo (aumento da FC). Na dose de 100 µg o veneno produziu inotropismo positivo imediato seguido por bloqueio átrio-ventricular transitório, bradicardia, aumento da pressão diastólica e queda do fluxo coronariano. Em corações isolados, a infusão contínua de propranolol foi capaz de proteger os corações das alterações induzidas pelo veneno em ambas as doses. Entretanto, o tratamento dos corações com atropina não modificou signifrcativamente tais alterações, exceto, uma discreta proteção sobre a bradicardia observada com altas doses do veneno. Isto sugere que nesta preparação in vitro, o veneno promove liberação de noradrenalina e acetildblina das terminações nervosas simpáticas e parassimpáticas do músculo cardraco. Todavia, embora o veneno produza a liberação desses neurotransmissores in vitro, concluimos que estes não são os responsáveis pela hipotensão e hipertensão observados in vivo em virtude dos resultados negativos obtidos com atropina, fenoxibenzamina e propranolol Abstract: The changes induced in the mean arterial blood pressure (MABP) of anaesthetised rats following the administration of armed spider (Phoneutria nigriventer) venom have been investigated. The intravenous injection of Phoneutria nigriventer venom (PNV; 0.1 mg/kg) evoked a brief and reversible decrease in the MABP whereas a higher dose of venom (0.3 mg/kg) caused a biphasic response characterized by a short lasting hypotension followed by a sustained and prolonged hypertension (40-50 min). These changes were accompanied by tachycardia, salivation, fasciculations, defecation and respiratory disturbances. Pretreatment of the animais with atropine (10 mg/kg), propranolol (100 mg/kg), phenoxybenzamine (100 mg/kg) and indomethacin (4 mg/kg) did not significantly affect the MABP changes induced by PNV. Similarly, the bradykinin B2 receptor antagonist Hoe 140 (0.6 mg/kg), the PAF antagonist WEB 2086 (20 mg/kg), the NK1 receptor antagonist SR 140333 (0.5 mg/kg) and the nitric oxide synthase inhibitor Nro-nitro-L-arginine methyl ester (10 mg/kg) had no significant effect on the PNV-induced MABP changes. The increase in the MABP induced by PNV was also not significantly affected by either angiotensin 11 receptor antagonist losartan (10 mg/kg) or the endothelin ET A receptor antagonist FR 139317 (30 mg/kg). The A TP-dependent potassium channel antagonist glibenclamide (50 mg/kg) reduced by 40% the hypotension induced by Pf'JV without affecting the hypertensive response. Pretreatment of the animais with Ltype Ca2+ channel antagonists such as verapamil (10-100 µ/kg/min), diltiazem (40-120 /-l9/kg/min) and nifedipine (0.3-10 mg/kg) markedly attenuated the PNVinduced hypertension. Verapamil (30 µ/kg/min) and diltiazem (120µ/kg/min) also promptly reversed the established hypertension induced by PNV when infused 8 min after venom injection. Our results indicate that the brief decrease of blood pressure induced by PNV is partially due to A TP-dependent or calcium activated channels activation. The prolonged hypertension seems to result from direct calcium entry in vascular and/or cardiac muscles. Phoneutria nigriventer venom (PNV; 50 and 100 µg) was also investigated in isolated rat hearts by the Langendorff method. Doses of 50 µg evoked a significant positive inotropism (increase of left ventricule developed pressure; LVDP) associated with discreete positive cronotropism. Higher doses of PNV (100µg caused an immediate increase of L VDP followed by bradicardy and temporary atrium-ventricule blockad (AVB). This was accompained by significant reduction of coronary blood flow. These changes were prevented by the P-blocker propranolol indicating that such effects are caused by activation of sympathetic nerve endings and hence noradrenaline release. Since atropine potentiated the increase of L VDP and attenuated the bradicardia induced by PNV, it is likely that PNV also induces the release of acetylcholine from parassympathetic nerve endings. However, the release of both noradrenaline and acetylcholine from the rat hearts does not probably account for the cardiovascular changes observed in vivo. The in vivo effect is likely to be of peripheral or CNS, rather than cardiac, origin Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Recentemente, o composto BAY 41-2272, um derivado da pirazolopiridina, 5-ciclopropil-2-[ 1-(2-fluor-benzil)-IH-pirazol[3, 4-b]piridina-3-il]-pirimidina-4-ilamina, (Bayer AGGermany), foi descrito como ativador específico de GCs de ação NO-independente (STRAUB et. al., 2001; STASCH et. aI., 2001). Experimentos in vitro demonstraram uma potente ativação da GCs pelo BAY 41-2272 nas concentrações de 0.1 nM a 100 J.IM, sendo esta estimulação potencializada na presença de doador de NO (DEA)/NO 1 J.LM (STACH et. al., 2001). Em estudos utilizando enzimas desprovidas de grupamento heme, o BAY 41-2272 não foi capaz de ativá-Ias demonstrando que seu mecanismo, apesar de ser NO-independente, é heme-dependente (STACH e1.al., 2001). Diante do exposto, observa-se que a inibição da síntese de óxido nítrico é responsável, em grande parte, pelo surgimento de processos patológicos, principalmente para o sistema cardiocirculatório. Neste sentido, o presente estudo foi realizado para investigar, principalmente, o efeito de um recente e potente estimulador da GCs (BAY 41-2272, Bayer AG, Germany) - independente de NO na hipertensão e miocardiopatia em ratos, avaliando desta forma a importância dessa via de estimulação na presença da patologia. Foram utilizados no experimento ratos WistarlUni S.P.F., pesando entre 250 a 350g fornecidos do Centro Multidisciplinar para investigação Biológica da Universidade Estadual de Campinas (CEMIB - Unicamp). Os animais foram mantidos em gaiolas individuais, dentro de estantes ventiladas (ALESCO), sob condições controladas de luminosidade (12/12 horas) e temperatura (22°C). A técnica iniciou-se por intermédio da implantação de uma unidade transdutor/transmissor na aorta descendente, fixado na parede abdominal interna do animal. As gaiolas com os animais foram colocadas em cima de receivers individuais, ligados a um computador no qual registrava a medição da pressão arterial e a freqüência cardíaca dos animais, por um período de 90 segundos, duas vezes por semana. A aquisição desses dados foi realizada de modo contínuo por meio do sistema de telemetria (Data Science Inc., S1.Paul, MN, USA). Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais, pesados semanalmente e tratados por oito semanas consecutivas. O grupo Controle (n= 10) recebeu (Iml de DMSO, Dimetil Sulfóxido) por gavagem esofágica; o grupo L-NAME (n=20) recebeu L-NAME (n-nitro-L-arginina-metil-éster), recebeu (20mg/rato/dia); o grupo L-NAME + BAY (n=15)recebeu L-NAME(20mg/rato/dia)+ BAY(lOmg/kg/dia)e o GrupoBAY 41-2272 (n=15)recebeu BAY41-2272(10mg/kg/dia). o L-NAME foi dissolvido em água autoclavada e fornecido normalmente para os animais, e o BAY 41-2272 foi administrado através de gavagem oral diária dissolvido em DMSO 80%. Os resultados demonstraram que o BAY 41-2272 diminui significativamente a hipertensão arterial induzida pelo tratamento crônico com L-NAME, diminui o peso cardíaco, diminui o peso do ventrículo esquerdo e reduz a área de lesão dos cardiomiócitos, e que somente os animais do grupo BAY 41-2272 apresentaram um aumento na freqüência cardíaca que pode ser caracterizado por um mecanismo compensatório devido à queda da pressão arterial nos animais Abstract: Recently, the compound BAY 41-2272, a pyirazolopyridine derivative, was described as an specific GCs activator by a mechanism that is independent of NO (Straub et al. ,2001; Stasch et al., 2001). In vitro experiments demonstrated that BAY 41-2272 stimulates potently sGC at concentrations of 0.1 nM to 100 Nrn, this effeet is potentiated in the presence of NO donors licke 2-(N, N-diethylamino )-diazendate-2-oxide (DEA)/NO (Staeh et. al., 2001). In studies using enzymes were the harm group was removed, BAY 41-2272 did not activate the harm-free enzyme demonstrating that BAY 41-2272 aetives sGC by an NO-independent, but heme-dependent mechanism (Stach et al., 2001). It is observed that the inhibition of the synthesis of nitric oxide is responsible, largely, for the appearance of pathological processes, mainly in the cardiac system. In this sense, this research seeks mainly to investigate the effects of BAY 41-2272 (BAY 41-2272, Bayer AG-Germany, a potent NO-independent stimulator of sGC) in rats, in a physiologie point of view and in a process physiopathological process (hypertension), evaluating the importance of this stimulation way in the presence of the pathology. For this purpose, WistarlUni S.P.F.(250 to 350g) obtained from the Center of Bioterism of the State University of Campinas (CEMIB - UNlCAMP), were housed in individual cages and kept in ventilated shelves (ALESCO) under controlled conditions of light (l2h light dark eycle) and temperature (22°C). The mean arterial blood pressures (MABP) were collected during 90 seconds two times a week for eight weeks. Rats were equipped with implantable radiotelemetry, and a data acquisition system (Data Science Inc., St. Paul, MN, USA), comprising a chronically implantable transducer/transmitter unit fluid-filled catheter. The transmitter was implanted into the peritoneal cavity and the descending aorta, affixed to the inner peritoneal wall. The animals were divided in four experimental groups as follow: 1) Control receiving 1 ml of DMSO 80% per day; 2) L-NAME, receiving L-NAME, alone (20mg/rat per day), 3) BAY 41-2272, reeeiving alone (lOmglkg per day); 4) L-NAME + BAY 41-2272, receiving concomitantly L-NAME (20mg/rat per day) and BAY 41-2272 (10mglkg per day). L-NAME was dissolved in the drinking autoclavated water daily drunk by the rats, BAY 41-2272 was dissolved in 80% of DMSO and administered by gavages. The experiments were performed for up to 8 weeks. The results obtained showed that BAY 41-2272 reduces significantly the arterial hypertension induced by chronic treatment with L-NAME, as well the weight ofthe heart and of the left ventricle and the cardiomyocite injured area. Only animals had receiving BAY 41-2272 showed an increase in the heart rate that can be characterized by a compensatory mechanism in function of reduction of the arterial pressure in these animals Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Stephen Hyslo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: As peptidases desempenham um papel importante na modulação da atividade de peptídeos endógenos em situações normais e patológicas. Neste trabalho, investigamos a atividade e expressão de quatro peptidases (aminopeptidase M- APM, dipeptidil peptidase IV - DPP IV, endopeptidase neutra - NEP 24.11 e metaloendopeptidase 24.15 - MEP 24.15) em tecidos (aorta, cérebro, coração, fígado, pulmão e rim) de ratos em dois modelos de hipertensão: a hipertensão induzida pelo tratamento crônico de ratos com NliJ-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME), um inibidor da biossíntese de óxido nítrico (NO), e em ratos espontaneamente hipertensos (SHR). A atividade enzimática foi avaliada por ensaios enzimáticos fluorométricos ou colorimétricos enquanto a expressão foi avaliadapor westernblotting.Em ratos tratadoscom L-NAME(80 mg kg-1day-1, p.o., durante 4 semanas), não houve alteração na atividade das quatro peptidases estudas em cérebro, coração, fígado, pulmão e rim (a NEP 24.11 foi detectada apenas no pulmão e rim). Entretanto, na aorta torácica, a atividade da APM mostrou um pequeno decréscimo enquanto as atividades da DPP IV e MEP 24.15 foram significativamente aumentadas. A expressão de DPP IV e MEP 24.15 também foi aumentada pelo tratamento com L-NAME.As atividades da MEP 24.15 recombinante ou DPP IV renal não foram afetadas pela incubação com L-NAME (1-100 fJM)ou nitroprussiato de sódio e 3-morfolinosidnonimina (1-100 fJM cada), ambos doadores de NO. A administração de N-[1-(R,S)-carboxi-3-fenilpropil]-Ala- Aib-Tyr-p-aminobenzoato (JA2), um inibidor de MEP 24.15/MEP 24.16, em ratos anestesiados com pentobarbital sódico aumentou a resposta hipotensora da bradicinina. No modelo SHR, a atividade da DPP IV foi aumentada no cérebro, enquanto que as atividades da MEP 24.15 e NEP 24.11 foram aumentadas no pulmão (MEP 24.15 e NEP 24.11) e rim (NEP 24.11). Por outro lado, as atividades da DPP IV e MEP 24.15 foram reduzidas na aorta torácica; a APM foi inalterada e a NEP 24.11 não foi detectada neste tecido. Western blotting para DPP IV e MEP 24.15 mostrou redução correspondente na expressão de ambas as enzimas na aorta e um aumento para DPP IV no cérebro; não houve alteração na expressão da MEP 24.15 no pulmão e nem da NEP 24.11 no pulmão ou rim. A administração do JA2 em SHR não alterou as respostas à bradicinina. Estes resultados indicam que há alterações na atividade e expressão das peptidases estudadas (exceto APM) nos dois modelos de hipertensão. Entretanto, a variabilidade nestas alterações entre os dois modelos sugere que a hipertensão per se não é a causa principal destas diferenças, mas que provavelmente resultam de alterações bioquímicas associadas a cada modelo e seletivas para cada peptidase Abstract: Peptidases play an important role in modulating the activity of endogenous peptides in normal and pathological situations. In this work, we investigated the activity and expression of four peptidases (aminopeptidase M - APM, dipeptidyl peptidase IV - DPP IV, metalloendopeptidase 24.15 - MEP 24.15 and neutral endopeptidase 24.11 - NEP 24.11) in rat tissues (aorta, brain, heart, kidney, liver and lung) in two models of hypertension, namely, chronic treatment with NlV-nitro-Larginine methyl ester (L-NAME), a nitric oxide (NO) synthase inhibitor (80 mg kg-1 dai1, p.o. for 4 weeks), and spontaneously hypertensive rats (SHR). Enzymatic activity was assayed fluorometrically or colorimetrically and protein expression was assessed by westem blotting. Treatment with L-NAME did not significantly alter the activities of the four peptidases in brain, heart, kidney, liver and lung (NEP was detected only in kidney and lung). In contrast, in thoracic aorta, the activity of APM was slightly but significantly reduced whereas those of DPP IV and MEP 24.15 were markedly enhanced. Immunoblotting for DPP IV and MEP 24.15 showed increased expression in aortic tissue. Neither L-NAME (1-100 J.lM)nor the NO donors sodium nitroprusside and 3-morpholinosydnonimine (1-100 J.lMeach) had any consistent effect on the activity of recombinant MEP 24.15 or renal DPP IV. Administration of the MEP 24.15/MEP 24.16 inhibitor N-[1-(R,S)-carboXy-3- phenylpropyl]-Ala-Aib-Tyr-p-aminobenzoate (JA2) in pentobartibal-anesthetized rats significantly potentiated the hypotensive response to bradykinin. In SHR, the activity of DPP IV was significantly increased in brain, whereas MEP 24.15 and NEP 24.11 activities were markedly enhanced in lung (MEP 24.15 and NEP 24.11) and kidney (NEP 24.11). In contrast, the activities of DPP IV and MEP 24.15 were markedly decreased in aortic tissue; APM was unaltered and NEP 24.11 was not detected in this tissue. Immunoblotting for DPP IV and MEP 24.15 showed decreased expression in aortic tissue and increased expression of DPP IV in the brain; there was no alteration in the expression of MEP 24.15 in the lung or of NEP 24.11 in kidney and lung. The administration of JA2 to SHR did not alter the responses to bradykinin. These results indicate that there were alterations in the activity and expression of the peptidases studied (except for APM) in both models of hypertension. However, the different patterns of afterations seen between the two models suggests that the changes were not caused by the hypertension per se, but rather were probably the result of biochemical alterations associated with each model and selective for each peptidase Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Júnior Texto em português e inglês Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: INTRODUÇÃO: A hipertensão arterial é o mais prevalente e significante fator de risco modificável para doença arterial coronariana (DAC). Uma parte destes pacientes com hipertensão descontrolada é classificada como sendo portadora da Hipertensão Arterial Resistente (HAR). A incidência da isquemia miocárdica e da DAC aumenta juntamente com a ascensão dos níveis pressóricos. No entanto, a prevalência de isquemia miocárdica em pacientes com HAR é desconhecida, bem como os fatores associados à primeira. MÉTODOS: Analisamos 129 pacientes com HAR verdadeira, seguidos regularmente em nosso ambulatório especializado. Foram realizados cintilografia de perfusão miocárdica em repouso e após stress farmacológico por dipiridamol nestes indivíduos. Os pacientes eram então divididos em dois grupos: com (I-HAR, n=36) e sem (SI-HAR, n=93) isquemia miocárdica. Ecocardiograma, MAPA-24h (para inclusive análise de efeito do jaleco branco), e vasodilatação mediada por fluxo (VMF) também foram realizados. RESULTADOS: Trinta e seis pacientes (28%) tinham isquemia miocárdica e 49% apresentavam o efeito do jaleco branco (EJB). O EJB esteve associado com alta prevalência de isquemia miocárdica (49,2% vs. 7,6%, p

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Segundo o VII JNC e V Diretrizes Brasileiras de Hipertensão Arterial, a hipertensão arterial resistente (HAR) é definida como sendo a elevação persistente dos níveis pressóricos (= 140/90 mmHg) a despeito de tratamento farmacológico tríplice, pleno, incluindo diuréticos, em pacientes com boa adesão e sem causas secundárias de hipertensão arterial ou pseudo-hipertensão. O excesso ou escape de aldosterona pode ocorrer após tratamento crônico com IECA, BRA ou diuréticos tiazídicos, comumente utilizados nestes pacientes ou por hiperaldosteronismo primário não diagnosticado. A espironolactona tem sido apontada como fármaco indispensável no tratamento de HAR por melhorar os níveis pressóricos, mas pouco se sabe sobre a pressão arterial (PA), função endotelial e remodelamento cardiovascular avaliados simultaneamente após sua utilização. O objetivo deste estudo foi avaliar a pressão arterial, a função endotelial, o remodelamento cardiovascular e a função diastólica em hipertensos refratários antes e após a utilização de antagonista de aldosterona, espironolactona, em associação ao tratamento anti-hipertensivo otimizado e individualizado em centro de referência em HAR por 6 meses. Após triagem e adesão rigorosa, 71 pacientes encaminhados ao nosso serviço como hipertensos resistentes foram seqüencialmente incluídos no estudo, após avaliação e caracterização como hipertensos resistentes (HAR, n=39) ou hipertensos controlados (HAC, n=32). O grupo controle foi constituído por pacientes normotensos (CONT, n=37). Anti-hipertensivos eram fornecidos integralmente. Ecocardiograma, Teste de vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF), espessura íntima-média de carótidas (IMT), dosagens bioquímicas de concentrações de renina e aldosterona plasmáticas, sódio e potássio séricos e urinários foram realizados na fase inicial (pré-espiro), seguida por associação de espironolactona 25mg/dia ao tratamento anti-hipertensivo por 6 meses (apenas para os grupos HAR e HAC) . Subsequentemente, estes parâmetros foram reavaliados (fase pós-espiro). Após 6 meses de espironolactona, os grupos HAR e HAC apresentaram redução da PA (p

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertrofia ventricular esquerda caracterizada como lesão de órgão alvo aumenta o risco de morbi-mortalidade de 5 a 9 vezes quando presente. A detecção precoce da HVE permite a identificação de pacientes com risco, além de permitir a intervenção de forma precoce, melhorando o planejamento estratégico para o seu manejo. A hipertensão arterial resistente é caracterizada pelo paciente, que mesmo em uso de três medicações em doses otimizadas, sendo um deles diurético, ainda se mantém fora das metas preconizadas. Vários métodos diagnósticos de hipertrofia estão disponíveis para o diagnóstico da HVE, entre eles se destaca o ecocardiograma com elevada sensibilidade, especificidade e acurácia, o eletrocardiograma, com elevada especificidade, porém baixa sensibilidade e acurácia, em contrapartida com excelente reprodutibilidade e baixo custo operacional, e fácil realização, inclusive em locais afastados dos grandes centros, em contraposição ao ecocardiograma. Outro método, não muito usado na prática clínica, o vetorcardiograma, pode atualmente, ser realizado no mesmo equipamento do eletrocardiograma, justificando assim a sua empregabilidade na prática clínica diária. Apresentou em nosso estudo a mesma baixa sensibilidade e acurácia que o eletrocardiograma, compatíveis com estudos publicados recentemente, porém a associação de dois critérios, um eletrocardiográfico e outro vetorcardiográfico melhorou a sensibilidade e acurácia na detecção da hipertrofia ventricular esquerda, sem prejuízo para a especificidade, com valores próximos ao ecocardiograma Abstract: Left ventricular hypertrophy characterized as target-organ damage increases the risk of morbidity and mortality 5-9 times when present. Early detection of LVH allows the identification of patients at risk, and allows intervention at an early stage, improving strategic planning for its management. The resistant hypertension is characterized by the patient, even taking three medications in doses optimized, one being a diuretic, is still outside of the recommended goals. Several diagnostic methods are available to hypertrophy the diagnosis of LVH, including echocardiography stands out with high sensitivity, specificity and accuracy, the electrocardiogram, with high specificity but low sensitivity and accuracy, in contrast with excellent reproducibility and low operating cost, and easy to perform, even in places far from the large centers, in contrast echocardiography. Another method, not widely used in clinical practice, the vectorcardiogram, can now be performed on the same equipment on the electrocardiogram, thereby justifying their employability in daily clinical practice. In our study vectorcardiography presented the same low sensitivity and accuracy than electrocardiography, consistent with recently published studies, but the combination of two criteria, an electrocardiogram and other vetorcardiográfico improved sensitivity and accuracy in detecting left ventricular hypertrophy, without prejudice to the specificity, with values close to echocardiography Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A Hipertensão arterial refratária (HAR) é definida, de acordo com o Seventh Joint National Committe (JNC VII), quando os níveis pressóricos permanecem acima de 140 mm Hg para pressão arterial sistólica e 90 mm Hg para pressão arterial diastólica, mesmo sob uso de três ou mais classes de anti-hipertensivos, incluindo um diurético em dose plena e os demais anti-hipertensivos em doses submáximas a despeito de boa adesão ao tratamento não-farmacológico e farmacológico. A fisiopatologia da hipertensão arterial, inclusive a refratária, é complexa, sendo modulada por diversos fatores interligados: sistema nervoso autônomo, músculo liso vascular (endotélio-óxido nítrico) e rins, além do sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA), entre outros. Desta forma, a fisiopatologia da HA é assumida como poligênica e heterogênea, com contribuição importante do ambiente (multifatorial). Entre as muitas adaptações sofridas pelo organismo para suportar a sobrecarga crônica de pressão encontra-se a hipertrofia ventricular esquerda (HVE) e o remodelamento vascular. Os resultados do Framingham Heart Study demonstraram de forma inequívoca o valor prognóstico da detecção de hipertrofia ventricular esquerda na estratificação de risco para doença cardiovascular, morbidade e mortalidade. A avaliação da espessura íntima - média das paredes anterior e posterior da carótida, utilizando ultra-som de alta resolução, vem sendo usado na detecção precoce de remodelamento vascular e como marcador precoce de aterosclerose. A produção endotelial de NO é a maior contribuinte do relaxamento da musculatura lisa vascular. A inabilidade de liberação de NO ou disfunção endotelial, pode ser avaliada de forma não invasiva, quantificando-se a resposta da artéria braquial ao estímulo mecânico como a resposta à manobra de compressão/descompressão da artéria braquial ou após estímulo farmacológico de substâncias vasodilatadoras, como a nitroglicerina, cuja ação é direta sobre a musculatura lisa vascular. Uma abordagem genética permite investigar a participação dos polimorfismos de base única dos genes (SNP) que codificam os componentes do sistema renina-angiotensina-aldosterona, tais como, o polimorfismo I/D da enzima conversora da angiotensina e a variante M235T do angiotensinogênio e o polimorfismo Glu-Asp do gene para sintase endotelial do óxido nítrico em pacientes com hipertensão arterial refratária. Foram estudados, 220 indivíduos, dos quais 70 eram hipertensos refratários (HAR), 80 responsivos a tratamento farmacológico (HT) e 70 indivíduos controles (CT). Os objetivos do presente estudo foram: 1) caracterizar e analisar comparativamente perfil clínico, demográfico, antropométrico e bioquímico de pacientes com HAR, HT e CT; 2) avaliar a massa do ventrículo esquerdo (HVE), a espessura íntima - média (EIM) das carótidas e quantificar a reatividade vascular, visando identificar alterações morfológicas e funcionais cardiovasculares; 3) analisar marcadores genéticos (SNP) dos genes do AGT, da ECA e da eNOS, visando esclarecer mecanismos básicos de controle da PA, incluindo a identificação de predisposição individual à HAR; 4) avaliar a associação dos polimorfismos da AGT, ECA e eNOS, com as alterações morfológicas e funcionais cardiovasculares. Os principais resultados do presente estudo mostraram: a) semelhante prevalência de indivíduos não caucasianos e caucasianos, aumento do índice de massa corporal, elevação da concentração sérica de aldosterona, da atividade plasmática da renina e da excreção urinária de sódio em pacientes com HAR; b) presença de alterações morfológicas caracterizadas por HVE e aumento da EIM das carótidas (remodelamento cardiovascular) e alterações funcionais qualificadas como alteração da vasodilatação dependente (VMF) e não dependente do endotélio; c) elevada prevalência do genótipo T/T do polimorfismo M235T do gene para angiotensinogênio e do genótipo Glu-Glu para eNOS nos pacientes com HAR, ambos em correlação estatisticamente significante com alterações morfológicas e funcionais cardiovasculares. Os resultados deste trabalho permitem concluir que: HAR tem distribuição étnica equivalente e que apresentam fatores associados como: aumento do IMC e hiperatividade do sistema renina-angiotenisna-aldosterona; fenótipos intermediários caracterizados por remodelamento cardiovascular (HVE e aumento da EIM das carótidas) e alterações funcionais representadas pela disfunção vascular dependente e não-dependente do endotélio, estão envolvidas na expressão fenotípica de pacientes com HAR e HT. O genótipo T/T do polimorfismo do gene para AGT e o Glu-Glu da eNOS têm maior prevalência em pacientes com HAR, contudo somente o genótipo TT do polimorfismo para AGT apresenta correlação com alterações estruturais e funcionais cardiovasculares. Enquanto, os genótipos Glu-Glu e Glu-Asp se correlacionam somente com alterações funcionais Abstract: Refractory hypertension (HAR) is defined, according to the Seventh Joint National Committee (JNC VII), when the systolic arterial pressure remains above 140 mmHg and the diastolic arterial pressure above 90 mmHg even when taking three or more classes of anti-hypertensive agents including full-dose of a diuretic and the other agents at sub maximum doses with good compliance to both non-pharmacological and pharmacological treatments. The pathophysiology of arterial hypertension, including refractory hypertension, is complex; it is modulated by several interlinked factors including the autonomic nervous system, vascular smooth muscles (endothelium-nitric oxide) and kidneys, as well as the renin-angiotensin-aldosterone system (RAAS). Thus the pathophysiology of arterial hypertension is considered polygenic and heterogeneous with significant involvement of the environment (multifactorial). Among the many changes suffered by the organism to cope with the chronic pressure overload are left ventricular hypertrophy (LVH) and vascular remodeling. The results of the Framingham Heart Study unequivocally demonstrated the prognostic value of detecting left ventricular hypertrophy in the stratification of risk for cardiovascular disease, morbidity and mortality. Assessment of the intimae-media measurement of the anterior and posterior walls of the carotid artery utilizing high-resolution ultrasound is being used for the early detection of vascular remodeling and as an early marker of atherosclerosis. The endothelium production of NO is the greatest contributor to vascular smooth muscle relaxation. Inability to release NO or endothelial dysfunction can be non-evasively evaluated by measuring the brachial arterial response to mechanical stimuli such as the response to a compression/decompression maneuver or after pharmacological stimulus using vasodilator agents, including nitroglycerine which acts directly on the vascular smooth muscle. An approach using genetics allows the investigation of the participation of Single Nucleotide Polymorphisms (SNP) which code to components of the renin-angiotensin-aldosterone system which include the I/D polymorphism of the angiotensin-conversion enzyme gene (ACE), the M235T angiotensinogen gene polymorphism (AGT) and the Glu-Asp endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism (eNOS) in patients with refractory hypertension. A total of 220 individuals were studied including 70 patients with refractory hypertension (HAR), 80 responsive to pharmacological treatment (HT) and 70 control subjects (CT). The objectives of this study were: 1) to characterize and comparatively analyze the clinical, demographic, anthropometric and biochemical profile of the HAR, HT and CT individuals; 2) to evaluate the left ventricle mass (LVH), the intimae-media thickness (IMT) of the carotid arteries and measure the vascular reactivity aiming at identifying morphological and cardiovascular functional alterations; 3) analyze the SNP genetic markers of the AGT, ACE and eNOS genes aiming at elucidating the basic control mechanisms of arterial pressure including identifying the individual predisposition to HAR; 4) to evaluate the association of the AGT, ECA and eNOS polymorphisms with the morphological and cardiovascular functional changes. The main results of the current study showed: a) similar prevalence in non-Caucasian and Caucasian individuals, increases in the body mass index, elevations in the serum aldosterone concentrations, the plasma renin activity and of the sodium urine excretion in patients with HAR; b) the presence of morphological changes characterized by LVH, an increase of the IMT of the carotid arteries (cardiovascular remodeling) and functional changes such as endothelial dependent and independent vasodilation; c) a higher prevalence of the TT genotype of the M235T ATG gene polymorphism and of the Glu-Glu genotype of the eNOS gene in patients with HAR. In conclusion HAR has an ethnically equivalent distribution and presents associated factors such as: an increase in the body mass index and hyperactivity of the RAAS; intermediary phenotypes characterized by cardiovascular remodeling (LVH and an increase of the IMT of the carotid arteries) and functional alterations represented by endothelial-dependant and independent vascular dysfunction, are involved in the phenotypic expression. The TT genotype of the AGT gene polymorphism and the Glu-Glu of eNOS gene have a higher prevalence in patients with HAR, however only the TT genotype of the AGT gene polymorphism is associated with both structural and functional cardiovascular alterations. The Glu-Glu and Glu-Asp genotypes have correlations with functional alterations alone Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão é um fator de risco bem estabelecido para doenças cardiovasculares. Embora existam muitas classes de drogas disponíveis, os inibidores da Enzima Conversora de Angiotensina (iECA) são uma das classes mais amplamente utilizadas. O efeito anti-hipertensivo dos iECA envolve a vasodilatação e a melhora da função endotelial através da inibição da ECA, levando a uma diminuição da formação de angiotensina II (ang II) e aumento dos níveis de bradicinina. A diminuição da pressão arterial promovida pelo iECA é explicada, ao menos em parte, pelo aumento da formação de óxido nítrico (NO) proporcionado pela bradicinina e diminuição do estresse oxidativo e vasoconstrição induzidos pela ang II. Apesar de vários estudos com modelos animais e in vitro evidenciarem que o tratamento com iECA promove aumento da biodisponibilidade de NO em nível tecidual, não existe consenso entre os estudos clínicos que buscam associação dos níveis circulantes dos metabólitos estáveis de NO com a resposta anti-hipertensiva a essa classe de drogas. Além disso, evidências crescentes indicam que os efeitos de drogas que aumentam a biodisponibilidade de NO são modulados por polimorfismos no gene da síntase endotelial do óxido nítrico (eNOS) e do receptor tipo 2 de bradicinina (BDKRB2). Assim, os objetivos do nosso estudo foram: 1) Identificar possíveis associações entre o tratamento com enalapril e mudanças em marcadores relevantes relacionados ao estresse oxidativo e a formação de óxido nítrico e 2) investigar se polimorfismos genéticos/haplótipos nos genes da eNOS e do BDKRB2 afetam a resposta anti-hipertensiva ao enalapril. Para atingir nosso primeiro objetivo, dezoito pacientes hipertensos foram tratados com enalapril por 60 dias e dezoito voluntários normotensos foram seguidos pelo mesmo período de tempo. Amostras de sangue venoso foram coletadas antes do início do tratamento e após 30/60 dias de tratamento com enalapril. As concentrações de NOx (nitrito + nitrato) no plasma foram medidas usando reação de Griess. As concentrações de nitrito no plasma e no sangue total foram determinadas por quimioluminescência. Já as concentrações das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e de 8-isoprostano no plasma foram determinadas por método fluorimétrico e ELISA, respectivamente. O tratamento com enalapril diminuiu a pressão arterial nos pacientes hipertensos. No entanto, não encontramos mudanças estatisticamente significativas nas concentrações de NOx plasmático e nitrito medidos no plasma e sangue total nem em marcadores de estresse oxidativo em indivíduos normotensos ou pacientes hipertensos tratados com enalapril. Adicionalmente, para atingirmos o segundo objetivo proposto, nós avaliamos cento e seis pacientes hipertensos tratados com enalapril por 60 dias. A diferença entre a pressão arterial média (PAM) antes e após o tratamento anti-hipertensivo foi definida como ?PAM. Os pacientes foram agrupados como respondedores pobres (RP) ou respondedores bons (RB) quando ?PAM foi menor ou maior que a mediana, respectivamente. O DNA genômico foi extraído a partir do sangue total e amostras foram então genotipadas para os polimorfismos da eNOS através de reação de PCR seguida por eletroforese para o polimorfismo 4b/4a e por PCR em tempo real para os polimorfismos T -786C e G894T. As frequências dos haplótipos da eNOS foram estimadas pelo programa PHASE. Os polimorfismos C-58T e BE1 +9/-9 e os haplótipos do gene BDKRB2 foram determinados por reação de PCR seguida por sequenciamento. Os genótipos TC/CC e o alelo C para o polimorfismo T-786C no gene da eNOS foram mais frequentes entre os RB quando comparado aos RP. Adicionalmente, o genótipo TT para o polimorfismo C-58T no gene do BDKRB2 foi mais frequente em RP quando comparado ao grupo dos RB. Não foram encontradas outras diferenças significativas nos demais genótipos avaliados nem nos haplótipos. Esses achados nos sugerem que o polimorfismo T-786C no gene da eNOS e C-58T no gene do BDKRB2 afetam a resposta anti-hipertensiva ao enalapril Abstract: Hypertension is an established risk factor in cardiovascular diseases. Although there are many available drugs, angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi) are one of the most widely used drug class. The antihypertensive effects of ACEi involve vasodilation and improved endothelial function resulting from ACE inhibition, which lowers angiotensin II formation and increases bradykinin levels. The effect of blood pressure lowering of ACEi are explained, at least in part, by enhanced bradykinin-dependent nitric oxide (NO) formation and decreased angiotensin II-induced oxidative stress and vasoconstriction. Although previous studies in animal models or in vitro showed that ACEi increase NO bioavailability at tissue levels, there aren't consensus regarding clinical studies involving circulating concentrations of NO metabolites in responsiveness to antihypertensive therapy. Moreover, there is growing evidence indicating that the effects of drugs that improve NO bioavailability are modulated by polymorphisms of endothelial nitric oxide syntase (eNOS) and bradykinin type 2 receptor (BDKRB2) gene. Thus, the objectives of this study were: 1) to identify possible associations between the treatment with enalapril and changes in relevant markers of oxidative stress and NO formation and 2) to investigate if polymorphisms (or haplotypes) of eNOS and BDKRB2 genes affect the antihypertensive response to enalapril. To achieve our first goal, untreated hypertensive patients were treated with enalapril for 60 days and eighteen normotensive healthy controls were followed for the same period. Venous blood samples were collected at baseline and after 30/60 days of treatment with enalapril. Plasma NOx (nitrites+nitrates) concentrations were determined by using the Griess reaction. Plasma nitrite and whole blood nitrite concentrations were determined by using an ozone-based chemiluminescence assay. Plasma thiobarbituric acid-reactive species (TBARS) and 8- isoprostane concentrations were determined by a fluorimetric method and by ELISA, respectively. The treatment with enalapril decreased blood pressure in hypertensive patients. However, we didn't find significant changes in plasma NOx, nitrite, whole blood nitrite, and in the levels of markers of oxidative stress in both normotensive controls and hypertensive patients treated with enalapril. Moreover, to achieve our second goal, we evaluated one hundred and six hypertensive patients treated with enalapril for 60 days. The difference between the mean arterial pressure (MAP) before and after the antihypertensive treatment was defined as ?MAP. The patients were classified as poor responders (PR) or good responders (GR) when their ?MAP were below or above the median value, respectively. Genomic DNA was extracted from whole blood, and then the genotypes for eNOS were determined by PCR followed by electrophoresis for 4b/4a polymorphism and by real time PCR for T-786C and G894T polymorphisms. The eNOS haplotype frequencies were determined by the programs PHASE. The C-58T and BE1 +9/-9 polymorphisms of BDKRB2 gene and their haplotypes were determined using PCR amplification, followed by DNA sequencing. The TC/CC genotypes and the C allele for the T-786C polymorphism of eNOS gene were more frequent in GR, compared with PR patients. Furthermore, the TT genotype for the C-58T polymorphism of BDKRB2 gene were more frequent in PR when compared with GR. No other significant differences in genotypes or haplotypes were found. These findings suggest to us that both T-786C polymorphism of eNOS gene and C-58T polymorphism of BDKRB2 gene affect the antihypertensive response to enalapril Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A definição de hipertensão arterial resistente (HAR) inclui pacientes cuja pressão arterial (PA) permanece acima da meta apesar do uso de 3 classes de anti-hipertensivos bem como aqueles que usam 4 ou mais classes e possuem pressão controlada, excluída a pseudo-resistência. A hiperatividade do sistema nervoso simpático está criticamente envolvida na patogênese da hipertensão arterial, correlacionando-se positivamente com a gravidade da hipertensão arterial e maior variabilidade da frequencia cardíaca, estando ainda envolvida no efeito do avental branco (EAB). Ademais, os distúrbios do sono frequentemente associam-se à HAR. Objetivos: Avaliar se a presença do EAB associa-se a maior proporção (adicional) de lesões de órgão alvo em HAR; avaliar se a disfunção do sistema nervoso autônomo, quantificada através da variabilidade da frequência cardíaca, correlaciona-se com diferentes níveis de PA nestes pacientes e verificar se o risco para apneia obstrutiva do sono e qualidade do mesmo está associado ao EAB. Casuística e Métodos: subestudo 1 - Foram incluídos 121 pacientes diagnosticados como hipertensos resistentes em seguimento no ambulatório de Hipertensão Resistente do HC-FCM/UNICAMP e divididos em 2 grupos: HAR+EAB (n=66) e HAR-EAB (n=61). Foram realizados estudos para investigação do remodelamento cardiovascular (Ecocardiografia), da função renal (microalbuminúria e Clearance de creatinina); subestudo 2 - foram incluídos 44 pacientes diagnosticados como hipertensos resistentes em seguimento no ambulatório de Hipertensão Resistente do HC-FCM/UNICAMP e divididos em 2 grupos: HAR+EAB (n=25) e HAR-EAB (n=19). Foram realizados estudos para investigação da avaliação da variabilidade da frequência cardíaca (sistema não invasivo - Holter 24 horas), bem como responderam ao Questionário índice de qualidade do sono de Pittsburgh e Questionário de Berlim (avaliação do risco para apneia obstrutiva do sono). Resultados: subestudo 1- os dois subgrupos eram semelhantes em distribuição de gênero, idade e índice de massa corporal. Os valores de PA observados foram: consultório= 169,8±15,8/95,1±14,0 (HAR+EAB) e 161,9±9,0/90,1±10,4 mmHg (HAR-EAB) e MAPA= 143,0±12,8/86,1±9,9 (HAR+EAB) e 146,1±13,6/85,1±14,9 mmHg (HAR-EAB). Não houve diferença significativa entre os 2 subgrupos quanto ao IMVE (HAR+EAB= 132±38; HAR-EAB= 125±32 g/m²), clearance de creatinina (HAR+EAB= 78±38; HAR-EAB= 80±28 ml/min/m²) e microalbuminúria (HAR+EAB= 44±68; HAR-EAB= 49±53 mg/g Cr); subestudo 2 - os dois subgrupos eram semelhantes em distribuição de gênero, idade e índice de massa corporal. A despeito da alta prevalência de risco para apneia obstrutiva do sono e qualidade de sono ruim ter sido observada em ambos os subgrupos, o subgrupo HAR+EAB apresentou atividade simpática aumentada durante o período noturno (HAR+EAB=58,9±20,9 e HAR-EAB=39,8±22,9, p

Orientador: Heitor Moreno Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Introdução: Hipertensão Refratária se caracteriza por quadro de hipertensão concomitante ao uso de 3 classes diferentes de anti-hipertensivos, sendo, pelo menos um destes, diurético. Existem fatores genéticos que influenciam mecanismos de controle da pressão arterial, podendo ter papel importante na hipertensão refratária. O sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona desempenha um papel central na gênese da hipertensão. Isto torna interessante o estudo das influências genéticas sobre sistemas envolvidos com a produção e transporte da aldosterona. Este trabalho apresenta o estudo de um polimorfismo na região promotora do gene CYP11b2 (troca de timina por citosina na posição -344 do gene), que codifica a aldosterona sintase, enzima responsável pelo último passo na síntese de aldosterona pelas glândulas supra-renais. Secundariamente, o trabalho apresenta o estudo de um polimorfismo no exon 26 do gene da p-glicoproteína (troca de citosina por timina na posição 3435 do gene). Esta proteína está envolvida com resistência a diversos medicamentos na terapêutica (o gene é chamado Muliple Drug Resistance-1, MDR-1), e recentemente foi associada a alterações na excreção e captação tecidual de aldosterona. Objetivos: O estudo visa determinar se existe associação entre o alelo T do polimorfismo -344C/T no gene CYP11b2 e a resistência ao tratamento anti-hipertensivo. Secundariamente, é avaliada, de maneira preliminar, a participação do alelo C do gene MDR-1 no fenótipo de hipertensão refratária. Materiais e Métodos: Foram avaliados 340 indivíduos, dos quais 88 eram portadores de HAR que preencheram os requisitos de inclusão no estudo, 142 indivíduos eram hipertensos moderados e responsivos a tratamento farmacológico (HT). Os demais indivíduos (n = 110) constituíram o grupo controle. Foram coletadas amostras de sangue para exames laboratoriais (dentre eles, quantificação de aldosterona, cortisol, renina) e extração de DNA. Foi medida a espessura da íntima média de carótida (EIM) dos pacientes através de ultra-som. Foi estimada a Velocidade de Onda de Pulso carótida-femural (VOP) dos pacientes. O DNA foi extraído pelo método de Salting Out. O polimorfismo do gene CYP11b2 foi genotipado por PCR(Polymerase Chain Reaction) seguido por digestão enzimática com a enzima Hae-III. O polimorfismo do gene MDR-1 foigenotipado através de PCR alelo específico. Resultados: Foi encontrada associação do alelo T do gene CYP11b2 com Hipertensão (p

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O íon nitrito é um produto da oxidação do óxido nítrico (NO), o qual é oxidado a nitrato. Além disso, nitrito e nitrato podem ser provenientes de fontes exógenas da dieta. Estes íons são fisiologicamente reciclados no sangue e tecidos para retornar a NO e outros óxidos de nitrogênio bioativo. A ingestão de nitrato exerce efeito anti-hipertensivo, porém de maneira dependente de sua conversão a nitrito por bactérias orais. Nitrito por sua vez possui efeito vasorelaxante, atenua a contração vascular por agente contrátil e exerce efeito anti-hipertensivo. O mecanismo proposto é que a dieta de nitrato restaura os níveis de óxidos de nitrogênio teciduais e reduz os níveis de marcadores de estresse oxidativo, sendo reduzido a NO, como um exemplo pela enzima xantina oxidoredutase (XOR) e regulando negativamente a NADPH oxidase vascular. Apesar dos efeitos farmacológicos serem atribuídos ao nitrito, estes íons estão juntamente presentes nos tecidos. Até este trabalho não fora mostrado se a presença de nitrato influenciaria os efeitos vasculares e anti-hipertensivos exercidos pelo nitrito. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do nitrato de sódio na queda da pressão arterial e efeito vasorelaxante exercidos pelo nitrito de sódio, bem como avaliar possíveis mecanismos de interação. Os resultados encontrados mostram que a presença de nitrato atenua os efeitos cardiovasculares exercidos pelo nitrito. A infusão endovenosa de nitrato de sódio 40 µmol/Kg atenuou a queda de pressão arterial exercida por doses crescentes de nitrito de sódio no modelo agudo de hipertensão pelo análogo da L-arginina, L-NAME. Paralelamente, verificamos em artéria aorta e em leito mesentérico, que a pré-incubação com nitrato de sódio 300 µM reduziu o relaxamento exercido por doses cumulativas de nitrito. Em ensaios in vitro com enzima isolada, o nitrato de sódio reduziu a taxa de formação de NO a partir de nitrito pela da enzima xantina oxidoredutase (XOR), evidenciando que o nitrato poderia atenuar os efeitos cardiovasculares do nitrito por inibir sua reação a NO através da XOR. O efeito do nitrato sobre a ação cardiovascular do nitrito foi avaliado no modelo de hipertensão prolongada que aumenta a atividade da XOR, 2 rins - 1 clip (2R1C). Novamente nitrato atenuou o relaxamento vascular e a queda de pressão arterial exercida pelo nitrito. Contudo, diferentemente do inibidor específico da XOR, nitrato também atenuou a resposta vascular ao nitrito em aorta de ratos normotensos, sugerindo que nitrato pode atuar por mecanismos adicionais à inibição da XOR. Portanto, este trabalho mostra pela primeira vez que nitrato atenua o relaxamento vascular e a queda na pressão arterial exercidos pelo nitrito. O mecanismo proposto é que seja devido, pelo menos em parte, à inibição da atividade nitrito redutase da XOR pelo nitrato, como mostramos novamente pela primeira vez. Contudo os resultados apontam para existência de outros mecanismos adicionais a inibição da XOR, pelos quais nitrato atenua os efeitos cardiovasculares exercidos pelo nitrito Abstract: The nitrite ion is a product of oxidation of nitric oxide (NO), which in turn, is oxided to nitrate. Moreover, nitrate and nitrite can come from dietary sources. These ions are recycled physiologically in blood and tissue to return to NO and other bioactive oxides of nitrogen. The nitrate intake exerts antihypertensive effect, however this is dependent on conversion of nitrate to nitrite by oral bacteria. Nitrite, in turn, has vasorelaxant effect, attenuates the vascular contraction by contractile agents and exert anti-hypertensive effect. The mechanism proposed is that the nitrate intake restores the levels of tissue nitrogen oxides and reduces the levels of oxidative stress markers. Nitrite is reduced to NO, as an example by enzyme xanthine oxidoreductase, and it downregulates the vascular NADPH oxidase. Although the pharmacological effects are attributed to nitrite, these two ions are together in the tissue. Until this work, it had not been shown if the presence of nitrate would influence the vascular and antihypertensive effects exerted by nitrite. However, the purpose of this work was to evaluate the sodium nitrate effect in the fall in arterial pressure and in the vasorelaxant effect exerted by sodium nitrite, and to evaluate possible mechanism of interaction The results found show that the presence of nitrate attenuates the cardiovascular effects exerted by nitrite. The endovenous infusion of sodium nitrate 40 µmol/Kg attenuated the fall in the arterial pressure exerted by increased doses of sodium nitrite in acute model of hypertension by analogue of L-arginine, L-NAME. At the same time, we saw in aortic artery and in the mesenteric bed, that the previous incubation with sodium nitrate 300 µM decreased the relaxation exerted by cumulative concentrations of sodium nitrite. In vitro assay using isolated enzyme showed that sodium nitrate decreased the rate of NO formation from nitrite by enzyme xanthine oxidoreductase (XOR), providing evidence that nitrate could attenuate the cardiovascular effects of nitrite by inhibition of the reaction to NO performed by XOR. The nitrate effect on the cardiovascular action of nitrite was evaluated in prolonged hypertension model that shows increased XOR activity, the 2 kidney - 1 clip (2K1C) model. Again, nitrate attenuated the vascular relaxant effect and the fall in the arterial pressure exerted by nitrite. However, differently from the specific inhibitor of the XOR, nitrate also attenuated the vascular response to nitrite in the aorta from normotensive rats. This suggests that nitrate can act by additional mechanism to XOR inhibition. Therefore, this work shows for the first time that nitrate attenuates the vascular relaxation and the fall in the arterial pressure exerted by nitrite. The proposed mechanism is that , at least in part, the inhibition of nitrite reductase activity of the XOR by nitrate, as we showed, for the first time again. However, the results point to the existence of additional mechanism combined with XOR inhibition, by which nitrate attenuates the cardiovascular effects exerted by nitrite Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia CAPES 01-P-3371/2017

Orientadores: Rodrigo Gimenez Pissutti Modolo, Ana Paula Cabral de Faria Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão arterial sistêmica (HAS), caracterizada por níveis elevados da pressão arterial (PA), é uma condição clínica multifatorial. Especificamente nos indivíduos com hipertensão arterial resistente (HAR), a presença de fatores de risco é frequente, sendo comum a ocorrência de comorbidades como a obesidade e o diabetes mellitus do tipo 2 (DM2). Entre os mecanismos interconectados estão a hiperativação do sistema nervoso simpático (SNS) e do sistema renina angiotensina aldosterona (SRAA), a resistência insulínica e o desequilíbrio dos níveis de citocinas inflamatórias produzidas pelo tecido adiposo. Na população HAR, a proporção de eventos cardiovasculares aumentada e, consequentemente, a diminuição da sobrevida são maiores em comparação às encontradas nos outros subgrupos de hipertensos, ressaltando o caráter de alto risco destes pacientes. Embora exista uma série de estratégias para prevenção, tratamento e controle da HAR, do DM2 e da obesidade, alcançar uma terapia eficaz é difícil, principalmente quando essas doenças coexistem. Uma nova classe de antidiabéticos, os inibidores dos co-transportadores de sódio e glicose tipo 2 (iSGLT2), têm demonstrado resultados promissores na redução do peso corporal (PC) e da PA além do controle glicêmico, podendo ser útil no tratamento conjunto destas três condições. Visto que os efeitos dos iSGLT2 ainda não foram estudados na população com HAR, este trabalho teve como objetivos avaliar se em indivíduos com sobrepeso ou obesidade, DM2 e HAR a intervenção por 12 semanas com o iSGLT2 dapagliflozina em comparação à glibenclamida altera (1) a massa gorda, (2) outros parâmetros de adiposidade corporal e os níveis de adiponectina. Nós conduzimos um estudo do tipo cruzado, simples cego para o avaliador, randomizado e controlado por terapia padrão no qual avaliamos medidas antropométricas e de bioimpedância, níveis de PA no consultório e ambulatorial, e testes bioquímicos para obter os parâmetros antes e após as intervenções. O tratamento com dapagliflozina reduziu os parâmetros PC [-1,1±3,1 versus 1,2±2,4 Kg (p=0,002)], índice de massa corporal (IMC) [-0,8±1,8 vs. 1,1±2,2 Kg/m² (p=0,03)], taxa metabólica basal (TMB) [-63±137 vs. 46,7±90,6 cal/dia (p=0,04)] e circunferência do quadril (CQ) [-2,3±3,8 vs. 0,7±2,3 cm (p=0,01)] versus glibenclamida, respectivamente. Comparando com seus valores basais, a adiponectina reduziu tanto com o tratamento com dapagliflozina [5,8±4,8 vs. 4,5±4,8 ug/mL (p=0,01)] quanto com glibenclamida [5,1±4,6 vs. 4,0±4,2 ug/mL (p=0,02)]. O iSGLT2 promoveu glicosúria em comparação aos seus valores basais e ao tratamento com glibenclamida. A intervenção com glibenclamida diminuiu a hemoglobina glicada (HbA1c) em relação aos valores basais. Não foram encontradas diferenças nos parâmetros pressóricos para ambas as intervenções. Estes resultados nos sugerem que a intervenção por 12 semanas com dapagliflozina altera favoravelmente o perfil de adiposidade corporal em comparação ao tratamento convencional com glibenclamida nesse grupo de pacientes de alto risco cardiovascular Abstract: Hypertension (HTN) characterized by elevated blood pressure (BP) levels is a multifactorial clinical condition. Subjects with resistant hypertension (RH) present comorbidities like obesity and type 2 diabetes mellitus (T2DM), and the interconnected mechanisms such as hyperactivation of the sympathetic nervous system (SNS) and the renin angiotensin aldosterone system (RAAS), insulin resistance and imbalance of inflammatory cytokines produced by adipose tissue are described to explain those conditions. In RH population, the rate of cardiovascular events is increased, and then the survival rate is diminished when compared to other hypertensive subgroups, emphasizing the high risk these patients are submitted. Although a set of strategies for preventing, treating and controlling RH, T2DM, and obesity, effective therapy is difficult, especially when these diseases coexist. A new class of antidiabetics, the sodium glucose co-transporters type 2 inhibitors (SGLT2i), has shown promising results in reducing body weight (BW) and BP in addition to glycemic control, and then may be useful in order to treat these three conditions. Since the effects of iSGLT2 have not yet been studied in RH population the aim of this study was to evaluate whether 12-week therapy with SGLT2i dapagliflozin compared to glibenclamide changes (1) fat mass, (2) other body adiposity parameters and the levels of adiponectin in overweight or obese individuals, with T2DM and RH. We conducted a crossover study, single-blind to the evaluator, randomized and controlled by standard therapy in which anthropometric and bioimpedance measures, ambulatory and office BP levels, and biochemical tests to obtain parameters before and after interventions were evaluated. Treatment with dapagliflozin reduced BW [-1.1±3.1 versus 1.2±2.4 Kg (p=0.002)], body mass index (BMI) [-0.8±1.8 vs. 1.1±2.2 Kg/m² (p=0.03)], basal metabolic rate (BMR) [-63±137 vs. 46.7±90.6 cal/day (p=0.04)] and hip circumference (HC) [-2.3±3.8 vs. 0.7±2.3 cm (p=0.01)] versus glibenclamide, respectively. Compared with baseline values, adiponectin reduced both with dapagliflozin treatment [5.8±4.8 vs. 4.5± 4.8 ?g/mL (p=0.01)] and with glibenclamide [5.1±4.6 vs. 4.0±4.2 ug/mL (p=0.02)]. SGLT2i promoted glycosuria compared to baseline values and treatment with glibenclamide. Glibenclamide decreased glycated hemoglobin (HbA1c) from baseline. No differences in BP parameters were found in the both interventions. In conclusion 12-week intervention with dapagliflozin favorably alters body adiposity compared to glibenclamide in the high-risk group of RH patients who are diabetic and obese Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia CAPES 01-P-1748/2016, 01-P-3371/2017 FAPESP 2016/00483-0

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A formação de óxido nítrico (NO) derivado de nitrito exerce efeitos anti-hipertensivos em modelos clínicos e experimentais de hipertensão. Estudos recentes demonstraram que o nitrito em dose sem efeito anti-hipertensivo (1mg / kg) possui propriedades antioxidantes em modelos animais, diminuindo a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) nos tecidos e aumentando a biodisponibilidade do NO. Assim, moléculas que exercem efeitos vasodilatadores e / ou anti-hipertensivos e que têm seu efeito prejudicado pelo estresse oxidativo na hipertensão podem apresentar melhora com o tratamento crônico com essa droga. Além desse efeito no organismo, o nitrito pode de alguma forma inibir enzimas cuja atividade é aumentada na doença. Levando isso em consideração, nosso grupo decidiu examinar se o tratamento crônico de nitrito em uma dose sem efeito anti-hipertensivo poderia melhorar as respostas do enalapril, também em uma dose baixa, diminuindo o estresse oxidativo e inibindo a enzima conversora da angiotensina (ECA). Para tanto, tratamos cronicamente ratos de dois rins e um clipe (2R1C) por uma semana com enalapril e nitrito, combinados ou não, em baixas doses e examinamos os níveis de estresse oxidativo, atividade da ECA no plasma e aorta, fluorescência do DAF II e curva dose-resposta da bradicinina (BK) na pressão arterial invasiva. Consistente com estudos anteriores do nosso grupo, o tratamento com nitrito não afetou a atividade circulante da ECA, no entanto, este é o primeiro estudo a mostrar evidências consistentes de que o tratamento com nitrito de sódio em uma dose não anti-hipertensiva tem um efeito aditivo com enalapril e melhorar respostas de enalapril na pressão arterial inibindo a ECA e diminuindo os níveis de estresse oxidativo em ratos 2R1C Abstract: Nitrite-derived nitric oxide (NO) formation exerts antihypertensive effects in clinical and experimental models of hypertension. Recent studies have shown that nitrite in a dose without antihypertensive effect (1mg/kg) has antioxidant properties in animal models, by decreasing reactive oxygen species (ROS) production in the tissues and increasing the bioavailability of NO. Thus, molecules that exert vasodilator and/or antihypertensive effects and that have their effect impaired by oxidative stress in hypertension may have an improvement with chronic treatment with this drug. Besides this effect in the organism, nitrite can somehow inhibit enzymes which may show increased activity in disease conditions. Taking this into consideration, our group decided to examine whether chronic treatment of nitrite in a dose without antihypertensive effect could improve the responses to enalapril, also in a low dose, by blunting oxidative stress and by inhibiting angiotensin converting enzyme (ACE). For that, we treated two-kidney-one-clip (2K1C) rats for one week with enalapril and nitrite, combined or not, at low doses and examined oxidative stress levels, ACE activity in plasma and aorta, DAF II fluorescence and the blood pressure responses to increasing doses of bradykinin (BK) in invasive blood pressure. Consistent with previous studies from our group, nitrite treatment did not affect circulating ACE activity. However, this is the first study to show consistent evidence that sodium nitrite treatment at a non-antihypertensive dose has an additive effect to those found enalapril. Nitrite improved the blood pressure responses to BK and to enalapril by inhibiting ACE and decreasing oxidative stress levels in 2K1C rats Mestrado Farmacologia Mestra em Farmacologia CAPES 1636797

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Vanessa Fontana Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: A falta de controle da pressão arterial (PA) (? 140/90 mmHg) - mesmo com o uso de três ou mais anti-hipertensivos de diferentes classes - define o grupo de hipertensos resistentes (HAR), um grupo com alto risco cardiovascular (CV) e alta incidência de lesões de órgãos-alvo (LOA). Estudos sugerem o envolvimento da metaloproteinase 2 (MMP-2) na hipertensão e no remodelamento CV associado a LOA. A hipertensão é uma condição multifatorial na qual fatores genéticos podem ter uma grande contribuição para o desenvolvimento da doença. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) da MMP-2 foram associados a alterações cardiovasculares, contudo poucos estudos avaliaram o impacto dos polimorfismos da MMP-2 em condições clínicas e sua influência na HAR. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de MMP-2 e de seu inibidor TIMP-2 (tissue inhibitor of metalloproteinase-2) nos grupos de pacientes hipertensos leve-moderados (LM) e pacientes hipertensos resistentes (HAR), assim como analisar a associação das MMP-2 e TIMP-2 com lesões de órgão alvo como rigidez arterial e hipertrofia cardíaca. Também avaliamos a frequência dos SNPs da MMP-2 (-1575G/A, rs243866; -1306C/T, rs243865; e -735C/T, rs2285053) nesses grupos e analisamos a associação destes três polimorfismos no grupo com HAR. Por fim, identificamos quais polimorfismos da MMP-2 podem estar relacionados à rigidez arterial e à hipertrofia cardíaca na população com HAR. Métodos: Cento e dezenove pacientes HAR e cento e trinta e seis hipertensos LM foram incluídos e submetidos a análises clínicas e laboratoriais. Os genótipos foram determinados por meio do teste de discriminação alélica utilizando técnica de real time polymerase chain reaction (RT-PCR). Características clínicas e laboratoriais foram comparadas de acordo com os genótipos / haplótipos dos SNPs (rs243865, rs243866 e rs2285053). As lesões de ógão-alvo cardíaca e vascular foram categorizadas respectivamente pelo Índice de Massa Ventricular Esquerda (IMVE) (mulheres>95g/m2 e os homens>115g/m2) e rigidez arterial (VOP>10m/s). Resultados: Não foram observadas diferenças estatísticas nos níveis de MMP-2 entre os grupos NT, LM e HAR. Por outro lado, níveis aumentados de TIMP-2 foram detectados no grupo HAR quando comparados com os grupos LM e NT (90,0 (76,1-107,3) vs. 70,1 (57,7-88,3) vs. 54,7 (40,9-58,1) ng/ml, p 95 g / m2 and men> 115g / m2) and arterial stiffness (PWV> 10 m/s). Results: MMP-2 levels showed no differences among NT, HT and RH groups, while TIMP-2 levels were higher in RH compared to HT and NT (90.0 (76.1-107.3) vs. 70.1 (57.7-88.3) vs.54.7 (40.9-58.1) ng/mL, p

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Vanessa Fontana Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão arterial resistente (HAR) é definida pela presença de pressão arterial (PA) acima da meta pressórica com o uso de três classes de anti-hipertensivos, ou ainda os pacientes que atingem controle da PA utilizando quatro ou mais fármacos. A morbidade e mortalidade associadas à hipertensão são atribuídas às lesões de órgãos-alvo, sendo que a hipertrofia ventricular esquerda (HVE) e rigidez arterial são fatores de risco independentes para os desfechos cardiovasculares. A participação das metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), dentre elas, a MMP-9, no remodelamento que leva à HVE e à rigidez arterial são bem descritas em modelos animais, porém na hipertensão resistente não há estudos na literatura. Os polimorfismos do gene da MMP-9, -1562C>T (rs3918242) e um segundo, chamado de R279Q (rs17576) estão associados ao aumento nos níveis de MMP-9 e eventos cardiovasculares. Também, foi demonstrada a influência do polimorfismo R279Q sobre a rigidez arterial em indivíduos saudáveis. Por fim, o SNP não sinônimo Q668R (rs17577) foi associado com doença coronariana em pacientes hipertensos tratados com Anlodipino. Até o momento, nenhum polimorfismo no gene da MMP-9 foi avaliado na HAR. Portanto o presente trabalho teve como objetivos: (1) Determinar os níveis circulantes de MMP-9, do inibidor TIMP-1 e da razão MMP-9/TIMP-1 (atividade global da MMP-9) nos grupos de hipertensos resistentes (HAR) (n=124) e não resistentes (HAS) (n=136); (2) Avaliar a associação entre os níveis da MMP-9 e TIMP-1 com o grau de rigidez arterial e HVE nos grupos de hipertensos; (3) Avaliar as frequências dos alelos, genótipos e haplótipos para os polimorfismos da MMP-9 (rs3918242, rs17576 e rs17577) nos HAS e HAR e (4) Avaliar a relação dos polimorfismos com as concentrações de MMP-9 e com HVE e rigidez arterial. Os níveis plasmáticos de MMP-9 e TIMP-1 foram avaliados por ELISA. O grupo de HAR apresentou menor concentração de MMP-9, menor razão MMP-9/TIMP-1 e maiores valores de TIMP-1 comparados aos HAS. Em seguida, avaliamos a associação desses biomarcadores com a rigidez arterial, avaliada através de velocidade de onda de pulso (VOP), e com a HVE, avaliada através do índice de massa do ventrículo esquerdo (IMVE) por ecocardiograma. A MMP-9 e a relação MMP-9/TIMP-1 foram positivamente correlacionadas com o diâmetro diastólico do ventrículo esquerdo (DDVE) no grupo HAR. Já no grupo HAS, as mesmas correlações foram negativas. O TIMP-1 foi negativamente correlacionado com IMVE no grupo HAR e positivamente associado à IMVE no grupo HAS. Não foi encontrada correlação entre IMVE e MMP-9, nem correlações entre VOP com MMP-9 e TIMP-1 em ambos os grupos. Por fim, determinaram-se as frequências genotípicas dos polimorfismos -1562C>T por PCR seguida de eletroforese, e dos polimorfismos R279Q e Q668R, por PCR em tempo real utilizando sondas Taqman. As frequências haplotípicas foram estimadas pelo programa PHASE. Não houve diferenças nas frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas entre os grupos. Nós avaliamos ainda a associação dos diferentes genótipos com as concentrações de MMP-9, rigidez arterial e prevalência de HVE, mas nenhuma associação foi encontrada. Nossos resultados sugerem que o equilíbrio entre MMP-9 e TIMP-1 varia de acordo com a gravidade da hipertensão e estão associados com HVE. Além disso, nossos dados demonstraram que os 3 polimorfismos genéticos da MMP-9 não estão associados com o fenótipo de HAR e não afetam os níveis plasmáticos de MMP-9 nos pacientes hipertensos estudados Abstract: Resistant hypertension (RHTN) is defined as BP that remains above goals despite of the concurrent use of 3 antihypertensive agents of different classes at optimal dose amounts. Also, patients whose BP are controlled but require 4 or more medications are considered resistant. Left ventricular hypertrophy (LVH) and arterial stiffness are important predictors of mortality and morbidity and it is related to major cardiovascular events. Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of zinc dependent enzymes. MMP-9 participates in cardiovascular remodeling that contributes to LVH and arterial stiffness. These relationships are well described in animal models of hypertension, however in RHTN remains unclear. Genetics polymorphisms in MMP-9 gene including -1562C>T (rs3918242) and R279Q (rs17576) were associated with MMP-9 levels and cardiovascular events. The relationship between R279Q and arterial stiffness was also described in healthy volunteers. Finally, non-synonymous SNP Q668R (rs17577) was related to coronary disease in hypertensive patients treated with Amodipine. To date, no MMP-9 polymorphisms were evaluated in RHTN. Therefore, this study aimed: (1) To evaluate the levels of MMP-9, TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 ratio in RHTN subjects (n=124) and non-RHTN (HTN) (n=136) (2) To evaluate the relationship between MMP-9 and TIMP-1 with arterial stiffness and LVH in both groups (3) To evaluate the frequencies of MMP-9 polymorphisms (rs3918242, rs17576 e rs17577) in HTN vs. RHTN (4) To evaluate the relationship of genetic polymorphisms with MMP-9 levels, LVH and arterial stiffness. Plasma levels of MMP-9 and TIMP-1 were measured by ELISA. RHTN subjects presented decreased levels of MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 ratio and higher TIMP-1 compared to HTN. We evaluated the association of these biomarkers with arterial stiffness, measured by pulse wave velocity (PWV), and with LVH, defined by left ventricular mass index (LVMI) (by echocardiogram). MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 ratio were positively correlated with LV diastolic diameter (LVDD) in RHTN group. On the other hand, these biomarkers were inversely related to LVDD in HTN group. TIMP-1 was negatively related to LVMI in RHTN subjects, while positive association was found in HTN group. No relationship was found between LVMI and MMP-9, neither between PWV and MMP-9 nor TIMP-1 in both groups. We assessed genotypic frequency of -1562C>T using PCR followed by electrophoresis. R279Q and Q668R polymorphisms were determined using Real Time PCR with Taqman probes. Haplotype frequencies were estimated by PHASE software. There were no significant differences in the genotypes, alleles or haplotypes distributions between the RHTN patients and HTN. Moreover, no differences were found in MMP-9 levels, PWV or LVMI according to MMP-9 genotypes. Our data suggest that MMP/TIMP balance varies according to the severity of hypertension and are associated with resistant hypertension and left ventricular hypertrophy. In addition, genetic polymorphisms in MMP-9 are not associated to RHTN phenotype and do not affect MMP-9 levels in the studied hypertensive patients Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2012/23410-7

Orientadores: Heitor Moreno Júnior, Rodrigo Gimenez Pissutti Modolo Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: A avaliação da adesão farmacológica é um desafio na prática clínica, e obrigatório para o diagnóstico preciso de hipertensão resistente (HAR). Embora já seja bem estabelecido que a adesão ao tratamento seja crítico para o controle da pressão arterial (PA), há ainda dificuldades de aplicação de um método simples, com baixo custo e viável no contexto clínico. Nosso objetivo foi testar um método simples para avaliar a adesão de pacientes HAR. Desenho de estudo e métodos: Foi realizado um estudo piloto que demonstrou um aumento progressivo de fluorescência na urina, atingindo um pico a cerca de 6 horas, após a administração de triantereno (p

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Vanessa Fontana Leite Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: A Hipertensão arterial resistente (HAR) é uma doença multifatorial e poligênica, frequentemente associada à obesidade, e definida como níveis pressóricos acima das metas recomendadas, embora o uso de 3 ou mais fármacos anti-hipertensivos de diferentes classes em doses otimizadas e incluindo, se possível, um diurético. Estudos prévios demonstraram que níveis reduzidos de adiponectina, um hormônio produzido pelo tecido adiposo, foram associados à resistência ao tratamento anti-hipertensivo. Além disso, os polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) rs266729 e rs1501299 no gene da adiponectina ADIPOQ foram relacionados a risco de doenças cardiovasculares. O presente estudo avaliou a associação entre os dois SNPs mais estudados (-11377C/G e +276G/T) e os níveis de adiponectina nos pacientes resistentes. Desenho de estudo e Métodos: Este estudo do tipo transversal incluiu 109 pacientes com HAR genotipados para ambos os polimorfismos genéticos pelo método de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com sondas fluorescentes. As características clínicas e bioquímicas foram comparadas entre os sujeitos homozigotos CC (n=56) vs. portadores do alelo G (n=53) para o SNP -11377C/G e homozigotos GG (n=49) vs. portadores do alelo T (n=60) para o SNP +276G/T. Os níveis plasmáticos de adiponectina foram determinados por ELISA. Resultados: Os níveis de PA de consultório e da MAPA, assim como os marcadores de lesão em órgãos-alvo, foram semelhantes nos subgrupos genotípicos estudados. Os níveis de adiponectina foram significativamente maiores em CC comparados aos portadores do alelo G (CC = 7,0 (4,0-10,2) vs. alelo G = 5,5 (2,5-7,9), p = 0,04) e reduzidos em GG quando comparados aos portadores do alelo T (GG = 5,3 (2,3-7,7) vs. alelo T = 7,1 (3,6-10,5), p = 0,04). As análises de regressão linear múltipla revelaram que os alelos menos frequentes G (coeficiente beta = -0,16, SE = 0,07, p = 0,02) e T (coeficiente beta = 0,12, SE = 0,06, p = 0,04), ajustados para as variáveis MAPA sistólica, índice de massa corporal, idade, gênero, raça e presença de diabetes tipo 2, foram preditores independentes dos níveis de adiponectina. Conclusão: Os SNPs -1377C/G e +276G/T no gene ADIPOQ foram associados aos níveis de adiponectina em hipertensos resistentes Abstract: Background: Resistant hypertension (RHTN) is a multifactorial and polygenic disease, frequently associated with obesity, and defined as high blood pressure (BP) maintained in spite of concurrent use of three or more antihypertensive drugs of different classes, combined at optimal doses and including a diuretic. Previous studies demonstrated that low plasma adiponectin levels, a hormone produced by the adipose tissue, were associated with RHTN. Indeed, single-nucleotide polymorphisms (SNPs) rs266729 and rs1501299 in adiponectin coding gene ADIPOQ were associated with hypertension and risk of cardiovascular disease. This study evaluated the association between two of the most widely studied SNPs (-11377C/G and +276G/T) and adiponectin plasma levels in RHTN subjects. Design and Methods: This study comprised 109 RH patients genotyped for both polymorphisms by Real-time Polymerase Chain Reaction (PCR) method using fluorescent probes. We conducted a cross-sectional design comparing clinical and laboratorial characteristics of CC homozygous (n=56) vs. G allele carriers (n=53) for -11377C/G and GG homozygous (n=49) vs. T allele carriers (n=60) for +276G/T. Adiponectin levels were measured by enzyme-linked immunoassay. Results: Office and ambulatory BP measurements were similar among genotypes subgroups in both SNPs as well as the markers of target organ damage. Adiponectin levels were significantly higher in CC compared to G-carrier for -11377C/G (CC = 7.0 (4.0-10.2) vs. G allele = 5.5 (2.5-7.9), p=0.04) and lower in GG compared to T-carrier for +276G/T (GG = 5.3 (2.3-7.7) vs. T allele = 7.1 (3.6-10.5), p=0.04). Adjusting for systolic ambulatory BP, body mass index, age, gender, race and presence of type 2 diabetes, multiple linear regression revealed that the minor alleles G (beta coefficient = -0.16, SE = 0.07, p = 0.02) and T (beta coefficient = 0.12, SE = 0.06, p = 0.04) were independent predictors of adiponectin levels. Conclusion: The -1377C/G and +276G/T polymorphisms in ADIPOQ were associated with adiponectin levels in RH subjects Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Gabriel Forato Anhê Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A obesidade é caracterizada pela deposição ectópica de gordura no fígado. Este acúmulo de gordura hepática (NAFLD) pode gerar consequências graves, como a hepatite não alcoólica (NASH), fator de ricos para carcino hepatocelular (HCC). A morte de hepatócitos, evento chave na evolução da NAFLD para NASH, é causada pelo excesso de nutrientes e é dependente do estresse de retículo endoplasmático (RE). O estresse no RE resulta no acúmulo de proteínas não processadas desencadeia a "unfolded protein response" (UPR), podendo gerar apoptose. A mTOR é formada basicamente por dois complexos: mTOR1 e mTOR2; ambos são sensíveis a nutrientes, a insulina e a rapamicina. O complexo mTOR2/Rictor catalisa a fosforilação da AKT, aumentando a sinalização da insulina. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre ativação da mTOR, do estresse de RE e da apoptose em hepatócito expostos a ácidos graxos livres. Observamos que a apoptose causada pelo palmitato ativa o estresse de RE de maneira tempo dependente. Não observamos alterações na fosforilação de proteínas alvo específicas para o complexo mTOR1. No entanto, a fosforilação geral da mTOR foi estimulada pelo palmitato. Altas doses de rapamicina inibiram a apoptose e do estresse de RE causado pelo palmitato, sugerindo a participação do complexo mTOR2. Estes resultados ainda foram confirmados pelo silenciamento gênico da Rictor. A fosforilação em serina 473 da AKT apresenta um caráter transitório, elevando-se em tempos que precedem morte e o estresse de RE, e diminuindo em tempos prolongados concomitantemente à apoptose. A inibição da AKT pelo "AKT inhibitor" gerou diminuição da apoptose, do estresse de RE e da incorporação lipídica na linhagem de hepatoma. Estes dados sugerem que a AKT, como alvo preferencial da mTOR2 é necessária para geração de morte e da UPR. A glicose (33.3mM) gera morte as células HepG2 e esta é inibida com baixas doses de rapamicina, mostrando possível atividade via mTOR1 nesta resposta. De outro modo, a frutose (4.5mM) que também desencadeia apoptose das células de hepatoma, tem seu efeito inibido por doses maiores de rapamicina, indicando atividade mTOR2 neste processo. No entanto, a possibilidade de diferentes monossacarídeos recrutarem complexos diferentes de mTOR para desencadear apoptose ainda precisa ser melhor explorada Abstract: Obesity is characterized by fat ectopic deposition in liver. This hepatic fat accumulation our non-alcoholic fat liver disease (NAFLD) can have serious consequences such as non-alcoholic hepatitis (NASH), that is a factor to liver cancer. The cell death of hepatocytes is an important event in the development to NAFLD to NASH, all that are caused by excess nutrients and dependent of endoplasmic reticulum (ER) stress. The ER stress is caused by accumulation of unfolded proteins triggers the unfolded protein response (UPR), which mau cause apoptosis. mTOR is basically formed by two complexes: mTOR1 and mTOR2, both are sensitive to nutrients, insulin and rapamycin. The mTOR2/Rictor complex catalyse AKT phosphorylation increasing the insulin pathway. All together, the aim of this study was evaluate the relationship between mTOR, ER stress and apoptosis in liver cells exposed to free fatty acids. We observed that apoptosis caused by palmitate activates ER stress in a manner dependent on time. We din¿t observed changes in phosphorylation of specific target proteins to mTOR1 complex. However, a general phosphorylation of mTOR was stimulated by palmitate. High doses of rapamycin inhibited apoptosis and ER stress caused by palmitate, suggesting the participation of the mTOR2 complex. These results were further confirmed by gene silencing of Rictor. The AKT phospholylation in serine 473 has a transitional character, rising in times that preceding cell death and ER stress, and decreasing concomitantly apoptosis in prolonged times. Inhibition of AKT by AKT inhibitor caused a decrease in apoptosis, ER stress and lipid incorporation in hepatoma cell line. These data suggest that AKT, preferential targets of mTOR2 is required for generation death and UPR. Glucose (33.3mM) generates HepG2 cell death and this is inhibited by low doses on rapamycin, showing possible mTOR1 activity. Otherwise, fructose (4.5mM) also triggers apoptosis of hepatoma cells; its effect is inhibited by higher doses of rapamycin, indicating mTOR2 activity in this process. However, the possibility of different monosaccharide recruit different complexes of mTOR to trigger apoptosis should be further explored Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Júnior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Em pacientes hipertensos resistentes, frequentemente obesos, tanto a pressão arterial elevada como a obesidade contribuem para a disfunção vascular. Além disso, resultados prévios demonstraram que distúrbios autonômicos estão relacionados com a obesidade e hipertensão e que a redução da variabilidade da frequência cardíaca (VFC) pode representar um fator de risco para a hipertensão. Para melhor entender a relação entre a disfunção autonômica e a hipertensão arterial resistente (HAR), este trabalho teve a finalidade de avaliar a associação entre a VFC, obesidade e função vascular na HAR. Trinta e sete pacientes com hipertensão arterial resistente foram selecionados. Os parâmetros da VFC foram obtidos a partir da gravação ambulatorial simultânea com Holter/MAPA de 24 horas e analisados no domínio do tempo. A função endotelial foi avaliada com a técnica da vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e a rigidez arterial pela velocidade da onda de pulso (VOP). Encontramos correlação positiva entre o desvio padrão de todos os intervalos RR normais (SDNN) e o desvio padrão das médias dos intervalos RR normais calculados em intervalos de 5 min (SDANN) com a VMF (r = 0,56, p = 0,001; r = 0,48, p = 0,006, respectivamente) mas não com a VOP. Além disso, SDNN foi negativamente correlacionada com o índice de massa corporal e circunferência da cintura (r = -0,44, p = 0,01; r = -0,34, p = 0,04, respectivamente). Esses achados reforçam a importância da hiperativação do sistema nervoso simpático em hipertensos resistentes obesos. Além disso, a associação entre os parâmetros da VFC e a disfunção endotelial e obesidade sugerem um potencial mecanismo fisiopatológico na resistência à terapia anti-hipertensiva Abstract: Resistant hypertensive patients are generally overweight or obese, either high blood pressure as obesity contribute to vascular damage. Moreover, previous data showed that autonomic imbalance is related to obesity as well as hypertension. Reduced heart rate variability (HRV) may represent a risk factor for hypertension. In order to better understand the relationship between impaired autonomic function and resistant hypertension (RHTN), we aimed to evaluate the association between HRV, obesity and vascular function in RHTN. Thirty-seven resistant hypertensive patients were selected. Parameters of HRV were derived from the simultaneous recording of 24-hour Holter ambulatory electrocardiographic /ABPM and analyzed in time domain. Endothelial function was assessed by flow mediated dilation (FMD) technique and arterial stiffness by pulse wave velocity (PWV). We found positive correlation between standard deviation of all normal RR intervals (SDNN) and standard deviation of mean RR interval in all 5-minute segments of a 24-hour recording (SDANN) with FMD (r = 0.56, p= 0.001; r = 0.48, p = 0.006, respectively) but not with PWV. In addition, SDNN was negatively correlated with body mass index and waist circumference (r = -0.44, p = 0.01; r = -0.34, p = 0.04, respectively). These data strengthen the importance of sympathetic overactivity in obese resistant hypertensive subjects. Furthermore, the relationship between HRV parameters with endothelial dysfunction and obesity suggest a potential pathophysiological mechanism in RHTN Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Objetivo: A falha no controle da pressão arterial (PA), apesar do uso de três ou mais antihipertensivos caracteriza hipertensão arterial resistente (HAR). A disfunção endotelial está intrinsecamente associada a esta condição e inibidores da fosfodiesterase 5 (iPDE5)-inibindo a degradação de GMP cíclico (GMPc)-reduzem a PA em pacientes com HAR. A administração aguda de iPDE5 poderia melhorar parâmetros hemodinâmicos, endoteliais e de função diastólica do ventrículo esquerdo (FDVE) em pacientes com HAR e o polimorfismo T-786C da sintase de óxido nítrico (NO) endotelial (eNOS) modularia essas respostas. Métodos: Os pacientes (n = 26) foram dispostos em três grupos de acordo com o genótipo da eNOS T-786C: CC (n = 8), a CT (n = 9) e TT (n = 9). Doses crescentes de sildenafil oral (37,5, 50 e 100 mg) e placebo (em datas separadas por pelo menos 2 semanas) foram administradas a intervalos de 30 minutos, enquanto parâmetros hemodinâmicos (não invasivos e contínuos) foram obtidos. Também foram determinados: FDVE; vasodilatação mediada por fluxo (VMF); e nitrito e GMPc plasmáticos ao início e término do protocolo. Resultados: PA média (PAM) e resistência periférica total (RPT) diminuíram no grupo total (n=26) após o sildenafil (84,17 ± 21,04-75 ± 17,21 mmHg, 1149 ± 459,7-1,037 dyn.s/cm-5 ± 340, respectivamente; p

Orientador: Heitor Moreno Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A inflamação tem sido associada à hipertensão arterial e lesões de órgãos-alvo, sendo que elevados níveis de biomarcadores inflamatórios como a interleucina 6 (IL-6), 10 (IL-10), 1? (IL-1?), fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) e a proteína C reativa ultra sensível (PCR-US) têm sido relacionados à doenças cardiovasculares. Estes biomarcadores inflamatórios estão envolvidos na rigidez arterial, um importante fator de risco cardiovascular. De fato, a hipertensão arterial resistente (HAR) possui um prognóstico desfavorável atribuído ao não controle pressórico e a outros fatores de risco associados. Entretanto, ainda não foi estabelecido o perfil dessas citocinas na HAR, também não se conhece o potencial impacto desses biomarcadores inflamatórios na rigidez arterial. Este estudo transversal em 32 pacientes com HAR, 20 com hipertensão de grau leve a moderado (HAS) e 20 normotensos (NT) teve como objetivo avaliar a relação de marcadores inflamatórios com a rigidez arterial em pacientes hipertensos resistentes. Foram avaliadas as medidas de pressão arterial de consultório e rigidez arterial, através da velocidade de onda de pulso (VOP). As concentrações plasmáticas de IL-10, IL-6, IL-1? e TNF-? foram determinadas por ELISA e PCR-US por nefelometria. O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para comparar os níveis de IL-6, TNF- ? e PCR-US, assim como os valores de VOP, enquanto o teste Qui-quadrado foi utilizado para avaliação das variáveis IL-10 (1,0pg/mL) e IL-1? (0,012 pg/mL). Análise de regressão linear múltipla foi conduzida para testar se havia associação independente dos marcadores inflamatórios (IL-6, TNF-?, IL-1? e PCR-US) com a VOP. Os grupos não apresentaram diferenças de idade, gênero e IMC. A VOP foi maior nos pacientes HAR (10.5 ± 2.2m/s), seguidos por pacientes HAS (8.7±2.1m/s) e indivíduos NT (7.2± 1.0m/s) (p1.0 pg/mL) comparados aos HAS (50%) e NT (20%). Além disso, a proporção de pacientes HAR com IL-1? aumentada também foi maior (100%) comparada aos HAS (45%) e NT (25%). Finalmente, apenas a IL-1? foi independentemente associada a VOP (p1.0pg/mL) and IL-1? (0.012 pg/mL). Multiple linear regression analysis tested the association of inflammatory biomarkers (IL-10, TNF-?, IL-1? and hs-CRP) with PWV. No differences were observed between the 3 groups with respect to age, gender and BMI. PWV was increased in RHTN (10.5 ± 2.2m/s) followed by HTN patients (8.7±2.1m/s) compared to NT individuals (7.2± 1.0m/s) (p1.0 pg/mL) compared with HTN (50%) and NT (20%). Moreover, RHTN had higher frequency of subjects with increased levels of IL-1?(100%) compared to HTN (45% ) and NT (25%). Finally, IL-1? was independently associated to PWV (p

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: A disfunção diastólica do ventrículo esquerdo (DDVE) e a hipertrofia ventricular são consideradas marcadores frequentes para lesão cardíaca e fatores de risco de progressão para insuficiência cardíaca congestiva (ICC), especialmente em pacientes com hipertensão arterial resistente (HAR). A redução dos níveis pressóricos arteriais pode melhorar a disfunção diastólica do ventrículo esquerdo e os sintomas de insuficiência cardíaca. Entretanto, frequentemente esta redução não é atingida nos pacientes com HAR. Inibidores da fosfodiesterase 5 (PDE5) apresentam efeitos vasodilatadores discretos e, recentemente, se demonstrou que a administração de sildenafil a ratos hipertensos melhorou a disfunção diastólica do ventrículo esquerdo, através de ação direta sobre os miócitos cardíacos, evidenciando a presença de PDE5 neste tecido. Objetivo: Avaliar se o uso de um inibidor de PDE5 de longa duração (tadalafil) melhora a DDVE em pacientes com HAR de maneira independente de outros mecanismos secundários. Casuística e Métodos: Realizou-se um estudo intervencionista, cego, controlado por placebo, cruzado de uma via, incluindo 19 pacientes com HAR e DDVE. Inicialmente, receberam por via oral uma dose diária de placebo por 14 dias, com realização de medidas da pressão arterial de consultório e MAPA, avaliação da função endotelial (técnica de FMD), ecocardiograma e medidas de concentrações sanguíneas de BNP-32, GMPc e nitrito, antes e após o período de administração. Posteriormente, repetimos o mesmo procedimento, mas substituindo o placebo por tadalafil 20mg por dia. Ao final, as variáveis obtidas foram comparadas antes e após os usos de tadalafil e placebo, utilizando-se o método t de student pareado, com ?

Orientador: Heitor Moreno Júnior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A Hipertensão Arterial Resistente (HAR) é uma condição na qual sobrepeso e obesidade estão correlacionados devido à influência no controle da pressão arterial (PA). Embora ambos os subgrupos resistentes não controlados (HARNC) e controlados (HARC) são, frequentemente, obesos, estudos recentes demonstram que o primeiro apresenta maior índice de massa corporal (IMC) comparados com o segundo subgrupo. A redução de adiponectina plasmática, um hormônio produzido pelo tecido adiposo, tem sido correlacionada ao desenvolvimento da hipertensão e foi considerada um dos fatores de risco independente para essa doença. Entretanto, é desconhecida se essa adipocina está associada com o não controle de PA nestes pacientes. O total de 96 pacientes foi dividido em dois subgrupos: HARNC (n=44) e HARC (n=52) e distribuído controlando idade, gênero e IMC. Foram avaliados os níveis plasmáticos de aldosterona e adiponectina (enzyme-linked immunosorbent assay - ELISA), medidas da PA de consultório e da Monitoração Ambulatorial de PA (MAPA), a resposta dependente do endotélio (vasodilatação mediada por fluxo - VMF), índice de massa ventricular esquerda (IMVE) e velocidade de onda de pulso (VOP). As idades foram 57±1,6 e 59±1,5 em HARNC (26M/18H) e HARC (35M/17H), respectivamente, e todos os pacientes tinham sobrepeso. Os pacientes HARNC apresentaram maiores níveis de aldosterona (12,6±1,4 vs. 8,9±0,8 ng/dL, p=0,02), assim como, IMVE (142,2±6,0 vs. 122,9±4,3 g/m², p=0,02) e VOP (12,0 ± 1,8 vs. 9,2 ± 1,7 m/s, p

Orientadores: Gilberto de Nucci, Fabiola Taufic Monica Iglesias Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A enzima alvo do NO, a guanilato ciclase solúvel (GCs) é responsável em converter o trifosfato de guanosina (GTP) em monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). É sabido que a via do NO-GCs-GMPc está alterada em diversas patologias, como no diabetes mellitus, na hipertensão arterial e pulmonar, na disfunção erétil assim como nas alterações do baixo trato urinário. O estresse oxidativo presente nestas patologias pode ser um dos responsáveis por influenciar o estado redox da GCs promovendo a oxidação da mesma e, portanto, criando um estado de refratariedade aos tratamentos usuais. O uso de nitratos orgânicos não é eficiente no tratamento destas patologias já que o uso contínuo leva à tolerância. Sendo assim, compostos que atuem na via NO-GCs-GMPc seja ativando ou estimulando a enzima GCs constituem importantes alvos no tratamento das disfunções causadas por anormalidades da via do NO. Baseado no exposto acima o objetivo do presente trabalho foi avaliar o estado redox da enzima GCs de ratos hipertensos renovasculares (2K1C) e espontaneamente hipertensos (SHR) e seus respectivos grupos controles através de curvas concentração resposta à fenilefrina (PE), acetilcolina (ACh), nitroprussiato de sódio (SNP), ao estimulador (BAY 41-2272) e ativador (BAY 60-2770) da GCs em artéria mesentérica superior isolada. Em alguns experimentos os inibidores da GCs (quinoxalin-1-one 1H[1,2,4] oxidiazolo [4,3-a]) (ODQ) ou da sintase de óxido nítrico (NOS), N (G)-nitro-Larginine methyl ester (L-NAME) foram incubados previamente ao relaxamento induzido pelo BAY 41-2272 ou BAY 60-2770. Os parâmetros de potência (pEC50) e resposta máxima (Emax) foram determinados. A pressão sistólica (PS) e o peso foram determinados semanalmente. A PS dos animais SHR mostrou elevada (188,23 ± 3,46 mm/Hg) na 8ª semana em relação ao respectivo grupo controle (118,83 ± 2,67 mm/Hg), sendo este aumento ainda maior na 16ª (203,75 ± 3,61 mm/Hg), enquanto que o peso corporal dos animais SHR apresentou-se menor na 8ª semana de vida. Nos ratos 2K1C os animais apresentaram aumento na PS de, aproximadamente, 25 e 40 % na 1ª e 8ª semana pós-clipagem, respectivamente. Os resultados funcionais mostraram que a contração a fenilefrina foi significativamente maior nos animais SHR em comparação ao controle e este efeito não foi observado nos animais 2K1C. Em animais SHR e 2K1C o relaxamento a ACh foi maior em comparação ao grupo controle, com aumento da resposta máxima e deslocamento da potência (aproximadamente 3 vezes), respectivamente. Em relação ao SNP, tanto nos animais SHR como nos 2K1C houve deslocamento da pEC50 de, aproximadamente, 67 e 5 vezes para a direita, respectivamente em relação aos respectivos grupos controles, sem alteração da Emax. O relaxamento ao estimulador da GCs, BAY 41-2272 encontrou-se deslocado para a direita nos animais SHR (2,2 vezes), sem nenhuma alteração nos ratos 2K1C. A adição de L-NAME e ODQ tanto nos animais hipertensos como normotensos diminui a potência do BAY 41-2272, sugerindo que o relaxamento desta substância é dependente do acúmulo de GMPc e atua sinergicamente com NO. Interessantemente, o ativador BAY 60-2770 induziu relaxamento nos animais SHR que foi, aproximadamente, 47 vezes mais potente em relação ao controle. Nenhuma diferença foi observada nos animais 2K1C. Diferentemente do BAY 41-2272, a presença de LNAME ou ODQ potencializou o relaxamento ao BAY 60-2770, mostrando que a oxidação da GCs ou até mesmo a ausência de NO favorecem este efeito. Em conclusão, nossos dados mostram que nas mesentéricas dos animais SHR a enzima GCs pode estar oxidada (Fe3+), uma vez que observamos diminuição e aumento da potência do BAY 41-2272 e BAY 60-2770, respectivamente. Por sua vez, nos vasos de animais 2K1C nenhuma alteração foi observada nas respostas a estas substâncias, porém, o relaxamento ao SNP encontrou-se diminuído, sugerindo diminuição da biodisponibilidade do NO. Assim, os estimuladores e ativadores da enzima GCs constituem importante ferramenta farmacológica para avaliar o estado redox da GCs Abstract: The target enzyme NO, the soluble guanylate cyclase (sGC) is responsible to convert guanosine triphosphate (GTP) to cyclic guanosine monophosphate (cGMP). It is known that, via the NO-cGMP GCs is altered in various pathologies, such as diabetes mellitus, arterial hypertension and pulmonary in erectile dysfunction as well as changes in the lower urinary tract. The oxidative stress can be present in these conditions a significant role in influencing the redox state of sGC promoting oxidation thereof and, thus creating a state of refractory to usual treatments. The use of organic nitrates is not effective in treatment of pathologies since the continuous use leads to tolerance. Thus, compounds that act via the NO-sGC-cGMP is activating or stimulating the enzyme sGC are important targets in the treatment of disorders caused by abnormalities of the NO pathway. Based on the above the aim of this study was to evaluate the redox state of the enzyme sGC renovascular hypertensive rats (2K1C) and spontaneously hypertensive rats (SHR) and their respective controls by concentration-response curves to phenylephrine (PE), acetylcholine (ACh), sodium nitroprusside (SNP), the stimulator (BAY 41-2272) and activator (BAY 60-2770) of the sGC in superior mesenteric artery isolated. In some experiments inhibitors sGC (quinoxalin-1-one 1 H [1,2,4] oxidiazolo [4,3-a]) (ODQ) or nitric oxide synthase (NOS), N (G)-nitro-L- arginine methyl ester (LNAME), were incubated prior to the relaxation induced by BAY 41-2272 or BAY 60- 2770. The power parameters (pEC50) and maximal response (Emax) was determined. Systolic blood pressure (SBP) and weight were determined weekly. The PBS of the SHR showed higher (188.23 ± 3.46 mm/Hg) at week 8 compared to respective control group (118.83 ± 2.67 mm/Hg), and this increase was even higher at 16 (203.75 ± 3.61 mm/Hg), whereas the body weight of SHR was lower at 8 weeks of age. In rats, 2K1C animals showed an increase in PBS of approximately 25 and 40% in the 1st and 8th week after clipping, respectively. Functional results showed that the contraction to phenylephrine was significantly higher in SHR compared to control and this effect was not observed in 2K1C animals. In SHR and 2K1C relaxation to ACh was greater in the control group, with increased maximum response and power shift (approximately 3- fold), respectively. Concerning the SNP, both in SHR and in 2K1C displacement pEC50 was approximately 67 and 5 times to the right, respectively in relation to the respective control group, without changing the Emax. The relaxation of the sGC stimulator, BAY 41- 2272 was found displaced to the right in SHR (2.2 times), with no change in 2K1C rats. The addition of L-NAME and ODQ both in normotensive and hypertensive rats reduces the power of BAY 41-2272, suggesting that the relaxation of this substance is dependent on the accumulation of cGMP and acts synergistically with NO. Interestingly, the activator BAY 60-2770 induced relaxation in SHR was approximately 47 times more potent than the control. No difference was observed in 2K1C animals. Unlike BAY 41- 2272, the presence of L-NAME or ODQ potentiated relaxation to BAY 60-2770, showing that the oxidation of sGC or even the absence of NO contribute to this effect. In conclusion, our data show that in the mesenteric SHR sGC the enzyme can be oxidized (Fe3+), since we observed a decrease and increase of power of BAY 41-2272 and BAY 60-2770, respectively. In turn, in 2K1C animals vessels no change was observed in response to these substances, however, found to relax the SNP is decreased, suggesting decreased bioavailability of the NO. Thus, stimulators and activators of the enzyme sGC is an important pharmacological tool to assess the redox state of the GCs Doutorado Farmacologia Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A leptina, um hormônio derivado de adipócitos, e a aldosterona, têm sido associados aos mecanismos fisiopatológicos da hipertensão. Entretanto, apesar de estudos demonstrarem a associação da leptina com o espeçamento íntimo-carotídeo, distensibilidade arterial, ativação do sistema nervoso simpático, a relação entre os níveis plasmáticos de leptina e a pressão arterial em hipertensos resistentes ainda é desconhecida. Nosso objetivo foi avaliar a correlação entre os níveis de leptina plasmática, a concentração plasmática de aldosterona (CPA) e a pressão arterial em hipertensos resistentes não controlados (HARNC) e hipertensos resistentes controlados (HARC). Foram avaliados os níveis plasmáticos de leptina e a concentração plasmática de aldosterona (ensaio imuno-enzimático - ELISA), medidas de pressão arterial de consultório e da MAPA. Nenhuma diferença estatística foi encontrada entre os grupos HARNC (n=41) e HARC (n=39) em relação ao gênero, a idade e índice de massa corpórea. O grupo de HARNC apresentou valores maiores de leptina (38,2 ± 21,4 vs 19,6 ± 8,7 ng/mL, p0.05), diastolic BP(r=0.24, p> 0.05) and PAC(r=0.21, p>0.05). Simple linear regression showed that SBP, DBP and PAC may be predicted by leptin (r²=0.16, p,0.05, r²=0.15, p

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão é uma doença muito comum, e está associada à alta morbidade e mortalidade cardiovascular. Em relação às doenças associadas à hipertensão, se observam diferenças étnicas, sendo que negros são expostos a maior risco cardiovascular que os brancos. A manutenção de níveis pressóricos elevados leva a alterações teciduais em vasos e no coração em um processo chamado remodelamento cardiovascular. No coração este processo leva à hipertrofia cardíaca. Esta condição causa progressiva perda na eficiência de contração do coração, e em casos avançados pode levar à morte dos pacientes. O remodelamento cardíaco envolve a participação de metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs), principalmente a MMP-2 e MMP-9. Diversos polimorfismos genéticos foram associados com alterações na expressão e/ou atividade destas enzimas, e é possível que diferenças nas distribuições dos polimorfismos ajudem a explicar as diferenças étnicas quanto à morbidade e mortalidade cardiovascular. Os principais polimorfismos da MMP-9 e MMP-2 são: um polimorfismo de base única (SNP) (C-1562T) e um microssatélite (-90 CA (14-24)) no promotor, e um SNP no exon 6 (A855G - Q279R) da MMP-9, e dois SNPs (C-1306T e C-735T) no promotor da MMP-2. Como estes polimorfismos também foram associados com diversas doenças, o propósito deste estudo foi avaliar se polimorfismos da MMP-9 e MMP-2 estão associados à hipertensão, a alterações ecocardiográficas em hipertensos e se diferem entre populações de brancos e de negros. Em nosso estudo avaliamos 173 hipertensos submetidos a eco cardiografia e 137 indivíduos normotensos, pareados para idade gênero e raça. Avaliamos também 140 indivíduos brancos e 177 indivíduos negros recrutados aleatoriamente. Nossos resultados mostraram uma associação do alelo H e do genótipo HH do microssatélite -90 CA(14-24) com hipertensão (P= 0,0058 e P=0,0085, respectivamente), e os portadores destes alelos apresentaram maior risco a estadoença, quando comparados com o alelo L (odds ratio, ou razão de chances (OR) =1,581) e genótipo LL (OR=2,32). Haplótipos da MMP-9 foram capazes de exercer efeitos protetores (H3, P=0,049) e deletérios (H7; P=0,0015) sobre o diâmetro diastólico final e protetores (H3, P=0,0367) e deletérios (H7; P=0,0057) sobre o índice de massa do ventrículo esquerdo. Não encontramos associações dos polimorfismos da MMP-2 com hipertensão, porém os haplótipos H1 e H3 mostraram efeitos protetores sobre diâmetro diastólico final e índice de massa do ventrículo esquerdo (H1; P=0,0290 e P=0,0318, respectivamente) e deletérios sobre e índice de massa do ventrículo esquerdo (H3; P=0,0187). Nós encontramos diferenças grandes nas distribuições dos polimorfismos estudados entre brancos e negros. O alelo H e genótipo HH do microssatélite -90 CA (14-24) é mais frequente em negros (P

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O óxido nítrico (NO) regula diversos sistemas orgânicos. Disfunções na produção ou disponibilidade de NO podem comprometer sua atuação fisiológica. Além da produção de NO pelas óxido nítrico sintetases, outras vias de produção de NO são relatadas, entre elas a conversão de nitrito a NO. O nitrito é o produto inicial da oxidação do NO, sendo posteriormente oxidado a nitrato. Sabe-se que estas três moléculas formam um ciclo dentro do organismo. A conversão de nitrito a NO pode ocorrer de forma enzimática ou não enzimática. Como forma não enzimática, o nitrito é convertido a NO pela reação com H+. Esta reação ocorre principalmente no estômago, todavia não se sabe se este NO formado tem efeito na pressão arterial sistêmica ou atua apenas localmente. A fim de verificar a influência do pH gástrico no efeito hipotensor do nitrito de sódio, utilizamos animais tratados agudamente com LNAME e normotensos canulados acordados pré-tratados com omeprazol e, posteriormente, com nitrito de sódio 15mg/kg e 45mg/kg. Foi verificado que o nitrito de sódio reduz a pressão arterial média dos animais significativamente e de maneira dependente da dose. O pré-tratamento com omeprazol reduziu o efeito hipotensor do nitrito de sódio significativamente. Após, foram quantificados os níveis de nitrito e nitrato. Foi observado aumento em ambos após o tratamento com nitrito de sódio. A partir destes resultados podemos sugerir que o omeprazol atenua o efeito hipotensor do nitrito de sódio em ratos normotensos e hipertensos Abstract: Many body systems are regulated by nitric oxide (NO). Dysfunctions in the production or availability of NO may impair it physiological roles. However, other routes of NO production are reported in addition to NO production by nitric oxide synthases, including the conversion of nitrite to NO. Nitrite is the initial product of oxidation of NO and is further oxidized to nitrate. It is known that these three molecules form a cycle within the body. The conversion of nitrite to NO can occur enzymatic or nonenzymatic. Non-enzymatic nitrite is converted to NO by reacting with H+. This reaction occurs mainly in the stomach, however it is unclear whether this NO affects blood pressure or simply acts locally. To study the influence of gastric pH on the hypotensive effect of sodium nitrite, we used hypertensive or normotensive cannulated animals pretreated with omeprazole and with sodium nitrite 15 mg/kg and 45 mg/kg. We found that sodium nitrite reduces mean arterial pressure of animals in a dose-dependent manner. Pretreatment with omeprazole reduced the hypotensive effect of sodium nitrite significantly. Thereafter, we quantified the levels of nitrite and nitrate. We found increase in both species after treatment with sodium nitrite. These results suggest that omeprazole attenuates the hypotensive effect of sodium nitrite in normotensive and hypertensive rats Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Introdução Hipertensão resistente é definida como a pressão arterial que permanece acima da meta pressórica, apesar do uso de 3 classes de antihipertensivos sendo um deles um diurético. Recentes diretrizes da American Heart Association (AHA-2008) consideraram também hipertensos resistentes os pacientes que usam 4 ou mais classes e possuem suas pressões controladas. No entanto, é desconhecido se as repercussões cardíacas e vasculares nos pacientes hipertensos resistentes não controlados (HARNC) e controlados (HARC) são semelhantes e qual a influência do envelhecimento sobre esses subgrupos de hipertensos resistentes (HAR). Objetivo Comparar as repercussões cardíacas e vasculares nos HARNC e HARC e avaliar a influência do envelhecimento nesses subgrupos. Métodos Após a triagem e adesão rigorosa, noventa pacientes foram separados em HARNC (n=47) e HARC (n=43). Pressão arterial sistólica (PAS), pressão arterial diastólica (PAD), pressão de pulso (PP), velocidade de onda de pulso (VOP), índice de massa do ventrículo esquerdo (IMVE), índice de massa corpórea (IMC), concentração plasmática de aldosterona (CPA) e atividade renina plasmática (ARP) foram avaliados. Realizaram-se testes estatísticos paramétricos e não paramétricos e regressão linear multivariada (RLM) e univariada (RLU). Resultados A PAS, PAD, PP, VOP, IMVE, IMC e CPA foram maiores nos HARNC (PAS=170/150/204 mmHg; PAD=100/88/130 mmHg; PP=69/40/91 mmHg; VOP=10.9/8/15.3 m/s; IMVE=179±49.2 g/m2; IMC=32±2.1 Kg/m2 e CPA=24.4±3.2 ng/dL), comparados com os HARC (PAS=143/130/163 mmHg; PAD=90/70/116 mmHg; PP=54.5/30/75 mmHg; VOP=9.5/6.8/11.3 m/s; IMVE=140.3±30.1 g/m2; IMC=28.3±1.5 Kg/m2 e CPA=19.7±2.6 ng/dL)(p

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Juan Carlos Yugar Toledo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Segundo o VII JNC, Hipertensão arterial refratária (HAR) é definida como sendo a elevação persistente dos níveis pressóricos (acima de 140 mmHg) à despeito de tratamento farmacológico tríplice, pleno, incluindo um diurético, em pacientes com boa adesão e sem causas secundárias de hipertensão arterial ou pseudo-hipertensão. Quando exposto aos fatores de risco, como a hipertensão arterial (HA), o endotélio apresenta alterações funcionais denominadas genericamente de disfunção endotelial, onde ocorre principalmente uma menor biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) e de substâncias vasodilatadoras ou uma maior produção de substâncias vasoconstritoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar a função do endotélio vascular no leito venoso e arterial em pacientes com HAR. Após a triagem e adesão rigorosa, os 86 pacientes foram seqüencialmente incluídos no estudo, dos quais 33 foram caracterizados como hipertensos resistentes (HAR), 50,7±8,5 anos, 28 pacientes como hipertensos controlados (HA), 54,9±12,0 anos e 25 normotensos controle (NT), 35,8±12,1anos. Todos os grupos foram submetidos ao exame da função endotelial venosa pela técnica da veia dorsal da mão (DHVT), do endotélio arterial pela vasodilatação mediada pelo fluxo (VMF) e velocidade de onda de pulso (VOP). Os principais resultados do presente estudo mostraram: a) diferença estatisticamente significante entre os grupos HAR e NT (p 140 or diastolic > 90 mmHg), even on a triple drug regimen at maximal doses including a diuretic, in patients with good adhesion and without secondary causes of hypertension or pseudo-hypertension. When exposed to risk factors, such as hypertension, the endothelium presents functional alterations, denominated endothelial dysfunction, with a reduced bioavailability of nitric oxide (NO) and vasodilation agents or an increased production of vasoconstrictor agents. The objective of this work was to evaluate the vascular endothelial function in venous and arterial networks of patients with RH After careful selection, a total of 86 patients were included in the study; 33 were characterized as resistant hypertensives (50.7±8.5 years), 28 as controlled hypertensives (54.9±12.0 years) and 25 as apparently healthy volunteers (35.8±12.1 years). All participants were submitted to an evaluation of the venous endothelial function by the dorsal hand vein technique, the arterial endothelium by flow-mediated vasodilation and the Arterial Stiffness. The main results of this study showed: a) a significant difference between the RH and NT Groups (p< 0.05) in respect to endothelial-dependent vasodilatation in the venous network; this was not seen in endothelium-independent vasodilatation induced by sodium nitroprusside; and b) functional alterations of the arterial network as seen by endothelial-dependent vasodilation comparing the RH and NT (p

Orientador: Heitor Moreno Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O óxido nítrico (NO) é um mediador biológico que atua como molécula chave em muitos processos fisiopatológicos, como a regulação do tônus vascular, neurotransmissão, aprendizado, memória, dentre outros. Por causa de sua importância e envolvimento nos mecanismos fisiológicos e patológicos, a sua regulação e síntese têm sido extensivamente estudadas. A inibição crônica do NO por administração via oral do inibidor inespecífico da NO-sintase, a nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) resulta em cardiopatia hipertensiva em ratos. A hipertensão renovascular [dois rins e um clipe (2R1C)] e o diabetes melito (DM) associadas, induzem a anormalidades morfológicas semelhantes às descritas no modelo de cardiomiopatia induzida por L-NAME em ratos, mas seus efeitos hemodinâmicos ainda são controversos. O presente estudo avaliou a função cardíaca e vascular nestes dois modelos de cardiomiopatia após oito semanas de tratamento. Foram utilizados ratos Wistar, divididos em 5 Grupos: Grupo Controle; Grupo L-NAME: 60mg/kg/dia de L-NAME; Grupo 2R1C: com estenose cirúrgica de artéria renal para indução de hipertensão arterial renovascular; Grupo DM: animais que receberam estreptozotocina (60 mg/kg intra-venoso), Grupo 2R1C+DM: animais submetidos à cirurgia para indução de hipertensão arterial renovascular e que receberam estreptozotocina. Foram avaliados os seguintes parâmetros: pressão arterial média (PAM), débito cardíaco (DC), resistência vascular periférica total (RVPT), dP/dt positivo e dP/dt negativo em coração isolado. Em todos os grupos foram encontrados aumento na PAM, RVPT e redução do DC depois de oito semanas em relação ao Grupo Controle. Os grupos L-NAME e 2R1C+DM apresentaram aumento na PAM (175,4±29,7 e 158,7±16,7 mmHg, respectivamente) e redução do DC após a oitava semana. A RVPT aumentou em ambos os grupos. Uma diminuição da dP/dt positiva foi observada no grupo 2R1C+DM (1895±98 mmHg/s, p

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Introdução: O diagnóstico de hipertensão arterial resistente requer cuidadosa avaliação da adesão ao tratamento prescrito. Objetivos: Analisar a adesão ao tratamento dos pacientes com hipertensão arterial de difícil controle, referenciados ao Ambulatório de Farmacologia Cardiovascular do Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, a fim de identificar os hipertensos resistentes ao tratamento farmacológico. Avaliar também os resultados clínicos e humanísticos durante o seguimento farmacoterapêutico. Método. Realizou-se um estudo prospectivo de 44 pacientes acompanhados por um período de 12 meses. Durante o seguimento farmacoterapêutico, utilizaram-se os seguintes instrumentos: Teste de Morisky et al. e contagem de comprimidos para análise da adesão ao tratamento; teste do conhecimento em relação à doença e ao tratamento anti-hipertensivo; análise da pressão arterial (PA) ambulatorial e através da Monitorização Ambulatorial da Pressão Arterial (MAPA); para qualidade de vida, utilizou-se o instrumento genérico como o SF-36 e instrumento específico (perfil de sintomas físicos); também utilizaram-se os facilitadores de cuidados à saúde (urgência hipertensiva e internação hospitalar). Resultados: Com relação à adesão ao tratamento pelo método contagem de comprimidos, 63,6% dos pacientes foram aderentes no início e, 95,4%, no final do estudo. Pelo Teste de Morisky et al., a adesão foi de 36,4%, no início e, 68,2%, no final. Os hipertensos apresentaram altos níveis de conhecimento em relação à doença e ao tratamento, porém não houve relação com o controle da pressão arterial. Houve redução significativa da pressão arterial (p

Orientador: Gilberto de Nucci Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Compostos farmacológicos que liberam óxido nítrico (NO) têm sido utilizados para avaliar o amplo papel do NO na fisiopatologia e terapêutica de diversas doenças. Estudos demonstram que a deficiência de NO está envolvida com a gênese e evolução de diversos estágios de doenças como, por exemplo, a hipertensão. Deste modo, a adição de uma molécula de NO em drogas previamente estudadas vem sendo praticada por diversos pesquisadores na última década. Estes pesquisadores buscam associar as propriedades farmacológicas de cada droga com as atividades proporcionadas pelo NO exógeno. No presente trabalho, comparamos a farmacocinética e a farmacodinâmica do enalapril com as de um nitro-derivado do enalapril (NCX899), em Beagles machos não anestesiados. Os efeitos do enalapril e NCX899 na hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica induzida pela inibição aguda da síntese de NO em cães anestesiados também foram investigados. Na avaliação farmacocinética, os cães receberam NCX899 (4 µmol/Kg) ou Enalapril (4 µmol/Kg) pela via intravenosa. Em seguida, as concentrações plasmáticas dos analitos e metabólitos foram quantificadas pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massa (LCMS- MS). No grupo NCX899, a área sob a curva (ASC0-24h) foi 29,18 ± 4,72, 229,37 ± 51,32 e 5159,23 ± 514,88 µgh/l para os analitos nitro-enalapril, enalapril e enalaprilato, respectivamente. No grupo Enalapril, a ASC0-24h foi de 704,53 ± 158,86 e 4149,27 ± 847,30 µgh/l para os analitos enalapril e enalaprilato, respectivamente. As análises estatísticas entre os grupos demonstraram uma diferença significativa para o analito enalapril, mas não para o analito enalaprilato, o metabólito ativo. Entretanto, o NCX899 e o Enalapril foram efetivos de maneira semelhante na inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina sérica. Em cães anestesiados, a administração intravenosa do inibidor da síntese de NO, o N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME; 0,1-10 mg/kg), elevou significativamente a pressão arterial e causou bradicardia. O composto NCX899 atenuou significativamente a hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica, enquanto o Enalapril não apresentou efeito significativo. Além disso, nossos estudos também demonstraram que o NCX899 pode atuar não só como anti-hipertensivo, mas também auxiliar na inibição da agregação plaquetária. Assim, concluímos que o nitro-derivado do enalapril (NCX899) apresenta uma relação farmacocinética/farmacodinâmica similar ao composto enalapril. No entanto, ao contrário do Enalapril, o NCX899 apresenta um efeito protetor nas alterações cardiovasculares induzidas pela inibição aguda de NO Abstract: Pharmacological compounds that release nitric oxide (NO) have been useful tools for evaluating the broad role of NO in physiopathology and therapeutics of several diseases. Studies show that lack of NO can cause several diseases such as hypertension. Thus, the addition of a NO molecule in drugs previously studied has been reported by some researchers in the last decade. They look for the combination of the pharmacologic properties of each drug, plus exogenous NO properties. This work has compared the pharmacokinetics and pharmacodynamics of enalapril and a NO-releasing enalapril molecule (NCX899) in conscious male Beagles. The effects of both enalapril and NCX899 in the arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction induced by acute NO inhibition in anesthetized dogs have also been investigated. In the pharmacokinetic evaluation, dogs received either NCX899 (4 µmol/Kg) or Enalapril (4 µmol/Kg) intravenously. Later, the plasma concentrations of the analytes and metabolites were quantified by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS-MS). In the NCX899 group, the area under time-course curve (AUC0-24h) was 29.18 ± 4.72, 229.37 ± 51.32 and 5159.23 ± 514.88 µgh/l for the nitro-enalapril, enalapril and enalaprilat analytes, respectively. In the Enalapril group, the AUC0-24h was 704.53 ± 158.86 and 4149.27 ± 847.30 µgh/l for the enalapril and enalaprilat analytes, respectively. The statistical analysis between both groups showed a significant difference for the enalapril analyte, but not for enalaprilat, the active metabolite. Moreover, NCX899 and Enalapril were equally effective on inhibiting the activity of serum angiotensin-converting enzyme. In anesthetized dogs, intravenous administration of the NO synthase (NOS) inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME; 0.1-10 mg/kg) significantly elevated arterial blood pressure with concomitant bradycardia. The compound NCX899 significantly attenuated arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction, whereas Enalapril had no significant effect. In addition, our work showed that NCX899 also has properties of inhibiting the activity of platelets aggregation. In conclusion, our results showed that the NO-releasing derivative of enalapril NCX899 presents a pharmacokinetic / pharmacodynamic relationship similar to the enalapril compound. Moreover, different from Enalapril, NCX899 presented protective effect in the cardiovascular alterations induced by acute NOS inhibition Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O óxido nítrico (NO) é um mediador biológico multifuncional que serve como molécula chave em muitos processos fisiopatológicos, sintetizado nas células endoteliais em resposta a estímulos fisiológicos ou patológicos. Sua síntese se dá a partir da clivagem do terminal nitrogênio-guanidina do aminoácido L-arginina, em uma reação catalizada pela enzima óxido nítrico sintase (NOS). Há três isoformas de NOS: a NOS endotelial (eNOS), a NOS neuronal (nNOS) e a NOS induzível (iNOS). A eNOS e a nNOS são isoformas expressas constitutivamente nas células endoteliais vasculares e nas células neuronais, respectivamente; e a iNOS que a forma induzível, expressa em células inflamatórias após a indução por citocinas e outros mediadores inflamatórios. Após sua síntese o NO se difunde para as células do músculo liso vascular ativando a enzima guanilato ciclase solúvel (GCs), que converte guanosina-tri-fostato (GTP) em guanosina-3¿,5¿-monofosfato cíclica (GMPc), um segundo mensageiro para seus diversos efeitos biológicos, dentre os quais o relaxamento da musculatura lisa vascular. A síntese de NO pode ser inibida por vários compostos análogos à L-arginina, como L-NMMA, L-NAA, L-NAME e L-NIO de forma dose-dependente. A inibição crônica da síntese de óxido nítrico pela administração crônica de L-NAME é um modelo complexo e bem estabelecido de hipertensão arterial e miocardiopatia hipertensiva. É caracterizado por elevação da pressão arterial (PA) de forma severa, redução na freqüência cardíaca, no fluxo coronário e débito cardíaco (DC), aumento da resistência vascular periférica total (RVPT), diminuição do relaxamento vascular e alterações na contratilidade cardíaca, hipertrofia cardíaca, aumento do tamanho cardiomiócito, remodelamento miocárdico e microvascular com fibrose perivascular, sendo que o índice peso cardíaco/peso corporal e peso ventricular esquerdo/peso corporal estão usualmente aumentados. As fosfodiesterases são enzimas que degradam os nucleotídeos cíclicos GMPc e AMPc nas suas formas inativas. São conhecidas 11 famílias de enzimas (PDE1 ¿ PDE11) que diferem com relação ao padrão distribuição, especificidade de substrato, regulação pelas PKs e proteínas ligantes. Estão envolvidas em diversos processos fisiológicos e patológicos, tais como ereção peniana, asma, hipertensão pulmonar, aterosclerose, insuficiência cardíaca e diabetes. Consequentemente, os inibidores seletivos de PDE são interessantes e promissores alvos farmacológicos. Os inibidores das PDEs inpedem a degradação do AMPc, GMPc, elevando seus níveis intracelulares. Esses inibidores mimetizam as estruturas do AMPc e GMPc, mas não são degradados. Sildenafil é um inibidor seletivo da PDE5 induzindo o e relaxamento do músculo vascular liso e têm sido utilizados com sucesso no tratamento da disfunção erétil. A base racional para este projeto é a hipótese de que o sildenafil, por inibir de forma seletiva a PDE5 e conseqüentemente aumentar a disponibilidade de GMPc, possa ter efeitos cardiovasculares benéficos na inibição crônica da síntese de NO que reduz os níveis de GMPc no músculo cardíaco e vascular. Para isso foram estudados 4 grupos experimentais divididos aleatoriamente em: CONTROLE, L-NAME, SILDENAFIL e SILDENAFIL + L-NAME, durante 8 semanas de tratamento. Analisamos as alterações hemodinâmicas através das medidas da pressão arterial média, débito cardíaco, freqüência cardíaca e resistência vascular. As análises histológicas foram feitas através de técnicas morfométricas para determinação do diâmetro de miócito, lesões miocárdicas e espessura da camada média vascular e análises imunohistológicas. Nossos resultados demonstraram que a administração crônica de sildenafil altera os padrões hemodinâmicos e histolólgicos do modelo de miocardiopatia hipertensiva induzida pela inibição da síntese de NO por L-NAME. A inibição da PDE5 restaurou parcialmente os padrões hemodinâmicos, avaliados através da PA, DC e RVPT, além de protege parcialmente o miocárdio e músculo vascular liso contra as lesões e remodelamento cardiovascular característicos deste modelo experimental. A biodisponibilidade de GMPc, nos animais do grupo L-NAME + sildenafil, foi totalmente restaurada após 8 semanas de tratamento e a expressão das enzimas PDE3 e PDE5 estavam modificadas no músculo vascular liso e nos discos intercalares dos miócitos. Dessa forma, concluimos que o sildenafil, através da inibição da PDE5, aumentando a biodisponibilidade do GMPc, resulta em um efeito cardioprotetor e antiproliferativo contra as alterações cardiovasculares descritas no modelo de miocardiopatia hipertensiva induzida pela inibição crônica da síntese de NO em ratos Wistar Abstract: Many of the physiological responses to nitric oxide (NO) are mediated by cyclic 5'-guanosine monophosphate (cGMP), the intracellular levels of which are regulated by phosphodiesterase type 5 (PDE5). In situations of reduced NO formation, the inhibition of PDE5 by selective inhibitors such as sildenafil could be beneficial in restoring physiological functions by enhancing the intracellular levels of cGMP. In this study, we evaluated the effects of sildenafil on the hemodynamic and histological alterations induced by the chronic treatment of rats with Nw¿nitro-L¿arginine¿methyl ester (L-NAME). After 8 weeks of concomitant treatment with sildenafil and L-NAME, arterial blood pressure was significantly lower (P

Orientador : Heitor Moreno Junior Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: É desconhecida a participação do endotélio na patogênese da hipertensão arterial HA resistente. Neste estudo, pacientes com HA diagnosticada como refratária ao tratamento foram encaminhados ao Ambulatório de Farmacologia Cardiovascular para confirmação diagnóstica baseada no seguinte método: monitorização arterial de pressão arterial por 24 horas (MAPA, sistema Space Labs ¿ USA), antes e após a administração oral vigiada dos fármacos prescritos pelo médico assistente do paciente, na presença do pesquisador. Hipertensos leves/moderados foram utilizados como controles. As alterações ocorridas no remodelamento vascular (em nível de vasos) foram obtidas pelo método ultrassonográfico. Através do ecocardiograma, foram estudadas as possíveis alterações a nível de miocárdio. Selecionou-se 60 voluntários, de ambos os sexos, com idade entre 18 e 60 anos alocados em grupos: 1) Controle (normotensos): n=15; 2) hipertensos leves: n=15 e 3) hipertensos refratários: n=15. Pela manhã, em jejum, antes da administração das medicações rotineiramente ingeridas pelos pacientes, foram coletadas amostras de sangue venoso (10 ml/amostra) para realização de exames bioquímicos. Todos os pacientes HAL e HR estavam devidamente medicados e controlados com as seguintes drogas anti-hipertensivas: Diuréticos tiazídicos, inibidores da enzima conversora de angiotensina (IECA), antagonistas de angiotensina II, bloqueadores de canais de cálcio e ß-bloqueadores. Foram realizadas nestas amostras a quantificação de tromboxano B2, GMPc e nitratos e nitritos pelo método ELISA. Análise de variância para medidas repetidas ou amostras independentes foram utilizadas para as variáveis descritas. Os pacientes foram observados pelo período de 12 meses, com retorno ambulatorial a cada dois meses. Verificou-se os seguintes resultados: a) a HVE no grupo HR demonstrou-se aumentada; b) o remodelamento também demonstrou-se aumentado; c) a determinação de tromboxano B2, GMPc e nitratos e nitritos foram similares nos três grupos estudados; d) a pressão de pulso teve aumento nos pacientes HR quando comparados com os demais grupos em estudo. Observação: O grupo de pacientes HAL não apresentou resultados de ultrassonografia de carótidas e de ecocardiograma. Não se observou correlação entre os marcadores bioquímicos endoteliais analisados e o remodelamento vascular / miocárdio em pacientes com HR. Entretanto, verificou-se aumento considerável na pressão de pulso nos pacientes com HR quando comparados com os demais grupos em estudo. Além disso, os pacientes HR tiveram massa do ventrículo esquerdo aumentada Mestrado Mestre em Farmacologia