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Se presenta el caso de un paciente de la tercera edad mostrando cuadro agudo sintomático con complicaciones cardiacas evidenciadas por detección de fibrilación auricular, miopericarditis, derrame pericárdico moderado, sin signos de taponamiento cardíaco, fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI) < 30% y aneurisma, detectados mediante estudios electro y eco cardiográficos, respectivamente. El despistaje parasitológico reveló la presencia de Trypanosoma cruzi en muestra de sangre circulante y líquido pericárdico, con hemocultivo positivo y detección de ADN específico del parásito por ensayos de PCR. Asimismo, la presencia de altos niveles de anticuerpos circulantes anti-T. cruzi detectados con dos pruebas serológicas (TAD, IFI) y la observación de altos niveles IgM, corroboran el diagnóstico de un cuadro de enfermedad de Chagas en fase aguda de la infección. Además, la procedencia del paciente de una localidad andina del occidente de Venezuela, donde la enfermedad de Chagas es endémica, unido al hallazgo de ejemplares adultos de triatominos en la vivienda del paciente confirman el diagnóstico. Se discute la significación del presente hallazgo y se detallan las observaciones durante la re-evaluación en el seguimiento post tratamiento. A Clinical case from an aged patient with evidence of suffering heart failure showing arrhythmia, atrial fibrillation and pericarditis, pericardial effusion and left ventricle aneurism detected by electrocardiogram and echocardiogram respectively, is reported. Parasitological examination revealed presence of Trypanosoma cruzi in blood and pericardial fluid samples. In addition, hemoculture was positive and PCR assay revealed specific T. cruzi DNA. Serological techniques (DAT, IFAT) showed anti-T.cruzi circulating antibodies, including high level IgM. The sero-parasitological and molecular (PCR) findings confirmed the presumptive clinical diagnosis for Chagas disease acute infection. The significance of the present findings is discussed and clinical details observed during re-evaluation post-treatment, are included.

Se registra un brote de enfermedad de Chagas agudo, en una localidad rural de Mérida-Venezuela, asociado con transmisión oral por ingesta contaminada con Trypanosoma cruzi dada la masiva y simultanea infección detectada en 5 miembros de una familia. La masiva transmisión de T. cruzi generó cuadros clínicos severos causando miocarditis aguda en 2 pacientes (40%) incluyendo un caso fatal. La severidad clínica en todos los pacientes involucrados mostró correspondencia con los hallazgos parasitológicos, serológicos y moleculares (PCR) con los cuales se evidenció presencia de tripomastigotes sanguícolas de T. cruzi, anticuerpos anti-T. cruzi con niveles variables de IgM e IgG específicas y ADN de T. cruzi, respectivamente. Asimismo, el perfil clínico reveló 17 signos o síntomas con un promedio por paciente de 12±3 (rango=9-16) con simultaneidad en 8 de los síntomas más frecuentemente detectados. Resalta en la sintomatología la presencia de edema facial interno con manifiesta tumefacción y parestesia lingual en ausencia del cuadro típico de edema bipalpebral (signo de Romaña) y/o chagoma de inoculación comúnmente registrados en la infección chagásica por vía vectorial. Se argumenta la posibilidad de la transmisión oral y se discute la potencial importancia epidemiológica del presente hallazgo. An acute Chagas disease outbreak associated with oral transmission, detected in a rural village of Merida- Venezuela, is reported. The massive transmission due to ingestion of food contaminated with Trypanosoma cruzi generated, in 5 members of the same family, severe clinical features causing acute myocarditis in two of them (40%) including a fatal case. Parasitological, serological and molecular (PCR) examination of samples from the 5 patients involved in the outbreak, revealed T.cruzi blood circulating tripomastigotes, anti-T. cruzi specific antibodies (IgM; IgG) and the presence of T. cruzi respectively. The recorded clinical pattern detected a total of 17 signs or symptoms with an average ± SD 12±3 per patients (range = 9-16) showing simultaneity in 8 symptoms and a 20% mortality. A remarkable characteristic detected during the study was the presence of internal facial swollen with paresthesia in tongue in absence of the typical Romaña's sign or chagoma commonly found in Chagas disease-infection caused by vector transmission. The possible oral transmission and the potential of the findings from the epidemiological viewpoint are discussed.

Se registra, en un paciente masculino de 48 años, la detección de Leishmania (Viannia) braziliensis en muestra de lesión mucosa crónica con 16 años de evolución clínica. El caso presentado cursa con perforación del tabique nasal no evidenciándose lesión cutánea primaria sugestiva de leishmaniasis. Por su ocupación el paciente ha frecuentado, por largos períodos, bosques en áreas endémicas para leishmaniasis en el occidente de Venezuela. Continuas evaluaciones clínicas, inmunológicas e histopatológicas realizadas durante varios años fallaron en establecer un diagnóstico certero incrementando la severidad del caso. Exámenes recientes realizados en nuestro laboratorio revelan la presencia de amastigotes en muestras de la lesión nasal activa en extendidos coloreados con tinción de Giemsa. La identificación del parásito como L. braziliensis y la verificación de la infección por este parásito en el paciente, fue lograda por ensayos de PCR y Western Blot, respectivamente. Se concluye que el caso presentado sufre una leishmaniasis mucocutánea de vieja data con una baja respuesta inmunológica, a juzgar por la frecuente negatividad en pruebas de IDR y/o la detección de anticuerpos circulantes anti-Leishmania. Se discute sobre la imprecisión diagnóstica en el caso presentado y se advierte sobre el riesgo epidemiológico potencial de casos similares. The detection of Leishmania (Viannia) braziliensis from a chronic mucosal lesion with 16 years of clinical evolution in a 48 years old male patient is reported. The patient showed destruction of the nasal septal cartilage with no evidence of primary leishmanial lesion. Due to his professional work he frequently visited areas of western Venezuela where leishmaniasis is endemic. Frequent clinical, immunologic and histopathologic evaluations carried out during several years failed to establish a right diagnosis, increasing the severity of the mucosal lesion. The finding of a sparse number of amastigotes in a sample from the mucosal lesion stained by Giemsa stain, suggested a mucosal infection by Leishmania. The identification of the parasite as L. braziliensis and the verification of the infection by this parasite in the reported case were carried out using a PCR assay and a Western Blot test, respectively. It is concluded that the patient was suffering a long-lasting, reluctant to heal and severe lesion with a low immunological response due to infection by L. braziliensis causing mucocutaneous leishmaniasis (MCL). The fail in the diagnosis of this particular case of MCL and the potential epidemiological risk in similar cases are discussed.

The effect of Trypanosoma cruzi re-inoculations on experimentally infected mice was evaluated. Mice received a primary infection by intradermal inoculation of 5x103 T. cruzi metacyclic infective forms from laboratory infected Rhodnius prolixus. From 200 mice initially infected, 52 survived the course of the infection during 23 weeks. From these, 45 mice were re-inoculated and seven used as infected control. Two re-inoculations were performed using the same conditions as in the prime-infection. Observations on re-inoculated mice revealed a parasitemia level lower than that detected during the primary-infection. Serologic evaluation showed no variation in the immunoglobulin profile, maintaining similar IgM and IgG levels after re-inoculations. Similar mortality rates were observed in primary-infected, re-inoculated and infected control mice. No remarkable histopathological changes attributable to re-inoculation were detected. These results lead us to conclude that T. cruzi re-inoculation in mice previously infected with the same parasite does not produce a reactivation of infection similar to the typical acute clinical or immunological profiles. This also suggests that T. cruzi primary infection may prevent severe re-infection, establishing a protective stage making infected mice resistant to a second infection. Epidemiological implications of the present findings are discussed. Se evalúa el efecto de reinoculaciones por Trypanosoma cruzi en ratones experimentalmente infectados. De un total de 200 ratones que fueron infectados por vía intradérmica con un inóculo de 5x103 tripomastigotes metacíclicos provenientes de especimenes de Rhodnius prolixus, 52 sobrevivieron a la primo-infección luego de 23 semanas. De estos 45 fueron re-inoculados en la misma forma como en la infección primaria y siete fueron utilizados como controles infectados no re-inoculados. Observaciones sistemáticas llevadas a cabo en muestras de los ratones re-inoculados revelaron parasitemias significativamente menores que las detectadas durante la primo-infección. La evaluación serológica no mostró diferencias en los niveles de IgM e IgG entre ratones primo-infectados y los re-inoculados. Observaciones histopatológicas no mostraron cambios atribuibles al efecto de las re-inoculaciones en muestras de corazón y músculo esquelético. Una tasa similar de mortalidad fue observada en ratones primo-infectados, re-inoculados y controles infectados. Se concluye que re-inoculaciones con T. cruzi en ratones previamente infectados con el mismo parásito no producen reactivación de la infección similar al típico cuadro agudo. Asimismo, se sugiere que la primo-infección por T. cruzi previene una reinfección severa estableciendo un estado de protección y resistencia a subsecuentes infecciones. Se discuten las implicaciones epidemiológicas de los presentes hallazgos.

Inapparent infections by Trypanosoma cruzi were detected, for the first time, in symptomless seropositive healthy individuals from a Yukpa ethnic community in western Venezuela where Chagas disease had not been previously reported. Seropositivity was detected in 24 out of 173 (13.9%) sera samples taken from asymptomatic people by using three serological methods (DAT, IFAT, ELISA). Complementary analyses by IFAT revealed a low level of anti-T. cruzi specific IgM and IgG in all seropositive people when compared with detected levels in acute and chronic chagasic patients included as positive controls. In addition, 100% of the sampled dogs (8) were seropositive showing a level of anti-T. cruzi IgG similar to that detected in humans. Genotyping of a T. cruzi isolate obtained from an infected wild specimen of Rhodnius pictipes, revealed the circulation of lineage1 (DTU1) in the study area. The importance of the detection of asymptomatic T.cruzi-infections in this indigenous community and its potential epidemiological implications are discussed. Infecciones inaparentes por Trypanosoma cruzi fueron detectadas, por vez primera, en individuos seropositivos asintomáticos muestreados en una comunidad Yukpa del occidente de Venezuela donde no se ha registrado hasta el presente enfermedad de Chagas. De un total de 173 muestras de suero examinadas 24 (13,9%) fueron registradas como seropositivas utilizando tres pruebas serológicas. Análisis complementarios por IFI revelaron bajos niveles de IgM e IgG cuando las muestras de individuos seropositivos asintomáticos fueron comparadas con casos agudos y crónicos incluidos como controles positivos. La totalidad de perros examinados (8) reveló seropositividad, registrándose niveles de IgG similares a los detectados en el grupo humano. La caracterización molecular de un aislado de T. cruzi obtenido de un espécimen silvestre de Rhodnius pictipes reveló la circulación del linaje 1 (DTU1) en el área de estudio. Se discute la importancia de infecciones asintomáticas por T. cruzi y sus implicaciones epidemiológicas en la comunidad indígena estudiada.

Se detecta la presencia de Anaplasma marginale en becerros hijos de vacas con infección asintomática. Ensayos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) llevados a cabo en muestras de sangre de 31 vacas lactantes, en aparente buen estado físico y sus respectivas crías, revelaron la presencia de ADN específico de A. marginale en el 70 y 40%, respectivamente. La detección de parte del genoma de A. marginale en becerros recién nacidos, hijos de vacas asintomáticas PCR positivas, sugiere la transmisión de la infección madre-hijo por vía transplacentaria. Se discute las implicaciones epizootiológicas de la infección por A. marginale en animales asintomáticos y se advierte sobre la potencialidad de esta forma de transmisión en el mantenimiento del ciclo de este organismo. Se concluye que la transmisión por vía transplacentaria podría ser un evento de frecuente ocurrencia en el área de estudio y se sugiere la utilización de técnicas producto de la nueva biotecnología como la PCR para incrementar la especificidad en el diagnóstico

Se presenta la valoración comparativa de 8 técnicas de uso común en el despistaje serológico de la enfermedad de Chagas utilizando muestras de pacientes de diversas procedencias del occidente de Venezuela. En el estudio fueron utilizados métodos serológicos convencionales (TAD, IFI, ELISA) y pruebas de diagnóstico comercialmente expendidas en el país (Pharmatest®, Chagatest ELISA®, Chagatest ELISA Recombinante V.3.0®, Test ELISA para Chagas III® y Chagas Stat PakTM Assay®). La comparación de los resultados no reveló diferencias estadísticamente significativas entre los niveles de sensibilidad y especificidad de las técnicas evaluadas (P>0.05). Se sugiere, para la obtención de un diagnóstico preciso, la implementación de pruebas de rutina y pruebas confirmatorias. El análisis de la relación costo-beneficio reflejó diferencias entre las técnicas evaluadas, sugiriendo su uso de acuerdo a las condiciones de servicio presentes en cada centro diagnóstico, para lo cual se proponen pruebas candidatas para la rutina y la confirmación diagnóstica. Se demuestra la disminución progresiva de reactividad, con el consecuente incremento de resultados erróneos, en una prueba comercial sometida a sucesivos cambios de temperatura en el tiempo. The comparative evaluation of conventional serologic methods (DAT, IFAT, ELISA) and commercial tests (Pharmatest®, Chagatest ELISA®, Chagatest ELISA Recombinant V.3.0®, Test ELISA for Chagas III®, Chagas stat pakTM assay®) commonly used to detect Chagas disease is presented. Sera samples were taken from chagasic patients and controls from different rural localities of western Venezuela. Statistical comparison of the sensitivity and specificity level, revealed no-significant differences among methods (P > 0.05). To warrant a secure sero-diagnosis the implementation of a routine and a confirmatory test is suggested. The cost-benefit analysis showed significant differences among methods, suggesting its use according to the condition of each diagnostic center. Considering the results obtained in the present study a combination of candidate tests is proposed to be used either as a routine or confirmatory method according to the circumstances. The effect of thermo-shock on the loss of reactivity of a commercial test is demonstrated.

A total of 72 Trypanosoma cruzi isolates from different hosts and geographical regions of western Venezuela, where Chagas disease is endemic, were typed using ribosomal and mini-exon gene markers. The isolates were obtained from wild, peridomestic and domestic sources including triatomine-bugs, human acute chagasic patients and other mammals. Results showed that T. cruzi two major phylogenetic lineages, T. cruzi I and T. cruzi II were present. However, a remarkable predominance of T. cruzi I (96%) over T. cruzi II (4%) was observed. The present results suggest that in western Venezuela circulation of both T. cruzi I and T. cruzi II isolates is independent from the source of isolation and the geographical area where they occur, with predominance of T. cruzi I. The epidemiological significance of the present results is discussed. Un total de 72 aislados de Trypanosoma cruzi obtenidos de diferentes hospedadores y regiones geográficas del occidente de Venezuela, donde la enfermedad de Chagas es endémica, fueron caracterizados genéticamente utilizando marcadores moleculares de los genes ribosomales y del mini-exón. Los aislados fueron obtenidos de fuentes silvestres y domésticas, incluyendo triatominos-vectores, pacientes chagásicos agudos y otros mamiferos. Los resultados mostraron la presencia de los dos linajes reconocidos para T. cruzi (TcI y TcII) en la mayoría de los aislados provenientes de los diferentes hospedadores estudiados. Sin embargo, fue observada una marcada predominancia de T. cruzi I (96%) sobre T. cruzi II (4%). Los presentes resultados sugieren que en el occidente de Venezuela la circulación de aislados de los linajes TcI y TcII es independiente de la fuente biológica de aislamiento y del área geográfica de procedencia, siendo predominante los aislados TcI. Se discute la significación epidemiológica de los presentes resultados.

Se registra el tiempo de supervivencia de formas metacíclicas de Trypanosoma cruzi, obtenidas del tracto digestivo deRhodnius prolixus, sobre alimentos contaminados experimentalmente. Observaciones entre 1h y 18h post-contaminación revelaron la presencia de abundantes y activos metacíclicos en los alimentos contaminados durante las primeras 6 horas, declinando la población de los mismos sobre la décima hora. La actividad de las formas metacíclicas no mostró diferencias en alimentos contaminados en fase sólida o líquida. Asimismo, se demuestra la alta infectividad de metacíclicos de T. cruzi que sobreviven en alimento contaminado luego de ser ingeridos por un hospedador vertebrado. The survival of Trypanosoma cruzi metacyclic forms in contaminated food is reported. Observations carried out 1-18h after contaminating food with metacyclics from infected Rhodnius prolixus, revealed abundant and active flagellates during the first 6h post-contamination. The same activity was observed in metacyclics maintained on liquid or solid contaminated food. In addition, the infectivity of surviving T. cruzi metacyclic forms in contaminated food after being ingested by a vertebrate host is demonstrated.

Se registra la supervivencia de formas de cultivo de Trypanosoma cruzi en alimentos experimentalmente contaminados. En 8 de 11 (73%) muestras de frutas y hortalizas utilizadas en los experimentos los parásitos permanecieron vivos por períodos entre 6 y 72 horas. Se estima que el mayor número de parásitos vivos está entre las 6 y las 18 horas post-contaminación. Se discute las implicaciones epidemiológicas potenciales de estos hallazgos. The survival of Trypanosma cruzi culture forms in contaminated food is reported. In 8 out 11 (73%) samples of fruits and other vegetables experimentally contaminated with T. cruzi, the parasite was able to survive from 6 to 72 hours. The major number of survivor flagellates was detected from 6 h to 18 h post contamination. The potential epidemiological implication of this finding is discussed.

Three serological tests (ELISA, IFAT, DAT) were evaluated using sera from selected individuals with different American cutaneous leishmaniasis (ACL) clinical conditions. Reactivity in at least 2 of the 3 named tests was established as a criterion for declaring a patient as sero-positive. Prior to serological testing, people were diagnosed by clinical (presence of lesion = pl or scar=Sc), parasitological (presence of parasites =pp), immunological (LST) and molecular (PCR) methods. For a statistical comparison of the evaluated tests 4 groups of people were made up: 1) patients with active leishmanial lesion (n=44; pl, pp, +LST, +PCR); 2) patients who had recovered from leishmanial infection (n=43; Sc, +LST, +PCR); 3) asymptomatic individuals from endemic areas showing evidence of having contacted Leishmania-parasites (n=40; +LST, +PCR) and 4) Leishmania-negative people from the above localities where leishmaniasis is endemic and living under the same risk conditions, considered as healthy controls (n=104; -LST, -PCR). Considering the above-established criteria for sero-positives, the analysis of the results obtained with the 3 tests employed revealed very low sensitivity values. Seropositive figures of 50% were recorded for the first group, 9% for the second group, and 12.5% for the third group. Statistical analysis also revealed a low positive predictive value (PPV=0.73), a low negative predictive value (NPV=0.49), and a low kappa coefficient value (k=0.114). The present results raise questions about the use of the 3 conventional serological tests compared here to detect ACL at any clinical condition. Tres pruebas serológicas (TAD, IFI y ELISA) fueron evaluadas en sueros de pacientes con Leishmaniasis cutánea Americana (LCA) en diferentes condiciones clínicas. Para este propósito se estableció como criterio diagnóstico la reactividad de al menos dos de las tres pruebas para declarar un individuo seropositivo. Previo a la realización de la serología, los individuos seleccionados fueron diagnosticados clínicamente (presencia de lesión=pl o presencia de cicatriz =pc), parasitológicamente (presencia de parásitos =pp), inmunológicamente (IDR) y molecularmente (PCR). Para la comparación estadística de las pruebas serológicas evaluadas fueron conformados 4 grupos constituidos por: 1. Pacientes con lesiones activas (n=44; pl, pp, IDR +, PCR+); 2. Pacientes cicatrizados recobrados de una infección por Leishmania (n=43; pc, IDR+, PCR+); 3. Individuos asintomáticos de áreas endémicas con evidencias de haber tenido contacto previo conLeishmania (n=40; IDR+, PCR+) y 4. Individuos negativos controles de áreas donde la Leishmaniasis es endémica y quienes vivían bajo condiciones de riesgo (n=104; IDR-, PCR-). Los análisis estadísticos de los resultados obtenidos utilizando las tres pruebas serológicas indicadas, revelaron valores muy bajos de sensibilidad, siendo de 50%, 9% y 12% para los grupos de pacientes con lesión activa (1), pacientes recobrados de infección previa (2) e individuos asintomáticos (3) respectivamente, con una especificidad general de 89%. Asimismo, fue detectado un bajo valor predictivo positivo (PVP=0,73); un bajo valor predictivo negativo (PVN=0,49) y un muy bajo valor de coeficiente kappa (k=0,114). Los resultados obtenidos en el presente estudio arrojan dudas sobre la confiabilidad de las tres pruebas de diagnóstico serológico evaluadas aquí para detectar LCA en cualquier condición clínica.

Se compara el efecto terapéutico del alcaloide clorhidrato de emetina administrado dentro de la lesión (IL) con el del tratamiento sistémico convencional con Glucantime® sobre lesiones de hámsteres machos, heterocigotos, experimentalmente infectados con 4 x 10³ amastigotes de Leishmania (Viannia) braziliensis. Se demuestra que la aplicación de ambos agentes quimioterapéuticos reduce significativamente (P < 0,01) los tamaños promedio de las lesiones cuando se comparan con los animales control no tratados. Se halló que los resultados clínicos obtenidos con la aplicación del alcaloide, son similares a los observados con el Glucantime®, ambos redujeron el tamaño de las lesiones leishmánicas (P > 0,05). Los efectos ultraestructurales en los parásitos leishmánicos expuestos a la acción quimioterapéutica de la emetina, se evidenciaron principalmente en el interior del citoplasma de los amastigotes, que se mostró intensamente vacuolizado, desordenado e indefinido; sin embargo, no fue posible relacionar directamente las observaciones ultraestructurales con los mecanismos de acción conocidos de la emetina. La presencia de parásitos viables fue demostrada en lesiones activas y/o cicatrices, en todos los hámsteres evaluados después de 75 a 230 días post-tratamiento, mediante los métodos de frotis directo, histopatología convencional, medios de cultivo (NNN) y la técnica de la inmunoperoxidasa; esta última tiene una sensibilidad del 100%. Estos hallazgos sugieren que además de la medición del tamaño de las lesiones cutáneas, debe realizarse la búsqueda de parásitos leishmánicos remanentes como método válido para evaluar la eficacia de la quimioterapia en la LT experimental. La detección de amastigotes en lesiones curadas clínicamente, apoya la hipótesis de considerar al hombre como un posible reservorio intradomiciliar. The therapeutic effect of the emetine hydrochloride alkaloid administered intralesionaly was compared with that of standard parenteral treatment with Glucantime® in outbred male hamsters experimentally infected with 4 x 10³ amastigotes of Leishmania (Viannia) braziliensis. Both chemotherapeutic agents reduced significantly (P < 0.01) the average lesion sizes in experimental animals in comparison with those untreated. The alkaloid infiltration was found to be as effective as the antimonial injection for clinical resolution. The ultrastructural effects on the Leishmania parasites exposed to emetine were observed mainly in the inner cytoplasm, which appeared disorganized, pycnotic and with loss of morphological definition; however, any known emetine hydrochloride action mechanism factor could not be directly related with ultrastructure effects detected on leishmanial parasites. Smears, conventional histopathology, culture in NNN medium and indirect inmunoperoxidase method showed viable amastigotes in nodules and/or scars of all the evaluated hamsters 75 to 230 days after the end of treatment. These findings suggest that measurement of the size of cutaneous leishmanial lesions does not appear to be a valid criterion for evaluating the efficiency of chemotherapy in experimental LT. Detection of leishmanial parasites in the lesion scars, supports the hypothesis that man could be considered as an intradomiciliar reservoir.